Name: Overaccumulation Ileectomy-induzierten Galle im Darm der Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Erfahren Sie die Ileektomie-Technik zur Untersuchung von Gallensäure-Malabsorption und Überakkumulation im Darm von Mus musculus. Diese Methode liefert wertvolle Einblicke für gastroenterologische Forschung und Therapieansätze.

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Diese Forschung wird von Tom Peterson Stiftung unterstützt und NIH R01-HL119780 (Jain, MK) zu gewähren.

Tier-Protokoll wurde überprüft und durch die institutionelle Animal Care and Use Committee an der Case Western Reserve University School of Medicine genehmigt und wurde im Einklang mit der National Institutes of Health (NIH)-Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren (8. Auflage, 2011). Mäuse wurden durch Methoden der American Veterinary Medical Association (AVMA) Richtlinien für die Euthanasie der Tiere eingeschläfert (Ausgabe 2013). C57BL/6J, männliche, 8-16 Wochen alten Mäusen wurden in diesem Protokoll verwendet. Mäuse in einer 12 h hell/dunkel-Zyklus Umgebung untergebracht waren.
 1. präoperative Vorbereitung <ol><li>Transfer Mäuse zu einem sauberen Käfig 24 h vor dem Eingriff. Können Sie Tiere freien Zugang zum Wasser. Chow Gargut mit weiche Nahrung (Gel Nahrungsergänzungsmittel) 4-6 h vor der Operation, den Inhalt des Dünndarms für die Operation zu reduzieren.</li>
	<li>Alle chirurgischen Instrumente sterilisieren und die Einweg-sterilen chirurgischen Materialien vorzubereiten. Reinigen Sie den OP-Bereich und die Narkose Bugnase mit 70 % igem Ethanol.</li>
	<li>Richten Sie eine Dissektion Mikroskop, Isoflurane Narkose Verdampfer, Instrumente und eine temperaturgeführte kleine Tier OP-Tisch für Körper Temperaturerhaltung. Instrumente, Nahtmaterial und Spritzen an einem Ort für den freien Zugang zu organisieren, während der Operation.</li>
	<li>Eingerichtet, eine Lichtquelle um genug Licht für den OP-Bereich zur Verfügung zu stellen.</li>
	<li>Sterile 0,9 % Kochsalzlösung in 5 mL Spritze für die Reinigung von Darm und Bauchschmerzen bereiten.</li>
</ol> 2. Ileectomy und Anastomose <ol><li>Anesthetize Mäuse mit Isofluran (2-3 %) in einer kleinen tierischen Inkubation Kammer. Angemessene Anesthetization mit der Zehe Pinch-Technik, während das Tier auf Isofluran ist zu bestimmen.</li>
	<li>Bauch Haare durch die Anwendung der Haarentfernung Produkt entfernen und wischen Sie Haar mit chirurgischen Schwämme unter Beibehaltung der Anästhesie. Platzieren Sie den Mauszeiger auf eine temperaturgeführte kleine Tier OP-Tisch ( Abb. 1 A) auf Körpertemperatur zu halten, bei 37 ° c Maintain Anästhesie mit Isofluran (1-2 %) durch eine Gesichtsmaske. Die Maus-Augen mit okulärer Salbe zu behandeln.</li>
	<li>Reinigen Sie die Haut mit Povidon-Jod und 70 % Alkohol und decken Sie den chirurgischen Bereich des Bauches mit sterilen chirurgischen Gaze ( Abbildung 1 B).</li>
	<li>Stellen eine Mittellinie Bauchschnitt mit einem chirurgischen Skalpell einmal Anästhesie in Kraft. Verwenden Sie einen Baumwoll-gespitzten Applikator schützen den Darm und ziehen Maus Bauchmuskel mit Retraktoren vollständig öffnen und Aussetzen der Bauchhöhle ( Abbildung 1 C).</li>
	<li>Suchen Sie nach der Blinddarm. Ausgehend von der Blinddarm vorsichtig bewegen die angeschlossenen Ileum und Bestandteil der Jejunum aus der Bauchhöhle ( Abbildung 1 D). 
	Hinweis: Der Blinddarm leicht erkennbar aufgrund seiner Größe auch nach Fasten.</li>
