Name: Etablierung einer wertvollen Nachahmung der Alzheimer-Krankheit im Rattentiermodell durch intrazerebroventrikuläre Injektion von kompositiertem Amyloid-Beta-Protein (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-29T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Erfahren Sie die intrazerebroventrikuläre Injektion von Aβ25-35 zur Etablierung eines Alzheimer-Rattenmodells. Diese Methode ermöglicht die Bewertung von Gedächtnisstörungen und neuronalen Veränderungen für die Arzneimittelforschung.

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Unterstützt wurde das Projekt von der Hebei Provinz Natural Science Foundation (Nr. C2009001007, H2014406048), dem Hebei Provincial Administration der traditionellen chinesischen Medizin (Nr. 05027) und das wichtige Thema Bauprojekt der Hebei Provinz College, China.

Dieses Verfahren wurde in Übereinstimmung mit den Vorschriften der experimentellen Tier Verwaltung herausgegeben von der staatlichen Ausschuss of Science and Technology of China am 31. Oktober 198811. Wissenschaftler sollten die Richtlinien festgelegt und genehmigt durch ihre institutionellen und nationalen Tieren Regulierungsorganisationen befolgen.
Hinweis: Tier und Regenten: vier Monate alten männliche Sprague-Dawley Ratten (300-350 g) für dieses Experiment geliefert wurden. Alle Ratten wurden in Gruppen (vier oder fünf pro Käfig) bei einer Temperatur von 23 ± 1 ° C mit einem 12-h-Hell-Dunkel-Zyklus untergebracht. Nahrung und Wasser waren verfügbar Ad Libitum. Die Ratten wurden akklimatisiert, die Wohnverhältnisse für 7 Tage, bevor der Eingriff durchgeführt wurde. Aβ25-35 war aufgelöst in 1 % DMSO Kochsalzlösung bis 1 mg/mL und für 5 min in einen Ultraschall Oszillator bis aufgelöst beschallt. AlCl3 und RHTGF-β1 wurden in Kochsalzlösung bei 1 % und 0,1 mg/mL, aufgelöst. Kongo-rot, Silbernitrat und andere Chemikalien analysenrein waren und wurden von gewöhnlichen kommerziellen Quellen erworben.
1. chirurgischer Eingriff
Hinweis: 20 männliche Sprague-Dawley Ratten wurden mikroinjiziert mit Compositing Aβ in die seitlichen Ventrikel und Anterodorsal thalamische Kern, und als der zusammengesetzten Aβ-behandelten Gruppe bezeichnet. Ein weiteres 20 Ratten die gleiche Operation unterzogen wurden aber 0,1 % DMSO saline Mikroinjektion erhielt, und als der Schein betrieben-Gruppe bezeichnet.
<ol><li>Die Ratten mit 100 % Isofluran Inhalation betäuben und dann auf einem Gehirn stereotaktischen Apparat zurückhalten.</li>
	<li>Das Fell auf den Scheitelpunkt des Kopfes mit chirurgische Scheren zu rasieren und desinfizieren mit jodophor. Dann Abdeckung Einweg op Handtuch auf den Kopf.</li>
	<li>Machen Sie einen Schnitt an der Kopfhaut entlang die mittlere längs-Calvaria mit chirurgischen Bistouries und Scheren.</li>
	<li>Trennen Sie der Unterhaut und Faszie, wischen Sie den Schädel Calvarium mit einer sterilen trockene Baumwolle für die Blutstillung und markieren Sie die Bregma mit einem Filzstift.</li>
	<li>Beziehen sich auf die Ratte Gehirn stereotaktischen Karte12; in Anbetracht der Bregma als Herkunftsort, markieren Sie die drei Punkte, die Anterodorsal thalamische Kern (n. Chr.) (Posterior (P): 2,0 mm, die Bregma; seitliche (L): 1,4 mm an der Mittellinie) für RHTGF-β1 injizieren und eine Befestigungsschraube, die seitlichen Ventrikel (LV) Bereich ( Posterior (P): 0,8 mm bis Bregma; Lateral (L): 2,0 mm an der Mittellinie) zum Einspritzen von Aβ25-35 und AlCl3 und die zweite Schraube Befestigung Ort (Front (F): 2,0 mm, die Bregma; seitliche (L): 1,5 mm auf der Mittellinie).</li>
	<li>Sanft die Bohrungen drei 1 mm Durchmesser mit einem flexiblen knochenbohrer, bestimmt an die oben genannten drei Punkte des Schädels (1.5. Schritt). Schrauben Sie nicht tiefer als nötig, stechen das Hirngewebe zu vermeiden.</li>
	<li>Die Blutung zu stoppen und die Schädel Oberfläche immer wieder mit sterilen trockenen Baumwolltuch reinigen.</li>
	<li>Nadel verbunden mit der Mikro-Einspritzpumpe des Gehirns bei 4,6 mm Tiefe und sanft Spritzen 1 μl RHTGF-β1 (10 ng) in den Anzeige-Bereich. Nadel 2 min nach der Injektion zu bleiben und langsam Herausziehen der Nadel (ergänzende Datei 1).</li>
	<li>Befestigen Sie die beiden Schrauben in den Schädel, die in der Anzeige und die zweite Schraube Befestigung Ort des Schädels bezeichnet (die waren bestimmt bei 1,5. Schritt) mit einem kleinen Schraubendreher. Schrauben Sie nicht tiefer als nötig, stechen das Hirngewebe zu vermeiden.</li>
	<li>Montieren Sie die Kanüle Implantation System (zusätzliche Datei-2), legen Sie die Dummy-Kanüle in die Guide-Kanüle nach der Desinfektion durch hohen Druck.</li>
	<li>LV-Bereich durch den Schädel Loch (zusätzliche Datei-3), stecken Sie Edelstahl-Rohre Reiseführer Kanüle an das Gehirn bei 4,6 mm mit Hilfe der Kanüle Halter von Ratten stereotaktischen Gerät.</li>
	<li>Mischen Sie den prothesenkunststoff mit Prothese Basis Wasser im Verhältnis von 1,5 g pro 1 mL, setzen Sie die Paste zur Deckung der Führer Kanüle Kunststoff Sockel und zwei Schrauben für die Immobilisierung der Führer-Kanüle und bis Abdeckung der gesamten Hautschnitt für die Infektion der Haut zu vermeiden.</li>
	<li>Am 2. Tag der Operation betäuben Sie die Ratten mit Isofluran Inhalation mit dem kleinen Tier Anästhesiegerät. Die Dummy-Kanüle ziehen Sie, legen Sie die internen Kanüle in die Leitfaden-Kanüle und Schrauben Sie die Befestigungsschraube um die interne Kanüle zu immobilisieren.</li>
	<li>Die Polyethylen-Rohr verbindet die Mikroinjektion Pumpe auf die internen Kanüle und regulieren Sie die Einspritzgeschwindigkeit auf 1 μl/min Microinject Aβ25-35 oder AlCl3, die LV</li>
	<li>Microinject 4 μg (1 μl) Aβ25-35 täglich für 14 Tage in der früh und 3 μL AlCl3 (1 %) täglich für 5 Tage am Nachmittag unter Isofluran-Narkose.</li>
	<li>Warten Sie 5 Minuten nach Beendigung der Injektion, sanft die interne Kanüle ziehen Sie und stecken Sie die Dummy-Kanüle wieder in die Guide-Kanüle.</li>
	<li>Am 15. Tag Post op (entspricht bis zum letzten Tag der Injektion der Aβ25-35) demontieren Sie die Kanüle Implantation System. Schonend entfernen Sie der Prothese basisvolumenkörper Material mit chirurgische Scheren und Pinzetten, Schrauben Sie die zwei, die Leitfaden-Kanüle herausziehen Sie und Desinfizieren Sie die Wunde mit Betadine. Füllen Sie das Loch des Schädels mit Knochenzement und Naht der Haut mit einer einfachen Naht unterbrochen-Methode.</li>
	<li>Den gleichen Vorgang mit der Farce betriebene Gruppe ausführen und microinject 0,1 % DMSO Kochsalzlösung.</li>
	<li>
Postoperative Pflege
	<ol>
<li>Haus 2 Ratten pro Käfig nach Operation und bieten Nahrung für 30 Tage. Hinweis: 18 Ratten in der Sham-betrieben Gruppe überlebt (90 % Erfolgsquote der Operation) und 19 Ratten in der Compositing-behandelten Aβ Gruppe überlebt (95 % Erfolgsquote der Operation).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Screening für erfolgreiches Modell Ratten und Beurteilung des räumlichen Gedächtnisses mit Morris Wasser-Irrgarten
<ol><li>
Morris-Wasser-Irrgarten Hinweis: Der Morris-Wasser-Irrgarten wurde zur Ratte räumliche Gedächtnis13zu bewerten. Der Morris-Wasser-Irrgarten ist ein Edelstahl-kreisförmigen Tank mit 120 cm Durchmesser und 50 cm Tiefe. Der Wasser-Labyrinth-Test wurde durchgeführt, basierend auf dem "Gold Standard" Paradigma Biopsychologie von J. Nunez14beschrieben.<ol>
<li>Das Wasser im Pool mit einigen Tropfen Lebensmittelfarbe zu schwärzen.</li>
		<li>Pflegen Sie die Tiefe des Wassers bei 31,5 cm und die Temperatur auf 23 ± 1 ° C.</li>
		<li>Legen Sie eine 1,5 cm Runde transparente Plexiglas-Plattform unterhalb der Wasseroberfläche.</li>
		<li>Behaupten Sie, dass alle räumlichen Signale durch das Wasser-Labyrinth während der Wasser-Labyrinth-Tests unveränderlich sind.</li>
		<li>Teilen Sie den Pool in 4 gleichen Quadranten durch imaginäre Linien für beschreibende Daten-Sammlung.</li>
