Name: Vorbereitung der Kräutermedizin: Er-Xian Decoction und Er-Xian-haltiges Serum für In vivo Und In vitro Experimente (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Lernen Sie die standardisierte Zubereitung von Er-Xian Decoction für In-vivo- und In-vitro-Studien. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Extraktion und Serumpräparation zur Untersuchung osteogener Effekte.

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Diese Arbeit wurde von der Nationalen Naturwissenschaftlichen Stiftung von China (81573992) unterstützt. Wir danken Emily K. Lo und Kathleen DiNapoli für ihre Sprachbearbeitung.

Das Protokoll folgt den Tierpflege Richtlinien der Shanghai University of Traditional Chinese Medicine und ist von der Tierversuch Shanghai Animal Ethics Committee genehmigt. 1. Protokoll I: Vorbereitung von EXD <ol><li> Berechnung <ol><li> Verabreichen Sie die EXD einer Behandlungsgruppe von 10 Sechs Monate alten weiblichen Imprinting Control Region (ICR) Mäusen (0,02 kg / Maus), 5 Tage pro Woche für 12 Wochen. HINWEIS: Es werden insgesamt 1.702 EXDs benötigt. Da EXDs in diskreten Inkrementen gemessen werden, in realer Praxis 2 EXDs verabreichen. </li><li> Berechnen Sie das Volumen der EXD, das pro Maus aufgetragen wird ( dh V = (0,1418 EXD / kg • Tag) * (0,02 kg / Maus) * 50 ml / EXD = 0,14 ml / Maus • Tag). </li></ol></li><li> Einweichen <ol><li> Setzen Sie alle Rohstoffe von zwei EXDs ( zB Curculigo orchioides Gaertn (18 g), Herbaa Epimedii (18 g), Radix Morindae Officinalis (18 g), RAdix Angelicae Sinensis (18 g), Cortex Phellodendri (12 g) und Rhizoma Anemarrhenae (12 g), insgesamt 96 g) in einen Behälter mit Deckel. HINWEIS: Ein keramischer Behälter wird empfohlen. </li><li> Mischen Sie die rohen Kräuter mit 500 ml destilliertem Wasser für 1 Stunde; Das Wasser sollte die Kräuter um etwa einen Zoll abdecken. Lass alle Kräuter gründlich einweichen. </li></ol></li><li> Erste Wasserabkochung <ol><li> Die Kräuter mit einem Gaskocher oder einem Induktionsherd bei hoher Leistung erhitzen, bis das Wasser kocht (ca. 5 - 10 min, die Zeitspanne hängt von der Heizleistung, dem Behälter und der Menge an Kräutern und Wasser ab). Schalten Sie die Stromversorgung zu einem schwachen köcheln für 2 h. </li></ol></li><li> Erste Filtration <ol><li> Bedecken Sie ein 500-ml-Glasbecher mit normalem Filterpapier oder mit Gaze und Baumwolle. Die Abkochung vorsichtig in den Becher durch den Filter abgießen. Lassen Sie die Kräuter in den Behälter. </li><li> Den restlichen pflanzlichen Rückstand zurückgeben oN das Filterpapier zum Behälter. </li></ol></li><li> Zweite Wasserabkochung <ol><li> Füge dem Behälter mit den Kräutern destilliertes Wasser hinzu. Lass es die Kräuter um etwa einen Zoll abdecken. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 1.3. </li></ol></li><li> Zweite Filtration <ol><li> Wiederholen Sie die Schritte 1.4.1 und 1.4.2. </li><li> Gießen Sie die zweite Abkochung in den gleichen Becher. Mischen Sie die erste und zweite Abkochung zusammen. </li></ol></li><li> Konzentration <ol><li> Setzen Sie den Becher auf einen Gaskocher mit asbestfreien Drahtgaze zwischen ihnen, erhitzen Sie den Abkochung mit einem schwachen köcheln und langsam und kontinuierlich mit einem Glasstab umrühren. </li><li> Wenn die Abkochung auf 200 ml reduziert wird, transportiere sie auf ein 500-ml-Becherglas. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 1.7.1, bis die Abkürzung auf 100 ml reduziert wird. </li></ol></li><li> Lagerung und Verwaltung <ol><li> Übertragen Sie die konzentrierte Abkochung auf eine sterile Glasflasche. Lass es auf Raumtemperatur abkühlenRe (RT). Bei 4 ° C bei einer Verwendung von einer Woche oder bei -70 ° C zur Langzeitlagerung aufbewahren. </li><li> Mit einer Spülladel 0,14 ml / Maus des Abkochens an ovariektomierte (OVX) Mäuse einmal pro Tag, 5 Tage pro Woche für 12 Wochen. </li></ol></li></ol> 2. Protokoll II: Herstellung von EXD-haltigem Serum <ol><li> Berechnung <ol><li> Berechnen Sie die Ratten-Äquivalent-Dosis (RED) mit 0,15 kg als Körpergewicht jeder Ratte (1 Monat alt): dB = (1/60) * (90/100) * (60 / 0,15) 1/3 = 0,111 EXD / Kg / Tag. HINWEIS: Es werden insgesamt 10 ml EXD-haltiges Serum benötigt, um 100 ml Kulturmedium (10% EXD-haltiges Serum) herzustellen. Es wird erwartet, dass jede Ratte 2 ml Serum liefert. So werden 6 Ratten (ein 20% Verlust berücksichtigt) für die EXD-Verabreichung einmal täglich für 3 Tage benötigt. Die Anzahl der EXDs ist: (0,111 EXD / kg • Tag) * (0,15 kg / Ratte) * (6 Ratten) * (3 Tage) = 0,300 EXD. Wiederum, weil EXDs in diskreten Schritten gemessen werden,1 EXD verwenden. </li><li> Berechnen Sie das Volumen der aufgetragenen EXD pro Ratte ( dh V = (0,111 EXD / kg • Tag) * (0,15 kg / Ratte) * (50 ml / EXD) = 0,83 ml / Ratte • Tag). </li></ol></li><li> Einweichen <ol><li> Legen Sie die