Name: Visualisierung und Live Imaging Oligodendrozyt Organellen in organotypischen Gehirnscheiben mit Adeno-assoziierten Virus und konfokale Mikroskopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-23T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Lernen Sie die Visualisierung von Oligodendrozyten-Mitochondrien in organotypischen Gehirnschnitten mittels AAV-Transduktion und Zeitraffer-Mikroskopie. Diese Methode ermöglicht detaillierte Einblicke in die Dynamik myelinisierender Zellen.

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Wir danken Linda Hildegard Bergersen und Magnar Bjørås für den Zugang zu Handy-Lab und Ausrüstung, Janelia Molekularbiologie gemeinsame Ressource Personal für Plasmid und Virus-Produktion und Koen Vervaeke Unterstützung bei Lasermessungen macht. Diese Arbeit wurde von der norwegischen Health Association, der Norwegische Forschungsrat finanziert und die Mikroskopie-Ausrüstung wurde durch Norbrain finanziert.

<ol><li>Barry, C., Pearson, C., Barbarese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+organization+of+oligodendrocyte+processes+during+development+in+culture+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neursosci%22%5BJournal%5D)">Morphological organization of oligodendrocyte processes during development in culture and in vivo.</a> Dev. Neursosci. 18, 233-242 (1996).</li>
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</ol>

Die Autoren erklären keine Interessenkonflikte.

Das Protokoll zur Herstellung von organotypischen Kulturen hier beschrieben ist eine modifizierte Version18 des Protokolls von De Simoni und Yu (2006)5beschrieben. Die wichtigsten Änderungen sind nachfolgend dargelegt worden. TRIS-Puffer ist das Kulturmedium hinzugefügt, die das Überleben der Scheiben wenn außerhalb des Inkubators während virale Transduktion und Wechsel des Mediums Zelle verbessert. Die Sterilisation für Konfetti wird ebenfalls geändert. Während andere Prot...