		<li>Platzieren Sie das versteckte Plateau im ersten Quadranten (Q1) von Wasser-Irrgarten.</li>
		<li>Erfassen Sie die Ratte Schwimmen Verhaltensweisen (gemessen nach Latenz, Flugbahn, oder Kreuzung) durch eine Video-Kamera, über die Wasser-Irrgarten mit einer Computer-basierte Grafik analytische Software verknüpft.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Screening für erfolgreiches Modell Ratten der zusammengesetzten Aβ-behandelten Gruppe
	<ol>
<li>Am OP-Tag 45 führen Sie die Morris-Wasser-Irrgarten training für 4 aufeinanderfolgende Tage als Erfolgsmodell Ratten mit Beeinträchtigung des Gedächtnisses und die Screening-Ratio (SR) zu sammeln. Hinweis: Die SR ist definiert als die durchschnittliche Latenzzeit von jedes Compositing Aβ-behandelten Ratten und die Farce betriebene Gruppe von Ratten, das versteckte Plateau unter Wasser zu finden der Oberfläche auf Tag 4 des Wassers Labyrinth Training. "A" ist die durchschnittliche Latenzzeit von jede Compositing Aβ-behandelten Ratte, das versteckte Plateau zu finden und "B" beträgt die durchschnittliche Wartezeit der Schein betrieben Gruppe von Ratten, das versteckte Plateau am 4. Tag des Wasser-Irrgarten, Ausbildung, in der folgenden Gleichung zu finden: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56157/56157eq1.jpg"> Als SR größer als 0,2 für ein zusammengesetztes Aβ-behandelten Ratte war, galt als ein erfolgreiches Modell Ratte mit Gedächtnisstörungen Compositing Aβ-behandelten Ratten15die Ratte. Die Intraday-Speicher-Performance wurde durch den durchschnittlichen Wert von Ratten, das versteckte Plateau zu finden, die Daten von 2 Studien berechnet. Der Prozess von der Morris-Wasser-Labyrinth-Test wurde so konzipiert, dass die Ratten durften Schwimmen in den Wassertank Labyrinth und Suche nach der verborgenen Plattform innerhalb von 60 s. Wenn nicht, eine Ratte, die versteckte Plattform innerhalb von 60 finden s, dann die Ratte wurde auf der Plattform mit Hand des Experimentators gelegt. Wenn eine Ratte auf das versteckte Plateau erreicht (unabhängig oder assistierten), die Ratte war lassen Sie dort für 20 s. Dann war die Ratte aus dem Tank entfernt und erlaubt eine körperliche Erholung für 10 s zwischen den 2 Studien.</li>
	</ol>
</li>
</ol>(3) Neuron Prüfung
<ol><li>Auf 86 Post Tageschirurgie, Isoflurane Narkose einschläfern Sie die Ratten durch Enthauptung (Abbildung 1).</li>
	<li>Das Gehirn auf Eis gelegt und vorsichtig trennen die beiden Hemisphären in der Raphe. Nehmen Sie die linke Hemisphäre des optischen Chiasma und Fix in 4 % Formaldehyd für leichte Microcopy Beobachtung der Neuron Hämatoxylin und Eosin (HE), Kongo-rot oder Silbernitrat Flecken (siehe Abschnitte 4 bis 6). Befestigen Sie die rechte Hemisphäre Hippocampus CA1 Bereich in 2,5 % Glutaraldehyd für Elektron Microcopy Beobachtung (Abschnitt 7).</li>
	<li>Verarbeitet das Gehirn für die Probenvorbereitung Licht/Elektron Microcopy wie zuvor beschrieben16,17.</li>
</ol>4. Neuron HE Färbung
<ol><li>Deparaffinize jede Folie (20 min) mit Farbverlauf Alkohol (100 %, 95 %, 90 %, 80 % und 70 % Alkohol), destilliertes Wasser in einer Dampfhaube.</li>
	<li>Fleck für 3 min mit Hämatoxylin (0,5 % w/V), und dann spülen Sie mit Wasser aus dem Wasserhahn, den nicht gebundenen Farbstoff aus Folien zu entfernen.</li>
	<li>Spülen Sie mit 0,1 % iger Salzsäure in Alkohol für 1 s, die Farbe des ungefärbten Kerne zu entfernen.</li>
	<li>Tauchen Sie in 0,5 % Ammoniak-Lösung für 2 min bis der Hintergrund abwechselnd hellblau.</li>
	<li>Fleck für 1 min mit 1 % Eosin.</li>
	<li>5 min mit Farbverlauf Alkohol (70 %, 80 %, 90 %, 95 % und 100 % Alkohol) zu entwässern.</li>
	<li>In Xylol klar und mit harzigen Eindeckmedium montieren.</li>
	<li>Beobachten Sie und zählen Sie die lebenden Nervenzellen des Flecks HE pro 0,125 mm in der Mitte CA1 des Hippocampus und 0,0352 mm2 in der Großhirnrinde bei einer Vergrößerung von 400 X mit einem optischen Mikroskop durch eine Person geblendet, das experimentelle Design.</li>
</ol>(5) Kongo-rot Färbung für Neuron Aβ Belastung prüfen
<ol><li>Deparaffinize jede Folie (20 min) mit Farbverlauf Alkohol (100 %, 95 %, 90 %, 80 % und 70 % Alkohol), destilliertes Wasser in einer Dampfhaube.</li>
	<li>Fleck für 20 min mit Kongo-rot arbeiten Lösung (0,5 g Kongo-rot, 80 mL Methylalkohol, 20 mL Glycerinum).</li>
	<li>Spülen Sie mit destilliertem Wasser für 5 Minuten.</li>
	<li>Schnell zu unterscheiden, mit 80 % Alkohol-Lauge (0,2 g Alkohol/100 mL Kaliumhydroxid) für 3 s.</li>
	<li>Zweimal, jeweils für 5 min mit destilliertem Wasser abspülen.</li>
	<li>Gegenfärbung in Gills Hämatoxylin 3 Minuten lang.</li>
	<li>Spülen Sie mit Wasser aus dem Wasserhahn für 2 min.</li>
	<li>Tauchen Sie ein in Ammoniakwasser (ein paar Tropfen von Ammonium Hydroxid, Leitungswasser und gut vermischen) für 30 s oder bis die Abschnitte blau leuchten.</li>
	<li>Spülen Sie mit Wasser aus dem Wasserhahn für 5 min.</li>
	<li>Entwässern Sie mit Farbverlauf Alkohol (70 %, 80 %, 90 %, 95 % und 100 % Alkohol).</li>
	<li>In Xylol klar und mit harzigen Eindeckmedium montieren.</li>
	<li>Beobachten Sie und zählen Sie die Zellen mit Kongo-rot bei einer Vergrößerung von 400 X mit einem optischen Mikroskop durch eine Person Blind den Versuchsplan gebeizt.</li>
</ol>(6) Silbernitrat Färbung für Prüfung Neuron NFT Bildung
<ol><li>Deparaffinize jede Folie (20 min) mit Farbverlauf Alkohol (100 %, 95 %, 90 %, 80 % und 70 % Alkohol), destilliertes Wasser in einer Dampfhaube.</li>
	<li>Tauchen Sie in 20 % Silbernitratlösung und Capper Agent für 20 min in der Dunkelheit.</li>
	<li>In destilliertem Wasser zweimal, waschen Sie 5 min für jedes Mal.</li>
	<li>Tauchen Sie in Silber Ammoniak-Lösung. Ammoniak-Lösung in 20 % Silbernitratlösung und fügen Sie hinzu, bis die Lösung von Trübung zur Klärung geht. Gleichzeitig, rühren Sie die Lösung mit einem Glasstab für 15 min und dann in das 1 % verdünnt Ammonium Hydroxid 2 min. lang.</li>
	<li>Legen Sie die Folie in die entwickelnden Arbeitslösung für 3-7 min, bis der schwarze Block in das Axon beobachtet werden kann.</li>
	<li>Tauchen in die 0,1 % verdünnt-Ammoniak-Lösung für 1 min und dann spülen Sie mit Wasser für 1 min.</li>
	<li>Entsorgen mit Natriumthiosulfat 5 % für 2 min und dann spülen Sie mit Wasser für 5 Minuten.</li>
	<li>Entwässern Sie mit Farbverlauf Alkohol (70 %, 80 %, 90 %, 95 % und 100 % Alkohol).</li>
	<li>In Xylol klar und mit harzigen Eindeckmedium montieren.</li>
	<li>Beobachten Sie und notieren Sie die Zelle für Silbernitrat Fleck bei einer Vergrößerung von 400 X mit einem optischen Mikroskop durch eine Person geblendet, das experimentelle Design.</li>
</ol>(7) hippocampal Neuronen Ultrastruktur Messung
<ol><li>Schneiden des Ratte Hippocampus CA1 in mehrere Würfel (1 x 1 x 1 mm-3) und in 2,5 % Glutaraldehyd für 2 h bei 4 ° C.</li>
	<li>Spülen Sie die Würfel mit PBS drei Zeiten (pH 7,2, 10 min für jedes Mal).</li>
	<li>Beheben Sie die Würfel in 1 % Osmic Säure für 2 h bei 4 ° C.</li>
	<li>Spülen Sie die Würfel in doppelt destilliertes Wasser 3 x (10 min für jedes Mal).</li>
	<li>Entwässern Sie mit Farbverlauf Alkohol 50 %, 70 % und 90 % (10 min für jeden), 100 % zweimal (15 min für jedes Mal).</li>
	<li>Ersetzen von Propylenoxid zweimal (15 min für jedes Mal), Propylen oxid: Harz 1:1 (60 min für jedes Mal bei Raumtemperatur) und Propylen oxid: Harz 1:4 (60 min für jedes Mal bei Raumtemperatur). Weichen Sie in Harz (120 min bei Raumtemperatur).</li>
	<li>Einbetten in Verfahrensweisen 812 und polymerisieren (5 h/35 ° C, 5 h/60 ° C, 5 h/80 ° C).</li>
	<li>Schneiden Sie die Ansät Abschnitten (1 µm), Färben von Methylenblau und unter dem Mikroskop zu lokalisieren.</li>
	<li>Flecken auf die ultra-dünnen Abschnitten (50 nm) mit Uranyl-o-Acetat und führen Citrat.</li>
	<li>Überprüfen Sie unter einem Elektronenmikroskop JEM-1400 und sammeln Bilder.</li>
</ol>

