Dissektion der Maus Bauchspeicheldrüse für histologische Analyse und Metabolic Profiling

Das Hauptziel dieses Video-Artikels ist es, detaillierte visuelle Anleitungen für die Dissektion einer Mauspankreas bereitzustellen. Die Anweisungen sollen für Forscher nützlich sein, die Mausmodelle menschlicher Pankreaserkrankungen untersuchen und die Mauspankreas mittels Dissektion für die histologische Analyse oder metabolische Profilierung gewinnen müssen. Der Video-Artikel enthält außerdem ausführliche Anleitungen zur Durchführung einer terminalen Blutentnahme mittels Herzpunktion.

Abgebildet ist ein Operationsfeld mit den benötigten Materialien. Dazu gehören ein Glasgefäß mit Deckel, ein 15-mL-Falcon-Röhrchen, eine Schere für chirurgische Eingriffe, eine Sprühflasche mit 70 % Ethanol, zwei Schaumstoffplatten, zwei Pinzetten, zwei Ein-mL-Spritzen mit 21-Gauge-Kanüle, zwei 50-mL-Falcon-Röhrchen, ein Zentrifugenröhrchen, ein Kryoröhrchen, vier chirurgische Tupfer, zehn Nadeln, ein Spender mit Desinfektionstüchern und ein Container für scharfe Abfälle. Abgebildet ist das Nachbereitungsfeld mit den benötigten Materialien.

Dazu gehören eine Analysenwaage, ein Vier-Liter-Dewar mit flüssigem Stickstoff, ein flacher Dewar mit weitem Mund, ein schwimmender Mikrogefäßerhalter, ein Paar chirurgische Scheren, zwei Pinzetten, fünf Kryoröhrchen und eine Spenderflasche mit sterilen Wischtüchern. Um die Tötung durchzuführen, wird die Maus zunächst in ein Glasgefäß gegeben, das einen Tupfer enthält, der mit wenigen Tropfen Isofluran getränkt ist, und anschließend mit einem Deckel verschlossen, bis die Maus das Bewusstsein verliert, was in der Regel etwa eine Minute dauert. Danach wird die Maus aus dem Glasgefäß entnommen, und ein Zehenquetschtest wird durchgeführt, um sicherzustellen, dass die Maus keine Schmerzen empfinden kann.

Wenn der Zehenquetschtest fehlschlägt, wird die Maus in das Glasgefäß zurückgebracht und der Deckel wieder aufgesetzt, bis der Zehenquetschtest erfolgreich durchgeführt werden kann. Legen Sie die Maus auf den Rücken und befestigen Sie ihre Gliedmaßen am chirurgischen Schaumstoffbrett. Benetzen Sie die Bauchseite der Maus mit 70 %igem Ethanol. Quetschen Sie mit der Pinzette das Fell nahe der Harnröhrenöffnung und ziehen Sie leicht nach oben.

Erstellen Sie einen Schnitt durch die Bauchhöhle, beginnend am Harnröhrenausgang entlang der Mittellinie bis zum Kinn. In der Nähe des Anfangspunkts des ersten Schnitts greifen Sie eine Seite des Fells und führen einen weiteren Schnitt schräg nach unten in Richtung der hinteren Pfote durch. Wiederholen Sie dies auf die gleiche Weise auf der gegenüberliegenden Seite.

Suchen Sie das Herz, um die terminale Herzpunktion durchzuführen. Greifen Sie dazu das Brustbein mit der Pinzette und schneiden Sie in das Zwerchfell. Schneiden Sie rasch nach oben durch den Brustkorb und entfernen Sie den durchtrennten Teil, um das schlagende Herz freizulegen.

Wenn das Herz lokalisiert ist, entfernen Sie das Perikard und führen Sie die letale Herzkranzpunktion mit der Spritze durch. Um eine optimale Blutentnahme zu gewährleisten, verwenden Sie den Kolben der Nadel, um die Pumpbewegung des Herzens nachzuahmen, und vermeiden Sie es, zu schnell zu aspirieren. Geben Sie das Blut in das Zentrifugenröhrchen ab und entsorgen Sie die Spritze im spitzenfesten Behälter.