Rohstoffe für 1 EXD in einen Behälter mit einem Deckel. Mischen Sie die rohen Kräuter in destilliertem Wasser für 1 Stunde; Das Wasser sollte die Kräuter um etwa einen Zoll abdecken. Lass alle Kräuter gründlich einweichen. </li></ol></li><li> Erste Wasserabkochung <ol><li> Die Kräuter mit einem Induktionsherd bei hoher Leistung erhitzen, bis das Wasser kocht (ca. 5 - 10 min, die Zeitspanne hängt von der Wärmeleistung, dem Behälter und der Menge an Kräutern und Wasser ab). Schalten Sie die Stromversorgung für 2 Std. </li></ol></li><li> Erste Filtration <ol><li> Bedecken Sie ein 500-ml-Glasbecher mit normalem Filterpapier oder mit Gaze und Baumwolle. Die Abkochung vorsichtig in den Becher durch den Filter abgießen. Lassen Sie die Kräuter in den Behälter. </li><li&gt; Bringen Sie den pflanzlichen Rückstand auf das Filterpapier zum Behälter zurück. </li></ol></li><li> Zweite Wasserabkochung <ol><li> Füge dem Behälter mit den Kräutern destilliertes Wasser hinzu. Lass es die Kräuter um etwa einen Zoll abdecken. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 2.4. </li></ol></li><li> Zweite Filtration <ol><li> Wiederholen Sie die Schritte 2.5.1 und 2.5.2. </li><li> Gießen Sie die zweite Abkochung in den gleichen Becher wie in Schritt 2.4.1 und mischen Sie die erste und zweite Abkochung zusammen. </li></ol></li><li> Konzentration <ol><li> Setzen Sie den Becher auf einen Gaskocher mit asbestfreien Drahtgaze zwischen ihnen, erhitzen Sie den Abkochung mit einem schwachen köcheln und langsam und kontinuierlich mit einem Glasstab umrühren. </li><li> Wenn die Abkochung auf 100 mL abfällt, übertrage sie in ein 100-ml-Becherglas. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 2.7.1, bis die Abkürzung auf 50 ml reduziert wird. </li></ol></li><li> Lagerung und Verwaltung <ol><li> Übertragen Sie die konzentrierte Abkochung in ein SterIle Glasflasche Lass es auf RT abkühlen. Bei 4 ° C bei einer Verwendung von einer Woche oder bei -70 ° C zur Langzeitlagerung aufbewahren. </li><li> Intragastrisch verabreichen 0,83 ml / Ratte einmal pro Tag für 3 Tage. </li></ol></li><li> EXD-haltige Serumzubereitung <ol><li> Die Ratten durch intraperitoneale Injektion von 300 ml / 100 g 80 mg / kg Ketamin und 10 mg / kg Xylazin bei 1 h nach der letzten Verabreichung von EXD anästhesieren. Bestätigen Sie die richtige Betäubung durch Zehenknecht. </li><li> Die Haut und das Bauchfell der Ratte vom Bauch bis zum Boden des Thorax mit einem Skalpell (oder einer geraden Arbeitsschere) aufschneiden. Erstellen Sie einen Schnitt von Länge und Tiefe von etwa 5 cm bzw. 0,5 cm. Verschieben Sie die Bauch-Eingeweide nach links mit Seidenpapier. </li><li> Mit Tissue-Papier, entfernen Sie das Bindegewebe der Bauch-Aorta, um deutlich aus dem Gefäß. </li><li> Ziehen Sie das Blut langsam aus der Bauchaorta mit einer 10-ml-22-Gauge-Spritze. Übertragen Sie es aufEin 15-ml-steriles Rohr nach dem Entfernen der Nadel; Eine Ratte kann 8-10 ml Blut produzieren. ANMERKUNG: Die Ratte sollte am Leben sein ( dh mit der abdominalen Aorta pulsierend) beim Beginn der Blutzeichnung und tot, nachdem die Zeichnung abgeschlossen ist. </li><li> Das Blut in einer aufrechten Position für 30 - 60 min bei Raum RT klopfen. Zentrifuge bei 500-600 xg für 20 min. Setzen Sie den Überstand (Serum) sorgfältig in ein 50 ml steriles Röhrchen und mischen Sie das ganze Serum (von verschiedenen Tieren) zusammen. </li><li> Durchführen der Hitzeinaktivierung durch Inkubieren des Serums in einem 56 ° C Wasserbad für 30 min. Filtern des Serums unter Verwendung eines Spritzenfilters mit einer hydrophilen Polyethersulfonmembran mit einer Dicke von 0,22 μm. Verwenden Sie das Serum frisch oder lagern Sie es bei -20 ° C. </li></ol></li><li> Kontroll-Arzneimittel enthaltende Serumzubereitung (in der Kontrollgruppe verwendet) <ol><li> Jede Ratte mit dem gleichen Salzgehalt (0,83 ml) einmal pro Tag für 3 Tage verabreichen. Die anderen Schritte sind die gleichen wie in Schritt 2.9.</li></ol></li><li> Anwendung <ol><li> Füge 10 ml EXD-haltiges Serum oder medikamentenhaltiges Serum zu je 100 ml Medium, plus 1% Penicillin-Streptomycin (PS) 23 hinzu. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+in+vitro+effects+and+interactions+of+active+fractions+in+a+Chinese+medicinal+formula+%28Yaotongning+Capsule%29+on+rat+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes.</a> J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).</li>
<li>Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+seven+crude+drug+components+in+the+sleep-promoting+effect+of+Yokukansan%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">The role of the seven crude drug components in the sleep-promoting effect of Yokukansan.</a> J Ethnopharmacol. 177, 19-27 (2016).</li>
