Name: Beurteilung der Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke durch intravenöse Infusion von FITC-markierte Albumin in einem Mausmodell der Neurodegenerative Erkrankung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: Erfahren Sie die Bewertung der Blut-Hirn-Schranke-Durchlässigkeit bei neurodegenerativen Erkrankungen mittels intrajugulärer Injektion von FITC-markiertem Albumin im Mausmodell. Diese schnelle Methode ermöglicht die Untersuchung von Barrierenschäden.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde von "Fondazione Neuromed" unterstützt und gefördert durch das italienische Gesundheitsministerium "Ricerca Corrente", Valašské

alle Vorgänge an Tieren wurden genehmigt durch das IRCCS Neuromed Animal Care Review Board und &#34; Istituto Superiore di Sanità &#34; (Anzahl zu ermöglichen: 1163/2015-PR) und wurden nach den Vorgaben der EU-Richtlinie 2010 / 63/EU für Tierversuche.
 1. Vorbereitung der FITC-Albumin-Lösung in Halsschlagader injiziert werden Hinweis: alle Experimente wurden durchgeführt in manifest (11 - Wochen alten) HD R6/2-Mäuse und in Alter und Geschlecht abgestimmt Wildtyp (WT) Kontrolle Wurfgeschwistern.
<ol><li>Auflösen FITC-Albumin Pulver (siehe Tabelle der Materialien) in Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) bei 10 mg/ml. 
	Hinweis: Um optimale Ergebnisse zu erzielen, dies sollten werden frisch zubereitet für jede Kennzeichnung Reaktion.</li>
</ol> 2. Vorbereitung der Ausrüstung werden verwendet während der Operation <ol><li>legen Sie die zuvor autoklaviert chirurgische Instrumente (siehe Tabelle der Werkstoffe).</li>
	<li>Reinigen die chirurgischen Bank mit Alkohol (70 % Ethanol-Lösung). Vorbereitung der OP-Bereich (45 x 45 cm) mit einem chirurgischen sterile Einweg-Handtuch drapieren und richten Sie die operativen Stereomikroskop.</li>
</ol> 3. Chirurgische Verfahren für FITC-Albumin-Infusion in die Halsschlagader <ol><li>Maus Körpergewicht für Anästhesie aufnehmen.</li>
	<li>Anesthetize Maus mit einer intraperitonealen Injektion (IP) einer angemessenen Dosis von Ketamin (100 mg/kg) - Lösung (10 mg/kg) Xylazin.</li>
	<li>Monitor Tier Sedierung durch sanfte Zehe Prise zurückziehen Reflex, wie in Walantus Et al. 11 , 12.</li> <li>der narkotisierten Maus in Rückenlage aufgedeckt und die vier Beine und die Rute auf die chirurgische Werkbank mit Klebeband fixieren.</li>
	<li>Nach die Maus gesichert ist, sorgfältig die entsprechenden chirurgischen Marge am Hals mit einem elektrischen Rasierapparat Rasieren (siehe Tabelle der Materialien) und mit Povidon-Jod-Lösung und 70 % Ethanol desinfizieren.</li>
	<li>Die exponierte rasierte Oberfläche mit Wattestäbchen trocknen.</li>
	<li>Sanft die rasierte Haut hochziehen und machen einen 1,5 cm lange längs-Schnitt, mit Skalpell, in der Midclavicular Linie, beginnend in der Mitte auf dem Brustkorb und Erweiterung auf knapp unterhalb des Halses.</li>
	<li>Sorgfältig dehnen auseinander Bindegewebe mit der Pinzette unter mikroskopischer Beobachtung (5 X Vergrößerung), die äußere Halsschlagader aussetzen.</li>
	<li>Gewährleisten eine ausreichend Platz auf der rechten Seite und links von der Halsschlagader, die Einfügung der 30½ G Nadel für die Infusion der FITC-Albumin-Lösung zu erleichtern.</li>
	<li>Das Tier intravenös zu injizieren (Rechte Halsschlagader) langsam (über 3 min) mit 100 µL 10 mL/kg FITC-Albumin mit 30½ G Nadel.</li>