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<li>Puzzo, D., Gulisano, W., Palmeri, A., Arancio, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+Alzheimer%27s+disease+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Rodent models for Alzheimer's disease drug discovery.</a> Expert Opin Drug Discov. 10, 703-711 (2015).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Es ist bekannt, dass der Verlust von lernen und Gedächtnis sind wichtige klinische Symptome bei AD Patienten2. Das hier beschriebene Verfahren ist eine in-Vivo -Methode AD zu studieren; Wir haben ein zuvor veröffentlichten Protokoll angepasst, die ein Medikament zur Linderung von Gedächtnisstörungen und neuronalen Verletzungen in eine Ratte Modell4getestet. Unser Protokoll liefert wichtige Details zu wertvollen Daten sowie eine hohe Überlebensrate der Tiere, die erfolgreich Betrieb, Gedächtnisstörungen, Neuron Verletzungen, Aβ Belastung und NFT Ablagerung, AD (im vorliegenden Experiment, die Überlebensrate zu imitieren modellieren und erfolgreiches Modell Betrieb mehr als 90 %). Diese Erfolgsmodell Ratten wurden verwendet, um ihre räumliche Gedächtnis mit dem Morris Wasser-Labyrinth-Test zu messen. Die Positionierung Navigation-Studie festgestellt, dass das Compositing Aβ Ratte Erwerb Gedächtnisstörungen verursachen kann; die Sonde Versuch festgestellt, dass das Compositing Aβ Ratte Merkfähigkeit verringern kann; und die Umkehrung Studie festgestellt, dass das Compositing Aβ Ratte Wiedererlernen Beeinträchtigung führen kann. Diese Morris Wasser Labyrinth Testdaten zeigen, dass die zusammengesetzten Aβ Ratte räumliche Gedächtnis hervorrufen kann. Injektion von Ratten Intracerebroventricularly mit Aβ25-35 in Kombination mit AlCl3 und TGF-β1 erstellt insgesamt eine machbare und glaubwürdig in Vivo AD-wie Tiermodell für das Labor.
Frühere Studien haben gezeigt, dass das Hirnvolumen bei Alzheimer-Patienten 10 % geringer als die von gesunden Personen. Die zerebrale Hemisphäre durch visuelle Beobachtung verschiedener verkümmert entnehmen. Der Grad der Kortikale Atrophie bezieht sich positiv auf das Gedächtnis Beeinträchtigung19. In der Histologie stören die große Anzahl der neuronenverlust und schwere morphologische Pathologie direkt die Memory-Funktion im AD Patienten20. In der vorliegenden Studie festgestellt Licht/Elektron mikroskopische Beobachtung, dass die Ratten mit Compositing Aβ mikroinjiziert dramatische Neuropathologische Veränderungen, einschließlich neuronenverlust und Störung der neuronalen und subzelluläre Struktur angezeigt. Dieses Ergebnis bestätigt die Ratte räumliche Gedächtnisstörung durch Compositing Aβ induziert und ist vergleichbar mit dem Zustand der Alzheimer-Patienten.
Es ist bekannt, dass das Gehirn Aβ Belastung und NFT Aggregation der wichtigsten Merkmale der Histopathogenic in AD gelten. Sie können zerstören die neuronale Struktur, stören die neuronale Signalisierung der neuronale Funktion zu stören und führen zu fortgeschrittenen Demenz17. Die vorliegende Tiermodell gefunden Aβ Belastung und NFT Aggregation im Gehirn, die mit den AD Patienten Zustand einverstanden sind. Daher die vorliegende Neuron Verletzungen bei Ratten durch Compositing Aβ induziert als Modell lässt sich um neuronale Pathologie und Behandlungsstrategie Anzeige zu studieren.
Im folgenden werden Beispiele von screening-Drogenwirkungen in AD Ratte Modelle: Zhao Et Al., berichtet, dass beide Flavonoide aus Helmkraut stammt und verlässt (SSF) und Helmkraut Barbata (SBF) Dämpfen kann, Ratte Gedächtnisstörungen und Apoptose induziert durch Compositing Aβ8,9. Guo Et Al., auch berichtet, dass SBF NFT Aggregation und Tau-Protein über Phosphorylierung an Ser199, Ser214, Ser202, Ser404 und Thr231 Seite zu hemmen und GSK-3β, CDK5 und PKA Protein- und mRNA Expression in zusammengesetzten Aβ-behandelten Ratten21 verringern können . Gleichzeitig, Shang Et Al., haben auch berichtet, dass SBF die Astrozyten und Mikroglia Verbreitung und niedriger Aβ1-40, Aβ1-42 unterdrücken kann, und β-Website APP Spaltung Enzym 1 (BACE1) mRNA Expression im Gehirn von Compositing Aβ22 Ratten. Basierend auf den oben genannten Ergebnissen, ist unsere Tiermodell über andere AD-ähnliches Modell, die weitere neuronale Funktion und Struktur Störung sind vorteilhaft.
Bezug auf andere AD-ähnliches Modell einzelne Intracerebroventricular Injektion von Aβ Ratten kann dazu führen, dass Ratte Gedächtnisdefizite, neuronenverlust und Neurogliocyte Verbreitung, aber kann oder haben keine Aβ und NFT Ablagerung23. Ratten, hochdosierte Al ausgesetzt scheinen eine hohe Erfolgsquote, Mimik AD und eine kostengünstige Tiermodell mit Gedächtnisstörungen, neuronenverlust, Neurogliocyte Verbreitung und senile Plaques (SP) und NFT Aggregation im Gehirn zu haben. Doch die hohe Dosis von Al Ratte Leber Verletzungen verursachen und Magersucht, begleitet mit verringert Gewicht24. Die alte Ratte ist eine weitere AD-ähnliches Modell. Die gealterten Ratten zu demonstrieren, Gedächtnisstörungen, krankhafte Veränderungen der neuronalen Struktur/Unterkonstruktion, Lipofuszin Ablagerung, aber ohne Aβ Belastung und NFT Aggregation. Ratten von mehr als 24 Monaten des Alters gelten im Alter für dieses Modell und daher es erfordert eine längere Fütterung und dadurch die Kosten höher17,25. SAMP8 und APP Transgene Mäuse sind die engsten Mimik, AD, und sie sind die idealen Modelle für die Untersuchung von AD. Aber beide Tiermodelle sind höhere Preise und sind nur in der Labor-26,-27. Verglichen mit den oben genannten Tiermodellen, hat unser Modell der zusammengesetzten Aβ-behandelten Tiermodell eine geringere Kosten und hohe Leistung, so dass es ein ideales Werkzeug für die Untersuchung von AD.
Fazit: Intracerebroventricular Injektion von Aβ25-35 kombiniert mit AlCl3 und TGF-β1, Ratten bietet eine wertvolle in Vivo Tiermodell um besser zu verstehen, die Beeinträchtigung des räumlichen Gedächtnisses, neuronalen Verletzungen Aβ Belastung und NFT Ablagerung zugrunde liegenden AD. Dieses Modell bietet eine schnelle und relativ einfaches experimentelle Protokoll mit einem hohen Tier überleben Rate und hohe Modell erfolgreich Rate der Betrieb sowie eine hohe Rate der Vervielfältigung, die erwies sich als wirtschaftlicher. Die vorliegende Tiermodell ist ein wirksames Modell, AD zu imitieren und kann weiter selbst überprüfen, indem wird verwendet, um verschiedene andere Krankheiten imitieren.

