Lokalisierung von Odorant-Rezeptor-Genen in Locust-Antennen durch RNA In Situ Hybridisierung

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, niedrig exprimierte Geruchsrezeptorgene sowie andere Gene in den Insektenantennen mit Hilfe von Digoxigenin- oder Biotin-markierten Sonden zu lokalisieren. Um mit diesem Verfahren zu beginnen, wählen Sie die neuen adulten Heuschrecken aus, die aktiv sind und intakte Antennen haben, und schneiden Sie die Antennen dann mit sterilen Rasierern in zwei bis drei Millimeter große Stücke. Tragen Sie anschließend die OCT-Verbindung auf einen Gefriermikrotomhalter auf und legen Sie die Proben horizontal auf die Verbindung.

Übertragen Sie den Halter bei minus 24 Grad Celsius in das Gefriermikrotom, um ihn auszugleichen, bis die Verbindung gefriert. Nehmen Sie anschließend den Halter heraus und bedecken Sie die Proben mit etwas Masse. Übertragen Sie den Halter erneut für mindestens 10 Minuten bei minus 24 Grad Celsius in das Gefriermikrotom, dann schneiden Sie die gefrorenen Proben in 12 Mikrometer dicke Scheiben.