Name: Partielle Sehnerv Durchtrennung bei Ratten: ein Modell gegründet mit einem neuen operativen Ansatz zur sekundären Degeneration der retinalen Ganglienzellen bewerten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 12 s
Description: Erfahren Sie eine innovative chirurgische Methode zur partiellen Durchtrennung des Sehnervs bei Ratten. Dieses Modell ermöglicht die Untersuchung sekundärer Degenerationsmechanismen retinaler Ganglienzellen im Glaukom.

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Diese Arbeit wurde von der Beijing Natural Science Foundation (7152038), die grundlegende Forschungsmittel für die zentralen Universitäten Central South University (2016zzts162) und der Science Foundation der Aier Auge Krankenhaus Forschungsgruppe (Grant Nr. unterstützt. AF156D11). Zu guter Letzt Dank Fancheng Yan Yiping Xu für die wertvolle Unterstützung im Laufe der Jahre.

Verfahren mit tierische Probanden durch das institutionelle Tier genehmigt wurden kümmern und Ausschuss (IACUC) von der Hauptstadt medizinischen Universität zu verwenden. Alle chirurgischen Instrumente und Lösungen wurden vor der Operation, mikrobielle Infektion zu begrenzen sterilisiert.
 Hinweis: das chirurgische Protokoll enthalten fünf Teilen, nämlich Anästhesie, chirurgische Vorgehen, Sehnerv Bewertung, Schließung und Erholung. Um mit teilweise quantitative Durchtrennung des Sehnervs zu unterstützen, wurde ein neue, kostengünstige chirurgisches Instrument entwickelt. Alle Verfahren wurden nach ethischen Regeln und der Operationstechnik durchgeführt.
 1. Operationstechnik <ol><li>Durchführung von Experimenten mit der aseptischen Technik; Protokolle für die Verwendung von Tieren sollte bestimmten Institution werden.</li>
	<li>Sterilisation Instrumente und Materialien (Lösungen, Testsubstanzen, Tracer, Nadeln, etc.) zur Vermeidung von Infektionen und nachteilige Auswirkungen auf den Tierschutz sowie potenzielle negative Auswirkungen auf die Studie die Berührung lebendes Gewebe .</li>
</ol> 2. Narkose <ol><li>Anesthetize SD-Ratten mit einem tierärztlichen Isofluran-Vaporizer-System. Verwenden Sie medizinischem Sauerstoff mit einer Rate von 1 L/min, um das Isofluran Gas verdampfen. Legen Sie das Tier im Feld beigefügten Anästhesie und führen Isofluran in einer Konzentration von 4,5 % bis langsame Atmung und tierischen Sedierung.</li>
	<li>Wechseln die Gaszufuhr an der Gasmaske Anlage und legen Sie das Tier auf dem OP-Tisch. Senken Sie die Isofluran-Konzentration um 2 % und Monitor Anästhesie. Größere Tiere (&#62; 300 g) erfordern eine höhere Konzentration von Isofluran. Überwachen Sie Anästhesie während der Operation mit Isofluran Dosierung entsprechend angepasst. Ständig bewerten die Tiefe und die Atmung, und führen Sie Zehe Prise Bewertung alle 5 min um die Abwesenheit von tiefen Schmerz zu gewährleisten.</li>
	<li>Wenn die Operation abgeschlossen ist, schalten Sie die Isoflurane und lassen das Tier atmen Sauerstoff für einige Minuten vor dem Entfernen aus dem OP-Tisch. Körpertemperatur beizubehalten, indem das Tier mit einer chirurgischen Decke abdecken und/oder mit einer geregelten Wärme-Unterbett intraoperativ.</li>
</ol> 3. Selbst entworfen, chirurgische Assistenten Instrument (SSAI) <ol><li>Verwendung einer SSAI aus rostfreiem Stahl, und vor allem umfasst ein Hand-Held Pole (Länge, 100 mm, Durchmesser 9 mm) und einem gerillten Kopf ( Abbildung 1). Die geriffelte Oberfläche des gerillten Kopfes ist halbrund, vertikale Tiefe, Breite und Länge von 200 µm, 500 µm und 1.000 µm. Zwischen den beiden Teilen gibt es einen gemeinsamen Abschnitt mit einer Länge von 50 mm. Die gerillten Kopf &#39; s Edge ist 300 µm Breite. 
	Hinweis: Die gerillte Oberfläche ermöglicht die Stabilisierung des ventralen Sehnerven zur Durchtrennung. Die dorsale Sehnerv ist an der Außenseite der Nut ausgesetzt, wenn die ventrale Seite des Sehnervs darin legt; Unterdessen kann der dorsalen Sehnerv ausgesetzt an den geriffelten Rand transected werden als vertikaler Ausschnitt durchgeführt wird. Der ventralen Sehnerv innerhalb der geriffelten Oberfläche wird durch den geriffelten Kopf geschützt &#39; s Rand.</li>
	<li>Zu erreichen primären Verletzung in Routinggruppenconnectors entsprechend quantitativ durchtrennten Sehnerv Axone (Rückenseite), während die sekundäre Verletzungen würde in Routinggruppenconnectors untransected Sehnerv Axone (Bauchseite) ohne direkten Schaden entsprechend durchgeführt werden.</li>
</ol> 4. Chirurgisches Vorgehen <ol><li>Ort der rechten Seite der Ratte nach oben auf den OP-Tisch mit Kopf nach der Chirurg. Stellen Sie die richtige Umlaufbahn in der Mitte des chirurgischen Sichtfeld. Reinigen Sie dann die Schnitt-Bereich mehrmals entlang der seitlichen Augenwinkel zu externen akustische Foramen der rechts orbital Haut, Anwendung von 0,5 % Chlorhexidin in 75 % Ethanol. Entfernen Sie das Fell zwischen den seitlichen Augenwinkel zu externen akustische Foramen mit Iris Schere.</li>
	<li>Stellen einen Hautschnitt mit Iris-Schere entlang der seitlichen Augenwinkel zu externen akustische Foramen mit einer Länge von 0,5 bis 1 cm. Dann kneifen Sie die Faszie und ziehen Sie nach oben, um einen dreieckigen Keil mit 0,12 mm gezahnte Pinzette zu erstellen. Untermesser Vannas Feder Schere in der Schnitt-Bereich einfügen und die Faszie in die gleiche Richtung Schere aufschneiden.</li>
	<li>Schnitt die Faszie mit Vannas Frühling Schere und setzen die orbitale Vene. Einsatz scharf gezackte Pinzetten, Klemmen Sie die Seiten der orbital Ader und stumpf öffnen Sie beide Seiten des Schnittes. Die orbitale Vene in chirurgische Richtung der orbital Muskel-Oberfläche positioniert ist, um Follow-up-Vorgang zu vereinfachen und eine Operation vermeiden im Zusammenhang mit Blutungen der orbital Ader.</li>
	<li>Iris-Schere zum Schneiden der rechten seitlichen Augenwinkel entlang der Schnittführung, vollständig aussetzen das Sichtfeld für stumpfe Dissektion der orbital Muskeln während auseinander folgen up verwenden</li>
	<li>Weiter, um Klemmen Sie den Ordner mit den Subfascial orbital Muskel und stumpf trennen vertikal in Richtung der Haut und Faszien Einschnitt. Separate Seiten nach und nach um die orbital Tiefe bis erscheinen des orbitalen Fettgewebes zu erreichen.</li>
	<li>Nach der Belichtung des orbitalen Fettgewebes Richtungswechsel der Ratte Kopf vor der Chirurg vertikal an der rechten Seite des Chirurgen. Unterdessen halten Sie den Bereich ständig feucht mit chirurgischen oder Wattestäbchen mit sterilen PBS. Dieses Verfahren sorgt für eine klare Vision des Operationsfeldes, wobei das Gewebe feucht und weich.</li>
</ol> 5. Zugriff auf den Sehnerv <ol><li>abgeschnitten orbitale Fettgewebe für den orbitalen Muskel Kegel um den Sehnerv in die Augenhöhle. Dies sorgt für eine bessere Belichtung für das entsprechende chirurgische Vorgehen. Halten Sie Resektion des Fettgewebes begrenzt, um zu vermeiden, nachhaltig Blutungen.</li>
	<li>Schneiden das Fettgewebe, die seitlichen Rectus auszusetzen. Klemmen Sie die seitlichen Rectus nach außen, und dann schneiden Sie es mit einer Schere Vannas Frühling. Bleibt das Fettgewebe unter der seitlichen Rectus, ziehen Sie das Fett über den Sehnerv mit 0,12 mm gezahnte Pinzette und schneiden Sie es mit einer Schere Vannas Frühling. 
	Hinweis: Zu diesem Zeitpunkt der Gewebe Mantel um den optischen Nerv sollte sichtbar sein.</li>
	<li>Weiter, die Gewebe-Hülle entlang der Richtung des Sehnerven in die Tiefe des orbitalen bis Gesamtbelastung des Sehnervs zu trennen. Halten Sie den Bereich sauber mithilfe von chirurgischen Tupfer reinigen kleine Mengen von Blut, die durch Gewebeentnahme entstehen. 
	Hinweis: Nun, den Sehnerv sollte sichtbar sein.</li>
	<li>Um darauf zuzugreifen, entfernen Sie die meningealen Hülle, die den Nerv umgibt, ohne Beschädigung der Augenarterie. Sanft drehen die Scheide untersuchen die vaskuläre Muster der Dura bei hoher Vergrößerung unter einem Operationsmikroskop.
	<ol><li>Ein Gebiet frei von Blutgefäßen zu identifizieren, und führen Sie einen längs-Schnitt auf die Dura. 13 rip die Scheide parallel zur Richtung des Sehnervs mit 26G Nadelspitze oder Messerspitze Saphir chirurgische Probe sorgfältig, Vermeidung von Schäden an das Gefäßsystem mit seitlichen Einschnitte. 
		Hinweis: Die einzige übrig gebliebene deckt den Nerv sollte die Arachnoidea membraNe, die sehr dünn und transparent ist.</li>
	</ol></li> <li>Ähnlich wie bei Schritt 5.2, rip die Arachnoidea Membran vorsichtig mit einer Nadelspitze 26G oder Messerspitze Saphir chirurgische Probe parallel zur Richtung des Sehnervs. 13</li> <li>legen den Sehnerv innerhalb der Instrument-Nut sanft und vorsichtig, was in den dorsalen Sehnerv wird etwas höher als der gerillten Kopf Rand. Zu diesem Zeitpunkt Transekt dorsalen Sehnerven über die Kante der gerillten Kopf Plattform mit einer Nadelspitze 26G oder Messerspitze Saphir chirurgische Probe teilweise Sehnerv Durchtrennung abschließen.</li>
</ol> 6. Schließung und Verwertung <ol><li>Bewegung des Instruments ein wenig tiefer in Richtung der vertikalen Richtung des Sehnervs, Letzteres zu befreien. Dann entfernen Sie sanft die geriffelten Kopf des Instrumentes. Versuchen Sie nicht zu kratzen die Augenmuskeln oder anderen Geweben, zusätzlichen Schaden zu vermeiden. Der Stumpf des teilweisen Sehnerv Durchtrennung beobachtet werden.</li>
	<li>Ersetzen die seitlichen Rectus, Faszien und anderen umliegenden Gewebe des Auges an ihren ursprünglichen Positionen. Dann Naht der Muskel und die Hautschichten der Umlaufbahn in Folge. Wenn die Blutung anhält, sanft mit einem medizinischen Wattebausch vor dem Verschließen der Wunde füllen Sie, und halten Sie dies für einen bestimmten Zeitraum hinweg. Wenden Sie antibiotische Salbe auf die Wunde, um Infektion zu verhindern.</li>
	<li>Turn off Isofluran-Quelle und lassen das Tier zu atmen Sauerstoff für einige Minuten. Bei der Ratte Reanimation vorbereiten Wärmedämmung mit einer beheizten Matte oder Abdeckung der Käfig mit trockenen Polsterung. Decken die Tiere mit Decken, Ratte Fluglinie Durchgängigkeit des Wiederherstellungsvorgangs sicherzustellen.</li>
	<li>Haustiere individuell nach der Operation. Verwalten Sie postoperative Schmerzmittel nach den Richtlinien von institutionellen Tierbetreuung Behörden zur Verfügung gestellt. Tiere nach der Operation sorgfältig zu überwachen.</li>
</ol>