	<li>Nach 15 Minuten einschläfern die Maus durch Enthauptung, schnell entfernen das Gehirn aus dem Schädel als zuvor beschriebenen 13 und Tauchen Sie ihn für 15 min in mindestens 10 x das Volumen des Gehirns selbst vorgekühlt Isopentane.</li>
	<li>Bewegen der Isopentane Gehirn in ein vorgekühlt Rohr eingefroren und bis zur histologischen Schnitt in einem-80 ° C Gefrierschrank lagern.</li>
</ol> 4. Histologischen Schnitt des Gehirns infundiert mit FITC-Albumin <ol><li>Embed gefrorene Gehirn in optimale Arbeitstemperatur (OCT) zusammengesetzte (siehe Tabelle der Materialien) vor der Kryostat schneiden.</li>
	<li>Seriell das Gehirn in 20 µm dicke Schichten, mit einem Kryostat geschnitten (siehe Tabelle der Materialien), aus und klebe sie auf Glas-Objektträger.</li>
	<li>Führen die FITC-Albumin/Laminin Co-Färbung durch die Verwendung eines bestimmtes Anti-Laminin-Antikörper (siehe Tabelle der Materialien) wie oben beschrieben 6.
	<ol><li>Kurz, Abschnitte mit dem primären Antikörper Anti-Laminin (pAb 1: 1000) über Nacht inkubieren und fahren Sie mit entsprechenden Sekundärantikörpers konjugiert, Cy3.</li>
		<li>Deckglas gleitet mit Eindeckmittel mit 4 &#39;, 6-Diamidino-2-Phenylindole (DAPI) (Absorption Peak = 360 nm; Emission Peak = 460 nm (siehe Tabelle der Materialien).</li>
		<li>Die Rutsche über Nacht trocknen bei 4 ° C im Dunkeln verlassen.</li>
		<li>Beobachten die Fluoreszenz Färbung unter dem Fluoreszenzmikroskop (siehe Tabelle der Materialien) mit 20 X Vergrößerung mit beiden FITC ausgestattet (Absorption Peak = 495 nm; Emission Peak = 525 nm) und Cy3 Filter (Absorption Peak = 550 nm, Emission Peak = 570 nm).
		<ol><li>Um die Proben sofort nach der Färbung zu sehen, das Deckglas an den Ecken mit Nagellack zu sichern und prüfen sie unter dem Mikroskop wie oben (4.3.3).</li>
		</ol></li></ol></li></ol> 5. Fluoreszenz-Mikroskop Einstellung und Übernahme von Farbbildern <ol><li>dem Fluoreszenzmikroskop wie folgt einrichten.
	<ol><li>Schalten die Fluoreszenz Lampe ca. 10 Minuten vor dem Gebrauch. Schalten Sie das Mikroskop, den angeschlossenen Computer und Digitalkamera. Die Bildanalyse-Software ausführen (siehe Tabelle der Werkstoffe).</li>
		<li>Das geeignete Ziel für optimales Signal Sammlung und räumlicher Auflösung, und wählen Sie geeignete Filter.</li>
	</ol></li> <li>Erwerb von Farbbildern <ol><li>Wählen Sie den Befehl auf die Bildanalyse-Software [live] (siehe Tabelle der Materialien) und die optimale Ausleuchtung-Parameter für jeden Filter einrichten.</li>
		<li>Wählen Sie den Befehl [Freeze] das Einkanal-Farbbild und die Maßstabsleiste hinzufügen (&#39; bearbeiten &#62; brennen Skala &#39;)</li>
		<li>Speichern Sie jedes Bild in der &#39; .tiff &#39; Format.</li>
		<li>Kanäle zu einem einzigen Bild zu verschmelzen, durch die Auswahl &#39; Datei &#62; Merge Kanal &#39; und speichern Sie es in der</li>
		<li>Tiff &#39; Format.</li>
		<li>Erwerben mindestens vier 24-Bit-Farbe Bilder (2200 µm X 3400 µm) pro Gehirn-Scheibe (6 Sektionen pro Folie).</li>
	</ol></li></ol> 6. Bewertung der FITC-Albumin Extravasation <ol><li>analysieren die Fluoreszenzintensität für jeden einzelnen Kanal mithilfe der frei verfügbare ImageJ 14 , 15.</li>
	<li>Normalisieren die totale Fluoreszenzsignal Intensität der FITC-Albumin durch die totale CY3 Laminin Fluoreszenz Intensität pro jedes Bild und berichten die extravasierten Albumin außerhalb der Gefäße als grün Fluoreszenzintensität.</li>
</ol>

