Name: Neuartige Assay für kalte Nozizeption in Drosophila Larvae (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie kalte Nozizeption in Drosophila-Larven mit einer Peltier-Sonde untersuchen. Diese Methode ermöglicht präzise Reizapplikation und Quantifizierung kalteinduzierter Verhaltensweisen für neurowissenschaftliche Forschung.

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Wir danken Sarah Wu und Camille Graham für die kritische Lektüre des Manuskripts frühen Phasen des kalten Sondentest, der Bloomington Drosophila Stock Center für Fliegen Aktien und Galko lab Mitglieder zu entwickeln. Diese Arbeit wurde durch die NIH NRSA (NIH F31NS083306) zu HNT, und von NIH R01NS069828, R21NS087360 und University of Texas MD Anderson Clark Stipendium in der Grundlagenforschung zu MJG unterstützt.

1. Herstellung von Larvae <ol><li> Heben Sie Aktien oder genetische Kreuzungen in einem 25 ° C Inkubator. <ol><li> Wenn ein Kreuz Kultivierung verwendet 20-25 jungfräuliche Weibchen und Männchen 15-20 pro Fläschchen regelmäßige cornmeal Fliegen Medien enthält. Lassen Sie Weibchen Eier legen für etwa 48 Stunden, bevor sie in ein neues Fläschchen von Lebensmitteln zu übertragen. </li></ol></li><li> 4-5 Tage nach der Eierlegens, sammeln 3. Larvenstadium des gewünschten Genotyps durch vorsichtiges einen Strom von Wasser in die breiartige Nahrung und Larven, spritz- und den Inhalt in eine mittlere, saubere Petrischale gießen (60 mm x 15 mm). </li><li> Als nächstes sanft Larven nach Größe mit einer Pinzette oder einem Pinsel sortiert größeren „wandernden 3. Instar“ oder kleine sickly Larven auszuschließen getestet vom werden. Discard Larven keine unerwünschten genetischen Markern oder Ausgleicher enthält. </li><li> Haben Sie ein Kerl Labor Mitglied Etikett Gerichte oder Container, in denen sortiert Larven platziert werden, so dass der Experimentator „blind“ auf die Ex sein kannperimental Zustand oder Genotyp der Larven, wenn anwendbar. Der Experimentator kann entschlüsselten Etikett gesammelte Daten nach dem Experiment anwenden einen Schlüssel von einem Labor-Mitglied generiert. </li><li> Verwendung einen Spatel, überträgt einen Dime große Menge frischer Lebensmittel in ein (35 mm x 10 mm oder 60 mm x 15 mm) sauber, markierten Petrischalen gefüllt Hälfte mit Wasser von Raumtemperatur. </li><li> Sanft bewegen, um die Nahrung auf die sortierte Larven (Hungern oder Austrocknung zu verhindern, wenn der Test über 20 min zu nehmen erwartet wird) mit einer Pinzette oder einem Pinsel. </li></ol> 2. Kalt Probe Assay <ol><li> Schalten Sie den kalten Sondeneinheit ermöglicht einige min auf die gewünschte Temperatur zu kühlen. Wenn auf niedrigere Temperaturen einstellen, Kondenswasser entlang der Sonde wahrscheinlich bilden. </li><li> Wischen Sie überschüssige Feuchtigkeit mit einem Labortuch vor dem Auftragen auf die Larve. Wenn er nicht in der sofortigen Einsatz, isolierende Stelle Kappe auf Sonde sowohl zu isolieren und die Spitze sauber zu halten und Schäden zu vermeiden. </li><li> Legen Sie eine Mitte 3. Larvenstadium auf ein dünnes Stück dunkle beweglichen Vinyl (typischerweise mit einem kleinen Stück von einem Notebook Bindemittel geschnitten) unter einem Hellfeld - Mikroskop. Die schwarzen Vinyl AIDS in Kontrastdarstellung und in die Larve Bewegen ohne es zu berühren sie mit der Sonde richtig auszurichten. </li><li> Stellen Sie das Mikroskop (siehe Tabelle of Materials) und die Lichteinheit (siehe Tabelle of Materials) bis mittlere Helligkeit (50-75% max Helligkeit) Kontrast zu schaffen und zu verhindern , die Larve vor dem Austrocknen zu schnell aus. </li><li> Entsorgen Sie alle Larven, die nicht zuerst normale peristaltische Fortbewegung aufweisen, wie sie die Ergebnisse durcheinander bringen könnte. Die Larve sollte feucht sein, aus der Petrischale von Wasser sonst die Larve zum Hemmen Vinyl normale Fortbewegung haftet. Das Wasser sollte nicht um die Larve Pfütze. </li><li> Voraus, um die Sonde mit der Hand in Richtung der Larve in einem 90º Winkel zu der anteroposterioren Körperachse, die mit der Vinyl Larve in cor zu bewegenrect Position (siehe 1A). </li><li> Orient die Spitze der Sonde zu legen, leicht über die Mitte der dorsalen Oberfläche der Larve mit der Sonde bei etwa einem 45 ° Winkel zu dem Mikroskoptisch. </li><li> Bei Antastelement, ein Labor-Timer starten. Genügend Druck nach unten zu leicht, die Oberfläche der Larvencuticula einrücken, während noch Vorwärts- oder Rückwärtsbewegung ermöglicht wird. </li><li> Halten Sie die Sonde in Platz für bis zu 10 s oder bis eine Kalt evozierte Verhaltensreaktion beobachtet wird - je nachdem, was zuerst eintritt. Dann die Sonde entfernen. </li><li> Notieren Sie sich die beobachteten Verhaltensreaktion und die Antwort-Latenz. Larven, die nicht innerhalb von 10 s reagieren werden „Non-Responder“ betrachtet. Latenz kann auch für Responder aufgezeichnet und verwendet, um Änderungen in Reaktion Robustheit / Amplitude zu messen. </li><li> Entsorgen Larve und bereiten die nächste. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 2,3-2,11, bis die gewünschte Anzahl von Testlarven erreicht ist (drei Sätze von n = 20-40 Larven wurden used hier). </li></ol>