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</ol>

Alle Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte.

Operative Verfahren
Es gibt einige Punkte verdient Bekanntmachung in den Prozess der Modellbau. Im Schritt 4.2 sollte die chirurgische Bewegung sorgfältig durchgeführt werden, um nicht zu beschädigen das Gefäßsystem über dem Subfascial Muskel. Vor allem beim Schneiden der subkutanen Faszie in die äußeren seitlichen Augenwinkel sollte scharf gezackte Zange verwendet werden, die subkutane Faszie an der Faszie Oberfläche nach oben vertikal zu ziehen; die Faszie sollte Vannas geschnitten werden mit Feder Schere zur Vermeidung von Beschädigungen, die orbitale Vene am äußeren Augenwinkel, die Modell-Ausfall durch übermäßige Blutungen führen kann. Schritt 4.3 hat den Vorteil der potenziell verhindert Blutungen, wenn Sie direkt aus den Blutgefäßen zu entfernen. Orbitale Muskeln im Schritt 4.5, der Grund für die Kommissionierung scharf gezackte Zange aber nicht Vannas zu trennen ist Frühling Schere, ständige Blutungen und Blutungen zu vermeiden. Die Muskeln werden unverblümt auf beiden Seiten in Richtung senkrecht zu der Hautinzision Faszie getrennt; Unterdessen werden die tiefen Muskeln der Umlaufbahn nach außen und peripher gestreckt. Dieses Verfahren wird tiefer Teile der Augenhöhle, ein größeres chirurgischen Fenster und ungehinderten Zugang zu den Geweben, die Überlagerung der Sehnerv offenbaren. In den oben genannten Verfahren, wenn Blutungen auftreten, Druck angewandt werden mit sterilen chirurgischen oder Wattestäbchen. Kleinere Blutungen wird durch diesen Vorgang nach einigen Sekunden beendet. Schritt 4.6 soll Nachfolgeoperationen entfernen Sie leicht einige Fetten und separate Muskeln in der Umlaufbahn Muskel Kegel des Sehnervs entlang der Richtung des Sehnerven in die orbitale Tiefe aussetzen zu erleichtern.
Die wichtigsten Teile des derzeitigen Protokolls sind Schritte 5.1-5.6. Es ist wichtig, nicht zu beschädigen das Gefäßsystem um den Sehnerv Kopf. Der Sehnerv sollte teilweise transected mindestens 1,5-2,0 mm von der Rückseite des Auges, um Schäden an der Augenarterie zu vermeiden, die den Nerv innerhalb 1 mm des Auges dringt ein und liefert Blut an der inneren Netzhaut. Das Schneiden der seitlichen Rectus soll bessere Belichtung des Sehnervs zu erreichen, wie die seitlichen Rectus breit ist und offensichtlich die Sicht des Sehnervs versperrt. Inzwischen, um zu vermeiden, entfernen der Augenarterie, der mit der meningealen Scheide (Abbildung 5)verbunden ist, ist es notwendig zu trennen und die Dura rund um den Sehnerv zu distanzieren und das vaskuläre Muster der meningealen Hülle zu untersuchen, verwenden Zange um die Scheide sanft zu drehen. Darüber hinaus sollte eine Fläche frei von Blutgefäßen identifiziert werden, erlauben einen längs-Schnitt in der meningealen Scheide. Es ist auch notwendig, einen kleinen arbeiten Abstand von der Rückseite des Auges, die Teil der Dura zu vermeiden, die eng mit der Augenarterie verbunden ist. Die Netzhaut ist normalerweise transparent, und Blutgefäße können klar abgegrenzt. Im Falle eines beschädigten Netzhaut Blut-Versorgungsmaterial ist die Netzhaut verkommen, führt zu einem milchig-weißes flockiges Aussehen. Die gläserne Kammer des Auges und das Objektiv wird in der Regel im Laufe der Zeit bewölkt sowie mit verringerter Auge Größe geworden. In dieser Studie bestätigt präoperative und postoperative Bilder des Augenhintergrundes keine Schäden an den Fundus Blutversorgung im Modell nach der Anwendung der oben genannten Schritte.
Darüber hinaus ist besonderer Sorgfalt erforderlich, in mehreren Schritten dieses Modells. Bei Sharp-gebogen-Wellenschliff Pinzette oder andere chirurgische Instrumente verwenden, um den Sehnerv zu entlarven, vermeiden der Chirurg übermäßigen Kraft, es des Sehnervs, der Augapfel oder Augenarterie, beschädigen was primäre Verletzung und retinale Ischämie. Darüber hinaus sollten Blutgefäße rund um das Auge nicht beschädigt werden, um zu vermeiden, anhaltende Blutungen, führen könnte zum Ausfall der Modellierung. Die in diesem Experiment verwendet SSAI erfordert empfindliche Nutzung. Wenn der Sehnerv innerhalb der Instrument-Nut platziert wird, müssen die Sehnerven und gerillte Oberfläche fest montiert werden, um gute Konsistenz und Wiederholbarkeit der einzelnen Tiermodell zu gewährleisten. Mit etwas Übung kann das vollständige chirurgische Verfahren innerhalb von 15-20 Minuten pro Auge, abgeschlossen werden, nachdem die erstmalige Einreise Kürzungen vorgenommen wurden.
Wang Et al. 19 veröffentlicht eine ähnliche Tiermodell der teilweisen Sehnerv Durchtrennung über ein Sehnerv quantitative Item hergestellt. Die chirurgische Eingriffe umfasst: 1) auseinander schneiden, die äußeren Augenwinkel, Aussetzung und Befestigung der palpebrale Superior; (2) des Sehnervs zu erforschen und zu den überlegenen Teil des Sehnervs mithilfe der Item; und 3) Nähen die Bindehaut und die Haut. Obwohl der Eingriff relativ einfach war, wurden die folgenden Probleme während des Vorgangs gefunden. Obwohl seitlichen Augenwinkel Einschnitt bestimmten Raum für den Betrieb aussetzen könnte, gab es eine unvermeidliche Notwendigkeit, ständig den Augapfel Strecken um die retrobulbären Sehnerven Scheide offen zu legen, vor allem, wenn die Chirurgen eine längere retrobulbären aussetzen wollte Sehnerv Mantel Mantel isoliert weiter zu erleichtern; die Kraft für die Dehnung des Augapfels war größer, die direkte Traktion Verletzungen des Augapfels und der Sehnerven führen dürfte. Keine besondere Aufmerksamkeit galt an den Blutgefäßen, die zusammen mit den Sehnerv Mantel geschnitten werden könnte, und Schäden an den Blutgefäßen wird voraussichtlich zu gescheiterten Modell führen. Die wichtigsten Verfahren der sekundären Schädigung Modell in diesem Dokument beschriebenen sind: eine neue Operative nähern von orbital Seitenwand des Augapfels direkt