Es ist bekannt, dass Anzeige eine chronische und fortschreitende Neurodegenerative Erkrankung mit stufenweiser Gedächtnisverlust als die wichtigsten klinischen Syndrom ist. In der allgemeinen Pathologie ist Nervengewebe Atrophie, Nervenzelle und Synapse Verlust sowie neuronale subzelluläre Struktur und Funktion Störungen, die alle in der Entwicklung und klinische Manifestation von AD1,2beteiligt sind. Es wird berichtet, dass bei Tieren Intracerebroventricularly mit Aβ injiziert wurden, einige neurotoxischen Ereignisse im Gehirn mit neuronenverlust, Kalzium-Homöostase Störungen, Neuron Apoptose und reaktive Sauerstoff Spezies Überproduktion3auftreten. Jedoch mehrere Faktoren in der Pathogenese der AD und daher ist es wichtig, ein besseres Modell der AD zu etablieren.
Ein detailliertes Protokoll wird hier beschrieben, für den Aufbau einer in Vivo mimischen AD-Modell durch Intracerebroventricular Injektion von Aβ25-35 und AlCl3, kombiniert mit Anterodorsal thalamische Kern Injektion von RHTGF-β1 an Ratten. Diese Ratte Modelhighly imitiert menschliche neuronale Funktion und Histopathogenesis der Werbeanzeige, einschließlich Gedächtnisstörungen, neuronenverlust und Strukturschäden, Apoptose, intrazelluläre Aβ-Belastung und NFT Aggregation4,5,6 , 7 , 8 , 9. the AlCl3 verhindert, dass die hinterlegten Aβ bilden lösliche Aβ und RHTGF-β1 kann hinterlegte Aβ-Produktion fördern und erleichtern AD auftreten10. Dieser Angriff von mehreren Faktoren ab, das Neuron ist im Einklang mit der Multi-Pathogenese der AD.
Das gesamte Experiment überspannt 86 Tage: Abbildung 1 zeigt einen Zeitplan für die experimentelle Gesamtplanung, mit dem Zeitpunkt der tierischen Chirurgie, Tiermodell Screening, tierische räumliche Gedächtnis Test und Probenvorbereitung. Am ersten Tag der Operation war RHTGF-β1 in den Anterodorsal thalamische Zellkern mikroinjiziert. Am zweiten Tag der Operation wurden Aβ25-35 und AlCl3 in den seitlichen Ventrikel täglich für 14 aufeinanderfolgende Tage morgens und 5 aufeinander folgenden Tagen am Nachmittag bzw. mikroinjiziert. Alle Ratten durften für 45 Tage nach der Operation zu erholen. Morris-Wasser-Irrgarten diente, Bildschirm für erfolgreiches Modell Ratten mit Gedächtnisstörungen und Ratten räumliche Gedächtnis zu beurteilen. Die Ratten wurden 4 aufeinander folgenden Tagen der Wasser-Irrgarten training mit 2 Versuche pro Tag, und am 4. Tag der Ausbildung, wurden die Ratten mit Morris Wasser-Labyrinth-Leistung für Gedächtnisstörungen ausgewertet. Alle Ratten weiterhin 37 Tage nach der Vorführung Tiermodell gefüttert werden. Das räumliche Gedächtnis von Ratten wurde in der Morris-Wasser-Irrgarten über 7 aufeinander folgenden Tagen, vom Tag 79 bis 85 Tag nach der Operation getestet. Alle Ratten wurden durch Enthauptung am Tag 86 Gehirn Probenvorbereitung geopfert.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56157/56157fig1.jpg"> Abbildung 1. Timeline des experimentellen Designs. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56157/56157fig1large.jpg">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

