27. September 2017
Wir beschreiben hier Methoden für neonatale Capsaicin Behandlung atopischen Dermatitis bei Ratten und Exposition von verdampftem Formaldehyd zu untersuchen, die Wirkungen von Formaldehyd Inhalation auf atopische Dermatitis zu induzieren.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, durch die Behandlung mit Capsaicin bei Neugeborenen atopische Dermatitis-ähnliche Symptome hervorzurufen. Und um die Wirkung von Formaldehyd auf atopische dermatische Symptome zu messen. Diese Methode kann helfen, eine Schlüsselfrage im Zusammenhang mit der pathophysiologischen Behandlung der atopischen Dermatitis im dermatologischen Bereich zu beantworten.
Die Hauptvorteile dieser Technik sind die Induktion von atopischen Dermatitis-ähnlichen Symptomen und die Etablierung eines wichtigen Expositionssystems mit den Inkrementen. Zur Herstellung von fünf Milligramm pro Milliliter Capsaicin-Lösung geben Sie einen Milliliter Tween 80, einen Milliliter 100% Ethanol und 50 Milligramm Capsaicin in ein konisches 15-Milliliter-Röhrchen. Geben Sie dann acht Milliliter normale Kochsalzlösung in das konische Röhrchen.
Verschließen Sie das Röhrchen und schütteln Sie es kräftig, bis keine getrennten Schichten mehr sichtbar sind. Es ist wichtig, das Capsaicin zwischen 12 und 48 Stunden nach der Geburt zu verabreichen. Injizieren Sie die Capsaicin-Lösung in das Unterhautgewebe an der Mittellinie und Rückseite des Halses einer neugeborenen Sprague-Dawley-Ratte.
Um einen Atemstillstand aufgrund der Capsaicin-Injektion zu verhindern, legen Sie die Neugeborenen in eine Sauerstoffkammer, bis sich die Atmung normalisiert hat. Drücken Sie bei Bedarf auf die Brust von Neugeborenen, um die Atmung zu fördern. Beginnen Sie damit, Plastikkammern vorzubereiten, die mit einem Spiegel ausgestattet sind, um eine vollständige Abdeckung für die Betrachtung zu ermöglichen, und Löchern, damit die Ratten atmen können.
Lege die Ratten in die Plastikkammer und decke die Decke der Kammer mit einem schweren Gegenstand ab, um ein Öffnen des Deckels zu verhindern. Richten Sie dann eine digitale Videokamera ein, um gleichzeitig sowohl die Spiegelansichten als auch die Vorderansichten der Ratten aufzuzeichnen. Zeichnen Sie dann eine Stunde lang das spontane Verhalten der Ratten auf.
Spielen Sie die Videoclips ab und zählen Sie die Anzahl der Kratzverhaltensweisen, wie sie die Ratte auf der rechten Seite zeigt. Und die Ratte in der Mitte. Um die Läsionen zu bewerten, bestimmen Sie das Ausmaß und die Schwere der Dermatitis in den Ohren und anderen Teilen einer anästhesierten Ratte.
Definieren Sie die Einheitsgröße für das Ausmaß der Hautläsionen als 0,25 Zentimeter zum Quadrat. Und die Schwere der Hautläsionen anhand dieser Tabelle. Bereiten Sie einen Acrylglaskasten vor, der zwei Anschlüsse an gegenüberliegenden Seiten hat.
Für die Zirkulation von Formaldehydgas sollte der Entlüftungsauslass höher als der Gaseinlass platziert werden. Schließen Sie die Schläuche an beide Anschlüsse an. Führen Sie das Entlüftungsrohr zur Zirkulationshaube oder außerhalb des Gebäudes, um das Gas abzugeben.
Und verbinden Sie den anderen Einlassschlauch mit einem medizinischen Sauerstoffregler. Platzieren Sie einen herkömmlichen Rattenkäfig in der Acrylglasbox. Setzen Sie eine Woche alte Ratten in den Käfig und verschließen Sie dann den Acrylglaskasten so dicht wie möglich, um ein Austreten von Gas zu verhindern.