zugänglichen retrobulbären Sehnerven umgeben von orbital Muskel Kegel, primäre Schädigung zu vermeiden die Augapfel und Sehnerv, beim Ziehen nach unten oder in Richtung der nasalen lateralen Seite des Augapfels. Diese neue operative Vorgehensweise erhöht den Raum des chirurgischen Eingriffs beim Modellieren und ermöglicht einfache Isolierung der meningealen Hülle, die eng mit der Augenarterie vor partielle Durchtrennung des Sehnervs verbunden ist. Partielle Sehnerv Durchtrennung erfolgte mit einem selbst entworfenen chirurgischen Instrument, die kostengünstige und wiederverwendbar, reduzieren die Gesamtkosten der Modellierung ist. Die Ratte orbital Struktur ist verschieden von denen anderer Säugetiere, mit der Umlaufbahn am nächsten an die Augenwinkel und keine knöcherne Struktur, aber mit Muskeln bedeckt. Das chirurgische Vorgehen könnte den hinteren Teil des Augapfels ohne Zerstörung der orbital Knochen und Periost erreichen. Durch strenge präoperative Desinfektion und postoperative antibiotische Prophylaxe wurden Infektion, Entzündung und Ödem stark reduziert.
Selbst entworfene chirurgische Assistenten Instrument
Rattenmodell der teilweisen Sehnerv Durchtrennung entstand, indem er die selbstentworfenen OP-Assistenz-Instrument, deren wichtigste Merkmale wie folgt sind. Es hilft bei teilweise quantitative Durchtrennung des Sehnerven an den geriffelten Rand, auch die Durchtrennung Kohärenz zwischen verschiedenen Tieren ausgesetzt. Wir haben getestet und überprüft die Wiederholbarkeit der Modell-Einrichtung mit SSAI. Der maximale Variationskoeffizient war 1,85 %, mit einem durchschnittlichen Wert 0,67 % ±0. 44 %. 20 diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die SSAI verwendet werden könnten, teilweise Sehnerv Durchtrennung Modelle, zu befriedigend Reproduzierbarkeit und UN-knüpfenIformity.
Die gerillte Oberfläche Breite und das Design des Halbkreises der inneren Oberfläche der Nut können mehr feste wirken auf den Sehnerv und die gerillte Oberfläche und Sehnerv befestigen enger, auch experimentellen Fehler und unerwünschte Arzneimittelwirkungen verringern. Die geriffelte Rand ermöglicht einen besseren Schutz des Sehnervs in die Nut während der Operation, die den Sehnerv in der Nut, unabhängig von der Fräser Schärfe nicht beschädigt wird. Ein weiterer Vorteil des geriffelten Rand ist verknallt Verletzungsprävention beim Sehnerv Durchtrennung.
Es eignet sich für den Betrieb bei tiefen und schmalen Raum. Obwohl die neuen operative Ansatz erweitert worden ist, der Weg bleibt tief und Handheld Pol und gemeinsamen Abschnitt können verwendet werden, um den gerillten Kopf leicht unter den Sehnerv Mantel zum Follow-up-Operationen zu platzieren. Wenn das Gerät für den Betrieb verwendet wird, kann eine Vielzahl von Messern für Durchtrennung, z. B. einer Nadelspitze 26 G verwendet werden. Auch ein Saphir chirurgische Probe Messer kann ausgewählt werden, zu vermeiden, Quetschungen und Verletzungen durch Scheren zu vernichten. Nut Oberflächen können in verschiedenen vertikalen tiefen erfolgen, um unterschiedliche Grade der Sehnerv schneiden abzuschließen.
Verglichen mit der Item von Wang hat Et Al. die SSAI eine einfachere Struktur. Darüber hinaus ist der Schneiden Schritt bequemer mit der SSAI mit verbesserte Konsistenz und Wiederholbarkeit der Tiermodell. Zu guter Letzt ist die Palette der Werkzeuge für das Schneiden mit der SSAI auch breiter. SSAI, wodurch quantitative und einheitliche Einschnitte des Nervs kann zusammenfassend als wirksames Instrument für die Festlegung der Ratte-Modelle für die Beurteilung der Sehnerv Durchtrennung dienen.
Merkmale des Modells Ratte teilweise Sehnerv Durchtrennung
Das teilweise Sehnerv Durchtrennung Modell ist nützlich, um sekundäre Degeneration Routinggruppenconnectors zu beurteilen. Das mögliche Verdienst dieses Modells ist die Fähigkeit, primäre von sekundären Degeneration genau trennen in Situ, sowohl in den Sehnerv und Netzhaut. Die zentrale und ventralen Sehnerven wurden anfälliger für sekundäre Verletzungen nach partielle Durchtrennung (ca. 1/3 bis 1/2) des dorsalen Sehnerven (Abbildung 6). In der Netzhaut die regionale Lage des primären und sekundären Verletzungen von Routinggruppenconnectors die Topographie des Sehnervs entspricht retinalen Routinggruppenconnectors nach partielle Durchtrennung beruhen. Wenn die gesamte Netzhaut der Ratte in dorsalen (Superior) und ventralen (unterlegen) Teile geteilt wird, sind primäre und sekundäre Verletzungen in beiden Teilen vorhanden. Jedoch sollte auf der Grundlage der Beziehung zwischen Routinggruppenconnectors auf der Netzhaut und der Sehnerv Axon RGC Tod in der ventralen Netzhaut vor allem sekundäre Verletzungen (Abbildung 3)zugeschrieben werden. 12 , 22 , 23 die Vorteile dieses Modells sind: einfach und leicht zu bedienende Instrument mit Standardverfahren; kein Effekt auf ophthalmologische Schiffe; gute Reproduzierbarkeit und Stabilität. Diese Technik kann verwendet werden, um Routinggruppenconnectors von diesem Platz sparende operativen Ansatz zu transfizieren, durch die kurzen interferierenden RNAs (SiRNAs), Plasmide, Anwendung und virale Vektoren des teilweisen Sehnerven stumpf; Darüber hinaus könnte die teilweise Sehnerven Stumpf für die selektive Behandlung oder Kennzeichnung von Routinggruppenconnectors Reagenzien auferlegt werden.
Insgesamt, primäre und sekundäre Verletzungen von Routinggruppenconnectors koexistierten nach teilweiser Sehnerv Durchtrennung in diesem Tiermodell mit eine klare Grenze in der Netzhaut zwischen zwei Verletzungen. Obwohl der Verband der RGC Lage auf der Netzhaut und Sehnerv Axone weiteren Untersuchungen für eine genauere Unterscheidung benötigt, dieser Platz sparende operative Vorgehensweise erstreckt sich den Anwendungsbereich des Modells und erlaubt es den Forschern zu erkunden die Mechanismen der sekundäre Verletzungen in Routinggruppenconnectors in einer neuen Weise.