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</ol>

Eine US-Patentanmeldung (CL) fehlt noch auf der Gestaltung der kalten Sonde. Weitere Informationen über Einzelheiten der kalten Sonde Teilenummern und Konstruktion, sowie zusätzliche Beratung über Werkzeugkonstruktion werden auf Anfrage zur Verfügung gestellt werden.

Der Test hier beschrieben ist, kann verwendet werden, um qualitativ und quantitativ Nozizeption oder nozizeptive Sensibilisierung in Larven von verschiedenen genetischen Hintergründen, Umwelteinflüssen zu bewerten und / oder Schäden induzierten Bedingungen. Da dieser Test für Focal Anwendung eines Kältereizes ermöglicht, mit diesem Werkzeug kann man die Funktion einer Untergruppe von peripheren sensorischen Neuronen spezifisch an kalten Temperaturen bei der Reaktion abzuschätzen. Interessanterweise scheinen diese Kälte ...

Drosophila hat sich als sehr nützlich für die Identifizierung von neuen Genen konserviert und neuronaler Schaltkreise sein , das komplexe Verhalten zugrunde liegen. Flies liefern eine hoch entwickelte genetische Toolkit und ein vereinfachtes Nervensystems , die 1, für die präzise genetische Manipulation und neuronaler erlauben 2, 3, 4 , um die zellulären und molekularen Grundlagen der Nozizeption 5, 6, 7 zu sezieren. Larven sind besonders nützlich für diese Analysen, da der Verhaltensassays für sanfte Berührung 8, 9, 10, schädliche Wärme 11, 12, 13 und die mechanische Empfindung von schädlichen Reizen 4, </sup&gt; 11 haben bereits festgestellt worden ist , und die transparente Larvencuticula ermöglicht lebenden oder fixierten Abbildung der Epidermis und der darunter liegenden sensorischen Neuronen. Vor kurzem wurde ein Test für schädliche Kälte auch 7 entwickelt, die wir hier näher beschreiben. Unter Verwendung eine feine, konisch bestückte kalte Sonde zeigen wir , dass Drosophila - Larven zeigen eine Reihe von Kalt spezifischen reaktiven Verhaltensweisen, die sich von Verhaltensweisen während der normalen Fortbewegung, folgenden sanfte Berührung beobachtet oder nach hartem mechanischem oder hohen Temperaturen Stimuli 7, 8, 11 . Die kalt spezifischen Verhaltensweisen beinhalten eine robuste Ganzkörper-Kontraktion (CT), ein 45-90º Erhöhung der posterioren Segmente (PR) und einer gleichzeitigen Erhöhung der vorderen und hinteren Segmente in einer U-Form (US). Die Prävalenz dieser Verhaltensweisen steigt mit abnehmender Temperatur, aber jedes Peaks bei sleicht unterschiedliche kalte Temperaturen. Neuere Arbeiten legen nahe , dass CT - Antworten von verschiedenen peripheren sensorischen Neuronen als die vermittelt werden , die 7 bis schädlicher Hitze oder groben mechanischen Reiz reagieren. Ähnlich wie wirbel Nozizeptoren, Drosophila multiple dendritische (md) periphere sensorische Neuronen haben komplexe dendritische Strukturen , die 1 über die Epidermis verzweigen. md Neuronen ist in jedem larvalen Körpersegment, ihre Axone zu der Bauchmark 14 vorsteht. md sensorische Neuronen sind in vier verschiedene Klassen eingeteilt (I-IV) auf dendritische Morphologie basierten und sensorische Funktionen haben variierende 4, 9, 10, 15, 16, 17. Während Klasse IV Neuronen sind für die Larven seitliche Wankbewegungen Antworten