Name: Messung der Wirkung von Chemikalien auf das Wachstum und die Vermehrung von Caenorhabditis elegans (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Lernen Sie die Bewertung chemischer Toxizität mit Caenorhabditis elegans für toxikologische Studien. Diese kostengünstige Methode unterstützt die Arzneimittelentwicklung und Umweltrisikobewertung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Studie wurde unterstützt durch das Korea Institute of Science and Technology intramuralen Forschungsstipendium (2E27513) und die hohe Mehrwertsteuer Food Technologie Entwicklung Programm (IPET) gefördert durch das Ministerium für Landwirtschaft, Food and Rural Affairs (315067-03).

Hinweis: das gesamte Experiment muss in einem sauberen isolierten Labor gehalten bei 20 ° C mit staubarme und Minimierung der Kontamination während der Wurm und bakterielle Behandlung durchgeführt werden. Zu diesem Zweck Experimente unter die Flamme eine Alkohol-Lampe oder mit einem sauberen Werkbank durchgeführt werden müssen.
 1. Wartung von C. Elegans und Ei-Vorbereitung auf die chemische Prüfung <ol><li>pflegen C. Elegans N2 (var. Bristol) weiterleben einer NGM Nährbodenplatte gefüttert mit E. Coli OP50 bei 20 ° C 12 , 13.</li>
	<li>Vorbereiten Alter synchronisiert Eiern entweder Bleichen Lösung Behandlung 5 oder die Zeit Ei Verlegung Methode 6 , 14 , 15. 
	Hinweis: vor dem Ei Zubereitung, Mantel die Etoposid-haltigen NGM-Platte mit Hitze-E. Coli OP50 wie unten beschrieben inaktivierten. Hitze-inaktivierten E coli OP50 wird verwendet, um die metabolische Aktivität von E. Coli 6 , 16 minimieren.</li>
</ol> 2. Vorbereitung von Hitze-inaktivierten e.coli OP50 Feed C. Elegans während Toxizitätstest <ol><li>500 mL doppelte Hefe Tryptone (DYT) Medium vorzubereiten, wie in Tabelle 1 beschrieben, und eine einzige Kolonie von E. Coli OP50 kultiviert auf impfen ein Luria-Bertani (LB) Agar Platte 5.</li>
	<li>E. Coli OP50 in einem schütteln Inkubator für 14 h bei 37 ° C und 150 u/min inkubieren.</li>
	<li>Nach Zentrifugation für 30 min bei 3.220 x g und 20 ° C, alle überstehenden DYT Medium zu entfernen, und fügen Sie eine Pre-Mischung von 25 mL S-Puffer, 250 µL 1 M MgSO 4 und 25 µL 5 mg/mL Cholesterin (gelöst in Ethanol). Alle diese Lösungen sind steril.</li>
	<li>Die Bakterien aufzuwirbeln und übertragen Sie sie auf eine 50 mL Einweg-Kunststoff-Rohr.</li>
	<li>Für die Hitzeinaktivierung brüten die resuspendierte E. Coli OP50 in einem Wasserbad für 30 min bei 65 ° c</li>
	<li>Abkühlen auf Raumtemperatur und Store bei 4 ° C bis zur Verwendung. Dies kann bis zu einem Monat gelagert werden.</li>
</ol> 3. Vorbereitung der NGM Platten enthält entweder 1 % DMSO oder 750 µM Etoposid <ol><li>bereiten zwei saubere 200 mL Glasflaschen. Eine Flasche 0,6 g NaCl, 0,5 g Pepton, 3,4 g Agar, 195 mL destilliertem Wasser und einem Magnetrührer hinzufügen. Die leere Flasche ein Magnetrührer hinzufügen.</li>