<table><tbody><tr><td>Sprague-Dawley-Ratte</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd, China</td><td>SCXK(Jing) 2012-0001</td><td>300– 350 g</td></tr><tr><td>Morris Wasserlabyrinth</td><td>Chinesische Akademie der Medizinischen Wissenschaften und Peking Union Medical Research Institute, China</td><td>Keine</td><td></td></tr><tr><td>bewegliche Kleintieranästhesie</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>R580</td><td></td></tr><tr><td>Gehirn Stereotaktisches Gerät</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>68001</td><td></td></tr><tr><td>Flexibler Knochenbohrer</td><td>Shanghai Soft Long Technology Development Co., Ltd. China</td><td>BW-sD908</td><td></td></tr><tr><td>Transmissionselektronenmikroskop</td><td>Japan Co., Ltd. Japan</td><td>JEM-1400</td><td></td></tr><tr><td>Zweikanal-Mikroinjektionspumpe</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>RWD202</td><td></td></tr><tr><td>EM Mikrotom</td><td>Hitachi Co., Ltd. China</td><td>H-7650</td><td></td></tr><tr><td>Dummy-Kanüle</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62001</td><td>0.D.0.64&amp;mal; I.D.0.0.45mm/M3.5 http://www.rwdls.com/English/Product/3985102014.html</td></tr><tr><td>Führungskanüle</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62101</td><td>0.D.0.40mm/M3.5</td></tr><tr><td>Interne Kanüle</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62201</td><td>0.D.0.41&amp;mal; I.D.0.25mm/<img alt="Spezial" src="/files/ftp_upload/56157/special01.jpg">M3.5</td></tr><tr><td>Ziehen Sie die Mutter</td><td>fest RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62501</td><td>0.D.5.5mm/L7.5mm/M3.5</td></tr><tr><td>Befestigungsschraube</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62514</td><td>M1.2&amp;mal; L2,0 mm (100BAO)</td></tr> <tr><td>Der Schraubendreher</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62999</td><td>45 * 1 mm</td></tr><tr><td>PE-Schlauch</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62302</td><td></td></tr><tr><td>Amyloid Beta 25-35</td><td>Sigma Aldrich Co. USA</td><td>SCP0002-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinanter menschlicher transformierender Wachstumsfaktor-Β 1</td><td>PeproTech Inc. USA</td><td>100-21</td><td></td></tr><tr><td>Aluminiumtrichlorid</td><td>Tianjin Kemiou Chemisches Reagenz Co., Ltd. China</td><td>3011080</td><td></td></tr><tr><td>Kongorot</td><td>Tianjin Kemiou Chemisches Reagenz Co., Ltd. China</td><td>3010016</td><td></td></tr><tr><td>Silbernitrat</td><td>Sinopharm Chcmical Reagenz Co., Ltd. China</td><td>20150720</td><td></td></tr><tr><td>Prothesengrundmaterial</td><td>Shanghai New Century Dental Materials Co., Ltd. China</td><td>20170609</td><td></td></tr></tbody></table>