erforderlichgegenüber hohe Temperaturen oder aggressiven mechanischen Reiz 4, Klasse III - Neuronen sind für die sanfte Berührung Antworten 9, 10 erforderlich , und werden nicht nur durch Kalt aktiviert, sind jedoch für die Kalt evozierten Verhaltensreaktionen 7 ebenfalls erforderlich. Beiden Klassen III und Klasse IV Neuronen verwenden diskrete transient receptor potential (TRP) Kanäle Verhaltensreaktionen auf schädliches 7, 11, 18 und nicht-schädlichen Reiz 9, 10, 17, 19 zu erleichtern. Ferner ist Larven Nozizeption nach einer Verletzung sensibilisiert, auf zellulärer 20 und Verhaltensstufen 12, 21. Der Test hier beschrieben ermöglicht die quantification entweder normal oder möglicherweise veränderte Verhaltensreaktionen auf kalte Temperaturen im Bereich von schädlicher Kälte (≤ 10 ° C), unschädliche kühlen (11-17 ºC), auf Umgebungstemperatur (18-22 ºC). Die kalten Temperaturen in diesem Test verwendet werden , sind fähig Klasse III sensorische Neuronen direkt Aktivierung Hervorrufen robust, reproduzierbar Calciumerhöhungen und kalt evozierten Verhaltensreaktionen, die qualitativ und quantitativ sein können , 7 analysiert. Dieser Test kann auf unterschiedliche Umweltbedingungen (veränderte Ernährung, Verletzungen, pharmakologische Wirkstoffe) sowohl genetische als auch Umweltfaktoren zu bestimmen, ausgesetzt von praktisch jeden Genotyp sowie den Larven Larven angewandt werden, die kalt Nozizeption, nozizeptive Sensibilisierung oder nozizeptiven Plastizität auswirken. Da thermosensation ist allgegenwärtig in vielen Arten, stellt dieser Test ein wertvolles Werkzeug für die Untersuchung von Nozizeption und kann neue Genziele oder neuronale Interaktionen aufzudecken, die verbessernunser Verständnis von Wirbeln Nozizeption. Die angefertigten kalte Sonde (siehe kalte Sonde, Table of Materials) verwendet eine geschlossene Regelkreis Temperatur Peltier - Vorrichtung gesteuert wird , die die Aluminiumschaft und konische Spitze durch Wärmeleitung kühlt. Ein Thermistor ist im Inneren der Aluminium-konischen Spitze eingebetteten berichtet die Echtzeit-Temperatur auf die Steuereinheit. Ein Kühlkörper und Lüfter sind mit der thermoelektrischen Modul befestigt , um den Peltier - Effekt der Wärmelast (Qc) so den gewünschten Temperaturbereich von (22-0 ° C) zu regulieren (siehe Thermal Control Unit, Table of Materials) erreicht werden. Der gesundheitsschädliche Kältereiz des kalten Sondenspitze mit der Hand auf die dorsalen Mittellinie aufgebracht wird, zu segmentieren (n) im gleichen Abstand von vorderen und hinteren Enden der Larve (ungefähr Segment A4, siehe 1A). Als Reaktion auf Kältereize, Larven erzeugen im allgemeinen eine von drei Kalt evozierte Verhaltensweisen innerhalb von 10 s Cutoff: ein GanzkörperKontraktion (CT), eine Erhöhung von 45-90º anterioren und posterioren Segmente in einer U-Form (US) oder eine Erhöhung der posterioren Segmente (PR) (im beschriebenen Ergebnisse). Keines dieser Verhaltensweisen während des normalen peristaltische Fortbewegung oder Nahrungssuchverhalten durchgeführt. Diese Verhaltensweisen sind auch verschieden von sanfter Berührung Reaktionen und die aversiven Roll Reaktion auf hohe Temperaturen oder schädliche mechanische Reize.