	<li>Autoklaven diese beiden Flaschen für 15 min bei 121 ° C, und dann abkühlen die Flaschen in einem Wasserbad für 30 min bei 55 ° c</li>
	<li>0,2 mL 1 M CaCl 2, 0,2 mL von 5 mg/mL Cholesterin, 0,2 mL 1 M MgSO 4 und 5 mL 1 M KPO-4 (alle diese Lösungen sind steril) hinzufügen und mischen sie dann durch magnetische rühren auf einer heißen Platte bei 55 ° c</li>
	<li>Unterteilen das gemischte NGM-Medium in zwei Flaschen mit dem gleichen Volumen (100 mL). Anschließend eine Flasche fügen Sie 1 mL DMSO hinzu, mischen Sie es erneut mit der magnetischen rühren. Speichern Sie die andere Flasche in einem Wasserbad bei 55 ° C erst im nächsten Schritt. Aliquoten 3 mL DMSO-haltige Mittel-bis jeweils 35 x 10 mm 2 Petrischale. Ca. 33 DMSO-haltige NGM Platten können von diesem Schritt gemacht werden.</li>
	<li>Mischen die andere Flasche mit der magnetischen rühren, fügen Sie 1 mL 75 mM Etoposid (bestand in DMSO gelöst) nochmals mixen und die aliquoten wiederholen (Schritt 3.4). Ca. 33 Etoposid (750 µM)-mit NGM Platten von diesem Schritt gemacht werden kann. 
	Hinweis: In der korrelierten zurück Papier 6 testeten wir 0, 250, 500 und 1.000 µM von Etoposid. Basierend auf diesen Daten, wir entschieden uns für die 750 µM Etoposid Dosis in diesem Papier.</li>
	<li>Cool hinunter die Chemikalie-haltigen NGM Platten auf Raumtemperatur durch verlassen sie bei Raumtemperatur für ca. 3 h und bei 4 ° C bis zur Verwendung aufbewahren. 
	Hinweis: Im Falle von lichtempfindlichen Chemikalien zu blockieren, Licht, Licht-induzierten Zersetzung zu minimieren. 
	Hinweis: Stellen Sie optional eine normale NGM-Platte ohne Chemikalien für die Eiablage Assay, die mit zwei verschiedenen chemischen Behandlungsbedingungen wie unten beschrieben durchgeführt werden kann.</li>
	<li>Hinzufügen 100 µL der Hitze-inaktivierten e.coli OP50 (wie beschrieben in Abschnitt 2) und auf jeder NGM Platte verteilen. Lassen Sie über Nacht trocknen in einem C. Elegans Inkubator bei 20 ° C für die chemischen Test</li>
</ol> 4. Messung von C. Elegans Wachstum <ol><li>Übertragung Alter synchronisiert C. Elegans Eiern auf der NGM-Platte ergänzt mit 1 % DMSO oder 750 µM Etoposid.</li>
	<li>Inkubieren C. Elegans in einem Inkubator bei 20 ° C für 4 Tage. Beobachtet die Würmer mit einem Stereo-Mikroskop, und mikroskopische Bilder jeden Tag. 20 X Vergrößerung (1 X Objektiv, 2 X Zoom-Vergrößerung und 10 X Okular) eignet sich in der Regel für die Beobachtung des Wachstums von C. Elegans. Auch eine mikroskopische Bild Mikroskop Bühne Mikrometer für die Kalibrierung Wurm Größe nehmen. 