	<li>Verbinden die oberen Zweig der überlegenen mesenterialen Arterie mit einer 7-0 Seide Naht zu verdecken das Blut liefert das Ileum Segment, das herausgeschnitten werden soll. Ileale Farbwechsel von rosa bis dunkel violett nach Ligatur. ( Abbildung 1-E - F).</li>
	<li>Je nach dem Zweck des Versuchs, mit einer Schere, Verbrauchsteuern und entfernen Sie 50 % oder 90 % der Krummdarm. 
	Hinweis: Für Schein-Chirurgie, der überlegenen mesenterialen Arterie Ligatur nicht durchführen und entfernen Sie nicht das Ileum.</li>
	<li>Spülen das Lumen der ileal beidseitig mit 0,9 % Kochsalzlösung. 
	Hinweis: da die verbleibenden intakten Ileum noch eine normale Blutversorgung empfängt von der überlegenen mesenterialen Arterie wird eine kleine Menge Blut während des Prozesses ausgespült werden. Dies bedeutet auch, dass das Blut-Versorgungsmaterial zu den ileal enden normal ist und keine Ischämie bei der Anastomose ( Abbildung 1 G gewährleistet).</li>
	<li>Suchen Sie die Mesenterien auf der Seite beidseitig Ileum. Richten Sie die Mesenterien und Naht die ileal Enden zusammen mit 8: 0 Nahtmaterial ( Abbildung 1-G - H).</li>
	<li>Naht die kontralaterale Seite des Ileum, Ileum zu halten auf natürliche Weise ( Abbildung 1 ich) anastomosieren.</li>
	<li>Naht die oberen und unteren Seiten zwischen die zwei ursprünglichen Nähte gründlich verbinden die beiden ileal Enden zusammen ( Abbildung 1 J).</li>
	<li>Bestätigen, dass es kein Durchsickern von der Anastomose Website nach Abschluss die Box-Stufigkeit ( Abbildung 1 G-ich). Der Blinddarm und Dünndarm in die Bauchhöhle, die ursprünglichen anatomischen Lage zurück. Waschen Sie den OP-Bereich mit warmen 0,9 % Kochsalzlösung mit einer stumpfen Nadel. ( Abbildung 1 K).</li>
	<li>In der Nähe des Schnitt der Bauchmuskel Schicht mit 6-0 Naht. Richten Sie die Bauchhaut Inzision mit Pinzette und Naht die Bauchhaut Erleichterung optimale Wundheilung ( Abbildung 1 L).</li>
</ol> 3. Postoperative Versorgung <ol><li>Übertragung der postoperativen Mäuse auf eine Intensivstation für Erholung. Beherbergen sie in einem Papier-Bettwäsche-Käfig auf eine temperaturgeführte Heizkissen auf die postoperative Erholung über Nacht fortsetzen. Mäuse mit weiche Nahrung zusätzlich regelmäßige Nahrung und Wasser zu versorgen.</li>
	<li>Verwalten Buprenorphin (0,05 - 0,1 mg/kg) mit subkutane Injektion alle 8-12 h für Analgesie. 
	Hinweis: Mäuse durch CO 2 einschläfern, wenn schwer kranke.</li>
	<li>An den Endpunkt zu Opfern Mäuse mit überdosiert Isoflurane und Ernte Proben nach Bedarf (Abschnitt 4).</li>
</ol> 4. Bewertung der Ileectomy-induzierten Galle Overaccumulation <ol><li>wiegen und sezieren die Mäuse einen Tag nach einer Resektion von 0 % (Schein), 50 % oder 90 % der Krummdarm.</li>
	<li>Entfernen Sie den GI-Trakt und wiegen es. Berechnen Sie das Gewicht der GI-Körper-Gewichts-Verhältnis, die Schwere der Galle Salz Malabsorption und Overaccumulation zu bewerten.</li>
	<li>Der GI-Tracts in 15 mL konische Röhrchen zu übertragen und in kurze Segmente mit einer Schere schneiden. Nach dem Schnitt übertragen Zentrifuge bei 3.000 x g für 10 min. Überstands (GI Flüssigkeit enthält Gallensalze) in ein sauberes Röhrchen.</li>
	<li>Total Volumen und Gewicht der GI Flüssigkeit zu messen und berechnen Sie das Fluid Gewicht GI-Trakt-Gewichts-Verhältnis Galle Overaccumulation im GI-Trakt einzuschätzen.</li>
	<li>Bestimmen Sie die Höhe der insgesamt Galle im Überstand von Gallensäure-Assay, wie in Referenz 8 beschrieben.</li>
</ol>

