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DOI: 10.3791/55610-v
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Hefe Angehende ist ein vorteilhaftes Modell die Dynamik der Mikrotubuli in vivo aufgrund seiner leistungsstarken Genetik und die Einfachheit der Mikrotubuli - Zytoskelett für das Studium. Das folgende Protokoll beschreibt, wie zu transformieren und Kultur Hefezellen, konfokale Mikroskopie Bilder erfassen und quantitativ die Dynamik der Mikrotubuli in lebenden Hefezellen analysieren.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Dynamik der Mikrotubuli in Hefezellen zu messen. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Mikrotubuli zu beantworten, z. B. wie Mutationen in Tubuli und Mikrotubuli-Regulatoren die Mikrotubuli-Dynamik in einer lebenden Zelle regulieren. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass lebende Hefezellen im Bild stabilisiert werden.
Vielmehr eine hohe Zeitauflösung für zehn Minuten oder eine niedrige Zeitauflösung für mehrere Stunden. Colby Fees und Cassi Estrem, zwei Doktoranden aus meinem Labor, werden das Verfahren vorführen. Die in diesem Experiment verwendeten Hefezellen wurden so konstruiert, dass sie GFP-markiertes Tubulin konstitutiv exprimieren.
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