	Hinweis: Hunger betrifft die Toxizitätstest. Daher füttern mit ausreichend Bakterien oder passen Sie die übertragenen C. Elegans Ei Zahlen am Anfang. Bis 3 Tage Hunger auszuschließen beobachten.</li>
	<li>Messen die Körperlänge von C. Elegans mit DMSO oder Etoposid zu jedem Zeitpunkt mit ImageJ-Software behandelt. 
	Hinweis: Für jede Probenmessung reichen 50 Würmer für die statistische Auswertung.
	<ol><li>In ImageJ, öffnen Sie das Mikroskopbild Bühne Mikrometer (&#39; Datei &#39; &#8594; &#39; öffnen &#39;). 
		Hinweis: Die Mikrometer Bild und Wurm Bilder (Schritt 4.2) müssen die gleiche Vergrößerung.</li>
		<li>Ziehen Sie eine Linie von 1.000 µm Mikrometer Kalibrierung Bild mit &#39; geraden &#39; Tool.</li>
		<li>Klicken Sie &#39; Analyze &#39; &#8594; &#39; Skala eingestellt &#39; und geben Sie 1.000 und µm in der &#39; Entfernung bekannt &#39; Feld und &#39; Längeneinheit &#39; box, bzw.. Überprüfen Sie &#39; Global &#39; und klicken Sie auf &#39; OK &#39;.</li>
		<li>Öffnen Sie die Wurm-Bilder (&#39; Datei &#39; &#8594; &#39; offene &#39;). Zeichnen Sie eine Linie entlang des Features jeder Wurm mit &#39; Freihandlinie &#39; Werkzeug. Der Körper Längendaten zu erhalten, indem Sie auf &#39; Analyse &#39; &#8594; &#39; Maßnahme &#39;.</li>
		<li>Wiederholen Sie diese Schritte für 50 Würmer.</li>
	</ol></li></ol> 5. C. Elegans Ei Verlegung Assay <ol><li>Inkubation der Alter-synchronisierte Eiern auf der NGM Platte mit DMSO oder Etoposid für 64 h (vor der Geburt des ersten Kindes) bis zum jungen Erwachsenen Stadium bei 20 ° c 
	Hinweis: Es ist optional, die Würmer aus dem Wachstumsversuchen Messung zu verwenden. Es ist bequem, die Messung von Wachstum und Ei Verlegung Assay zusammen.</li>
	<li>Transfer 5 Erwachsenen Würmer, die neue NGM Platten ohne Chemikalien (Bedingung 1, chemische Behandlung innerhalb einer bestimmten Frist Zeit, aus den Eiern zu jungen Erwachsenen Stadium) oder neue NGM Platte enthält die gleiche chemische Vorbehandlung (Bedingung 2, kontinuierliche Exposition des Chemikalien durch die insgesamt experimentelle Periode), und dann inkubieren sie 24 Std. 
	Hinweis: Es empfiehlt sich, Wiederholungen mit 3-5 NGM Platten für jede Behandlung zu machen; Diese Wiederholungen können für statistische Auswertungen verwendet werden.</li>
	<li>Auf die neue NGM-Platte zu übertragen, wie oben beschrieben, und die Anzahl von Eiern täglich. Zählen Sie die Würmer, die aus kroch, starben und wurden intern LukeHg.</li>
	<li>Wiederholen Sie diese Schritte, bis die Würmer nicht mehr, in der Regel innerhalb von 5 Tagen Eiablage.</li>
	<li>Berechnen Sie die Anzahl von Eiern pro Wurm aus jeder Platte gelegt, und addieren Sie diese Werte jeden Tag für 5 Tage, um die Gesamtzahl der Eiablage festzustellen. 
	Anmerkung: Ohne die Anzahl der Würmer, die gecrawlt aus- und intern aus der Berechnung geschlüpft.</li>
</ol>