<li>Kim, J. H., Doh, E. J., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Medicinal+Categorization+of+Atractylodes+japonica+Koidz.+by+Using+Internal+Transcribed+Spacer+Sequencing+Analysis+and+HPLC+Fingerprinting+Combined+with+Statistical+Tools%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Medicinal Categorization of Atractylodes japonica Koidz. by Using Internal Transcribed Spacer Sequencing Analysis and HPLC Fingerprinting Combined with Statistical Tools.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 2926819(2016).</li>
<li>Sheridan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+metabolic+fingerprinting+as+a+tool+for+the+modernisation+of+TCM+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">The potential of metabolic fingerprinting as a tool for the modernisation of TCM preparations.</a> J Ethnopharmacol. 140 (3), 482-491 (2012).</li>
<li>Planas, G. M., Kucacute, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17744732">Contraceptive Properties of Stevia rebaudiana.</a> Science. 162 (3857), 1007(1968).</li>
<li>Tashino, S. "Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Ther Drug Monit Res. 5, 54-64 (1988).</li>
<li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha-induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha-induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Exp Ther Med. 8 (3), 998-1004 (2014).</li>
<li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+Vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Ex Vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 7380439(2016).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Integr+Med%22%5BJournal%5D)">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chin J Integr Med. 20 (6), 450-455 (2014).</li>
<li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mechanism%3A+Erxian+Decoction%2C+a+Chinese+medicine+formula%2C+for+relieving+menopausal+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">A novel mechanism: Erxian Decoction, a Chinese medicine formula, for relieving menopausal syndrome.</a> J Ethnopharmacol. 123 (1), 27-33 (2009).</li>
<li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Erxian+decoction%2C+a+Chinese+medicinal+formulation%2C+on+serum+lipid+profile+in+a+rat+model+of+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+Med%22%5BJournal%5D)">Effects of Erxian decoction, a Chinese medicinal formulation, on serum lipid profile in a rat model of menopause.</a> Chin Med. 6, 40(2011).</li>
<li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized%2C+double-blind%2C+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+%28Er-Xian+decoction%29+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women%5BTitle%5D)+AND+%22Menopause%22%5BJournal%5D)">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li>
<li>Wang, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroidogenic+effect+of+Erxian+decoction+for+relieving+menopause+via+the+p-Akt%2FPKB+pathway+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Steroidogenic effect of Erxian decoction for relieving menopause via the p-Akt/PKB pathway in vitro and in vivo.</a> J Ethnopharmacol. , (2016).</li>
<li>Lin, L., Wu, S., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BClinical+observation+and+experimental+study+of+the+treatment+of+aplastic+anemia+by+warming+and+tonifying+the+spleen+and+kidney%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Clinical observation and experimental study of the treatment of aplastic anemia by warming and tonifying the spleen and kidney].</a> Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 10 (5), 272-274 (1990).</li>
<li>Nian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiosteoporotic+activity+of+Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats.</a> J Ethnopharmacol. 108 (1), 96-102 (2006).</li>
<li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiosteoporotic+chemical+constituents+from+Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula.</a> J Ethnopharmacol. 118 (2), 271-279 (2008).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+HNMR-based+metabonomics+study+of+postmenopausal+osteoporosis+and+intervention+effects+of+Er-Xian+Decoction+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">A HNMR-based metabonomics study of postmenopausal osteoporosis and intervention effects of Er-Xian Decoction in ovariectomized rats.</a> Int J Mol Sci. 12 (11), 7635-7651 (2011).</li>
<li>Lu, X. N., Xu, X. R., Lin, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BClinical+observation+of+bushen+er%27xian+decoction+in+treating+premature+ovarian+failure%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Clinical observation of bushen er'xian decoction in treating premature ovarian failure].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 28 (7), 594-596 (2008).</li>