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<li>Kuipers, F., Bloks, V. W., Groen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+intestinal+soap--bile+acids+in+metabolic+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Beyond intestinal soap--bile acids in metabolic control.</a> Nat Rev Endocrinol. 10, 488-498 (2014).</li>
<li>Buchman, A. L., Scolapio, J., Fryer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AGA+technical+review+on+short+bowel+syndrome+and+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">AGA technical review on short bowel syndrome and intestinal transplantation.</a> Gastroenterology. 124, 1111-1134 (2003).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Um eine erfolgreiche Ileectomy durchzuführen, muss die überlegene mesenterialen Arterie im Voraus ligiert werden, um das Blut-Versorgungsmaterial zum Segment resecting zu blockieren. Ischämische ileale Segment schaltet nach Ligation dunkelviolett. Das Ileum Segment muss dann komplett reseziert. Eine normale Blutversorgung muss für die einbehaltenen enden sichergestellt werden. Dies ist wesentlich, Blutungen und unsachgemäße Entfernung zu vermeiden, die können leicht Ursache chirurgische Fehler aufgrund von ischämischen N...

In der modernen biomedizinischen Forschung werden genetisch manipulierte Tiermodellen weithin genutzt, um Einblicke in menschliche Krankheiten aufzulesen. Insbesondere wurden Gewebe oder zellspezifische Gewinn und Verlust Funktionen von Genen zur molekularen Regulation sowie induzierte biologische Effekte zu studieren. Trotz der Fortschritte im Ziel Gene in VivoManipulation gibt es anhaltende Einschränkungen. Erste, viele Zellen oder Gewebe spezifische Löschungen betreffen mehrere Organe. Zum Beispiel wird epithelialen gen Löschung Ausdruck in Epithelien von mehreren Geweben beseitigen. Weiter, auch wenn die Löschung auf einem bestimmten Gewebe beschränkt ist, ist räumliche Kontrolle nur selten möglich. Zum Beispiel in einem Gewebe wie Darm durchführen verschiedene Segmente sehr spezifische Funktionen, die mit Präzision in Vivomanipuliert werden können nicht. In diesen Situationen Resektion der gen-haltigen Gewebe gilt ein effizienteres Studium Vorgehen die mechanistische und funktionelle Bedeutung der Gewebe Kommunikation bestimmen.