Sekundäre Degeneration tritt häufig in das zentrale Nervensystem (ZNS) nach traumatischen Verletzungen und folgenden akuten und chronischen neurodegenerativen Erkrankungen. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 der Tod von Neuronen und Gliazellen als eine frühe Folge des primären pathologische Ereignisse wird primären Degeneration bezeichnet, während sekundäre Degeneration bezieht sich auf den Tod von Neuronen und Gliazellen, die nicht oder nur teilweise von primären betroffen sind Schäden. Sekundären Degeneration der Routinggruppenconnectors wird auch geglaubt, um in Glaukom auftreten. 6 Yoles Et al. 7 bestätigt, dass sekundäre Schädigung des Routinggruppenconnectors im Sehnerv Verletzungen Modell auftritt. Sie zeigten, dass Neuronen, deren Axone wurden nicht verletzt, nachdem ein akuter Schäden schließlich aufgrund degenerativer Umgebung degenerieren wird, durch die Verletzung umgibt diese Axone produziert. Sekundäre Degeneration betrifft die Neuronen in einer progressiven Art und Weise im Zusammenhang mit der Schwere der zugefügten Schaden. Bisher unklar die Mechanismen RGC Schaden bei Glaukom, insbesondere im Zusammenhang mit sekundären Schädigung führt zu unzureichender klinischer Behandlung. 8 , 9 , 10 darum, ist es notwendig, die zugrunde liegenden Mechanismen der sekundären Degeneration der Routinggruppenconnectors während der Entwicklung eines Glaukoms zu erkunden. 11 Errichtung von Tiermodellen der sekundäre Verletzungen, die quantitativ, Größe, Verteilung und Mechanismus der sekundären Degeneration der Routinggruppenconnectors beurteilen können zieht immer mehr Aufmerksamkeit von Wissenschaftlern studiert sekundäre Verletzungen von Routinggruppenconnectors.
Um diese Frage zu klären, wurde einem Rattenmodell PONT Levkovitch-Verbin Et al. 12 auszuwertende axonale Schädigung induziert Degeneration und Tod von Routinggruppenconnectors. Dieses Modell wird geglaubt, um ein gutes Werkzeug für die Erforschung der Mechanismen der sekundären Degeneration und identifizieren mögliche neuroprotektive Akteure dar. Das Instrument benutzt, um dieses Modell der sekundäre Verletzungen zu erzeugen ist ein Diamant-Messer mit einer Skala bis quantitativ Transekt durch die Tiefe des Abschneidens durch den Drehknopf zum Abschließen einer quantitativen Durchtrennung des Sehnervs einstellen. Die chirurgische Weg nähert sich aus Augapfel nach oben oder temporalen Bindehaut. Während des operativen Vorgangs werden der Netzhaut und der Sehnerven durch die Kraft der Zange, beeinträchtigt wiederum primär Verletzungen führen kann. Noch wichtiger ist, aufgrund des begrenzten Platzes der exponierten Sehnerv ist es schwierig, die meningealen Scheide vor dem Schnitt zu trennen. Daher ist es möglich, die ophthalmologische Schiffe während der partiellen Sehnerv Durchtrennung, beschädigen, retinale Ischämie und das Scheitern des Modells führt. Darüber hinaus das Diamant-Messer ist kostspielig, und jedem Gebrauch verringert die Spitze Schärfe. Dies beeinträchtigt wiederum die Tiefe und Wirkung der Modellierung.
Das Modell der sekundären Degeneration der Routinggruppenconnectors beschrieben in dieser Studie wurde durch eine neue operative Vorgehensweise von orbital Seitenwand des Augapfels erhalten. Dieses neuartige operative Vorgehensweise greift direkt auf der retrobulbären Sehnerv orbital Muskel-Kegel, primäre Schädigung des Augapfels und des Sehnervs zu vermeiden, beim Ziehen nach unten oder in Richtung der nasalen lateralen Seite des Augapfels umgeben. Dies erhöht den Raum des chirurgischen Eingriffs bei Modell auch und ermöglicht meningealen Mantel Isolierung vor teilweise zu den Sehnerv. Es ist wichtig zu bemerken, dass die ungewollte Beteiligung und Verletzungen der ophthalmologischen Schiffe auf das Scheitern des Modells führen können. Darüber hinaus ermöglicht das Modell eine Follow-up-Bewertung der transfizierten Zellen, Drogen und Reagenzien auf den Stumpf der teilweise durchtrennten Sehnerv. Die selbst entworfene chirurgische Instrument kann ist billig und gebrauchte mehrmals, wodurch die Kosten der Modellierung. Das sekundäre Verletzungen Modell der Routinggruppenconnectors gegründet von dieser Methode zeigte gute Reproduzierbarkeit und Stabilität haben.

<table><tbody><tr><td>Anethethese-Beatmungssystem für Tiere</td><td>MIDMARK</td><td>Matrx VMR</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>RWD Life Science Co.</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>Operationsmikroskop</td><td>Leica AG, Heerbrugg, Schweiz</td><td>M620 F20</td><td></td></tr><tr><td>Tobramycin Augensalbe</td><td>Alcon</td><td>H20110312</td><td></td></tr><tr><td>Fluorgold</td><td>Biotium</td><td>80014</td><td></td></tr><tr><td>Irisschere</td><td>66vision Co.</td><td>54026</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Federschere</td><td>66vision Co.</td> KG<td>54137B</td><td></td></tr><tr><td>Zange mit scharfem Wellenschliff/0,12 mm gezahnte Pinzette&nbsp;</td><td>66vision Co.</td><td>53329A</td><td></td></tr><tr><td>Scharf gebogene Pinzette</td><td>66vision Co.</td><td>53324A</td><td></td></tr><tr><td>Saphir-Operationssonde</td><td>66vision Co.</td><td>50205TA</td><td></td></tr><tr><td>26G Nadelspitze</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.</td><td></td><td></td>3151474</tr><tr><td>10 &mu; l Hamilton Spritze</td><td>Hamilton Co.</td><td>80030</td><td></td></tr><tr><td>5-0 nicht resorbierbares Nahtmaterial</td><td>Johnson & Johnson International Co.</td><td>W580</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhexidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>282227 Stereotaxie-Gerät</td><td></td></tr><tr><td></td><td>RWD Life Science Co.</td><td>68026</td><td></td></tr><tr><td>Netzhaut-Bildgebungssystem</td><td>OptoProbe Ltd.</td><td>OPTO-RIS</td><td></td></tr><tr><td>RetCamII Weitfeld-Bildgebungssystem</td><td>Clarity Medical Systems,Inc.</td><td>RetCamII</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszenzmikroskop</td><td>Leica Microsystems Inc.</td><td>DM6000</td><td></td></tr></tbody></table>

partielle sehnerv durchtrennung bei ratten: ein modell gegründet mit einem neuen operativen ansatz zur sekundären degeneration der retinalen ganglienzellen bewerten