<li>Yu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-angiogenic+activity+of+Erxian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Anti-angiogenic activity of Erxian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in zebrafish.</a> Biol Pharm Bull. 35 (12), 2119-2127 (2012).</li>
<li>Chu, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+and+in+vivo+investigation+of+the+antimetastatic+effects+of+a+Chinese+medicinal+decoction%2C+erxian+decoction%2C+on+human+ovarian+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">An in vitro and in vivo investigation of the antimetastatic effects of a Chinese medicinal decoction, erxian decoction, on human ovarian cancer models.</a> Integr Cancer Ther. 12 (4), 336-346 (2013).</li>
<li>Zhu, Z., Li, L., Jin, X., Fang, J., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+intervening+early+in+hypothalamic-pituitary+axis+of+male+rats+with+delayed+puberty%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogn+Mag%22%5BJournal%5D)">Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, intervening early in hypothalamic-pituitary axis of male rats with delayed puberty.</a> Pharmacogn Mag. 10 (40), 517-521 (2014).</li>
<li>Miao, M. S. Experimental animals and technology. 1997, Chinese Modical Publisher. Beijing. 145(1997).</li>
<li>Soleimani, M., Nadri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).</li>
<li>Lu, S., Huang, J., Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Er-Xian+Decoction+Stimulates+Osteoblastic+Differentiation+of+Bone+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Ovariectomized+Mice+and+Its+Gene+Profile+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Er-Xian Decoction Stimulates Osteoblastic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells in Ovariectomized Mice and Its Gene Profile Analysis.</a> Stem Cells International. 2016, 4079210(2016).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+seven+flavonoids+in+dog+plasma+by+ultra-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+and+its+application+to+a+bioequivalence+study+of+bioactive+components+in+Herba+Epimedii+and+Er-Xian+Decoction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of seven flavonoids in dog plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a bioequivalence study of bioactive components in Herba Epimedii and Er-Xian Decoction.</a> J Pharm Biomed Anal. 54 (1), 186-191 (2011).</li>
<li>Hu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+major+chemical+constituents+and+their+metabolites+in+rat+plasma+and+various+organs+after+oral+administration+of+effective+Erxian+Decoction+%28EXD%29+fraction+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Chromatogr%22%5BJournal%5D)">Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD) fraction by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Biomed Chromatogr. 24 (5), 479-489 (2010).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+and+interaction+of+icariin%2C+curculigoside%2C+and+berberine+in+er-xian+decoction%2C+a+traditional+chinese+medicinal+formula%2C+on+osteoclastic+bone+resorption%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Effects and interaction of icariin, curculigoside, and berberine in er-xian decoction, a traditional chinese medicinal formula, on osteoclastic bone resorption.</a> Evid Based Complement Alternat Med. , (2012).</li>
<li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22J+Basic+Clin+Pharm%22%5BJournal%5D)">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> J Basic Clin Pharm. 7 (2), 27-31 (2016).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> Int J Clin Exp Med. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li>
<li>Li, Z., Wang, J. On the methods for Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Guo Zhong Yi Yao Xing Xi Za Zhi. 9 (2), 5-6 (2002).</li>
<li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors%27+expression+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Integr+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chin J Integr Med. 18 (1), 30-33 (2012).</li>
<li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BEffect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood%2C+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li>
<li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK%2FSTAT+signaling+of+HSC-T6+cells%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Gan+Zang+Bing+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells].</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li>
<li>Li, Y. K. [Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology]. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263(1999).</li>
<li>Zhang, L., et al. [A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study]. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254(2002).</li>
<li>Zhang, D. [Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology]. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