<table><tbody><tr><td>Kalte Sonde</td><td>Pro-Dev Engineering</td><td>Sonderanfertigungen auf Anfrage</td><td>Teilenummern und Konstruktionsdetails können auf Anfrage bereitgestellt werden</td></tr><tr><td>Thermal Control Unit</td><td>TE Technology</td><td>Custom Enbuilt Gehäuse</td><td>Teilenummern und Konstruktionsdetails können auf Anfrage bereitgestellt werden</td></tr><tr><td>Zeiss Stemi 2000 Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>NT55-605</td><td></td></tr><tr><td>Fiber-Lite MI-150 High Intensity Illuminator</td><td>Dolan-Jenner Industrie.</td><td>A20500</td><td></td></tr><tr><td>Schott Dual Schwanenhals 23 Zoll faseroptischer Lichtleiter</td><td>Schott North America, Inc.</td><td>Schott A08575</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>FST</td><td>FS-1670</td><td>Wird zum Sortieren und Handhaben von Larven verwendet. Achten Sie darauf, die Pinzettenspitzen leicht zu glätten und abzustumpfen, um das Risiko zu verringern, die Larven versehentlich zu durchstechen oder zu verletzen</td></tr><tr><td>Pinsel</td><td>Dick Blick Art Materials</td><td>06762-1002</td><td>Wird zum Sortieren und Handhaben von Larven verwendet. Hilfreich ist es, wenn der Pinsel während des Gebrauchs feucht ist.</td></tr><tr><td>35 mm x 10 mm Petrischale aus Polystyrol</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>60 mm x 10 mm Petrischale aus Polystyrol</td><td>Falcon</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Stück schwarzes Vinyl (mindestens 2 Zoll x 2 Zoll)</td><td></td><td></td><td>Wird verwendet, um Kontrast zu schaffen und Larven auf die Kältesonde auszurichten</td></tr><tr><td>Fisherbrand Scoopula Spatel</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-357Q</td><td>Wird zum Bewegen von Lebensmitteln</td></tr><tr><td>verwendet Kimtech Science Kimwipes</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666A</td><td>Wird zum Trocknen der Larven und zur Kältesonde bei überschüssiger Feuchtigkeit</td></tr></tbody></table> verwendet