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Frühere Studien haben gezeigt, dass die sekundären Degeneration der retinalen Ganglienzellen (Routinggruppenconnectors) häufig bei Glaukom tritt. Partielle Sehnerv Durchtrennung gilt als nützlich und reproduzierbare Vorbild. Verglichen mit anderen Sehnerv Verletzungen Modelle zur Bewertung von sekundären Degeneration, z.B. komplette Sehnerv Durchtrennung und Sehnerv Crush Modelle häufig verwendete, ist das teilweise Sehnerv Durchtrennung Modell überlegen, wie es primäre auszeichnet von sekundären Degeneration in Situ. Daher dient es als ein ausgezeichnetes Werkzeug für die Bewertung der sekundären Degeneration. Diese Studie beschreibt einen neuartigen operativen Ansatz teilweise Sehnerv Durchtrennung durch direkten Zugriff auf den Bereich des retrobulbären Sehnerven durch die orbitale seitliche Wand des Augapfels. Darüber hinaus präsentieren wir eine neu gestaltete, low-cost chirurgischen Instrument, mit Durchtrennung zu unterstützen. Wie die repräsentativen Ergebnisse bei der Unterscheidung von der Grenze des primären und sekundären Verletzungen Bereichen gezeigt haben, das Instrument und neuer Ansatz sorgt für hohe Effizienz und Stabilität des Modells durch die Bereitstellung von ausreichend Platz für chirurgische Operation. Dies erleichtert wiederum den Sehnerv vor Durchtrennung der meningealen Mantel und ophthalmologische Schiffe getrennt. Ein weiterer Vorteil ist, dass dieser Platz sparende operativen Ansatz die Ermittler verbessert, Drogen, Träger oder selektive RGC Tracer auf den Stumpf der teilweise durchtrennten Sehnerv, so dass die Erforschung der Mechanismen hinter zu verwalten sekundäre Verletzungen in Routinggruppenconnectors, auf eine neue Weise.

Um Erfolg bezüglich der Einrichtung eines sekundären Verletzungen-Modells mit dem neuen operativen Ansatz mit SSAI (Abbildung 2A)zu überprüfen, wurden die Routinggruppenconnectors Doppelthebel sofort nach Gründung Modell beschriftet. Der Zweck dieses Verfahrens war Label Routinggruppenconnectors Doppelthebel durch Einspritzen von neuronaler Tracer Farbstoff (3 % Fluorophor (z.B.Fluorogold) in sterilen Phosphat Puffer Kochsalzlösung) in den superior Colliculus (Abb. 2 b). Dieser Ansatz liefert reproduzierbare Kennzeichnung von lebensfähigen Routinggruppenconnectors mit geringen Abweichungen. 14 , 15 , 16 , 17 , 18 der Farbstoff wird von Routinggruppenconnectors in der Netzhaut Doppelthebel aufgenommen werden und ist einen Marker für live Routinggruppenconnectors mit der Axone nicht durchtrennten auf dem rechten Auge. Unterdessen Routinggruppenconnectors entspricht teilweise durchtrennten Sehnerv, die Axone auf dem rechten Auge nicht mit Tracer Farbstoff (Abbildung 2)beschriftet werden konnten. Als Kontrolle Auge das linke Auge ohne Operation, Routinggruppenconnectors entlang des Sehnervs, der Netzhaut wurden alle beschriftet mit gold Leuchtstofffärbung retrograde gewissermaßen aus dem superior Colliculus (Abb. 2D).
Sieben Tage nach teilweiser Sehnerv Durchtrennung und retrograde Kennzeichnung von Routinggruppenconnectors, wurden die Netzhaut geerntet, fixiert, abgeflacht und montiert. Die beschrifteten Routinggruppenconnectors wurden unter einem fluoreszierenden Mikroskop in definierten Regionen der Netzhaut abgebildet. Die Ergebnisse der Fluoreszenz-markierten Routinggruppenconnectors mit oder ohne teilweise Sehnerv Durchtrennung sind in Abbildung 3dargestellt. Nur die Routinggruppenconnectors in der richtigen Netzhaut entsprechend des untransected Teils des optischen Nervs mit fluoreszierenden Gold beschriftet waren, und eine klare Abgrenzung der unbeschrifteten und beschriftet Routinggruppenconnectors könnte visualisiert (Abb. 3A, Abb. 3 b), demonstriert die partielle Transaktion des Sehnervs. Als Kontrolle Auge, alle Routinggruppenconnectors der linken Auge Netzhaut zeigte Fluoreszenz (Abbildung 3, Abbildung 3D).
Um zu beurteilen, ob das Gefäßsystem des Sehnervenkopfes und der Augenarterie, das Blut der Entoretina versorgt wurden verletzt und während des Betriebs, dem rechten Auge-Fundus betroffen war vor und nach der Operation abgebildet. Die Bilder zeigten Blut-Versorgungsmaterial auf dem rechten Auge (operative) vor und 1 Stunde nach Operation. Blut in den Arterien war angemessen. Keine Behinderung der Vene wurde beobachtet. Diese Ergebnisse zeigten, dass während des Betriebs (Abbildung 4A, 4 b Abbildung)gab es keine Schäden an der Blut-Versorgung-System. Daher wurde das Modell der sekundären Degeneration der Routinggruppenconnectors erfolgreich etabliert.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig1.jpg"> 
Abbildung 1 : Fotos von selbst entworfenen OP-Assistenz Instrument, SSAI. (A) einen Panoramablick über das chirurgische Instrument mit zwei Hauptteile, einschließlich ein Hand-Held Pole und einen geriffelten Kopf. Dazwischen gibt es ein gemeinsamen Abschnitt mit einer Länge von 50 mm. Die Länge der Hand Stange beträgt 100 mm und der Durchmesser der Handheld Stange beträgt 9 mm. (B) eine Funktion der SSAI Nut. Die geriffelte Oberfläche des gerillten Kopfes ist halbrund, ermöglicht es den Sehnerv an darin lag für Durchtrennung stabilisiert wird. Die gerillte Oberfläche ist mit einer vertikalen Tiefe von 200 µm und eine breite von 500 µm und eine Länge von 1.000 µm. Die Breite des Randes der gerillten Kopf beträgt 300 µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig2.jpg"> 
Abbildung 2 : Schematische Darstellung der RGC Markierung auf der Netzhaut nach partielle Durchtrennung der rechten Sehnerv mit selbst entworfenen OP-Assistenz-Instrument (SSAI) und Doppelthebel Kennzeichnung der superior Colliculus mit dem Fluorophor. (A) die chirurgische Ansicht der teilweisen rechten Sehnerv Durchtrennung bei Ratten mit dem Instrument selbst entworfenen OP-Assistenz (SSAI). (B) nach der Modellierung, wurden Routinggruppenconnectors Doppelthebel beschriftet durch Einspritzen von neuronaler Tracer Farbstoff (gelb, 3 % Fluorophor in sterilen Phosphat Puffer Kochsalzlösung) in den superior Colliculus im Gehirn. Da die Axone der Routinggruppenconnectors in superior Colliculus wohnen, der Tracer-Farbstoff ist von Routinggruppenconnectors Doppelthebel aufgegriffen und bildet einen Marker für lebende Zellen. Der Querschnitt in der Abbildung stellt einen Querschnitt des Sehnervs. OD, operierten Auge; OS, Kontrolle Auge ohne Operation. (C)wurden nur die Routinggruppenconnectors entspricht des untransected Teils des Sehnervs mit Fluorophore beschriftet. Blau steht für ungetrennten ventralen Sehnerven und die entsprechenden Routinggruppenconnectors auf der Netzhaut; Rot spiegelt teilweise durchtrennten dorsalen Sehnerven und die entsprechenden Routinggruppenconnectors auf der Netzhaut. (D) der Netzhaut waren Routinggruppenconnectors des linken Auges (Kontrolle Auge) ohne operativen Eingriff alle durch den Farbstoff beschriftet. Dorsalen und ventralen Sehnerven waren alle durch den Farbstoff so gut beschriftet. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig3.jpg"> 
Abbildung 3 : Gesamte Netzhaut Epifluoreszenz Mikrographen des Fluorophore beschriftet Routinggruppenconnectors 7 Tage nach der Gründung der teilweisen Sehnerv Durchtrennung modellieren und retrograde Kennzeichnung von den Colliculus superior. Die entsprechenden Schemata von Fluorogold gebeizt RGC Bereiche auf der Netzhaut werden ebenfalls vorgestellt. (A) und (C) die schematischen Darstellungen von Routinggruppenconnectors in der Netzhaut des Rechts (operativ) und links (Kontrolle) Augen nach Markierung mit Fluorophor, bzw. vertreten. Gelb zeigt den Bereich mit gold Leuchtstofffärbung beschriftet. Die Netzhaut ist in dorsale, ventrale und zentralen Teile unterteilt. (B) und (D) repräsentieren die gesamte Netzhaut Epifluoreszenz Mikrographen erhalten unter dem Fluoreszenzmikroskop; Gelb ist die Routinggruppenconnectors mit Fluorophore beschriftet. In der chirurgischen Auge (rechtes Auge) in Bgezeigt vertritt die unbeschriftete Region Bereich Routinggruppenconnectors entsprechend des Sehnervs, die teilweise, vor allem auf der dorsalen Seite der Netzhaut durchtrennten ist. Die Region von gold Leuchtstofffärbung beschriftet ist der Bereich der Routinggruppenconnectors entspricht den Sehnerv nicht durchtrennten und hauptsächlich in den zentralen und ventralen Seiten der Netzhaut. Die bounzwischen den Bereichen beschriftete und unbeschriftete Routinggruppenconnectors Dary ist klar. Primären Degeneration der RGC Körper wäre auf der dorsalen Netzhaut beschränkt, und alle Verluste der RGC stellen in der zentrale und ventralen Netzhaut könnte zu einer sekundären Degeneration zugeschrieben werden. (D) der gesamten Netzhaut Mikrophotographie des linken Auges nach Kennzeichnung von Routinggruppenconnectors mit Fluorophor. Die Routinggruppenconnectors des linken Regler Auges ohne chirurgischen Eingriff waren völlig vom Fluorophor befleckt. Skalieren von Balken = 500 µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig4.jpg"> 
Abbildung 4 : Präoperative und postoperative Bilder des Augenhintergrundes des rechten Auges erzielten Funduskamera. (A) Darstellung des Augenhintergrundes vor dem rechten Augenchirurgie in Ratten, gute Blutversorgung des Augenhintergrundes, arterielle Füllung und keine venösen Rückfluss oder Obstruktion, zeigt ein gutes retinalen Blut Versorgungssystem. (B) Bild des Augenhintergrundes des rechten Auges 1 Stunde nach der Operation. Im Vergleich mit dem präoperativen Bild des Augenhintergrundes, wurden keine signifikanten Veränderungen beobachtet in retinal Blutversorgung, darauf hinweist, dass das Blut Versorgungssystem des Augapfels während des Prozesses der Modellierung nicht betroffen war. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig5.jpg"> 
Abbildung 5 : Fotos von der retrobulbären Sehnerv und der Augenarterie befindet sich auf der meningealen Scheide, eingefangen durch das chirurgische Vorgehen. Nach dem komplett entfernen die gezielte Länge des Sehnervs, war der Augenarterie (Pfeilspitze) mit der meningealen Mantel des Sehnervs ausgesetzt, und parallel zu den Sehnerv. Skalieren von Balken = 500 µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig6.jpg"> 
Abbildung 6 : Schematische Darstellung der primären und sekundären Degeneration lagen in den Sehnerv. Partielle Inzision des Sehnervs wurde erreicht mit dem Instrument selbst entworfenen OP-Assistenz (Pfeilspitze). Die Axone direkt beschädigten Websites (dorsale schneiden Standort des Sehnervs im Stirnschnitt in grau) unterziehen primären Degeneration, während diejenigen in indirekt beschädigte Seiten (Mittel- und ventralen Bereiche des Sehnervs im Stirnschnitt in gelb) sekundäre Degeneration zu unterziehen. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig6large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