<ol><li>Obermeier, B., Verma, A., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier.</a> Handb Clin Neurol. 133, 39-59 (2016).</li>
<li>Serlin, Y., Shelef, I., Knyazer, B., Friedman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the blood-brain barrier.</a> Semin Cell Dev Biol. 38, 2-6 (2015).</li>
<li>Moretti, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+dysfunction+in+disorders+of+the+developing+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier dysfunction in disorders of the developing brain.</a> Front Neurosci. 9, 40(2015).</li>
<li>Zhao, Z., Nelson, A. R., Betsholtz, C., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+Dysfunction+of+the+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Establishment and Dysfunction of the Blood-Brain Barrier.</a> Cell. 163 (5), 1064-1078 (2015).</li>
<li>Drouin-Ouellet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+and+blood-brain+barrier+impairments+in+Huntington%27s+disease%3A+Potential+implications+for+its+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular and blood-brain barrier impairments in Huntington's disease: Potential implications for its pathophysiology.</a> Ann Neurol. 78 (2), 160-177 (2015).</li>
<li>Di Pardo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+blood-brain+barrier+is+an+early+event+in+R6%2F2+mouse+model+of+Huntington+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Impairment of blood-brain barrier is an early event in R6/2 mouse model of Huntington Disease.</a> Sci Rep. 7, 41316(2017).</li>
<li>Lecler, A., Fournier, L., Diard-Detoeuf, C., Balvay, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-Brain+Barrier+Leakage+in+Early+Alzheimer+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Blood-Brain Barrier Leakage in Early Alzheimer Disease.</a> Radiology. 282 (3), 923-925 (2017).</li>
<li>van de Haar, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-Brain+Barrier+Leakage+in+Patients+with+Early+Alzheimer+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Blood-Brain Barrier Leakage in Patients with Early Alzheimer Disease.</a> Radiology. 282 (2), 615(2017).</li>
<li>Fernandez-Lopez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+permeability+is+increased+after+acute+adult+stroke+but+not+neonatal+stroke+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier permeability is increased after acute adult stroke but not neonatal stroke in the rat.</a> J Neurosci. 32 (28), 9588-9600 (2012).</li>
<li>Yang, Y., Rosenberg, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+in+acute+and+chronic+cerebrovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown in acute and chronic cerebrovascular disease.</a> Stroke. 42 (11), 3323-3328 (2011).</li>
<li>Walantus, W., Castaneda, D., Elias, L., Kriegstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+utero+intraventricular+injection+and+electroporation+of+E15+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In utero intraventricular injection and electroporation of E15 mouse embryos.</a> J Vis Exp. (6), e239(2007).</li>
<li>Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+pancreatic+islets+into+the+kidney+capsule+of+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice.</a> J Vis Exp. (9), e404(2007).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>McCloy, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+inhibition+of+Cdk1+in+G+2+phase+overrides+the+SAC+and+decouples+mitotic+events%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Partial inhibition of Cdk1 in G 2 phase overrides the SAC and decouples mitotic events.</a> Cell Cycle. 13 (9), 1400-1412 (2014).</li>
<li>Burgess, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+human+Greatwall+results+in+G2+arrest+and+multiple+mitotic+defects+due+to+deregulation+of+the+cyclin+B-Cdc2%2FPP2A+balance%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Loss of human Greatwall results in G2 arrest and multiple mitotic defects due to deregulation of the cyclin B-Cdc2/PP2A balance.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (28), 12564-12569 (2010).</li>
<li>Krueger, M., Hartig, W., Reichenbach, A., Bechmann, I., Michalski, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+after+embolic+stroke+in+rats+occurs+without+ultrastructural+evidence+for+disrupting+tight+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown after embolic stroke in rats occurs without ultrastructural evidence for disrupting tight junctions.</a> PLoS One. 8 (2), e56419(2013).</li>
<li>Hirano, A., Kawanami, T., Llena, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy+of+the+blood-brain+barrier+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy of the blood-brain barrier in disease.</a> Microsc Res Tech. 27 (6), 543-556 (1994).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenlegen

Das Verfahren, die, das wir hier beschreiben, eignet sich in erster Linie zur Erkennung von BBB Leckage unter Erkrankungen des Gehirns. BBB-Dysfunktion gewinnt Aufmerksamkeit als ein gemeinsames Merkmal der vielfältigen neurologische Störungen4. Wir früher diesen Ansatz um die frühe Störung der BBB Integrität in einem Mausmodell der eine seltene Neurodegenerative Erkrankung wie HD6beschreiben.
Diese Methode nutzt die relative Einfachheit und Wirk...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/56389/assessment-blood-brain-barrier-permeability-intravenous-infusion-fitc">Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease</a>. One of the author&#39;s names was corrected from:
Maglione Vittorio
to:
Vittorio Maglione

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/56389/assessment-blood-brain-barrier-permeability-intravenous-infusion-fitc">Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease</a>. One of the author's names was corrected.