Weißen Substanz des Gehirns besteht aus Nervenzellen Axone eingewickelt in Myelin, eine spezielle erweiterte Plasmamembran von Oligodendrozyten gebildet. Myelin ist für schnelle und zuverlässige Aktionspotential Ausbreitung und langfristiges Überleben der Markhaltige Axone erforderlich, und ein Verlust von Myelin kann neurologische Dysfunktion verursachen. Trotz ihrer großen Bedeutung sind die Eigenschaften von Oligodendrozyten weniger bekannte Neuronen und Astrozyten im Vergleich. Infolgedessen wurden weniger Werkzeuge für das Studium von Oligodendrozyten entwickelt.
Leben Sie Bildgebung von Zellorganellen, wie Mitochondrien, endoplasmatischen Retikulum (ER) oder verschiedene vesikuläre Strukturen, dynamische Veränderungen in der Organellen im Laufe der Zeit zu studieren nützlich sein können. Traditionell wurde Bildgebung der lebenden Oligodendrozyten in Monokulturen1,2durchgeführt. Jedoch Oligodendrozyten in Monokultur zeigen keine kompakte Myelin und organotypischen oder akuten Hirnschnitten, daher möglicherweise eine bessere Option bei der Lokalisierung und Bewegung der Organellen zu studieren. Lokalisierung von kleine Organellen und Proteinen in der Myelinscheide kann aufgrund der kurzen Entfernung zwischen Markhaltige Axon und die umgebenden Myelinscheide schwierig sein. So haben leichte mikroskopische Immunostaining Verfahren allein nicht die räumliche Auflösung zur Unterscheidung zwischen Organellen in der Myelinscheide und diejenigen in Markhaltige Axon. Dies kann durch virale Transduktion mit Genen für Organelle ausgerichtete fluoreszierende Proteine angetrieben von Zelle typspezifische Promotoren gelöst werden. Die Vorteile sind ein zellspezifische und spärlich Ausdruck, der genaue Beurteilung der Organelle Lokalisierung und Dynamik ermöglicht. Transgene Tiere können auch verwendet werden, um solch eine Organelle ausgerichtete zellspezifische Ausdruck3zu erreichen. Jedoch die Herstellung und Instandhaltung von transgenen Tieren ist teuer und bieten in der Regel nicht die spärlichen Ausdruck, der durch virale Methoden erreicht werden kann.
Die beschriebene Methode verwendet hier virale Transduktion von Oligodendrozyten mit mitochondrialen gezielt fluoreszierenden Proteinen (Dsred oder grün fluoreszierenden Proteins, GFP) angetrieben von Myelin basic Protein Promotor (MBP-Mito-Dsred oder MBP-Mito-GFP) zu visualisieren Oligodendrozyt Mitochondrien in organotypischen Hirnschnitten. Darüber hinaus wird Ausdruck einer anderen fluoreszierenden Proteins im Zytoplasma (GLP zusammen mit Mito-Dsred oder Tdtomato mit Mito-GFP verwendet) zur Visualisierung der Zellmorphologie, einschließlich der zytoplasmatischen Kompartimente der Myelinscheide ermöglichen. Das Protokoll enthält die Verfahren zur Herstellung von organotypischen Gehirnscheiben (eine modifizierte Version des Protokolls von De Simoni und Yu, 20064,5beschrieben). Dann beschreiben wir die Time-Lapse bildgebende Verfahren zur Untersuchung der mitochondrialen Bewegung. Dieses Verfahren nutzt eine aufrechte confocal Mikroskop mit einem kontinuierlichen Austausch von bildgebendes Medium, eine Einrichtung, die einfache Anwendung von Drogen oder anderen mittleren Änderungen während der Bildgebung ermöglicht. Die Time-Lapse bildgebende Verfahren kann auf jedem confocal Mikroskop mit einige zusätzliche Ausrüstung für die Aufrechterhaltung der lebenden Scheiben wie unten beschrieben durchgeführt werden. Das Protokoll enthält auch einige Tipps zur Optimierung der Bildgebung und Reduzierung Phototoxizität.
Zu guter Letzt bezeichnet man eine schnelle und einfache Möglichkeit, ungefärbten Myelin durch Reflexion der konfokalen Mikroskopie (CoRe) zu visualisieren. Dies ist nützlich, um die Myelinscheide während der live-Aufnahme zu identifizieren. In den letzten Jahren verschiedene Techniken wurden entwickelt um Bild Myelin ohne jede Färbung erforderlich, aber die meisten von Ihnen erfordern spezifische Ausstattung und Kompetenz6,7,8. Das hier beschriebene Verfahren verwendet die Reflexionseigenschaften der Myelinscheide und ist eine vereinfachte Single-Erregung Wellenlänge Version der spektrale Reflexion der konfokalen Mikroskopie (Partitur, in denen mehrere-Wellenlängen Laser werden kombiniert, um Myelin zu visualisieren) 9. Kern kann auf jede confocal Mikroskop, das 488 nm Laser und ein 470-500 nm Emission Bandpassfilter oder einen einstellbaren Emission Filter erfolgen.