<ol><li>Blomme, E. A., Will, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicology+strategies+for+drug+discovery%3A+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Toxicology strategies for drug discovery: present and future.</a> Chem. Res. Toxicol. 29 (4), 473-504 (2016).</li>
<li>Lilienblum, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+methods+to+safety+studies+in+experimental+animals%3A+role+in+the+risk+assessment+of+chemicals+under+the+new+European+Chemicals+Legislation+%28REACH%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Alternative methods to safety studies in experimental animals: role in the risk assessment of chemicals under the new European Chemicals Legislation (REACH).</a> Arch. Toxicol. 82 (4), 211-236 (2008).</li>
<li>Honnen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+as+a+powerful+alternative+model+organism+to+promote+research+in+genetic+toxicology+and+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans as a powerful alternative model organism to promote research in genetic toxicology and biomedicine.</a> Arch. Toxicol. , In Press (2017).</li>
<li>Hunt, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C.+elegans+model+in+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The C. elegans model in toxicity testing.</a> J. Appl. Toxicol. 37 (1), 50-59 (2017).</li>
<li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Ceron, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Caenorhabditis+elegans+methods%3A+synchronization+and+observation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> J. Vis. Exp. (64), e4019(2012).</li>
<li>Lee, S. Y., Kim, J. Y., Jung, Y. J., Kang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicological+evaluation+of+the+topoisomerase+inhibitor%2C+etoposide%2C+in+the+model+animal+Caenorhabditis+elegans+and+3T3-L1+normal+murine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Toxicological evaluation of the topoisomerase inhibitor, etoposide, in the model animal Caenorhabditis elegans and 3T3-L1 normal murine cells.</a> Environ. Toxicol. 32 (6), 1836-1843 (2017).</li>
<li>Imanikia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+the+comet+assay+to+assess+the+genotoxicity+of+environmental+pollutants+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The application of the comet assay to assess the genotoxicity of environmental pollutants in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Environ. Toxicol. Pharmacol. 45, 356-361 (2016).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfluorooctane+sulfonate+exposure+causes+gonadal+developmental+toxicity+in+Caenorhabditis+elegans+through+ROS-induced+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Perfluorooctane sulfonate exposure causes gonadal developmental toxicity in Caenorhabditis elegans through ROS-induced DNA damage.</a> Chemosphere. 155, 115-126 (2016).</li>
<li>Allard, P., Kleinstreuer, N. C., Knudsen, T. B., Colaiacovo, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+C.+elegans+screening+platform+for+the+rapid+assessment+of+chemical+disruption+of+germline+function%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">A C. elegans screening platform for the rapid assessment of chemical disruption of germline function.</a> Environ. Health Perspect. 121 (6), 717-724 (2013).</li>
<li>Singh, S., Sharma, B., Kanwar, S. S., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lead+phytochemicals+for+anticancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Lead phytochemicals for anticancer drug development.</a> Front. Plant Sci. 7, 1667(2016).</li>
<li>Kang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+topoisomerase+inhibitor%2C+daurinol%2C+suppresses+growth+of+HCT116+cells+with+low+hematological+toxicity+compared+to+etoposide%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">A novel topoisomerase inhibitor, daurinol, suppresses growth of HCT116 cells with low hematological toxicity compared to etoposide.</a> Neoplasia. 13 (11), 1043-1057 (2011).</li>
<li>Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+introduction+to+worm+lab%3A+from+culturing+worms+to+mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An introduction to worm lab: from culturing worms to mutagenesis.</a> J. Vis. Exp. (47), e2293(2011).</li>
<li>Zarse, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+insulin%2FIGF1+signaling+extends+life+span+by+promoting+mitochondrial+L-proline+catabolism+to+induce+a+transient+ROS+signal%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Impaired insulin/IGF1 signaling extends life span by promoting mitochondrial L-proline catabolism to induce a transient ROS signal.</a> Cell Metab. 15 (4), 451-465 (2012).</li>
<li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+on+solid+media%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring Caenorhabditis elegans life span on solid media.</a> J. Vis. Exp. (27), e1152(2009).</li>
<li>Weimer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-Glucosamine+supplementation+extends+life+span+of+nematodes+and+of+ageing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">D-Glucosamine supplementation extends life span of nematodes and of ageing mice.</a> Nat. Commun. 5, 3563(2014).</li>
<li>Schmeisser, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+ROS+signaling+rather+than+AMPK%2Fsirtuin-mediated+energy+sensing+links+dietary+restriction+to+lifespan+extension%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuronal ROS signaling rather than AMPK/sirtuin-mediated energy sensing links dietary restriction to lifespan extension.</a> Mol. Metab. 2 (2), 92-102 (2013).</li>
<li>Parodi, D. A., Damoiseaux, R., Allard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+assessment+of+germline+chemical+toxicity+using+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Comprehensive assessment of germline chemical toxicity using the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Vis. Exp. (96), e52445(2015).</li>
<li>Hahm, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+maximum+velocity+correlates+with+healthspan+and+is+maintained+in+worms+with+an+insulin+receptor+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">C. elegans maximum velocity correlates with healthspan and is maintained in worms with an insulin receptor mutation.</a> Nat. Commun. 6, 8919(2015).</li>
<li>Nussbaum-Krammer, C. I., Neto, M. F., Brielmann, R. M., Pedersen, J. S., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+spreading+and+toxicity+of+prion-like+proteins+using+the+metazoan+model+organism+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Investigating the spreading and toxicity of prion-like proteins using the metazoan model organism C. elegans.</a> J. Vis. Exp. (95), e52321(2015).</li>
<li>Schmidt, B. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+acute+and+developmental+neurotoxicity+screening%3A+an+overview+of+cellular+platforms+and+high-throughput+technical+possibilities%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">In vitro acute and developmental neurotoxicity screening: an overview of cellular platforms and high-throughput technical possibilities.</a> Arch. Toxicol. 91 (1), 1-33 (2017).</li>
<li>Fey, S. J., Wrzesinski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+drug+toxicity+using+3D+spheroids+constructed+from+an+immortal+human+hepatocyte+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Determination of drug toxicity using 3D spheroids constructed from an immortal human hepatocyte cell line.</a> Toxicol. Sci. 127 (2), 403-411 (2012).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