Erratum: Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Homöostase innerhalb des zentralen Nervensystems (ZNS) ist eine Voraussetzung für die richtige Kommunikation und Funktion der neuronalen Zellen. Das CNS-Parenchym ist fest von der Peripherie durch die endotheliale Blut - Hirn-Schranke (BBB), abgedichtet, stellt die Schnittstelle zwischen den peripheren Blutkreislauf und dem Gehirn dar und spielt eine Schlüsselrolle in der Übersprechen zwischen diese beiden Bezirke1 ,2. Die BBB ist eine komplexe und dynamischer dreidimensionale Struktur hauptsächlich bestehend aus spezialisierten Mikro-Schiff Endothelzellen (ECs) durch interzelluläre Knoten komplexe - tight Junctions (TJs) - miteinander verknüpft und umgeben von Perizyten, Neuron Endungen und Astrozyten Fuß Prozesse1,2.
Unter physiologischen Bedingungen die extrem geringe Durchlässigkeit der intakten BBB sorgt für die strenge Regelung des Transports von Nährstoffen und anderen Molekülen in und aus dem Gehirn und ZNS bietet einen einzigartigen Schutz vor Veränderungen in der Zusammensetzung des Blutes, die neuronalen Aktivität beeinflussen könnten und gegen Potenzial peripheren Beleidigungen1,2,3.
Störung des BBB Integrität und seine verbesserte Durchlässigkeit ist seit langem bekannt, bilden ein wesentliches Merkmal für viele neurologische und Neurodegenerative Erkrankungen4 einschließlich der Huntington-Krankheit (HD)5,6, jedoch , ob solch eine Funktionsstörung eine ursächliche Phänomen ist oder ein vermehrenden Ereignis im Verlauf der Erkrankung noch unklar ist. Das Timing der BBB Aufteilung bleibt auch schwer, zeigt jedoch Anzeichen von unserer Fraktion und anderen gestörten BBB Integrität dar kein Ende Ereignis in der Progression der Erkrankung, sondern eher ein erster Schritt6,7 , 8, die langfristige Auswirkungen haben kann.
Mit diesem Hintergrund ist es wichtig, altklug BBB Zusammenbruch der Neurodegeneration zu offenbaren, um Strategien nützlich, Krankheitsverlauf und Hirnschäden vorherzusagen und alternative und gezieltere Interventionen in der Lage, erfolgreich zu entwickeln Abschwächung der klinischen Folgen solch einer Unterbrechung. Zuverlässige Darstellung der BBB Beeinträchtigung ist daher von großer Bedeutung in der experimentellen Forschung und klinische Behandlung von Erkrankungen des Gehirns.
In diesem Beitrag beschreiben wir ein erfolgreiches und einfaches Verfahren für die Bewertung der BBB Permeabilität in einem HD-Maus-Modell mithilfe der hochmolekularen Fluorescein Herstellung gekennzeichnet-Albumin (FITC-Albumin). Extravasation von FITC-Albumin, die normalerweise die Schranke in das Gehirn Parenchym überqueren kann nicht gemessen wurde als Index der BBB Leckage. Diese Technik ist leicht anpassbar an Ratten und anderen pathologischen Zuständen zeichnet sich durch Cerebrovasculature Beeinträchtigung9,10.