<table><tbody><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>A9539</td><td></td></tr><tr><td>BD Mikrolanze 19G</td><td>BD</td><td>301500</td><td>Nadeln für den Ein- und Auslass des Bades</td></tr><tr><td>Bioxidgas</td><td>AGA</td><td>105701</td><td></td></tr><tr><td>Marke Pipettenbirnen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z615927</td><td>Pipettenbirnen</td></tr><tr><td>Bunsenbrenner (Flüssigpropanbrenner)</td><td>VWR</td><td>89038-530</td><td></td></tr><tr><td>Kabelkonfektion für Heizungsregler</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0106&nbsp;</td><td>Temperaturregler - Thermometerteil</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fluka</td><td>21100</td><td></td></tr><tr><td>CO2&nbsp;</td><td>AGA</td><td>100309</td><td>CO2 für Inkubator</td></tr><tr><td>Deckglas, quadratisch Corning</td><td>Thermo&nbsp; Fischer Scientific</td><td>13206778</td><td>Zur Befestigung unter der Badewanne für Live-Bildgebung. Mit Kleber oder Vaseline verschließen.</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>Zarte Pinzette</td><td>Finescience</td><td>11063-07</td><td>Zum Sezieren</td></tr><tr><td>Diamant-Ritzstift</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>54463</td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Glaspasteurpipetten 230 mm</td><td>VWR</td><td>612-1702</td><td>Glaspipetten</td></tr><tr><td>Doppelschneidige Rasierklinge aus Edelstahl</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>#7200</td><td>Rasierklinge für Vibratome</td></tr><tr><td>Earle's Balanced Salt Solution (EBSS)</td><td>Gibco-Invitrogen</td><td>24010-043</td><td></td></tr><tr><td>Filterpapierkreise</td><td>Schleicher & Schuell</td><td>300,220</td><td>Filterpapier zur Filtration von PFA</td></tr><tr><td>Fun Tack</td><td>Loctite</td><td>1270884</td><td>Zum Anschließen/Einstellen der Position von Ein- und Auslässen in der Badewanne</td></tr><tr><td>Handtuch C-Fold 2</td><td>Katrin</td><td>344388</td><td></td></tr><tr><td>Harfe, flach für RC-41 Kammer,</td> <td>Warner Instruments</td><td>&nbsp; 64-1418</td><td>Harfe, um Konfetti in der Badewanne festzuhalten. Schneiden Sie die Fäden vor der Verwendung mit organotypischen Scheiben ab. 1,5 mm, 13mm, SHD-41/15</td></tr><tr><td>HEPES, FW: 260,3</td><td>Sigma</td><td>H-7006</td><td></td></tr><tr><td>Holten LaminAir, Modell 1.2</td><td>Heto-Holten</td><td>96004000M</td><td>Laminar-Flow-Haube</td></tr><tr><td>Pferdeserum, hitzeinaktiviert</td><td>Gibco-Invitrogen</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>LCR-Membran, PTFE,&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>FHLC0130</td><td>Konfetti&nbsp;</td></tr><tr><td>Leica VT1200</td><td>Leica</td><td>14048142065</td><td>Vibratome</td></tr><tr><td>MEM-Glutamax mit HEPES</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>42360024</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>R.P. Normapur</td><td>25 108.295</td><td></td></tr><tr><td>Mikrolöffel Heyman Typ B</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>Sciences 62411-B</td><td>Kleiner, abgerundeter Spatel mit geschärftem Ende zum Sezieren</td></tr><tr><td>Millex-GP Filtereinheit</td><td>Millipore</td><td>SLGPM33RA</td><td>Spritzenfiltereinheit</td></tr><tr><td>Millicell Zellkultureinsatz, 30 mm</td><td>Millipore</td><td>PICM03050</td><td>Zellkultureinsätze</td></tr><tr><td>Minipuls 3 Speed Control Module</td><td>GILSON</td><td>F155001</td><td>Schlauchpumpe für Live-Imaging - Steuermodulteil (Anschluss an Zweikanalkopf)</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8282</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fluka</td><td>71628</td><td></td></tr><tr><td>Nunclon Delta Surface</td><td>Thermo&nbsp; Fischer Scientific</td><td>140675</td><td>Kulturplatte</td></tr><tr><td>Nystatin Suspension</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N1638</td><td></td></tr><tr><td>Objektiv W "Plan-Apochromat" 40x/1,0 DIC&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>441452-9900-000&nbsp;</td><td>Wasserimmersionsobjektiv für Live-Bildgebung. (WD=2.5mm), VIS-IR</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>VWR</td><td>291-1211</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd, granulat</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>#19208</td><td></td></tr><tr><td>PC-R Perfusionskammer</td><td>SiSkiYou</td><td>&nbsp; 15280000E</td><td>Bad für Live-Bildgebung</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin, flüssig</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale 140 mm&nbsp;</td><td>Heger</td><td>1075</td><td>Große Petrischale&nbsp;</td></tr><tr><td>Petrischale 92x16 mm;</td><td>Sarstedt&nbsp;</td><td>82.1473</td><td>Mittlere Petrischale&nbsp;</td></tr><tr><td>Petrischale 55x14,2 mm</td><td>VWR</td><td>391-0868</td><td>Kleine Petrischale</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Sigma</td><td>P4417</td><td>PBS Tabletten</td></tr><tr><td>R2 Zweikanal-Kopf&nbsp;</td><td>GILSON</td><td>F117800</td><td>Schlauchpumpe für Live-Imaging - Zweikanal-Kopfteil (Steuermodul erforderlich)</td></tr><tr><td>Rund-/Flachspatel, Edelstahl</td><td>VWR</td><td>82027-528</td><td>Großer Spatel zum Sezieren</td></tr><tr><td>Schleifpapier</td><td>VWR</td><td>MMMA63119</td><td>Optional, zum Glätten von Glasscheren Pipetten</td></tr><tr><td>Schere, &nbsp; 17,5 cm</td><td>Finescience</td><td>14130-17</td><td>Große Schere zum Sezieren</td></tr><tr><td>Schere, 8,5&nbsp;</td><td>Finescience</td><td>14084-08</td><td>Kleine, scharfe Schere zum Sezieren</td></tr><tr><td>Einschneidige, Edelsteinklinge</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>#71972</td><td>Einschneidige Rasierklinge</td></tr><tr><td>Einfache Inline-Lösungsheizung SH-27B</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0102</td><td>Temperaturregler - Heizteil</td></tr><tr><td>Steritop-GP Filtereinheit, 500 ml, 45mm</td><td>Millipore</td><td>SCGPT05RE</td><td>Filter zum Sterilisieren Lösungen</td></tr><tr><td>Sekundenkleber Präzision</td><td>Loctite</td><td>1577386</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Skalpellklinge Nr. 22</td><td>Swann Morton Ltd.</td><td>209</td><td>Abgerundete Skalpellklinge</td></tr><tr><td>Temperaturregler TC324B</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0100</td><td>Temperaturregler für Live-Bildgebung (erfordert Lösungsheizung und Kabelkonfektion)</td></tr><tr><td>Trizma-Basis</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Trizma HCl</td><td>Sigma</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator mit Wassermantel Serie II</td><td>Forma Scientific</td><td>78653-2882</td><td>Inkubator</td></tr></tbody></table>