neuartige assay für kalte nozizeption in<em&gt; drosophila</em&gt; larvae

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

Wie Organismen erkennen und darauf reagieren auf schädliche Temperaturen ist noch wenig verstanden. Ferner sind die Mechanismen Sensibilisierung der sensorischen Maschinen zugrunde liegen, wie bei Patienten periphere Neuropathie oder Verletzung induzierte Sensibilisierung erfahren, nicht gut charakterisiert. Genetisch tractable Drosophila - Modell wird verwendet, um die Zellen und Gene zu untersuchen , die für schädliche Brunsterkennung, welches mehrere konservierte Gene von Interesse ergeben. Es ist wenig bekannt, aber über die Zellen und Rezeptoren wichtig für schädliche Kälte Erkundung. Obwohl nicht Drosophila nicht längere überleben Exposition gegenüber kalten Temperaturen (≤10 ° C), und vermeidet kühlen, lieber wärmere Temperaturen in Verhaltenspräferenztests, wie sie fühlen und möglicherweise schädliche Kältereize vermeiden wurde erst vor kurzem untersucht worden. Hier beschreiben wir, und charakterisieren, die erste schädliche Kälte (≤10 ºC) Verhaltenstest inDrosophila. Mit diesem Tool und Test zeigen wir einen Ermittler, wie man qualitativ und quantitativ kalt nocizeptives Verhalten beurteilen. Dies kann unter normalen / gesunden Kulturbedingungen durchgeführt werden, oder vermutlich im Zusammenhang mit der Krankheit, Verletzung oder Sensibilisierung. Ferner kann dieser Assay für die Larven gewünschten Genotypen ausgewählt aufgebracht werden, die thermosensation auswirken könnten, Schmerzen oder nozizeptive Sensibilisierung. Da Schmerz ist ein hoch konservierter Prozess, unter Verwendung dieser Tests zum weiteren thermischen Nozizeption studieren wird wahrscheinlich wichtiges Verständnis der Schmerzprozesse in anderer Spezies aufzuzulesen, einschließlich Wirbeltiere.

Drosophila - Larven bewegen sich mit einer peristaltischen Bewegung , die gelegentliche Pausen umfasst, Kopf dreht, und Änderungen in der Richtung 22. Als Reaktion auf die fokale Anwendung eines schädlichen Kältereiz jedoch Larven zeigen eine Reihe von einzigartigen Verhalten, im Gegensatz zu den aversiven Seitenrolle schädliche Hitze und mechanische Reize. Diese Verhaltensweisen sind auch verschieden von Antworten auf sanfte Berührung <...

Hier zeigen wir einen neuen Assay kalt Nozizeption in Drosophila - Larven zu studieren. Dieser Test verwendet eine speziell angefertigten Peltier Sonde, die eine Brenn schädliche Kältereiz Anwendung und führt zu einer quantifizierbaren kalt spezifischen Verhaltensweisen. Diese Technik wird weiter zelluläre und molekulare Präparation von kalter Nozizeption ermöglichen.

Neuartige Assay für kalte Nozizeption in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvae

How organisms sense and respond to noxious temperatures is still poorly understood. Further, the mechanisms underlying sensitization of the sensory ...