<table><tbody><tr><td>Albumin-Fluorescin-Isothiocyanat-Conjiugat</td><td>SIGMA</td><td>A9771-100MG</td><td></td></tr><tr><td>pAb Anti-Laminin</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB300-144</td><td></td></tr><tr><td>CY3 Anti-Kaninchen aus Ziege</td><td>MILLIPORE</td><td>AP132</td><td></td></tr><tr><td>SUPERFROST PLUS</td><td>Thermo Scientific</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Deckgläser 24 x 50 mm</td><td>Thermo Scientific (DIAPATH)</td><td>61050</td><td></td></tr><tr><td>Kilik Optimum Cutting Temperature (OCT) Compound</td><td>Bio Optica</td><td>05-9801</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Eindeckmittel</td><td>VECTOR</td><td>H-1500</td><td>Eindeckmedien mit DAPI</td></tr><tr><td>iNSu/Light Insulin Einwegspritze</td><td>RAYS Gesundheit & Sicherheit</td><td>INS1ML26G13</td><td></td></tr><tr><td>30G 1/2"</td><td>BD Microlance</td><td>304000</td><td>Nadel für Insulin Einwegspritze</td></tr><tr><td>Skalpellgriff</td><td>F.S.T.91003-12</td><td></td><td></td></tr><tr><td>#22 Einweg Skalpell blads</td><td>F.S.T.</td><td>10022-00</td><td></td></tr><tr><td>Feine Irisschere 10,5 cm</td><td>F.S.T.</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Pinzette #5745 45&deg; 0,10 x 0,06 mm</td><td>F.S.T.</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Pinzette 10 cm</td><td>F.S.T.</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Pinzette #5 0,1 x 0,06 mm</td><td>F.S.T.</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Medizinisches Pflaster</td><td>Medicalis</td><td>34788</td><td></td></tr><tr><td>Steriles Einweg-Handtuchtuch</td><td>Dispotech</td><td>TVO50VE</td><td></td></tr><tr><td>Stereoskop</td><td>NIKON</td><td>SMZ 745 T</td><td></td></tr><tr><td>Optischer Illuminator LED-Licht (C-FLED2)</td><td>NIKON</td><td>1003167</td><td>Optischer Illuminator für Stereoskop</td></tr><tr><td>Eclipse Ni-U Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>932162</td><td>Epifluoreszenzmikroskop</td></tr><tr><td>Mikroskop Digitalkamera</td><td>Nikon</td><td>DS-Ri2</td><td>Mikroskopkamera</td></tr><tr><td>Intenslight</td><td>Nikon</td><td>C-HGFI</td><td>Mikroskoplampe</td></tr><tr><td>NIS-Elements 64 bit</td><td>Nikon</td><td>AR 4.40.00</td><td>Analysesoftware</td></tr><tr><td>Elektrorasierer</td><td>Gemei</td><td>GM-3007</td><td></td></tr></tbody></table>

beurteilung der durchlässigkeit der blut - hirn-schranke durch intravenöse infusion von fitc-markierte albumin in einem mausmodell der neurodegenerative erkrankung

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Störung der Blut - Hirn-Schranke (BBB) Integrität ist ein gemeinsames Merkmal für verschiedene neurologische und Neurodegenerative Erkrankungen. Obwohl das Zusammenspiel gestört, BBB-Homöostase und die Pathogenese der Erkrankungen des Gehirns weiteren Untersuchungen benötigt, können die Entwicklung und Validierung eines zuverlässigen Verfahrens zum BBB Veränderungen genau zu erfassen entscheidend sein und ein nützliches Werkzeug für die potenziell Vorhersage Krankheit gezielt Fortschritt und Entwicklung von Therapiestrategien.
Hier präsentieren wir Ihnen eine einfache und effiziente Verfahren zur Bewertung BBB Leckage in einer neurodegenerativen Zustand wie das Auftreten in einem präklinischen Mausmodell der Huntington-Krankheit, in denen Mängel in der Durchlässigkeit der BBB altklug im eindeutig nachweisbar sind die Krankheit. Insbesondere die hochmolekularen Fluorescein Herstellung gekennzeichnet (FITC)-Albumin, das ist in der Lage, die BBB überqueren Sie nur, wenn letztere beeinträchtigt wird, ist akut in eine Maus Halsschlagader und deren Verteilung in den Bezirken Gefäß- oder parenchymatösen infundiert richtet sich dann nach Fluoreszenz-Mikroskopie.
Ansammlung von Grün fluoreszierend-Albumin in der Anwesenheit von fungiert als einen Index von aberranten BBB Permeabilität und beim quantitated mit Bild J-Processing-Software, wird berichtet, wie grüne Fluoreszenzintensität.