Ileectomy ist vor allem bei Patienten mit Morbus Crohn und entzündlichen Erkrankungen mit der distalen Ileum 1,2,3. Ileum produziert in der Regel mehrere Energie Speicher Hormone wie Fibroblasten-Wachstumsfaktor 15/19 (FGF15/19), Peptid YY (PYY) und Glucagon-Like Peptid 1/2 (GLP1/2); Diese Hormone spielen eine wichtige Rolle für lokale und endokrine in vielen biologischen Funktionen4,5,6. Unter dieser Hormone wurde FGF15 als eine robuste endokrine Inhibitor der Gallensäure-Synthese in der Leber festgestellt. Sobald in ileal Enterozyten resorbiert, aktivieren Gallensäuren führt anschließend zu Feedback-Hemmung der hepatischen Gallensäure Synthese 7nuklearen Rezeptoren Farnesoid X Rezeptor (FXR), Fgf15 Ausdruck, zu stimulieren. In einer aktuellen Studie, wir Ileectomy Mausmodell eingeführt, um das Ileum Kruppel-ähnlichen Faktor 15 (KLF15) zu studieren -Fgf15 Signalisierung Achse, die circadiane Gallensäure-Produktion in der Leber 8regelt. Am wichtigsten ist, haben wir eine neuartige Familie, Kruppel-ähnliche Faktoren, vor allem KLF15 in Gallensäure Biologie eingeführt. Basierend auf funktionelle Studien einschließlich der Ileectomy Chirurgie, haben wir festgestellt, dass KLF15 reguliert Gallensäure Synthese über einen indirekten Mechanismus nicht hepatisch. Ileale KLF15 ist schließlich auch als der erste endogene negativer Regulator der Fgf15identifiziert.
Die intestinale Segmente Abstieg vom proximalen zum distalen Regionen sind verantwortlich für die Aufnahme von anderen Nährstoffen. Das Ileum ist das große Segment verantwortlich für Gallensäure und Vitamin B12 (VB12) Aufnahme 9. Eine frühere Studie beschäftigt ein Maus-Modell der proximalen Darm-Resektion, kurzes Darmsyndrom zu studieren; verschiedene Längen Resektion, Diäten und Naht-Typen wurden vorgeschlagen, eine optimale postoperative überleben Rate 10beizubehalten. Darüber hinaus zeigt eine neuere Überprüfung dieser ileale Resektion in der Regel schwerere Krankheit als andere gastrointestinalen (GI) Segment Resektionen wegen der verminderten Anpassungsfähigkeit der restlichen Trakt 11ergibt. Dieses Thema hat intensive Interesse der Grundlagenforschung und Klinische Forschergruppen, gewonnen, während das Verständnis der Erholung und der wirksame therapeutische Ansätze sind noch begrenzt.
Gallensäure-Durchfall entsteht durch Ungleichgewichte in Gallensäure Homöostase in den enterohepatischen Kreislauf 12,13. Es kann eine Folge von ileale Resektion, Magen-Darm-Erkrankung oder eine Folge der idiopathischen Gallensäure-Malabsorption. Mehr als 80 % der Patienten wurden gefunden, um mit Durchfall nach einer ileale Resektion 14zu präsentieren. Ileectomy hat das Potenzial, eine wichtige Operation-Modell für die Erforschung der Gallensäure Durchfall sein. In dieser Studie eine Reihe von Ileum Resektionen bietet eine gradient Bewertung der FGF15 Mangel sowie Darm Galle Salz Malabsorption, Overaccumulation und toxischen Schäden.