In diesem Artikel beschreiben wir die Toxizität Bewertung von Chemikalien in C. Elegans, ein Boden-Nematoden mit Etoposid als vergiftendes Beispiel. Zu diesem Zweck haben wir zwei Versuchsbedingungen verwendet. In der ersten Reihe C. Elegans auf Etoposid mit Platten aus Eiern, die jungen Erwachsenen Stadium angebaut wurden, und dann durften die Würmer zur Eiablage auf normalen NGM-Platten ohne Chemikalien. In der zweiten experimentellen Gruppe wurden C. Elegans kontinuierlich mit Etoposid währe...

Toxikologische Bewertung ist wichtig für die Entwicklung von Arzneimitteln, Nutraceuticals, und Cosmeceuticals, sowie die Risikobewertung von verschiedenen Umweltgiften. Das Nagetiere Modell ist eines der beliebtesten in Vivo experimentelle Systeme für Toxikologie Studie; nicht-Säugetier-Organismen wie C. Elegans sind alternativ auch am meisten benutzt. Toxikologische Bewertung nicht-Säugetier-Modelle sind vorteilhaft, weil nicht nur tierische ethische Fragen aber auch ihre Komfort und Nützlichkeit unter Berücksichtigung von Wirtschaftlichkeit, Wartbarkeit, Schnelligkeit und Reproduzierbarkeit1,2 ,3,4.
C. Elegans, einen Boden runden Wurm, hat als Modell Tier in verschiedenen Grundlagen- und angewandter Biologie und Chemie Forschung ausgenutzt worden. Es ist ein 1 mm lang, transparente Nematoden, die einfach in fester oder flüssiger Nematoden Wachstum Medien (NGM) gefüttert mit den Bakterienstamm Escherichia coli OP50 beibehalten wird. C. Elegans hat einen kurzen Lebenszyklus und Wildtyp N2 C. Elegans legt ca. 300 Eiern. Daher ist es leicht propagiert, um als experimentelle Materialien3,4,5verwendet werden. C. Elegans hat auch in den toxikologischen Studien vieler Medikamente und Umweltgifte6,7,8,9verbreitet.
Weil viele Krebsmedikamente schnell teilenden Krebszellen richten, können sie auch Schaden, sich schnell teilenden normale Zellen wie Knochenmark, Darmepithel und Haarfollikelzellen. Zum Beispiel gezielt Topoisomerase hemmenden Krebsmedikamente der DNA-Replikation werden von Krebszellen; Daher hemmen sie auch, sich schnell teilenden normale Zellen. Jeder lebende Organismus hat Adenin und diese Topoisomerase-Hemmer am ehesten Einfluss Umwelt Ökosysteme6,10,11. Somit ist eine Droge toxikologische Bewertung Plattform mit einem Modell Tier wertvoll für die Entwicklung von Arzneimitteln und Umweltverträglichkeitsprüfung.
In diesem Artikel beschreiben wir die detaillierte Protokolle, um der Toxizität von Etoposid, die einen klinischen Anti-Krebs-Agent ist, dass Ziele Topoisomerase II, als Modell giftige Chemikalie in C. Eleganszu testen. Zu diesem Zweck beschreiben wir die Messmethode von Körpergröße und die Gesamtzahl der Eiablage in C. Elegans mit Etoposid behandelt.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Affymetrix, USA</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>Caenorhabditis elegans N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td><td></td><td>Wildtyp</td></tr><tr><td>Cholesterin</td><td>Sigma, USA</td><td>C3045</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Sigma, USA</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli OP50</td><td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etoposide</td><td>Sigma, USA</td><td>E1383</td><td></td></tr><tr><td>Image J software (ver 1.4)</td><td>Natinoal Institute of Health, USA</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Mikroskopkamera</td><td>Jenopitk, Progress Gryphax, Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pepton</td><td>Merck, USA</td><td>107213</td><td></td></tr><tr><td>35 &times 10 mm Petrischale</td><td>SPL Life Sciences, Südkorea</td><td>10035</td><td></td></tr><tr><td>90> 15 mm Petrischale</td><td>SPL Life Sciences, Südkorea</td><td>10090</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon, Japan</td><td>SMZ800N</td><td></td></tr><tr><td>Hefeextrakt</td><td>Becton Dickinson, USA</td><td>212750</td><td></td></tr></tbody></table>

messung der wirkung von chemikalien auf das wachstum und die vermehrung von caenorhabditis elegans