visualisierung und live imaging oligodendrozyt organellen in organotypischen gehirnscheiben mit adeno-assoziierten virus und konfokale mikroskopie

Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy

Nervenzellen setzen auf die elektrische Isolierung und trophischen Unterstützung der Myelinating Oligodendrozyten. Trotz der Bedeutung der Oligodendrozyten wurden die erweiterte Tools derzeit verwendet, um Neuronen, studieren nur teilweise getroffen auf Oligodendrozyt Forscher. Zelle typspezifische Färbung durch virale Transduktion ist ein sinnvoller Ansatz, live Organelle Dynamik zu studieren. Dieser Beitrag beschreibt ein Protokoll zur Visualisierung von Oligodendrozyt Mitochondrien in organotypischen Gehirnscheiben durch Transduktion mit Adeno-assoziierte Virus (AAV) mit Genen für mitochondriale gezielte fluoreszierende Proteine von transkriptionelle kontrolliert Das Myelin basic Protein Förderer. Freuen Sie sich auf das Protokoll zur Herstellung von organotypischen koronalen Maus Gehirnscheiben. Ein Verfahren für Zeitraffer-Aufnahmen von Mitochondrien dann folgt. Diese Methoden auf andere Organellen übertragen werden können und möglicherweise besonders hilfreich für das Studium Organellen in der Myelinscheide. Schließlich beschreiben wir eine leicht verfügbare Technik zur Visualisierung von ungefärbten Myelin in lebenden Scheiben durch Reflexion der konfokalen Mikroskopie (CoRe). Kern erfordert keine zusätzliche Ausrüstung und kann nützlich sein, um die Myelinscheide während der live-Aufnahme zu identifizieren.

Organotypischen Gehirnscheiben, die kultiviert und ausgestrahlt, wie oben beschrieben wurden, zeigte eine spärliche Verteilung der kortikalen Oligodendrozyten mit dem Ausdruck Mito_dsred und GLP. Immunostaining mit Antikörpern gegen Olig2 und MBP bestätigte, dass der Ausdruck spezifisch für Oligodendrozyten (Abbildung 1).
Für live Aufnahmen wurden ausgestrahlt Oligodendrozyten durch ihre charakteris...