Korrekte Infusion von FITC-Albumin in die Halsschlagader-Ergebnisse in der Extravasation der grünen Fluoreszenz Tracer aus dem Blutkreislauf in das Gehirn-Parenchymawhen ist die BBB gefährdet6. Unter physiologischen Bedingungen, Verteilung der infundierten fluoreszierende Albumin beschränkt sich auf das Innere der Blutgefäße des Gehirns und kein Signal in die umliegenden perivaskuläre Bereich und/oder Gehirn Parenchym ist nachweisbar (Abb. 1A</...

In dieser Studie stellen wir eine einfache und effiziente Verfahren zur Bewertung der Störung der Blut - Hirn-Schranke unter neurodegenerativen Erkrankungen. Um unser Ziel zu erreichen, wir infundiert hochmolekularen Fluorescein Herstellung gekennzeichnet (FITC)-Albumin in Maus Jugular Ader und die Leckage in der Anwesenheit von Fluoreszenz-Mikroskopie bewertet.

Beurteilung der Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke durch intravenöse Infusion von FITC-markierte Albumin in einem Mausmodell der Neurodegenerative Erkrankung

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Permeabilität der Hirn-Blut-Schranke in einem Mausmodell für degenerative Erkrankungen durch intrajuguläre Injektion von FITC-markiertem Albumin zu bewerten. Diese Methode kann helfen, die Schlüsselfragen bei der Erforschung der Homöostase des Gehirns zu beantworten. Es kann besonders nützlich sein, einen möglichen Zusammenhang zwischen einer Schädigung der Blut-Hirn-Schranke und Neurodegeneration zu untersuchen.Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie schnell und einfach durchzuführen ist und auch auf größere Tiermodelle und andere neuropathologische Umgebungen angewendet werden kann. Das chirurgische Verfahren der intrajugulären Injektion von FITC-Albumin wird von Luca Capocci demonstriert. Salvatore Castaldo wird die histologische Schnittion eines Gehirns demonstrieren.Und Enrico Amico wird das Verfahren zur Aufnahme von Schliffbildern demonstrieren. Beginnen Sie mit der Herstellung der FITC-Albuminlösung, indem Sie FITC-Albuminpulver in phosphatgepufferter Kochsalzlösung bei 10 Milligramm pro Milliliter auflösen. Legen Sie die autoklavierten chirurgischen Instrumente aus.Reinigen Sie den Operationstisch mit 70

assessment-blood-brain-barrier-permeability-intravenous-infusion-fitc

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieses Video beschreibt einen Permeabilitätsassay zur Bewertung der Permeabilität der in vitro Blut-Hirn-Schranke mit Natriumfluoresceinmolekülen.

Assay zur Nachahmbarkeit der Blut-Hirn-Schranke: Ein In-vitro-Assay zur Beurteilung der Durchlässigkeit von BHS-Nachahmung gegenüber Tracermolekülen

Dieses Video zeigt ein Verfahren zur Beurteilung der Störung der Blut-Hirn-Schranke in einem EAE-Mausmodell. Fluoreszierende Farbstoffe unterschiedlicher Größe werden retroorbital injiziert und zirkulieren durch die Blutgefäße des Gehirns. Der kleinere Farbstoff dringt durch Lücken in das Hirngewebe ein, während der größere Farbstoff nur dann eintritt, wenn die Störung schwerwiegend ist, was mit dem Ausmaß der Barriereschädigung korreliert.

Bestimmung der Störung der Blut-Hirn-Schranke mit Hilfe von Fluoreszenzfarbstoffen in einem EAE-Mausmodell

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Untersuchung der Permeation durch ein in vitro Blut-Hirn-Schranken-Modell (BHS) unter Verwendung von Astrozyten und Endothelzellen auf einem Membraneinsatz, mit freiem FITC und FITC-beladenem Ferritin. FITC-Ferritin band an Rezeptoren auf Endothelzellen und überquerte die Membranbarriere zur unteren Kammer, während freies FITC eine eingeschränkte Permeation zeigte und in der oberen Kammer verblieb.

Untersuchung der Permeation von FITC und FITC-Ferritin durch ein in vitro Blut-Hirn-Schrankenmodell

Eine Methode zur Etablierung eines in vitro Modells der Blut-Hirn-Schranke, die auf einer Co-Kultur von mikrovaskulären Endothelzellen und Astrozyten des Rattenhirns basiert, wird beschrieben und validiert. Dieses System erwies sich als ein valides Werkzeug, um die Wirkung der Nanoformulierung auf die Transbarriere-Permeation von fluoreszierenden Molekülen zu untersuchen.

