Verwendung von Immunolabeling, stabilen, dynamischen und im Entstehen begriffene Mikrotubuli in Zebrafish Embryos zu analysieren

Das übergeordnete Ziel dieser Markierungsverfahren ist es, stabile, dynamische und entstehende Mikrotubuli im sich entwickelnden Zebrafischembryo abzubilden und zu quantifizieren. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Bereich der Entwicklungsneurobiologie zu beantworten, z. B. wie Mikrotubuli zur Etablierung der Zellpolarität beitragen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie den Nachweis und die Quantifizierung unterschiedlicher Mikrotubuli-Populationen in situ optimiert.

Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, die Integrität der Mikrotubuli zu erhalten. Nach der Entchlorung der Zebrafischembryonen gemäß dem Textprotokoll werden sie in 1,5-Milliliter-Zentrifugenröhrchen überführt, wobei so viel Medium wie möglich entfernt wird. Fügen Sie einen Milliliter 4%PFA in Mikrotubuli-Assemblierungspuffer oder MAB hinzu, um die Embryonen fünf Minuten lang bei 28,5 Grad Celsius zu fixieren.