etablierung einer wertvollen nachahmung der alzheimer-krankheit im rattentiermodell durch intrazerebroventrikuläre injektion von kompositiertem amyloid-beta-protein

Establishment of a Valuable Mimic of Alzheimer's Disease in Rat Animal Model by Intracerebroventricular Injection of Composited Amyloid Beta Protein

Alzheimer-Krankheit (AD) ist eine progressive, irreversible Gehirnerkrankung, die langsam zerstört Speicher und wird begleitet von Neuron Verlust und Struktur ändern. Mit der Zunahme von Alzheimer-Patienten weltweit ist der Pathologie und Therapie der Krankheit ein Schwerpunkt in der internationalen pharmazeutischen Industrie geworden. So ist die Einrichtung das Tiermodell AD im Labor nachahmen von großer Bedeutung.
Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll für die Gründung eines Mimic Anzeige in eine Ratte Tier Modell aber Intracerebroventricular Injektion von Amyloid Beta Protein 25-35 (Aβ25-35) in Kombination mit Aluminium Bortrichlorid (AlCl3) und Anterodorsal thalamische Kern Injektion von rekombinanten menschlichen Wachstumsfaktor-β1 (RHTGF-β1) in Ratten verwandelt. Die entsprechenden Marker der AD gemessen wurden, einschließlich: räumliche Gedächtnis, neuronale Struktur und Unterkonstruktion, neuronale Aβ und neurofibrillären Verschlingungen (NFT) Produktion. Diese Rattenmodell zeigt Beeinträchtigung des räumlichen Gedächtnisses, neuronale Struktur und pathologischen Veränderungen im Unterbau, Neuron intrazellulären Aβ-Belastung und NFT Aggregation und bietet eine enge Mimik der neuronalen Struktur und Funktion Störung mit der klinischen Alzheimer-Patienten. Damit die vorgestellten AD Ratte Modelprovides eine wertvolle in-Vivo -Tool für die Erkundung der neuronalen Funktion, neuronale Pathologie und Drogen-Screening von AD.

Dies ist ein Protokoll zur Alzheimer-Krankheit bei Ratten durch Bewertung der Beeinträchtigung des räumlichen Gedächtnisses, neuronale pathologischen Veränderungen, neuronale Amyloid Beta Protein (Aβ) Belastung zu imitieren, und kombiniert neurofibrillären Verschlingungen Aggregation, induziert durch die Injektion von Aβ25-35 mit Aluminium Bortrichlorid und rekombinante menschliche Umwandlung Wachstumsfaktor-β1.

Etablierung einer wertvollen Nachahmung der Alzheimer-Krankheit im Rattentiermodell durch intrazerebroventrikuläre Injektion von kompositiertem Amyloid-Beta-Protein

Alzheimer&#39;s disease (AD) is an irreversible, progressive brain disease that slowly destroys memory and is accompanied by neuron loss and structure ...