In den letzten Jahren wurde mehr Aufmerksamkeit auf pflanzliche Arzneimittel, eine Art von alternativen Medizin, die in der klinischen Einstellung in der östlichen Welt seit Tausenden von Jahren angewendet wurde bezahlt worden. Anders als das &quot;Bench to Bed&quot; -Muster der modernen Medizin, verlangen traditionelle Kräutermedizin zuerst das &quot;Bett zur Bank&quot; Muster, um ihre Mechanismen zu erklären. Darauf folgt eine Validierung, die im Bankstadium durchgeführt wird und für die Entwicklung von neu optimierte...

Das Interesse an der Studie und Anwendung der traditionellen Kräutermedizin wächst derzeit. Im Gegensatz zu modernen Medikamenten, in denen chemische Bestandteile definitiv sind, haben pflanzliche Formeln einige unbekannte Zutaten und erfordern Extraktionsverfahren, um die Abgabe ihrer Wirkstoffe zu ermöglichen. Obwohl viele Studien versuchen, eine kleine Verbindung mit einer bekannten Struktur als Vertreter der ganzen Kräuter- oder Kräuterformel auszuwählen, können weder die pharmakologischen Wirkungen noch Mechanismen als gleichwertig angesehen werden 1 , 2 . Während der Fingerabdruck die Analyse der Bestandteile komplexer pflanzlicher Formeln ermöglicht, werden einige Bestandteile noch nicht klar analysiert, was zu einer Herausforderung führt, wenn alle Extrakte für die Studie 3 kombiniert werden. Die Wechselwirkungen zahlreicher Bestandteile / Extrakte vermitteln die therapeutischen Wirkungen von pflanzlichen Arzneimitteln. Um diesen Vorteil zu behalten, wird der traditionelle Auszugsformular dekodiertIon ist in der Klinik immer noch weit verbreitet. Da das Extraktverfahren einen großen Einfluss auf die therapeutische Wirksamkeit hat, ist ein Standardprotokoll der traditionellen Wasserabkochung notwendig, insbesondere für in vivo Studien 4 , 5 . Auf der anderen Seite ist bei der Erforschung pharmakologischer Mechanismen auch die Verabreichung von Kräuterdekuren während der In-vitro- oder Ex-vivo- Studien eine Herausforderung. Das Konzept eines drogenhaltigen Serums wurde erstmals 1988 von Tashino vorgeschlagen 6 . Seitdem haben immer mehr Forscher die Kräutermedizin 7 , 8 , 9 angewendet. Obwohl die Methode des Arzneimittel-enthaltenden Serums einige Einschränkungen aufweist, wie der Einfluss bestimmter Bestandteile des Serums, gilt es immer noch als eine Methode, die physiologische Zustände imitiert. 10 , 11 , 12 , 13 . Es wurde auch auf die Behandlung von aplastischen Anämie 14 , Menopause Osteoporose 15 , 16 , 17 , vorzeitige Eierstockversagen 18 , Brustkrebs 19 , Eierstockkrebs 20 und verspätete Pubertät angewendet 21 . Hier stellen wir detaillierte Protokolle für die Herstellung sowohl des Er-Xian-Abkochens (EXD) als auch seines medikamentenhaltigen Serums vor. Darüber hinaus beschreiben wir die Anwendung von EXD und EXD-haltigem Serum, um menopausale osteoporotische Modelle zu mähen. Eine EXD besteht aus 9 g Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii </eM&gt;, Radix Morindae Officinalis und Radix Angelicae Sinensis und jeweils 6 g Cortex Phellodendri und Rhizoma Anemarrhenae pro erwachsenen Patienten pro Tag. Die äquivalente Dosis für eine Maus ist 0,1418 EXD / kg / Tag, bezogen auf die folgende Gleichung 22 : dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA und dB beziehen sich auf die Dosis pro Körpergewicht (mg / kg) des Menschen bzw. der Maus. Die Dosis in mg / kg wird durch die Anzahl der EXD / kg ersetzt. RA und RB repräsentieren den menschlichen Körperfaktor bzw. den Mauskörperfaktor, die proportional zur (Körperoberfläche (m 2 ) / Körpergewicht (kg)) 2/3 sind (siehe Tabelle 1 ). WA und WB geben das Körpergewicht (kg) des Menschen bzw. der Maus an.