Myelinating Oligodendrozyten fördern schnelle Aktionspotential Ausbreitung und neuronale überleben. Hier beschriebene ist ein Protokoll für Oligodendrozyt-spezifischen Ausdruck der fluoreszierende Proteine in organotypischen Gehirnscheiben mit nachfolgenden Zeitraffer Bildgebung. Darüber hinaus wird ein einfaches Verfahren zur Visualisierung von ungefärbten Myelin vorgestellt.

Visualisierung und Live Imaging Oligodendrozyt Organellen in organotypischen Gehirnscheiben mit Adeno-assoziierten Virus und konfokale Mikroskopie

Neurons rely on the electric insulation and trophic support of myelinating oligodendrocytes. Despite the importance of oligodendrocytes, the advanced ...

Das übergeordnete Ziel dieser viralen Transduktion und zeitraffenden Aufzeichnung besteht darin, die Bewegung von Mitochondrien in Oligodendrozyten in organspezifischen Hirnschnitten sichtbar zu machen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Oligodendrozyten zu beantworten, beispielsweise wie Oligodendrozyten und ihre Organellen auf Veränderungen in der lokalen Umgebung reagieren. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie detaillierte Informationen über die Struktur der Oligodendrozyten und die Dynamik ihrer Organellen in einer Präparation liefert, in der alle verschiedenen Gehirnzellen vorhanden sind und Oligodendrozyten kompaktes Myelin bilden. Transduzieren Sie Oligodendrozyten in Schnittkulturen am siebten Tag in vitro. Ziehen Sie zunächst 1,3 Mikroliter verdünntes AAV pro Schnitt auf. Stellen Sie sicher, dass die Außenseite der Pipettenspitze trocken ist, halten Sie die Pipette so nah wie möglich über den Kortex, ohne die Schnittfläche mit der Pipettenspitze zu berühren, und drücken Sie die Lösung langsam aus der Pipette. Sobald die Lösung den Schnitt berührt, bewegen Sie die Pipettenspitze über den Kortex, um die Lösung über die gesamte kortikal

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Research

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Neurowissenschaften

Hier präsentieren wir die intrakranielle Injektion von AAV-Vektoren für die Fluoreszenzmarkierung von Neuronen und Gliazellen in der Sehrinde.

Intrakranielle Injektion von Adeno-assoziierte virale Vektoren

Dieses Protokoll beschreibt eine organotypischen Slice-Assay für die postnatale Gehirn und hochauflösenden Zeitraffer-Bildgebung von Neuroblasten Migration in der rostralen wandernde Stream optimiert.

Ein organotypischen Assay für High-Resolution Time-Lapse Imaging neuronaler Migration in der postnatalen Gehirn

Quelle: Kennedy, L. H., et. al. Visualisierung und Live-Bildgebung von Oligodendrozyten-Organellen in organotypischen Hirnschnitten mittels Adeno-assoziierter Virus- und Konfokalmikroskopie. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt die Bildgebung von Oligodendrozyten-Mitochondrien in organotypischen Schnitten des Gehirns von Mäusen. Die Scheibe wird in eine Badekammer mit kontinuierlicher Flüssigkeitszirkulation und kontrollierter Temperatur gelegt. Nach dem Einstellen verschiedener Parameter des...

Konfokale Bildgebung der mitochondrialen Bewegung in Oligodendrozyten in organotypischen Hirnschnittkulturen

Quelle: Moye, S. L., et.al.  Visualisierung der Astrozytenmorphologie mit Hilfe der luzifergelben Iontophorese. J. Vis. Exp. (2019).  Dieses Video zeigt die Verwendung der Fluoreszenzfarbstoff-Iontophorese zur Untersuchung der Astrozytenmorphologie in fixierten Hirnschnitten. Es beschreibt das Durchstechen des Astrozyten-Somas mit einer Elektrode, um einen anionischen, hydrophilen Farbstoff unter einem Niederspannungsstrom in das Zytoplasma zu bringen, so dass der Farbstoff das Soma und die...