Tragen Sie Frischhaltefolie auf, um die Kammer zu umwickeln, und verschließen Sie die Kammer mit einem gummierten Deckel für eine dichte Versiegelung. Geben Sie 0,5%ige Formaldehydlösung in die Befeuchterflasche, die mit dem medizinischen Sauerstoffregler verbunden ist. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Formaldehyd äußerst gefährlich sein kann.
Und Vorsichtsmaßnahmen wie Masken und Handschuhe sollten immer bei der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden. Schalten Sie anschließend den Regler ein und stellen Sie die Durchflussmenge auf fünf Liter pro Minute ein. Setzen Sie die Ratten zwei Stunden lang Formaldehydgas aus.
Hier sind repräsentative Fotos von Hautentzündungen bei der mit Capsaicin behandelten Ratte zu sehen. Die chronologische Entwicklung der Dermatitis bei den mit Capsaicin behandelten Ratten ist hier dargestellt. Dieses Bild zeigt die chronologische Entwicklung des Kratzverhaltens bei den mit Capsaicin behandelten Ratten.
Dies ist ein repräsentatives Bild von schubförmigen Hautläsionen von 16 Wochen alten Ratten, die mit Capsaicin behandelt wurden. Die Serum-IgE-Spiegel sind bei mit Capsaicin behandelten Tieren signifikant erhöht. Eine signifikante Erhöhung der IL-4-mRNA-Expression wird auch bei mit Capsaicin behandelten Tieren beobachtet.
Hier ist eine signifikante Erhöhung der IL-13-mRNA-Expression bei mit Capsaicin behandelten Tieren zu sehen. Diese repräsentativen Fotos zeigen die atopische Dermatitis nach der fünften Behandlungswoche mit 1,2 Teilen pro Million. Und 0,8 Teile pro Million Formaldehyd im Vergleich zur kontrollierten Behandlung mit Luft.
Die Exposition gegenüber 1,2 Teilen pro Million Formaldehyd, aber nicht 0,8 Teilen pro Million Formaldehyd verschlimmerte die Pruritis im mit Capsaicin behandelten atopischen Dermatitis-Modell signifikant. Ähnliche Ergebnisse wurden bei der Messung der Dermatitis beobachtet. Erhöhte Serum-IgE-Spiegel wurden in dem mit Capsaicin behandelten AD-Rattenmodell beobachtet, das mit einer Formaldehydexposition von 1,2 ppm behandelt wurde.
Nach diesem Verfahren können andere Materialien wie z.B. Gylcol-Lösung verwendet werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, die sich auf die Auswirkungen bestimmter Stoffe auf atopische Dermatitis beziehen. Nach diesen Entwicklungen ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Dermatologie, die Rolle von Umweltfaktoren bei der Pathogenese der atopischen Dermatitis zu erforschen.
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In diesem Artikel werden Methoden beschrieben, um bei Ratten durch neonatale Capsaicin-Behandlung symptomatische Zeichen einer atopischen Dermatitis zu induzieren und die Auswirkungen einer Formaldehyd-Inhalation zu untersuchen. Das Ziel der Studie ist es, das Verständnis der Pathophysiologie der atopischen Dermatitis zu vertiefen.
Umweltfaktoren bei der atopischen Dermatitis bleiben eine entscheidende Unbekannte in der translationalen Dermatologie und beeinflussen die Vorhersagegenauigkeit für die therapeutische Entwicklung. Dieses Rattenmodell ermöglicht die systematische Bewertung umweltbedingter Expositionen, wie beispielsweise gegenüber Formaldehyd, hinsichtlich des Krankheitsverlaufs und der Biomarker-Antwort. Der Ansatz unterstützt die mechanistische Risikominimierung und leitet frühe Portfolioentscheidungen für Dermatologie-Pipelines an.
Dieses Modell schlägt eine Brücke zwischen der frühen Entdeckung und der präklinischen Validierung, indem es eine kontrollierte Hypothesenprüfung von Umweltfaktoren beim Fortschreiten der atopischen Dermatitis ermöglicht.