Das übergeordnete Ziel dieses schädlichen Kälte-Tests besteht darin, Veränderungen in der Wahrnehmung von harmloser zu schädlicher Kälte quantitativ erfassen und bewerten zu können. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Nozizeption zu beantworten, beispielsweise durch die Identifizierung neuartiger, konservierter Gene, die an der Kälte-Nozizeption beteiligt sind, sowie von Modulatoren der Schmerzreaktionen bei Krankheiten oder Verletzungen. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie eine präzise Steuerung des schädlichen Kältereizes sowie eine Quantifizierung der durch Kälte hervorgerufenen Reaktionen in unterschiedlichen Umwelt- und genetischen Kontexten ermöglicht.Im Allgemeinen müssen Personen, die neu in dieser Methode sind, zunächst die konsistente Anwendung der Sonde einüben, bevor sie mit einem Experiment beginnen. Wir hatten die Idee zu dieser Methode erstmals, als wir feststellten, dass Drosophila-Larven auf schädliche Wärme reagieren, und wir neugierig wurden, ob sie auch auf schädliche Kälte reagieren. Züchten Sie Stämme oder genetische Kreuzungen von Drosophila in einem Inkubator bei 25 Grad Celsius.Beachten Sie, dass bei der Kultivierung eines Kreuzes 20 bis 25 jungfräuliche Weibchen und 15 bis 20 Männchen pro Röhrchen mit herkömmlichem Maisfutter-Medium verwendet werden sollten; die Kultur wird etwa 48 Stunden lang inkubiert, bevor die Fliegen in ein neues Röhrchen mit Nahrung überführt werden. Fünf Tage nach Beginn der Kultur werden die Larven dritter Instar des gewünschten Genotyps vorsichtig durch Einspülen eines Wasserstrahls in das weiche Futter und die Larven gesammelt. Anschließend wird der Inhalt in eine mittelgroße, saubere Petrischale ausgegossen.Als Nächstes sortieren Sie die Larven vorsichtig nach Größe und verwenden dabei Pinzetten, um größere, wandermustige Larven der dritten Instar oder kleine, schwächliche Larven von der Untersuchung auszuschließen. Verwerfen Sie Larven, die unerwünschte genetische Marker oder Balancer enthalten. Ein weiteres Labormitglied sollte die Behälter beschriften, in die die sortierten Larven gelegt werden, um sicherzustellen, dass der Experimentator bezüglich des experimentellen Zustands oder des Genotyps der Larven verblindet bleibt.Verwenden Sie eine Spatel, um eine kleine Menge frisches Futter in eine saubere, beschriftete Petrischale zu überführen, die bis zur Hälfte mit Wasser von Raumtemperatur gefüllt ist. Schließlich benutzen Sie eine Pinzette, um die sortierten Larven vorsichtig auf das Futter zu bringen, um Verhungern oder Austrocknung zu verhindern, falls der Test länger als 20 Minuten dauern soll. Schalten Sie zunächst die Kaltsonden-Einheit ein und lassen Sie sie einige Minuten lang auf die gewünschte Temperatur abkühlen.Entfernen Sie mit einem Laborabwischmittel jegliche überschüssige Feuchtigkeit von der Sonde. Wenn die Sonde nicht sofort verwendet wird, setzen Sie eine isolierende Kappe auf die Sonde, um sie zu isolieren, die Spitze sauber zu halten und Beschädigungen zu vermeiden. Danach platzieren Sie eine Larve im mittleren Drittel des dritten Larvenstadiums auf ein dünnes Stück dunkles, bewegliches Vinyl, um den Kontrast zur besseren Sichtbarmachung und Ausrichtung der Sonde zu verbessern.Legen Sie anschließend dieses Vinylstück mit der Larve unter ein Hellfeldmikroskop. Stellen Sie das Mikroskop und die Lichtquelle auf mittlere Helligkeit ein, um Kontrast zu erzeugen und ein zu schnelles Austrocknen der Larve zu verhindern. Sorgen Sie mithilfe eines angefeuchteten Pinsels dafür, dass