Sekundäre Degeneration der retinalen Ganglienzellen (Routinggruppenconnectors) tritt häufig bei Glaukom. Diese Studie beschreibt eine innovative operative Vorgehensweise für partielle Sehnerv Durchtrennung. Die Verwendung dieses platzsparende operativen Ansatzes erstreckt sich das Modell Einsatzbereich und ermöglicht Erforschung der sekundären Verletzungen Mechanismen in Routinggruppenconnectors in einer neuen Weise.

Partielle Sehnerv Durchtrennung bei Ratten: ein Modell gegründet mit einem neuen operativen Ansatz zur sekundären Degeneration der retinalen Ganglienzellen bewerten

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

Die sekundäre Degeneration von retinalen Ganglienzellen tritt hauptsächlich bei Glaukom auf. Dieser Artikel stellt ein innovatives Operationsansatzmodell einer partiellen Durchtrennung des Sehnervs dar. Dieser platzsparende operative Ansatz verbessert die Fähigkeit des Forschers, Arzneimittel oder Trägersubstanzen beziehungsweise selektive Marker für retinale Ganglienzellen auf dem Stumpf des teilweise durchtrennten Sehnervs applizieren zu können, und ermöglicht es den Wissenschaftlern, die Mechanismen der sekundären Schädigung retinaler Ganglienzellen auf eine neue Weise zu untersuchen.Das Glaukom ist eine chronische neurodegenerative Erkrankung, und die fortschreitende Neuropathologie besteht über einen langen Zeitraum an. Eine erhöhte Augeninnendruck ist eine eindeutige Ursache für das Glaukom, und die Senkung des Augeninnendrucks hat sich als die einzige bestätigte wirksame Therapie zur Behandlung des Glaukoms erwiesen. Dennoch verschlechtert sich der Zustand einiger Patienten weiter, selbst nachdem der Augeninnendruck kontrolliert wurde.Daher wird angenommen, dass eine sekundäre Degeneration der RGCs im Rahmen eines Glaukoms auftritt. Der Mechanismus, der spezifisch mit der primären oder sekundären Degeneration verbunden ist, ist jedoch noch nicht vollständig geklärt. Der Mechanismus der sekundären Degeneration der RGCs wird die Behandlung von Neurotraumata und neurodegenerativen Erkrankungen des zentralen Nervensystems leiten.Um die partielle quantitative Durchtrennung des Sehnervs zu unterstützen, stellen wir ein neu entwickeltes, kostengünstiges chirurgisches Instrument vor. Das Instrument besteht aus zwei Teilen: einem handgehaltenen Stab und einem genuteten Kopf. Der genutete Kopf ist halbrund und weist eine vertikale Tiefe von 200 µm auf; die genutete Oberfläche ermöglicht es, dass der ventrale Sehnerv darin liegt und für die Durchtrennung stabilisiert werden kann.Legen Sie den Sehnerv in die Nut des Instruments. Die gerillte Oberfläche des Instruments ermöglicht eine Stabilisierung des Sehnervs für die Durchtrennung. Durchtrennen Sie den Sehnerv anschließend vertikal mit einer geeigneten Nadelspitze oder Messerspitze.Beachten Sie, dass nur der dorsale Teil des Sehnervs abgetrennt wird, da der ventrale Teil durch das Instrument geschützt ist. Trennen und lösen Sie die Dura um den Sehnerv herum, wobei darauf zu achten ist, die mit der Meningealscheide assoziiierte Augenarterie nicht zu verletzen. Die primäre Verletzung wurde in den RGCs erzielt, die den quantitativ durchtrennten Sehnervaxonen auf der dorsalen Seite entsprechen, während die sekundäre Verletzung in den RGCs durchgeführt würde, die den nicht durchtrennten Sehnervaxonen auf der zentralen und ventralen Seite entsprechen, ohne direkten Schaden. Die Ratten wurden mit einem tiermedizinischen Isofluran-Vaporisatorsystem anästhesiert. Die Anästhesie wurde während der Operation überwacht, und die Isoflurandosis entsprechend angepasst. Bewerten Sie kontinuierlich die Tiefe und Frequenz der Atmung und führen Sie alle fünf Minuten eine Zehenquetschprüfung durch, um das Fehlen von Tiefschmerzempfindung sicherzustellen.Platzieren Sie die rechte Seite der Ratte mit dem Kopf in Richtung des Operationsfeldes nach oben auf dem Operationstisch. Richten Sie die rechte Orbita in der Mitte des chirurgischen Sichtfeldes aus. Reinigen Sie anschließend den Inzisionsbereich mehrmals entlang des lateralen Augenwinkels bis zum äußeren Gehörgang der rechten Orbitahaut unter Verwendung von 0,5 % Chlorhexidin und 75 % Ethanol.Entfernen Sie das Fell zwischen dem lateralen Augenwinkel und dem äußeren Gehörgang mit einer Iris-Schere. Führen Sie einen Hautschnitt mit der Iris-Schere entlang der Strecke vom lateralen Augenwinkel zum äußeren Gehörgang mit einer Länge von 0,5 bis einem Zentimeter durch. Dann klemmen Sie die Faszie mit einer gezahnten Pinzette mit einer Zahngröße von 0,12 Millimetern an und ziehen nach oben, um einen dreieckigen Keil zu bilden.Führen Sie die untere Klinge der Vannas-Schere in den Einschnittbereich ein und öffnen Sie die Fascia in der gleichen Scher-Richtung wie beim Hautschnitt. Insbesondere beim Durchtrennen der subkutanen Fascia am lateralen Augenwinkel verwenden Sie die scharfe gezahnte Pinzette, um die subkutane Fascia an der Oberfläche der Fascia vertikal nach oben zu ziehen, und durchtrennen Sie die Fascia mit der Vannas-Schere, um eine Beschädigung der Orbitavenen am lateralen Augenwinkel zu vermeiden, die durch übermäßige Blutung zum Versagen des Modells führen könnte. Durchtrennen Sie die Fascia mit der Iris-Schere und legen Sie die Orbitavene frei.Verwenden Sie eine stumpfe Dissektion, um beide Seiten des Schnittes zu öffnen. Der Vorteil dieses Verfahrens besteht darin, dass es Blutungen verhindern kann, wenn die Blutgefäße direkt durchtrennt werden. Anschließend verwenden Sie Iris-Scheren, um den lateralen Augenwinkel entlang der Schnittlinie zu öffnen, um den chirurgischen Zugang vollständig freizulegen und das Sichtfeld für die anschließende stumpfe Dissektion der Orbitamuskulatur vollständig freizulegen.Setzen Sie den Klemmhalter am Fasziengewebe des subfascialen Orbitamuskels an und führen Sie die stumpfe Trennung vertikal zur Richtung des Haut- und Faszienschnitts durch. Trennen Sie dann schrittweise die Seiten auf, um die Orbit Tiefe zu erreichen, bis das orbitale Fettgewebe sichtbar wird. Dieses Vorgehen erschließt tiefere Abschnitte der Orbita und schafft ein größeres chirurgisches Arbeitsfenster, das uneingeschränkten Zugang zu den über dem Sehnerv liegenden Geweben ermöglicht.Bei den oben beschriebenen Verfahren, falls Blutungen