<table><tbody><tr><td>Dissektionsmikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td>Für die Chirurgie&nbsp;</td></tr><tr><td>Temperaturregler für Tiere</td><td>Physitemp Instruments, Inc.</td><td>TCAT-2LV</td><td>Zur Kontrolle der Körpertemperatur</td></tr><tr><td>Isofluran-Anästhesieverdampfer</td><td>VetEquip</td><td>&nbsp; 911104</td><td>Für die Anästhesie</td></tr><tr><td>Dissektionezange</td><td>&nbsp; Fine Science Tools, Inc.</td><td>11274-20</td><td>Für Chirurgie&nbsp;</td></tr><tr><td>Schere</td><td>&nbsp; Fine Science Tools, Inc.</td><td>14084-08</td><td>Für Chirurgie&nbsp;</td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>&nbsp; Roboz Chirurgisches Instrument Co.</td><td>RS-7882</td><td>Für die Chirurgie&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikromesser-Nadelklinge</td><td>Fisher Scientific</td><td>10318-14</td><td>Für die Chirurgie&nbsp;</td></tr><tr><td>6-0 monofile Naht</td><td>Ethicon</td><td>1698G</td><td>Für den Verschluss der Bauchhaut</td></tr><tr><td>7-0 Seidennaht</td><td>Ethicon</td><td>766G</td><td>Für die Ligatur</td></tr><tr><td>8-0 monofile</td><td>Naht Ethicon</td><td>1714G</td><td>Für Anastomose</td></tr><tr><td>Chirurgische Schwämme</td><td>Dynarex Corp.</td><td>3333</td><td>Für chirurgische Eingriffe&nbsp;</td></tr><tr><td>Kleine Applikatoren mit Wattespitze&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td>Für die Chirurgie&nbsp;</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>66794-013-25</td><td>Für die Anästhesie</td></tr><tr><td>Buprenorphin Hydrochlorid</td><td>Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals</td><td>12496-0757-1</td><td>Für Analgesie</td></tr><tr><td>0,9% Natriumchlorid Injektion</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>0264-7800-10</td><td>Zum Waschen/Einspritzen</td></tr><tr><td>Povidon-Jod-Vorbereitungslösung</td><td>Dynarex Corp.</td><td>1413</td><td>Zur Vorbereitung der Haut</td></tr><tr><td>Puralube Tierarztsalbe</td><td>Dechra Veterinärprodukte</td><td>17033-211-38</td><td>Zum Schutz der Augen</td></tr><tr><td>Haarentfernerlotion</td><td>Kirche & Dwight Co., Inc.</td><td></td><td>Für die Hautvorbereitung</td></tr><tr><td>Intensivstation</td><td>ThermoCare</td><td>FW-1</td><td>Für die postoperative Genesung</td></tr><tr><td>DietGel recovery</td><td>ClearH2O</td><td>72-06-5022</td><td>Für die postoperative Genesung</td></tr><tr><td>Aurum Gesamt-RNA-Kit für Fett- und Fasergewebe</td><td>Bio-Rad</td><td>7326830</td><td>Für die RNA-Isolierung</td></tr><tr><td>iScript Reverse Transkription Supermix für RT-qPCR</td><td>Bio-Rad</td><td>1708841</td><td>Für Reverse-Transkriptions-Assay</td></tr><tr><td>TaqMan schneller fortschrittlicher Mastermix</td><td>Applied Biosystems/Life Technologies</td><td>4444965</td><td>Für die QPCR-Analyse</td></tr><tr><td>Gesamtgallensäure-Assay-Kit</td><td>Genzyme Diagnostic</td><td>DZ042A-K01</td><td>Für Gallensäure-Assay</td></tr><tr><td>C57BL/6J&nbsp;</td><td>Das Jackson-Labor</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

overaccumulation ileectomy-induzierten galle im darm der maus

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Darm-Resektion ist eine gemeinsame Therapieansatz für menschliche Krankheiten wie Fettleibigkeit, entzündlichen Darmerkrankungen, Morbus Crohn und Darmkrebs, die oft schweren kurzen Darm-Syndrom-ähnliche Nebenwirkungen einschließlich Gallensäure Durchfall führt, Dehydrierung, Elektrolytstörungen und Nährstoff Malabsorption. Hier stellen wir eine murinen ileale Resektion Modell, genannt Ileectomy, um Gewebe-Kommunikation und die Pflege der systemischen Homöostase zu bewerten. Nach ileale Resektion ist das zirkulierende Blut dauerhaft frei von dem Ileum-spezifischen endokrinen Hormon Fibroblasten-Wachstumsfaktor 15 (FGF15), die ihre endokrine Hemmung der Gallensäure-Synthese in der Leber freisetzt. In Kombination mit der erhöhten Produktion und abgeschafft Rückresorption von Gallensäuren nach dem Entfernen der Krummdarm leiden Mäuse, die operiert Galle Salz Overaccumulation in den Darm und damit verbundenen Durchfall, Morbidität und Mortalität. Neuartige Nutzung des Modells Chirurgie eingeführt in dieser Studie kann mechanistische und funktionale Einblicke in ileal Kontrolle über systemische Stoffwechselregulation in Physiologie und Krankheiten geben.