die Larve mit Wasser aus der Petrischale benetzt bleibt, damit sie nicht am Vinyl haftet, und entfernen Sie überschüssiges Wasser in der Umgebung mit einem KimWipe.Schieben Sie die Sonde manuell in einem Winkel von 90 Grad zur anteroposterioren Körperachse in Richtung der Larve vor und verwenden Sie das Vinyl, um die Larve in die korrekte Position zu bringen. Richten Sie anschließend die Sondenspitze so aus, dass sie sanft auf der mitteldorsalen Fläche der Larve liegt, wobei die Sonde etwa in einem Winkel von 45 Grad zur Mikroskoptischfläche steht. Starten Sie bei Kontakt der Sonde einen Timer.Wenden Sie ausreichend Druck nach unten an, um die Oberfläche der larvalen Cuticula leicht einzudrücken, wobei dennoch eine Vorwärts- oder Rückwärtsbewegung möglich bleibt. Halten Sie danach die Sonde bis zu 10 Sekunden lang an Ort und Stelle oder bis eine auf Kälte bedingte Verhaltensreaktion beobachtet wird, je nachdem, welches Ereignis zuerst eintritt. Entfernen Sie anschließend die Sonde.Notieren Sie die beobachtete Verhaltensreaktion und die Reaktionslatenz. Achten Sie auf Nicht-Reagierende oder Larven, die innerhalb von 10 Sekunden nicht reagieren. Entsorgen Sie die Larve schließlich und bereiten Sie die nächste vor.Wiederholen Sie den Vorgang, bis die gewünschte Anzahl an Testlarven erreicht ist. Nach Kontakt mit der kalten Sonde zeigen die Ergebnisse dieses Experiments, dass die Larven mit folgenden kaltinduzierten Verhaltensweisen reagieren: Anziehen ihrer vorderen und hinteren Körperteile zur Körpermitte in einer Kontraktion (CT), Anheben ihrer vorderen und hinteren Körperteile in die Luft, um eine U-Form (US) zu bilden, sowie alleiniges Anheben der hinteren Körperteile in die Luft (PR). Darüber hinaus treten unterschiedliche Verhaltensweisen in variierenden Kältebereichen auf, sodass PR und US bei drei bis acht Grad Celsius ihren Höhepunkt erreichen, während CT bei etwa neun bis 14 Grad Celsius am stärksten ausgeprägt ist. Schließlich zeigen diese Daten, dass bei einem Vergleich der Latenzzeiten der verschiedenen Kaltreaktionen die CT-Antworten bei drei und zehn Grad Celsius signifikant von PR und US sowie bei 20 Grad Celsius signifikant von US abwichen.Wenn die Technik einmal beherrscht ist, kann sie für einen Satz von 30 Larven in etwa 30 bis 40 Minuten abgeschlossen werden. Während des Durchführens dieses Verfahrens ist es wichtig, auf abnormale Bewegungen, den Feuchtigkeitsgrad der Larve sowie auf Druck und Platzierung der kalten Sonde an der Larve zu achten. Eine visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, da eine unsachgemäße Anwendung der kalten Sonde zu unterschiedlichen Dosis-Wirkungs-Kurven oder zum Ausbleiben des Kälteantwortverhaltens führen könnte.Nach diesem Verfahren können andere Methoden angewendet werden, wie beispielsweise fluoreszierende Lichtmikroskopie, Genexpressionsanalysen und Verhaltensassays. Alle diese Methoden ermöglichen es, die Auswirkungen von Kälteexposition auf die zelluläre Aktivität, die Morphologie, die Genexpression oder andere Verhaltensweisen zu bestimmen. Diese Technik eröffnet Forschern auf dem Gebiet der kalten Nozizeption die Möglichkeit, genetische, umweltbedingte und krankheitsbedingte Effekte bei Drosophila zu untersuchen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie das Kälteprobengerät und der entsprechende Test verwendet werden, um auf Kälte ausgelöste Reaktionen zu analysieren und die zellulären sowie genetischen Mechanismen der Kältenozizeption zu verstehen.

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