auftreten, Druck mit sterilen chirurgischen Tupfern oder Wattestäbchen ausüben. Nach Freilegung des Fettgewebes im Orbitarraum die Kopfposition der Ratte so verändern, dass sie ursprünglich senkrecht zum Chirurgen blickt und anschließend zur rechten Seite des Chirurgen zeigt. Das orbitale Fettgewebe, das den Muskelfasziekegel um den Sehnerv bedeckt, abschneiden.Diese Maßnahme kann sicherstellen, dass der geeignete chirurgische Zugang freigelegt wird. Achten Sie darauf, das Volumen des resezierten Fettgewebes in einem angemessenen Bereich zu halten, um anhaltende Blutungen zu vermeiden. Nach dem Durchtrennen des Fettgewebes wird der Musculus rectus lateralis freigelegt.Den seitlichen geraden Augenmuskel nach außen klemmen und dann mit einer Vannas-Schere durchtrennen. Der Zweck dieses Eingriffs besteht darin, eine bessere Sicht auf den Sehnerv zu erzielen, da der seitliche gerade Augenmuskel viel breiter ist und die Sicht auf den Sehnerv offensichtlich blockiert. Befindet sich unter dem seitlichen geraden Augenmuskel noch Fettgewebe, ziehen Sie das über dem Sehnerv liegende Fettgewebe mit einer 0,12 Millimeter gezahnten Pinzette nach oben und durchtrennen es mit der Vannas-Schere.Dann ist die Gewebeschicht um den Sehnerv sichtbar. Setzen Sie die Trennung der Gewebeschicht entlang der Richtung des Sehnervs in der Tiefe der Augenhöhle fort, bis der Sehnerv vollständig freigelegt ist. Halten Sie den Bereich sauber, indem Sie mit chirurgischen Tupfern kleine Mengen Blut entfernen, die bei der Entfernung des Gewebes entstehen.Nun sollte der Sehnerv sichtbar sein. Um an den Nerven heranzukommen, entfernen Sie die das Nerven umgebende meningeale Hülle, ohne die A. ophthalmica zu beschädigen. Drehen Sie die Hülle vorsichtig, um das Gefäßmuster der Dura mit höherer Vergr&ouml;&szlig;erung des Operationsmikroskops zu untersuchen.Suchen Sie einen Bereich, der frei von Blutgefäßen ist, und führen Sie einen Längsschnitt in der Dura durch. Reißen Sie die Hülle vorsichtig parallel zur Richtung des Sehnervs mit der Nadelspitze oder Messerspitze auf, um Schäden an der Gefäßversorgung durch seitliche Schnitte zu vermeiden. Die einzige verbleibende Hülle um den Nerv war die Arachnoidea.Es ist sehr dünn und durchsichtig. Reiben Sie ähnlich wie im vorherigen Schritt die Arachnoidea vorsichtig mit der Nadelspitze oder Messerspitze parallel zur Richtung des Sehnervs. Legen Sie den Sehnerv sanft und sorgfältig in die Rille des Instruments, sodass der dorsale Sehnerv leicht höher liegt als der Rand des Rillenkopfes.Danach den dorsalen Sehnerv oberhalb der Plattformkante des Nutkopfs mit der Nadelspitze oder der Messerspitze durchtrennen, um die partielle Sehnervdurchtrennung abzuschließen. Das Instrument etwas tiefer, in Richtung der vertikalen Ausrichtung des Sehnervs, bewegen, um den Sehnerv zu lösen. Anschließend den Nutkopf des Instruments vorsichtig entfernen.Vermeiden Sie es, die Augenmuskeln oder andere Gewebe zu kratzen, um zusätzliche Schäden zu vermeiden. Anschließend kann der Stumpf einer teilweisen Durchtrennung des Sehnervs beobachtet werden. Bringen Sie den lateralen Rektus, die Faszie und andere umgebende Augengewebe in ihre ursprüngliche Position zurück. Dann nähen Sie nacheinander die Muskelschicht und die Hautschicht der Orbita. Tragen Sie nach der Naht antibiotische Salbe auf die Wunde auf, um eine Infektion zu verhindern. Während der Wiederbelebung der Ratte bereiten Sie eine Wärmeisolation mithilfe einer beheizten Unterlage vor oder decken Sie die Ratte im Käfig mit trockener Polsterung ab.Decken Sie sie ab, um sie warm zu halten. Stellen Sie während des Erholungsprozesses sicher, dass die Atemwege der Ratte frei sind. Die Tiere wurden nach der Operation einzeln untergebracht und sorgfältig überwacht.Um den Erfolg bei der Erstellung des Sekundärschadenmodells mit einem neuen operativen Ansatz unter Verwendung des selbstentwickelten chirurgischen Hilfsinstruments zu überprüfen, wurden die RGCs unmittelbar nach der Modellerstellung retrograd markiert. Ziel dieses Verfahrens war es, die RGCs retrograd zu markieren, indem ein neuronaler Tracerfarbstoff in den obere Hügel injiziert wurde. Der Farbstoff wurde von den RGCs in der Netzhaut retrograd aufgenommen und diente als Marker für lebende RGCs mit nicht durchtrennten Axonen im rechten Auge.Während RGCs, die den im rechten Auge teilweise durchtrennten Nervenfasern des Nervus opticus entsprechen, aufgrund der fehlenden Markierung mit Fluoro-Gold nicht angefärbt werden konnten, dienten als Kontrollauge das linke Auge ohne chirurgischen Eingriff, bei dem sämtliche RGCs entlang des Nervus opticus in der Retina retrograd durch die fluoreszierende Goldfarbe markiert waren. Die Ergebnisse der fluoreszenzmarkierten RGCs mit und ohne partielle Durchtrennung des Sehnervs wurden dargestellt. Lediglich die RGCs in der rechten Retina, die dem nicht durchtrennten Abschnitt des Nervus opticus entsprechen, waren mit dem fluoreszierenden Gold markiert, und die deutliche Grenze zwischen markierten und unmarkierten RGCs wurde sichtbar, was die partielle Durchtrennung des Nervus opticus belegt.Als Kontrollauge wurden alle RGCs der Netzhaut des linken Auges mit Fluorescent Gold markiert. Diese Bilder zeigen, dass die Durchblutung des rechten Auges vor und nach der Operation beobachtet wurde. Nach der Operation waren die Arterien weiterhin mit Blut gefüllt, und es wurde keine Verstopfung der Venen beobachtet.Dies zeigte, dass während der Operation kein Schaden am Blutversorgungssystem entstanden war. Das sekundäre Degenerationsmodell der RGCs wurde erfolgreich etabliert. Das potenzielle Modell der Sehnervdurchtrennung ist ein geeignetes Tiermodell, um den Mechanismus der sekundären Degeneration zu untersuchen und neuroprotektive Wirkstoffe gegen die sekundäre Degeneration zu screenen.Der Vorteil dieses Modells liegt in der genauen räumlichen Trennung von primärer und sekundärer Degeneration, sowohl im Sehnerv als auch in den Netzhäuten. Der Hauptvorteil unseres konstruierten Instruments ist eine höhere Reproduzierbarkeit und einfachere Handhabung. Mit etwas Übung können alle Schritte des vollständigen chirurgischen Eingriffs innerhalb von 10 bis 15 Minuten pro Auge durchgeführt werden, sobald die initialen Eintrittsschnitte gesetzt wurden.