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Toxikologische Bewertung ist entscheidend für das Verständnis der Auswirkungen von Chemikalien auf lebende Organismen in Grundlagen- und angewandter Biologie Felder. Ein nicht-Säugetier-Boden runden Wurm Caenorhabditis Elegansist eine wertvolle Modellorganismus für die toxikologischen Untersuchungen wegen seiner Bequemlichkeit und Mangel an tierethische Probleme im Vergleich zu Säugetieren tierischen Systemen. In diesem Protokoll wird ein detailliertes Verfahren der toxikologischen Bewertung von Chemikalien in C. Elegans beschrieben. Eine klinische Krebsmedikament, Etoposid, die Ziele menschlichen Topoisomerase II und DNA-Replikation von menschlichen Krebszellen hemmt, wurde als Modell chemische Tests ausgewählt. Alter-synchronisierte C. Elegans Eiern Dimethyl Sulfoxid (DMSO) oder Etoposid ausgesetzt waren, und dann wurde das Wachstum von C. Elegans durch die Stereo-Mikroskop-Beobachtung jeden Tag für 4 Tage überwacht. Die Gesamtzahl von Eiern gelegt von C. Elegans mit DMSO behandelt oder Etoposid war auch durch das Stereo-Mikroskop gezählt. Etoposid Behandlung beeinflusst wesentlich das Wachstum und die Vermehrung von C. Elegans. Im Vergleich dazu kann die Gesamtzahl der Eiablage aus Worms mit verschiedenen Behandlungsdauer von Chemikalien, entschieden, dass die reproduktive Toxizität von Chemikalien auf die Reproduktion von C. Elegans reversibel oder irreversibel ist. Diese Protokolle möglicherweise hilfreich für die Entwicklung der verschiedenen Drogen und Risikobewertung der Umweltgifte.

Die Behandlung von Etoposid (24-96 h) verzögert deutlich das Wachstum von C. Elegans. Nach 96 h Inkubation wuchs Etoposid behandelt Würmer auf 0,86 mm Körperlänge, während das Fahrzeug behandelt Würmer bis 1,04 mm (Abbildung 1) wuchs. Retardiertes Wachstum wurde offenbar auch unter Stereomikroskop Beobachtung (Abbildung 2) beobachtet. Wir begannen zu Eiern aus dem Fahrzeug behandelt Worms bei 72 h Inkubationszeit zu sehe...

Ein einfachen Protokolls zur Bewertung der Toxizität von Chemikalien in einem Modell Tier, Caenorhabditis Elegans, wird beschrieben. Die Methode ist praktisch und nützlich für die Entwicklung von Arzneimitteln sowie für die Risikobewertung von verschiedenen Umweltschadstoffe.

Messung der Wirkung von Chemikalien auf das Wachstum und die Vermehrung von Caenorhabditis elegans

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Wirkung von Chemikalien, wie z.B. dem Topoisomerase-Inhibitor Etoposid, auf das Wachstum und die Fortpflanzung des Modelltieres Caenorhabditis elegans zu messen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Toxikologie zu beantworten, wie z. B. die toxikologische Bewertung für die Entwicklung von Arzneimitteln und die Risikobewertung von Umweltgiften. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass die Toxizität verschiedener Chemikalien in Nicht-Säugetiersystemen überprüft werden kann, so dass diese Technik bequem und kostengünstig ist.Das Verfahren wird von So Young Lee, einer Doktorandin aus meinem Labor, demonstriert. Bereiten Sie zunächst zwei saubere 200-Milliliter-Glasflaschen vor, indem Sie 0,6 Gramm Natriumchlorid, 0,5 Gramm Pepton, 3,4 Gramm Agar, 195 Milliliter destilliertes Wasser und einen Magnetrührer in eine Flasche geben. Geben Sie dann einen Magnetrührer in die andere leere Flasche.Autoklavieren Sie die Flaschen 15 Minuten lang bei 121 Grad Celsius und kühlen Sie die Flaschen dann 30 Minuten lang in einem Wasserbad bei 55 Grad Celsius ab. Als nächstes geben Sie in die gefüllte Flasche 0,2 Millili