In - vitro - Permeation von FITC-geladen Ferritine Über eine Ratte Blut-Hirn - Schranke: ein Modell für die Lieferung von Nanoformulated Moleküle zu studieren

Hier präsentieren wir einen Maus Gehirn vaskulären Permeabilität Assay mit intraperitonealer Injektion von Fluoreszenz Tracer gefolgt von Perfusion, die auf Tiermodelle der Blut - Hirn-Schranke Dysfunktion anwendbar ist. Ein Hemi-Gehirn dient zur Durchlässigkeit quantitativ bewerten und die andere für die Tracer Visualisierung/Immunostaining. Der Eingriff dauert ca. 5-6 h für 10 Mäuse.

Eine In Vivo Blut - Hirn-Schranke Permeabilität Assay bei Mäusen mit Gewebekulturen beschriftet Tracer

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine hoch reproduzierbare Technik für in Vivo Beurteilung der Blut - Hirn-Schranke Störung in Ratte-Modelle des ischämischen Schlaganfalls liefern.

Eine In-Vivo -Bewertung der Störung der Blut - Hirn-Schranke in einem Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls

Hier präsentieren wir Ihnen Protokolle, um die Beeinträchtigung der neurovaskuläre Einheit während experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis in vivo zu untersuchen. Wir gezielt auf Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke und Gelatinase Tätigkeit in Leukozyte Migration über die Glia Limitans ermitteln.

Beeinträchtigung der Endothelzellen und glialen Barrieren des Referats neurovaskuläre während experimentelle Autoimmune Enzephalomyelitis In Vivo Visualisierung

Drug targeting zu Tumoren des zentralen Nervensystems ist eine große Herausforderung. Hier beschreiben wir ein Protokoll, um eine in-vitro-Mimik der Blut-Hirn-Tumor-Schranke mit murinen und/oder menschlichen Zellen zu produzieren und ihre Relevanz für die Vorhersagbarkeit des zentralen Nervensystems Tumor targeting in vivo zu diskutieren.

Vorhersage In Vivo Nutzlasten Lieferung mit einem Blut-Hirnschranke Tumor in einer Petrischale

Dieses Protokoll beschreibt eine neuartige Technik zur Messung der drei wichtigsten Parameter ischämischer Hirnverletzungen an demselben Satz von Nagetier-Gehirnproben. Die Verwendung von nur einer Hirnprobe ist in Bezug auf ethische und wirtschaftliche Kosten sehr vorteilhaft.

Messung des Abbaus von Hirnödem nach dem Schlaganfall, Infarktzone und Blut-Hirn-Barrierenabbau in einem einzigen Satz von Nagetier-Gehirnproben

Es wurde eine Methode entwickelt, um die Farbstoffextravasation aufgrund des Zusammenbruchs der Blut-Hirn-Schranke (BHS) sichtbar zu machen, indem Mäusen zu unterschiedlichen Zeitpunkten zwei Fluoreszenzfarbstoffe verabreicht wurden. Die Verwendung von Glycerin als Kryoprotektivum erleichterte die Immunhistochemie an derselben Probe.

Bewertung des Zusammenbruchs der Blut-Hirn-Schranke in einem Mausmodell für ein leichtes Schädel-Hirn-Trauma

Dieses Protokoll stellt eine zuverlässige Methode zur Beurteilung der Integrität der Blut-Hirn-Schranke (BHS) im adulten Zebrafischmodell (Danio rerio) unter Verwendung von Evans blaufarbstoffbasierter Bewertung dar, die sowohl eine qualitative als auch eine quantitative Analyse der neurovaskulären Störung ermöglicht.

Visualisierung des Torwächters: Evans auf blauem Farbstoff basierende Bewertung der Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke bei erwachsenen Zebrafischen

Erfahren Sie die Bewertung der Blut-Hirn-Schranke-Durchlässigkeit bei neurodegenerativen Erkrankungen mittels intrajugulärer Injektion von FITC-markiertem Albumin im Mausmodell. Diese schnelle Methode ermöglicht die Untersuchung von Barrierenschäden.

Beurteilung der Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke durch intravenöse Infusion von FITC-markierte Albumin in einem Mausmodell der Neurodegenerative Erkrankung (Video) | JoVE Journal

Beurteilung der Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke durch intravenöse Infusion von FITC-markierte Albumin in einem Mausmodell der Neurodegenerative Erkrankung

Weitere Videos entdecken