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Optic Nerve Durchtrennung ist eine weit verbreitete Modell der erwachsenen ZNS-Verletzung. Neunzig Prozent der retinalen Ganglienzellen (RGC), deren Axone sind vollständig durchtrennt (Axotomie) sterben innerhalb von 14 Tagen nach Axotomie. Dieses Modell ist leicht zugänglich experimentelle Manipulationen und hoch reproduzierbar.

Optic Nerve Durchtrennung: Ein Modell des Adult Neuron Apoptose in das zentrale Nervensystem

Optic Nerve Durchtrennung ist eine weit verbreitete Modell der erwachsenen ZNS-Verletzung. Dieses Modell ist ideal für die Durchführung einer Reihe von experimentellen Manipulationen, die die Netzhaut Ziel global oder direkt auf den verletzten neuronalen Population von retinalen Ganglienzellen.

Methoden für die experimentelle Manipulationen nach Optic Nerve Durchtrennung im Säuger-ZNS

Dieses Protokoll zeigt, wie man retrograd Label retinalen Ganglienzellen, und wie man später machen ein Sehnerv Quetschverletzung um retinalen Ganglienzellen Überleben und Apoptose zu analysieren. Es ist eine experimentelle Krankheit Modell für verschiedene Arten von Optikusneuropathie, einschließlich Glaukom.

Ein Optic Nerve Crush Injury Mausmodell zur retinalen Ganglienzellen Survival Study

Direkte Injektion in den Sehnerv der Ratte ist nützlich für die regenerative Forschung. Wir demonstrieren eine minimal-invasive Technik zur direkten Injektion in einen Sehnerv der Ratte, bei der der Schädel nicht geöffnet werden muss. Mit dieser Methode werden chirurgische Komplikationen minimiert und die Genesung ist schneller.

Minimal-invasive Technik für die Injektion in Ratten-Optic Nerve

Das Ziel des Protokolls ist es, photochemisch induzieren ischämischen Schädigung des hinteren Sehnervs bei Ratten. Dieses Modell ist für Studien der Pathophysiologie der hinteren ischämischer optischer Neuropathie und therapeutischen Ansätzen für diese und andere Optikusneuropathien sowie anderer ZNS-ischämischen Erkrankungen.

Rattenmodell der photochemisch-induzierte Posterior ischämische Optikusneuropathie

Das Glaukom ist durch eine Schädigung der retinalen Ganglienzellen gekennzeichnet. Die Induktion des Glaukoms in Tiermodellen kann Aufschluss über die Erforschung dieser Krankheit geben. Hier skizzieren wir ein Verfahren, das den Verlust von RGCs in einem in vivo Rattenmodell induziert und die Vorbereitung von Whole-Mount-Netzhäuten für die Analyse demonstriert.

Glaucoma auslösende Verfahren in ein<em&gt; In Vivo</em&gt; Rat Modell und Whole-mount Retina Vorbereitung

Der folgende Bericht beschreibt, wie das Nagetiermodell der nicht-arteriitischen anterioren ischämischen Optikusneuropathie (rNAION) unter Verwendung der entsprechenden Farbstoff-, Kontaktlinsen- und Laserparameter repliziert werden kann. Wir zeigen auch die geeigneten Schritte zur Beurteilung der rNAION-Läsion in vivo auf.

Das Nagetier-Modell der nonarteritic anteriore ischämische Optikusneuropathie (rNAION)

Chronische okulärer Hypertension wird induziert durch die Anwendung einer Circumlimbal Naht bei Ratten und Mäusen, was zu funktionellen und strukturellen Verschlechterung der retinalen Ganglienzellen, die konsistent mit Glaukom.

Ein Modell des Glaukoms induziert durch Circumlimbal Naht bei Ratten und Mäusen

In diesem Artikel werden detaillierte Anweisungen zur Durchführung einer Sehnervenquetschung in einem Kaninchenmodell unter Verwendung von Standard-ophthalmochirurgischen Techniken vorgestellt.

Ein chirurgischer Ansatz zur Quetschung des Sehnervs in einem Kaninchenmodell

Dieses Protokoll beschreibt eine einzigartige Technik, die einen transkonjunktivalen Ansatz verwendet, um Zugang zum Sehnerv der Ratte für Injektionen zu erhalten.

Transkonjunktivaler Zugang zur Injektion in den Sehnerv der Ratte

Erfahren Sie eine innovative chirurgische Methode zur partiellen Durchtrennung des Sehnervs bei Ratten. Dieses Modell ermöglicht die Untersuchung sekundärer Degenerationsmechanismen retinaler Ganglienzellen im Glaukom.

Partielle Sehnerv Durchtrennung bei Ratten: ein Modell gegründet mit einem neuen operativen Ansatz zur sekundären Degeneration der retinalen Ganglienzellen bewerten (Video) | JoVE Journal

Partielle Sehnerv Durchtrennung bei Ratten: ein Modell gegründet mit einem neuen operativen Ansatz zur sekundären Degeneration der retinalen Ganglienzellen bewerten

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