<table><tbody><tr><td>Curculigo orchioides Gaertn (9&thinsp; g), Herbaa Epimedii (9&thinsp; g), Radix Morindae Officinalis (9&thinsp; g), Radix Angelicae Sinensis (9&thinsp; g), Cortex Phellodendri (6&thinsp; g) und Rhizoma anemarrhenae (633; g)</td><td>Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN)</td><td>160922</td><td>EXD-Komponenten</td></tr><tr><td>Filterpapier</td><td>GElifesciences</td><td>99-103-952</td><td>Filter EXD-Abkochung vor der Konzentration</td></tr><tr><td>Prägung Kontrollregion (ICR) Mäuse Shanghai</td><td>Laboratory Animal Center</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>In-vivo-Studie</td></tr><tr><td>Sprague Dawley Ratten</td><td>Shanghai Laboratory Animal Center</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>EXD-haltige Serumzubereitung</td></tr><tr><td>Spritzenfilter</td><td>Millipore</td><td>SLGP033RB</td><td>0,22 &micro; </td></tr><tr><td>M-Sondennadeln (10 ml)</td><td>Shanghai BO Ge Handelsverkaufsabteilung</td><td>59104274</td><td>Verabreichung von EXD-Ketamin</td></tr><tr><td>(80 mg/kg)</td><td>Fujian Gutian Pharma Co. Ltd</td><td>H35020148</td><td>Anästhesie</td></tr><tr><td>Xylazin (10 mg/kg)</td><td>Sunway Pharma Co. Ltd</td><td>CB07591</td><td>Anästhesie</td></tr><tr><td>Dulbecco s Modifikation von Eagle" s Medium Dulbecco (DMEM) Kulturmedium</td><td>Gibco</td><td>12800-116</td><td>DMEM mit 2 mM L-Glutamin und ohne Ribonukleoside und Ribonukleotide</td></tr><tr><td>Streptomycin</td><td>Sigma</td><td>1277</td><td>100 &micro; g / ml</td></tr><tr><td>Penicillin</td><td>Sigma</td><td>4687</td><td>100 &micro; g / ml</td></tr></tbody></table>