Visualisierung der Astrozytenmorphologie mit Hilfe des Fluoreszenzfarbstoffs Iontophorese in einem fixierten Maushirnschnitt

Eine Technik zur Untersuchung von NG2-Zellen und Oligodendrozyten unter Verwendung eines Schnittkultursystems des Vorderhirns und des Kleinhirns wird beschrieben.  Diese Methode ermöglicht die Untersuchung der Dynamik der Proliferation und Differenzierung von Zellen innerhalb der Oligodendrozytenlinie, bei der die extrazelluläre Umgebung leicht manipuliert werden kann, während die Zytoarchitektur des Gewebes erhalten bleibt.

Organotypischen Kulturen zu Oligodendrozyten Dynamik und Myelinisierung Studieren

Um die Mechanismen der Demyelinisierung und der neuronalen Apoptose in kortikalen Läsionen von entzündlichen demyelinisierenden Erkrankungen zu untersuchen, werden verschiedene Tiermodelle verwendet. Wir beschreiben hier einen ex vivo Ansatz, bei dem Oligodendrozyten-spezifische CD8+ T-Zellen auf Hirnschnitten verwendet werden, was zum oligodendroglialen und neuronalen Tod führt. Mögliche Anwendungen und Grenzen des Modells werden diskutiert.

Ein Ex-vivo- Modell eines Oligodendrozyten-gerichtete T-Cell Attack in akuten Hirnschnitten

Hier ist eine modifizierte Roller Schlauch Methode zur Kultivierung und intermittierende hochauflösende Bildgebung des Gehirns Nagetier Scheiben über viele Wochen mit präzisen Neupositionierung auf komplexeste Deckgläsern. Neuronalen Lebensfähigkeit und Slice Morphologie sind gut gepflegt. Anwendungen dieses komplett geschlossenes System mit Viren für Zelltyp spezifische Ausdruck stehen zur Verfügung.

Modifizierte Roller Schlauch Methode genau lokalisierte und sich wiederholende intermittierende Bildgebung während langfristige Kultur Gehirnscheiben im geschlossenen System

Wir beschreiben ein Protokoll zur zelltypspezifischen Expression des genetisch codierten FRET-basierten Sensors ATeam1.03YEMK in organotypischen Scheibenkulturen des Mausvorhirns. Darüber hinaus zeigen wir, wie dieser Sensor für die dynamische Bildgebung von zellulären ATP-Spiegeln in Neuronen und Astrozyten verwendet wird.

Bildgebung von intrazellulärem ATP in organotypischen Gewebescheiben des Maushirns mit dem FRET-basierten Sensor ATeam1.03YEMK

Hier stellen wir eine Methode zur Untersuchung der Neuritenmorphogenese in postnatalen Maus-Netzhautexplantationen mittels konfokaler Zeitraffinalmikroskopie vor. Wir beschreiben einen Ansatz zur spärlichen Markierung und Erfassung von retinalen Zelltypen und deren Feinprozessen unter Verwendung rekombinanter adenoassoziierter Virusvektoren, die membrangerichtete fluoreszierende Proteine in einer Cre-abhängigen Weise exprimieren.

Zeitraffer-Bildgebung neuronaler Arborisation mittels spärlicher adenoassoziierter Virusmarkierung genetisch zielgerichteter Netzhautzellpopulationen

In dieser Arbeit beschreiben wir ein Protokoll, das die Adeno-assoziierte Virusinjektion mit der Implantation eines Schädelfensters kombiniert, um die Dynamik der Mikroglia und die neuronale Aktivität in wachen Mäusen simultan abzubilden.

Simultane Bildgebung von Mikrogliadynamik und neuronaler Aktivität in wachen Mäusen

Lernen Sie die Visualisierung von Oligodendrozyten-Mitochondrien in organotypischen Gehirnschnitten mittels AAV-Transduktion und Zeitraffer-Mikroskopie. Diese Methode ermöglicht detaillierte Einblicke in die Dynamik myelinisierender Zellen.

Visualisierung und Live Imaging Oligodendrozyt Organellen in organotypischen Gehirnscheiben mit Adeno-assoziierten Virus und konfokale Mikroskopie (Video) | JoVE Journal

Visualisierung und Live Imaging Oligodendrozyt Organellen in organotypischen Gehirnscheiben mit Adeno-assoziierten Virus und konfokale Mikroskopie

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