Die Verfahren für die Ileectomy sind in Abbildung 1dargestellt. Der erste Schritt beinhaltet Vorbereitung Maus Bauchhaut, wodurch ein Bauchschnitt und Verwendung von Retraktoren, um den Darm (Abbildung 1A-C) vollständig verfügbar zu machen. Als nächstes befand sich der Maus-Blinddarm (Abbildung 1D); Angesichts der Tatsache, dass seine Größe und Form es eine leicht er...

Dünndarm-abhängige Gallensäure Resorption und Feedback-Hemmung der hepatischen Gallensäure Synthese ist wichtig für systemische Homöostase und Gesundheit. In dieser Studie beschreiben wir ein Mausmodell für ileale Resektion, Ileectomy-induzierten Galle Malabsorption, Overaccumulation und Toxizität im Darm der Maus zu bewerten.

Overaccumulation Ileectomy-induzierten Galle im Darm der Maus

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs besteht darin, die durch eine Ileektomie verursachte gestörte Gallensäureresorption, deren Überakkumulation und Toxizität im Darm von Mäusen zu untersuchen. Erkrankungen des Ileums, die beispielsweise bei Morbus Crohn, Krebs, Autoimmunerkrankungen oder Infektionen auftreten, sind wichtige Ursachen für Morbidität und Mortalität. Wir sind der Ansicht, dass die Entwicklung dieses Modells, das die segmentale Entfernung des Ileums beinhaltet, wertvolle Erkenntnisse für das biologische Verständnis sowie für therapeutische Ansätze liefern kann.Die Implikationen dieser Technik reichen bis zur Therapie der Gallensäurediarrhö, da eine Ileektomie möglicherweise eine übermäßige Produktion von Gallensäuren durch die Leber sowie eine Fehlresorption und Überakkumulation im Darm verursachen kann. Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten mit der intestinalen Anastomose haben, die den kritischsten und schwierigsten Teil dieses chirurgischen Eingriffs darstellt. Beginnen Sie damit, den angemessenen Sedierungszustand durch Zehenquetschen zu überprüfen, und tragen Sie Enthaarungscreme auf den Bauch der Maus auf.Entfernen Sie die Haare mit chirurgischen Schwämmen und legen Sie das Tier auf einen temperaturgeregelten Kleintier-Operationstisch, der auf 37 Grad Celsius eingestellt ist. Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf und desinfizieren Sie die freigelegte Haut durch mehrmaliges Abwaschen abwechselnd mit Povidon-Iod und 70 %igem Ethanol. Bedecken Sie den Operationsbereich des Bauches mit steriler chirurgischer Gaze und verwenden Sie ein Skalpell, um eine mediane Bauchinzision vorzunehmen und durch die Muskelschicht zu schneiden.Unter Verwendung eines mit Watte abgeschlossenen Applikators zum Schutz der Därme die Bauchmuskulatur der Maus mit Retraktoren vollständig öffnen, um die Bauchhöhle freizulegen. Beginnend beim Blinddarm den verbundenen Dünndarm und einen Teil des Jejunums vorsichtig aus der Bauchhöhle herausbewegen und mit einer 7-0-Seidennaht den oberen Zweig der Arteria mesenterica superior ligieren. Wenn sich die Gewebefarbe von rosa zu dunkel verändert, was eine vollständige Okklusion anzeigt, mit einer Schere 50 oder 90 % des Ileums entfernen, abhängig von den Versuchsparametern.Spülen Sie das Lumen beider ilealer Enden mit 0,9 %iger Kochsalzlösung aus. Nachdem Sie das Mesenterium an der Seite beider ilealer Enden lokalisiert haben, richten Sie die Mesenterien an beiden Enden des entfernten Gewebes aus und verbinden Sie die Enden mit einer 8-0-Naht. Nähen Sie die kontralaterale Seite des Ileums, um das Ileum auf natürliche Weise anastomosiert zu