Mit dieser Methode lassen sich zentrale Fragen im Bereich der neurodegenerativen Erkrankungen, wie beispielsweise der Alzheimer-Krankheit, beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie die Alzheimer-Krankheit im Ratten-Tiermodell durch intrazerebroventrikuläre Injektion von A-beta 25 bis 35 in Kombination mit Aluminiumtrichlorid und rekombinantem humanem Transformationswachstumsfaktor-beta 1 nachahmt. Außerdem bietet sie ein schnelles und vergleichsweise einfaches experimentelles Protokoll mit einer hohen Überlebensrate der Tiere, einer hohen Erfolgsrate des Modells sowie einer hohen Reproduzierbarkeit, wodurch sie als wirtschaftlicher erwiesen hat.Die Auswirkungen dieser Technik erstrecken sich auf die Überprüfung der Wirksamkeit von Arzneimitteln gegen AD, da dieses Tiermodell Gedächtnisstörungen und neuronale Störungen aufweist, die den Zuständen von AD-Patienten nahekommen. Die Durchführung der Prozedur wird Cheng Jianjun, ein Techniker aus meinem Labor, demonstrieren. Beginnen Sie an einer anästhesierten Ratte damit, das Fell am Scheitel des Kopfes mit einer chirurgischen Schere abzuschneiden und desinfizieren Sie mit Iodophor.Als Nächstes führen Sie einen Einschnitt in die Kopfhaut entlang der medianen Längsachse des Schädeldaches mit chirurgischen Skalpellen und einer Schere durch. Lösen Sie das subkutane Gewebe und die Faszie, wischen Sie das Schädeldach mit 0,3 % Wasserstoffperoxid ab und markieren Sie den Bregma mit einem Markierstift. Danach markieren Sie drei Punkte: den anterodorsalen Thalamuskern zur Injektion von RHTGF-Beta eins und zur Befestigung einer Schraube, den Bereich des lateralen Ventrikels (LV) zur Injektion von A-Beta 25-35 und AICI3 sowie schließlich die Stelle zur Befestigung der zweiten Schraube.Bohren Sie vorsichtig mit einem flexiblen Knochenbohrer drei Löcher mit einem Durchmesser von einem Millimeter an den drei markierten Stellen des Schädels. Stoppen Sie die Blutung und reinigen Sie die Schädeloberfläche wiederholt mit steriler, trockener Baumwolle. Führen Sie danach eine mit einer Mikroinjektionspumpe verbundene Nadel bis zu einer Tiefe von 4,2 Millimetern in das Gehirn ein und injizieren Sie vorsichtig einen Mikroliter RHTGF-beta-1 in den ad-Bereich.Halten Sie die Mikroinjektion zwei Minuten nach der Injektion aufrecht. Ziehen Sie sie dann langsam heraus. Befestigen Sie die beiden Schrauben mit einem kleinen Schraubendreher an den zuvor markierten Stellen im Schädel.Nach der Schraubenplatzierung montieren Sie das Kanülenimplantationssystem, indem Sie zunächst die Dummy-Kanüle nach einer Desinfektion durch 24-stündiges Eintauchen in 75 %igen Alkohol in die Führungskanüle einführen. Danach führen Sie die Führungskanüle aus rostfreiem Stahl mit Hilfe eines Kanülenhalters am stereotaktischen Gerät der Ratte durch das Schädelloch 4,6 Millimeter in den LV-Bereich des Gehirns ein. Anschließend mischen Sie das Prothesenbasis-Material mit Prothesenbasis-Wasser im Verhältnis von 1,5 Gramm pro ein Milliliter.Tragen Sie die Paste auf, um den Kunststoffsockel der Leitkanüle und die beiden Schrauben zur Fixierung der Leitkanüle abzudecken. Bedecken Sie den gesamten Hautschnitt, um eine Infektion der Haut zu vermeiden. Am nächsten Tag ziehen Sie die Platzbosonde heraus und setzen die innere Kanüle in die Leitkanüle ein.Schrauben Sie die Befestigungsschraube fest, um die innere Kanüle zu fixieren. Bringen Sie das Polyethylenrohr an, das die Mikroinjektionspumpe mit der inneren Kanüle verbindet, und stellen Sie die Injektionsgeschwindigkeit auf einen Mikroliter pro Minute ein. Injizieren Sie A-beta 25-35 in das LV. Warten Sie fünf Minuten nach Beendigung der Injektion und ziehen Sie die innere Kanüle vorsichtig heraus.Danach wird die Platzbosonde erneut in die Führungssonde eingeführt. Am 15. Tag nach der Operation wird das Sondensystem entfernt, indem das mit chirurgischem Skalpell und Pinzette festgewordene Kunststoffmaterial abgetragen und die Wunde mit Iodophor desinfiziert wird. Abschließend wird die Schädellücke mit Knochenzement verschlossen und die Haut mit einer einfachen unterbrochenen Nahttechnik vernäht.Beginnen Sie damit, das Poolwasser mit schwarzer Lebensmittelfarbe zu färben. Halten Sie die Wassertiefe bei 31,5 Zentimetern und die Temperatur bei 23 ± 1 Grad Celsius. Bringen Sie dann eine 1,5 Zentimeter große, runde, transparente Plexiglasplattform unter der Wasseroberfläche an.Als Nächstes teilen Sie den Pool durch gedachte Linien in vier gleiche Quadranten auf, um beschreibende Daten sammeln zu können. Platzieren Sie die versteckte Plattform im ersten Quadranten, oder Q1, des Wasserlabyrinths. Erfassen Sie abschließend das Schwimmverhalten der Ratte mit einer Videokamera über dem Wasserlabyrinth, die mit einer computerbasierten grafischen Analyse-Software verbunden ist.Diese Ergebnisse zeigen, dass die sham-operierte Gruppe von Ratten stets frei schwamm, während die Ratten der zusammengesetzten A-Beta-behandelten Gruppe im Morris-Wassernebel stets am Beckenrand entlang im adaptiven Schwimmen verharrten. Während der vier Tage zur Überprüfung von Ratten mit Gedächtnisstörungen verkürzte sich die Zeit zum Auffinden der versteckten Plattform bei allen Ratten kontinuierlich. Außerdem waren die Latenzen der zusammengesetzten A-Beta-behandelten Gruppe zum Auffinden der versteckten Plattform signifikant länger als die der sham-operierten Gruppe, was zeigt, dass die zusammengesetzte A-Beta-Behandlung die Gedächtniswiedererlernstörung bei Ratten erhöhen kann.Im Gedächtnisbehaltbarkeitstest nach einem Tag benötigte die zusammengesetzte A-beta-behandelte Gruppe im Vergleich zur Schein-operierten Gruppe weniger Schwimmzeit, kürzere Schwimmdistanz und weniger Querungen innerhalb von 60 Sekunden. Schließlich war neben den pathologischen Veränderungen auch die Anzahl der Neuronen in der zusammengesetzten A-beta-behandelten Gruppe im Hippocampus und im zerebralen Kortex im Vergleich zur Schein-operierten Gruppe signifikant verringert. Sobald die Technik beherrscht ist, kann sie bei korrekter Durchführung in 20 bis 30 Minuten abgeschlossen werden.Während des Durchführens dieses Verfahrens ist es wichtig, darauf zu achten, dass die geführte Kanüle nicht von der Gehirnschraube abfällt. Nach diesem Verfahren können weitere Methoden wie das Labyrinth-Testverfahren angewendet werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, beispielsweise, ob das nachgeahmte AD-Modell erfolgreich war. Nach seiner Entwicklung ebnete diese Technik den Forschern auf dem Gebiet der Neurowissenschaften den Weg, um neurodegenerative Erkrankungen in vivo zu untersuchen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man erfolgreiche tierische Modelle der Alzheimer-Krankheit durch intrazerebroventrikuläre Injektion von A-beta 25 bis 35 in Kombination mit Aluminiumtrichlorid und rekombinantem humanem Transformationswachstumsfaktor-beta eins bei Ratten etabliert. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Polymethylmethacrylat äußerst gefährlich sein kann und Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von Masken und Handschuhen stets beachtet werden sollten, während dieses Verfahren durchgeführt wird.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Behavior

Verhalten

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Injektion monomerer Amyloid-Peptide in das Vorderhirn von erwachsenen Zebrafischen, um Amyloid-Toxizität zu erzeugen, die die neuronalen Schäden nachahmt, die bei der Alzheimer-Krankheit beobachtet...