vorbereitung der kräutermedizin: er-xian decoction und er-xian-haltiges serum für<em&gt; in vivo</em&gt; und<em&gt; in vitro</em&gt; experimente

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Traditionelle Kräutermedizin, eine alternative Medizin in der klinischen Einstellung, hat in den letzten Jahren verstärkte Aufmerksamkeit erhalten. Vor der Auslieferung an den Körper ist ein zusätzliches Extraktionsverfahren üblicherweise erforderlich, um die aktiven Bestandteile aus Rohkräutern freizusetzen. Wasserabkochung ist ein klassisches Extraktionsverfahren, das in den klinischen Einstellungen immer noch weit verbreitet ist. Hier schlagen wir ein detailliertes Protokoll für die Er-xian-Abkochung (EXD) vor, um pflanzliche Abkochungen auf experimentelle Studien anzuwenden. Die Berechnung einer tierrelevanten Dosis wird ebenso beschrieben wie die vier Hauptschritte von EXD: Einweichen, Wasserabkochen, Filtration und Konzentration. Darüber hinaus wird serumhaltiges EXD an Ratten als Mittel der in vitro- Validierung eingeführt. Hier wurden Ratten für drei Tage oral verabreicht. Blutproben wurden dann gesammelt, inaktiviert, zentrifugiert und filtriert. Das mit dem Kulturmedium verdünnte Serum kann zur Behandlung von Zellen oder Geweben in v verwendet werdenItro Beispielsweise wurde EXD sowohl in vivo als auch in vitro untersucht und gezeigt, dass EXD die Osteogenese verstärkt. Dieses Protokoll kann als Referenz für die Vorbereitung und Anwendung von pflanzlichen Arzneimitteln verwendet werden.

Die Wirkung von EXD auf die Knochendichte von OVX-Mäusen Hämatoxylin- und Eosin- (H &amp; E) -Färbung des Lendenwirbelabschnitts zeigt erhöhte Knochentrabekel nach der EXD-Behandlung in vivo (Abbildung 1A , rechte Tafel) im Vergleich zu denen in der OVX-Gruppe (Abbildung 1A , linke Tafel). Abbildung 1B zeigt die repräsentativen μCT-Bilder der 4. Lendenwirbelsäule in OVX-...

Hier präsentieren wir die Vorbereitung eines Er-Xian-Abkochens (EXD) in vier Stufen - Einweichen, Abkühlen, Filtrieren und Konzentrieren - und zeigen die Verabreichung eines präparierten EXD-haltigen Serums an Ratten. Diese Methoden gelten für die in vivo und in vitro Studie von pflanzlichen Abkochungen wie traditionelle chinesische Medikamente.

Vorbereitung der Kräutermedizin: Er-Xian Decoction und Er-Xian-haltiges Serum für<em&gt; In vivo</em&gt; Und<em&gt; In vitro</em&gt; Experimente

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein Er-Xian-Decoction, ein traditionelles chinesisches Kräutermedikament, für seine Anwendung in vivo und in vitro herzustellen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Kräutermedizin bezüglich der Herstellung und Anwendung eines traditionellen chinesischen Arzneimittels zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass die wässrigen Extraktionsschritte denen ähneln, die in klinischen Anwendungen verwendet werden.Geben Sie die Rohstoffe für eine einzelne Er-Xian-Abkochung in einen Behälter mit Deckel und fügen Sie so viel destilliertes Wasser hinzu, dass die Kräuter etwa einen Zoll bedeckt sind. Schließen Sie den Behälter und mazernieren Sie die rohen Kräuter eine Stunde lang. Erhitzen Sie anschließend die Kräuter mit einem Gasherd auf höchster Stufe, bis das Wasser kocht.Reduzieren Sie die Hitze auf ein schwaches Sieden und dekoktieren Sie die Kräuter für zwei Stunden. Am Ende der ersten Wasserdekoktion decken Sie einen 500-Milliliter-Glaskolben mit Gaze und Watte ab und gießen vorsichtig nur die Dekoktflüssigkeit durch das Filtermaterial in den Kolben. Geben Sie den pflanzlichen Rückstand au

preparation-herbal-medicine-er-xian-decoction-er-xian-containing

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieser Artikel enthält ein detailliertes Protokoll zur Vorbereitung einer Arbeitslösung von Gushukang-Granulat für Tierstudien und GSK-Granulat, das Serum für In-vitro-Experimente enthält. Dieses Protokoll kann auf pharmakologische Untersuchungen von pflanzlichen Arzneimitteln sowie auf Verschreibungen für In-vivo- und In-vitro-Experimente angewendet werden.

Vorbereitung von Gushukang (GSK) Granulat en for In Vivo und In Vitro Experiments

Dieses Protokoll bietet eine Kombinationsstrategie von zwei Kräutern zur Behandlung verletzter PC12-Zellen. Das Protokoll bietet eine Referenz für die Optimierung der besten Applikationsweise der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM).