halten, und nähen Sie die obere und untere Seite zwischen den beiden ursprünglichen Nähten, um die beiden ilealen Enden vollständig zu verbinden.Nach Bestätigung des Fehlens einer Leckage an der Anastomosestelle werden der Blinddarm und das Dünndarm in ihre ursprüngliche anatomische Lage zurückverbracht und der Operationsbereich mit einer stumpfen Nadel mit warmer 0,9%iger NaCl-Lösung gespült. Die Bauchmuskelschicht wird mit einer 6-0-Naht verschlossen und der Bauchhautschnitt exakt ausgerichtet, um die Haut zu schließen und eine optimale Wundheilung zu fördern. Anschließend wird die Maus in eine Intensivpflegeeinheit in einen Käfig mit Papierstreubett auf einer temperaturgeregelten Heizplatte überführt, wo sie über Nacht mit weicher Nahrung zusätzlich zu normaler Nahrung und Wasser versorgt wird.Ein Tag nach der Operation das gesamte Tier wiegen. Danach den gastrointestinalen oder GI-Trakt entnehmen und das Darmgewebe wiegen. Das GI-Gewebe in ein 15-Milliliter-Konischgefäß überführen und mit einer Schere in kurze Segmente schneiden.Anschießend pelletieren Sie die Gewebestücke durch Zentrifugation und überführen das gallensalzhaltige Überstand in ein neues Röhrchen. Die quantitative Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktionsanalyse zeigt einen hohen Gehalt an mRNA für Fibroblasten-Wachstumsfaktor 15, apikalen Natrium-Gallensäure-Transporter, ileales Gallensäure-bindendes Protein und organischen Lösungsstoff-Transporter Beta im Ileum, während die Expression im Jejunum und im restlichen Darm gering bis äußerst gering ist. Die als negativer Kontrollwert gemessenen mRNA-Spiegel von Adenomatösem Polyposis-Coli-Gen (APC) bleiben im gesamten Darmbereich ähnlich.Nach 24 Stunden ist der Darm nach der Scheinoperation normal und weist eine ähnliche Größe und Morphologie wie bei nicht operierten Tieren auf. Die Flüssigkeitsmengen zeigen einen Gradientenanstieg von 0 % bis zur 90 %-Ileektomie, was der signifikant erhöhten Relation von Magen-Darm-Trakt zu Körpergewicht nach einer 90 %-Resektion entspricht. Die aus den Magen-Darm-Trakten nach der Operation gesammelte Magen-Darm-Flüssigkeit sowie das Verhältnis des Gewichts der Magen-Darm-Flüssigkeit zum Gewicht des Magen-Darm-Trakts zeigen ebenfalls einen gradientenartigen Anstieg nach der Resektion.Außerdem bestätigt der Gallensäure-Assay, dass die Menge an Gallensäuren, die im Überstand nachgewiesen wird, mit zunehmender Größe der Ileumresektion ansteigt, was darauf hindeutet, dass das Mausmodell mit 50 % Ileumresektion aufgrund seiner relativ moderateren Nebenwirkungen besser geeignet ist. Wenn die Technik einmal beherrscht ist, kann sie bei korrekter Durchführung innerhalb von 30 Minuten abgeschlossen werden. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik Forschern auf dem Gebiet der Mikrochirurgie den Weg, um die Ileumbiologie sowie das Gallensäuresyndrom bei Kleintieren zu untersuchen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man das ileale Segment korrekt identifiziert und entfernt, und wie man eine intestinale Anastomose durchführt.

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Research

Forschung

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Medicine

Medizin

Dieses Video beschreibt das detaillierte Protokoll für die Darmresektion in einem Mausmodell. Diese Technik bietet Einblicke in die durch Ileektomie induzierte Gallenmalabsorption, Überakkumulation und Toxizität im Darm der Maus.