Nachdem die Herzpunktion durchgeführt wurde, erfolgt die Tötung durch Entfernen der Verbindungen, die das Herz befestigen. Lokalisieren Sie den Magen auf der linken Seite der Maus. Die Bauchspeicheldrüse hat das Aussehen eines diffusen, helleren Gewebes, das am Magen und Duodenum sowie entlang des gesamten Dünndarms und Dickdarms befestigt ist und mit der Milz verbunden ist.

Beginnen Sie, die Bauchspeicheldrüse vorsichtig mit der Pinzette vom Magen und Zwölffingerdarm zu lösen. Setzen Sie die Trennung der Bauchspeicheldrüse vom Dünndarm fort, ausgehend vom Jejunum und Ileum, und schließlich bis zum Z盲kum und Dickdarm. Am Z盲kum positionieren Sie die Pinzette neu und setzen die Trennung der Bauchspeicheldrüse entlang des verbleibenden Colon in Richtung Rektum fort.

An diesem Punkt ist es zweckmäßig, den Abschnitt vom Magen bis zum Kolon unmittelbar vor dem Rektum herauszuschneiden und zu entfernen. Lokalisieren Sie die Bauchspeicheldrüse und die daran befestigte Milz. Verschieben Sie die Bauchspeicheldrüse zur rechten Seite der Maus.

Schneiden Sie die verbleibenden Verbindungen zwischen der Bauchspeicheldrüse und der Brusthöhle durch, um die Bauchspeicheldrüse zusammen mit der anhängenden Milz vollständig zu lösen. Entfernen Sie die Bauchspeicheldrüse und breiten Sie sie zur Untersuchung aus. Falls gewünscht, können zu diesem Zeitpunkt weitere Organe entfernt werden.

Nach der Entnahme werden die Proben in den postoperativen Bereich gebracht. Jedes Organ wird gewogen und anschließend in die jeweilige Kryoröhre gegeben. Notieren Sie alle beobachteten Auffälligkeiten.

Sobald sich die Organe in den Kryoröhrchen befinden, stellen Sie diese in das schwimmende Mikrotuben-Rack und anschließend in den Dewar mit flüssigem Stickstoff. Nach dem Schnellschockgefrieren sollten die Organe zur Langzeitlagerung bei minus 80 Grad Celsius aufbewahrt werden. Alle verwendeten Dissektionswerkzeuge sollten mit Desinfektionstüchern gereinigt werden.

Der Falcon-Röhrchen, der mit dem mit Isofluran getränkten chirurgischen Pad ausgekleidet ist, sollte verschlossen werden. Das chirurgische Pad auf der Schaumstoffplatte sollte durch ein frisches chirurgisches Pad ersetzt werden. Nicht verwendete Teile der Maus sollten gemäß der Entsorgungsrichtlinie der Einrichtung für Versuchstiere entsorgt werden.

Die folgenden Materialien sollten entsprechend behandelt werden. Sobald diese Materialien ordnungsgemäß aufbewahrt sind, können zahlreiche Experimente durchgeführt werden, darunter unter anderem Fluoreszenzmikroskopie, Hämatoxylin- und Eosin-Färbung für die Histologie, Immunhistochemie, Massenspektrometrie und nukleare Magnetresonanzspektroskopie. Da die Bauchspeicheldrüse ein zentrales Organ für den Stoffwechsel und die Insulinproduktion ist, ermöglicht dieses Verfahren die Erhaltung der physiologischen Eigenschaften.

Durch die Isolierung der Bauchspeicheldrüse können zukünftige Analysen an der Probe durchgeführt werden. Dieses Verfahren ermöglicht den Vergleich und die Untersuchung von Wechselwirkungen mit anderen Geweben desselben Organismus innerhalb desselben Zeitraums.