Erforschung der Zwei-Kräuter-Kombinationsstrategie zur Behandlung verletzter PC12-Zellen

In diesem Protokoll wurde die Hammelöl-Verarbeitungstechnologie von Epimedii folium (EF) durch die Anwendung einer Box-Behnken-experimentellen Design-Response-Oberflächenmethodik optimiert und der Einfluss von rohem und optimiertem wasserextrahiertem EF auf die Embryonalentwicklung von Zebrafischen vorläufig untersucht.

Optimierung der Epimedii Folium Hammelöl-Verarbeitungstechnologie und Prüfung ihrer Wirkung auf die Embryonalentwicklung von Zebrafischen

Wir beschreiben eine allgemeine Protokoll für die in-vivo-Zellortung mittels MRT in einem Mausmodell mit Ex-vivo-markierten Zellen. Ein typisches Protokoll für die Zellmarkierung, Bildaufnahme und Verarbeitung Quantifizierung ist inbegriffen.

In-vivo-19 F-MRT für die Zellverfolgung

Dieses Verfahren wurde mit dem Ziel der Bereitstellung einer stabilen Arzneimittellösung über die Halsschlagader, die Pharmakokinetik von neuen Arzneimitteln in Mausmodellen zu bewerten entwickelt.

Halsschlagader Infusionen für pharmakokinetischen und pharmakodynamischen Analyse von Taxanen in Mäusen

Hier wird die Echtzeitüberwachung des Tumorzellstoffwechsels, kombiniert mit einem in vivo Modell der Chorio-Allantoismembran (CAM) der Metastasierung von Hühnerembryonen, verwendet, um neuartige Anti-Krebs-Ziele/Wirkstoffe auf ihre Fähigkeit hin zu bewerten, Tumorzellen für DNA-schädigende Chemotherapeutika zu sensibilisieren.

Bewertung der Wirksamkeit der Krebsmedikament Sensibilisierung<em&gt; In-vitro-</em&gt; Und<em&gt; In-vivo-</em

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte, die erforderlich sind, um die ex vivo-Validierung von in vivo Nahinfrarot-Fluoreszenz-Xenotransplantat-Bildgebungsexperimenten an Mäusen unter Verwendung von Fluorophor-markierten Nanobodies und konventionellen Antikörpern durchzuführen.

Validierung der Nanobody und Antikörper-basierte<em&gt; In-vivo-</em&gt; Tumorxenotransplantat NIRF-Bildgebung Experimente bei Mäusen verwenden<em&gt; Ex vivo</em&gt; Durchflusszytometrie und Mikroskopie

Menschliche Tumorxenotransplantate sind vaskularisiert und durch Zellen von Maus - Ursprung während der Wachstumsphase in vivo infiltriert. Um die Vorspannung, die durch diese kontaminierenden Zellen während nachgeschalteten Analyse verursacht umgehen, entwickelten wir ein Verfahren erlaubt eine umfassende Depletion aller Mauszellen durch magnetische Zellsortierung.

Depletion von Maus-Zellen aus menschlichem Tumorxenografte deutlich verbessert Downstream-Analyse von Zielzellen

Hier werden optimierte Methoden zur Generierung von in vivo und in vitro Modellen der hepatischen Steatose und zur Analyse der steatotischen Phänotypen und der damit verbundenen physiologischen Parameter beschrieben.

Optimierte Analyse von<em&gt; In Vivo</em&gt; und<em&gt; In Vitro</em&gt; Hepatosteatose

Dieses Manuskript beschreibt die effiziente, nicht-virale Abgabe von miR-Zellen durch einen PEI / MNP-Vektor und ihre Magnetisierung an Endothelzellen. Somit kann zusätzlich zu genetischer Veränderung, ermöglicht dieser Ansatz für die magnetische Zellführung und MRI Nachweisbarkeit. Die Technik kann verwendet werden, um die Eigenschaften von therapeutischen Zellprodukten zu verbessern.

Vorbereitung und<em&gt; In Vitro</em&gt; Charakterisierung von Magnetized miR-modifizierten Endothelzellen

Lernen Sie die standardisierte Zubereitung von Er-Xian Decoction für In-vivo- und In-vitro-Studien. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Extraktion und Serumpräparation zur Untersuchung osteogener Effekte.

Vorbereitung der Kräutermedizin: Er-Xian Decoction und Er-Xian-haltiges Serum für

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