Maus-Ileumresektionsmodell: Untersuchung des Ileektomie-induzierten Gallenstoffwechsels im Mausmodell

Ileokolische Resektion wird häufig bei verschiedenen menschlichen Krankheiten durchgeführt; es ist jedoch wenig über den Einfluss der Darmresektion auf chirurgische Erkrankungen bekannt. Dieser Artikel enthält Anweisungen zur Durchführung des Verfahrens bei Mäusen mit hohem Erfolg und bietet ein Mittel, um die Auswirkungen der ileokolischen Resektion in Krankheitsmodellen zu untersuchen.

Murine Ileocolische Darmresektion mit primärer Anastomose

Eine Störung des Gallenflusses führt zu einer schweren entzündlichen cholestatischen Leberschädigung mit einer charakteristischen zeitabhängigen Abfolge morphologischer Veränderungen. In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll für die chirurgische Ligatur des Gallengangs communis bei Mäusen vor, das es ermöglicht, nach 21 bis 28 Tagen eine starke fibrotische Reaktion zu induzieren.

Gallengang-Ligation in Mice: Induktion von Entzündungsleber-Verletzung und Fibrose von obstruktiver Cholestase

Hier präsentieren wir Ihnen teilweise Gallengang Ligatur als chirurgische Modell der Leberschädigung und Regeneration bei Nagetieren.

Partielle Gallengang Ligation in der Maus: eine kontrollierte Modell der lokalisierten obstruktive Cholestase

Darm Hindernisse sind eine teilweise oder vollständige Blockierung des Darms, die starke Bauchschmerzen, Übelkeit, Erbrechen, und verhindert den Durchgang von Stuhl verursachen können. Dieses Verfahren zum Erstellen von Darm teilweise Obsructions bei Mäusen ist zuverlässig bei der Untersuchung der Mechanismen, die krankhaften Zellwachstum und Tod im Darm.

Ein Maus-Modell der teilweisen Darmverschluss

Das vorgestellte Protokoll beschreibt eine einfache chirurgische Entfernung des Blinddarms (Kaecal-Patch) in einer Maus, gefolgt von der Induktion von entzündlichem Darmerkrankungen-assoziiertem Dickdarmkrebs. Dieses murine Appendektomie-Modell ermöglicht die Untersuchung der biologischen Rolle des Blinddarms bei der Pathogenese der menschlichen Magen-Darm-Krankheit.

Murine Appendektomie Modell der chronischen Colitis assoziiert entaktischen Darmkrebs durch präzise Lokalisierung von Caecal Patch

Der Duodeno-ileale Bypass mit einfacher Anastomose (SADI-S) ist ein aufstrebendes bariatrisches Verfahren mit wichtigen metabolischen Auswirkungen. In diesem Artikel stellen wir ein zuverlässiges und reproduzierbares Modell von SADI-S in Mäusen vor.

Duodeno-ilealer Bypass mit Sleeve-Gastrektomie-Modell bei Mäusen

Wir beschreiben ein Mausmodell des postoperativen Ileus, das durch intestinale Manipulation erzeugt wurde. Die gastrointestinale Transitfunktion, die pathologischen Veränderungen und die Aktivierung der Immunzellen wurden 24 Stunden nach der Operation beurteilt.

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Die hyperinsulinämische-euglykämische Clamp-oder Insulin-Clamp, ist der Goldstandard für die Beurteilung der Wirkung von...

Hyperinsulinämische-euglykämische Schellen in dem Bewusstsein, Unrestrained Mäuse

Ein Verfahren zur Visualisierung und Quantifizierung der 3-dimensionalen Struktur von Maus Pfortader oder intrahepatischen Gallengang wird beschrieben. Dieses Harz gegossenen Technik kann auch auf andere duktalen oder vaskulären Systemen angewendet werden und...

3-Dimensional Resin Casting und Imaging of Mouse Pfortader oder intrahepatische Gallengang-System

Erfahren Sie die Ileektomie-Technik zur Untersuchung von Gallensäure-Malabsorption und Überakkumulation im Darm von Mus musculus. Diese Methode liefert wertvolle Einblicke für gastroenterologische Forschung und Therapieansätze.

Overaccumulation Ileectomy-induzierten Galle im Darm der Maus

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