Etablierung eines Alzheimer-Modells im Gehirn von Zebrafischen durch Amyloid-Peptid-Injektion

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Injektion von Amyloid-Beta-Peptiden, Aluminiumchlorid und einem neuroinflammatorischen Wachstumsfaktor, die zusammen bei der Bildung von toxischen Amyloid-Plaques in der Hippocampus-Region helfen. Dies führt bei der Ratte zu Gedächtnisstörungen, die für die Alzheimer-Krankheit charakteristisch sind.

Etablierung eines Alzheimer-Rattenmodells durch eine Amyloid-Beta-Peptid-Injektion

Dieses Video zeigt die präzise stereotaktische Infusion von Amyloid-Beta in den Gyrus dentatus, um ein Mausmodell der Alzheimer-Krankheit zu etablieren. Die genaue Koordinatenbestimmung und die kontrollierte Verabreichung von Amyloid-Beta-Proteinen führen zu einer neuronalen Degradation, stören die Gedächtnisverarbeitung und tragen zur Entwicklung der Alzheimer-Krankheit bei.

Direkte stereotaktische Infusion von Amyloid-Beta-Proteinen im Gehirn für ein Alzheimer-Modell

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die direkte stereotaktische Gehirninfusion von Amyloid-beta. Diese Methodik bietet ein alternatives In-vivo-Mausmodell, um die kurzfristigen Auswirkungen von Amyloid-Beta auf Gehirnneuronen zu untersuchen.

Stereotaktische Infusion von oligomeren Amyloid-beta in die Maus-Hippocampus

Um die komorbiden Alzheimer-Krankheit (AD) und Schlaganfall Zustand in einem neuen Modell zu untersuchen, werden drei Verhalten Aufgaben beschrieben, die sowohl die Motorsteuerung und kognitive Verhalten beurteilen. Zu diesen Aufgaben gehören die Strahl zu Fuß Aufgabe, Zylinder Aufgabe und Morris-Wasserlabyrinth.

Motor und Hippokampus-Dependent Spatial Learning und Referenz-Gedächtnis-Bewertung in einem transgenen Mausmodell der Alzheimer-Krankheit mit Schlaganfall

Die Amyloid-β (Aß) -injected Tiermodell die Verabreichung einer definierten Menge und Arten von Aß-Fragmente ermöglicht und reduziert individuelle Unterschiede innerhalb der einzelnen Studiengruppe. Dieses Protokoll beschreibt die intracerebroventricular (ICV) Injektion von A &amp; bgr; ohne stereotaktischen Instrumente, die Produktion von Alzheimer-ähnliche Verhaltensstörungen in normalen Mäusen ermöglichen.

Intracerebroventricular Injektion von Amyloid-β-Peptide in normalen Mäusen zu Akut Induce Alzheimer-ähnliche kognitive Defizite

Um die Wirkungen von Aβo in vivo zu untersuchen, haben wir ein Modell entwickelt, das auf wiederholten hippokampalen Infusionen von löslichem Aβo in Verbindung mit einer kontinuierlichen Infusion von Aβo-Antikörpern (6E10) im Hippocampus unter Verwendung osmotischer Pumpen basiert, um der neurotoxischen Wirkung von Aβo entgegenzuwirken.

Neurodegenerative Erkrankungen im Tiermodell der chronischen Amyloid-beta-Oligomers Infusion wird durch Antikörper-Behandlung Angereichert mit osmotische Pumpen entgegen gewirkt

Wir entwickelten eine Methode für die quantitative 3D in silico - Modellierung (q3DISM) zerebraler Amyloid-β (Aß) Phagozytose durch mononukleäre Phagozyten in Nagetiermodellen der Alzheimer-Krankheit. Dieses Verfahren kann für die Quantifizierung von praktisch jedem phagozytischen Ereignis in vivo verallgemeinert werden.

Quantitative 3D In Silico Modellierung (q3DISM) zerebraler Amyloid-beta Phagozytose in Nagetiermodellen der Alzheimer-Krankheit

Dieses Protokoll beschreibt die Synthese, Charakterisierung und Injektion von Monomeren Amyloid-β42 Peptide zur Erzeugung von Amyloid Toxizität in Erwachsenen Zebrafisch, eine Alzheimer-Krankheitsmodell, gefolgt von histologische Analyse und Erkennung von Aggregationen.

Modellierung von Amyloid-β42 Toxizität und Neurodegeneration bei Erwachsenen Zebrafisch-Gehirn

Dieses Protokoll veranschaulicht eine Zellverkapselungsmethode durch schnelle physikalische Gelation von Alginat zur Immobilisierung von Zellen. Erhaltene Mikroperlen ermöglichen eine kontrollierte und nachhaltige Sekretion von Amyloid-B im Laufe der Zeit und können verwendet werden, um die Auswirkungen von abgesonderten Amyloid----Modellen in in vitro und in vivo zu untersuchen.

Herstellung von Amyloid---Sekret alginat Mikroperlen für den Einsatz bei der Modellierung der Alzheimer-Krankheit

Erfahren Sie die intrazerebroventrikuläre Injektion von Aβ25-35 zur Etablierung eines Alzheimer-Rattenmodells. Diese Methode ermöglicht die Bewertung von Gedächtnisstörungen und neuronalen Veränderungen für die Arzneimittelforschung.

Etablierung einer wertvollen Nachahmung der Alzheimer-Krankheit im Rattentiermodell durch intrazerebroventrikuläre Injektion von kompositiertem Amyloid-Beta-Protein (Video) | JoVE Journal

Etablierung einer wertvollen Nachahmung der Alzheimer-Krankheit im Rattentiermodell durch intrazerebroventrikuläre Injektion von kompositiertem Amyloid-Beta-Protein

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