measuring-effect-chemicals-on-growth-reproduction-caenorhabditis

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

C. elegans Eiablageverhalten kann wichtige Informationen in Entwicklungs-, Reproduktions- und anatomischen Studien liefern. Dieses Video stellt die wichtigen Schritte eines Eiablageassays vor und zeigt ein Beispielexperiment, in dem ein Medikament auf Reproduktionstoxizität getestet wird.

Egg Laying Assay: Eine Methode zur Quantifizierung des Eiablageverhaltens von C. elegans

Ein Ei-in-Wurm (EIW)-Assay ist eine nützliche Methode, um Eiablageverhalten quantifizieren. Änderungen in Eiablage kann eine Verhaltensreaktion des Modells...

Messung der Auswirkungen von Bakterien auf<em&gt; C. Elegans</em&gt; Verhalten Mit einem Ei Retention Assay

Wir beschreiben die detaillierten Schritte eines chemischen Hochdurchsatz-Assays im Fadenwurm Caenorhabditis elegans, der zur Beurteilung der Keimbahntoxizität verwendet wird. In diesem Assay wird die Störung der Keimbahnfunktion nach chemischer Exposition mit einem fluoreszierenden Reporter überwacht, der spezifisch für aneuploide Embryonen ist.

Umfassende Beurteilung der Keimbahn Chemical Toxicity Mit der Nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

C. elegans ist ein nützliches Modell zur Untersuchung der Auswirkungen von Ethanol auf das Verhalten. Wir stellen einen Verhaltenstest vor, der die Auswirkungen von Ethanol auf die Fortbewegungsgeschwindigkeit von krabbelnden Würmern quantifiziert; sowohl die anfängliche Empfindlichkeit als auch die Entwicklung einer akuten funktionellen Toleranz gegenüber Ethanol können mit diesem Test gemessen werden.

Ein Test zur Messung der Wirkung von Ethanol auf die Fortbewegungsgeschwindigkeit der<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Hier beschreiben wir Protokolle, die speziell zur Überwachung morphogener Defekte entwickelt wurden, die während der frühen und späten Phasen der embryonalen Elongation des Fadenwurms Caenorhabditis elegans auftreten. Letztendlich sind diese Protokolle darauf ausgelegt, Gene zu identifizieren, die diese Phasen regulieren, und ihre unterschiedlichen Anforderungen entlang der antero-posterioren Achse des Embryos zu charakterisieren.

Novel Metrics zur Charakterisierung von Embryonic Dehnung des Nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Eine quantitative Methode wurde entwickelt, um zu identifizieren und die akute Toxizität von Chemikalien durch die automatisch analysieren die phänotypische Profilierung von Caenorhabditis ElegansVorhersagen. Dieses Protokoll beschreibt die Würmer mit Chemikalien zu behandeln, in einem 384-Well-Platte, Videos aufzunehmen und toxikologischen Verwandte Phänotypen zu quantifizieren.

Ein High-Throughput-Assay für die Vorhersage der chemischen Toxizität durch automatisierte phänotypischen Profilierung von Caenorhabditis elegans

Trans- und mehrgenerationenische Wirkungen persistenter Chemikalien sind für die Beurteilung ihrer langfristigen Folgen für die Umwelt und die menschliche Gesundheit von wesentlicher Bedeutung. Wir bieten neuartige detaillierte Methoden zur Untersuchung von Trans- und Mehrgenerationeneffekten mit der freilebenden Nematode Caenorhabditis elegans.

Verwendung von Caenorhabditis elegans zur Untersuchung der trans- und mehrgenerationenlichen Wirkungen von Toxischen Stoffen

Dieses Protokoll beschreibt, wie die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegansgemessen wird. Diese Methode ist hilfreich für die biologische Grundlagenforschung zur Darmgesundheit im Zusammenhang mit der Wechselwirkung zwischen Darmbakterien und ihrem Wirt und für das Screening, um probiotische und chemische Wirkstoffe zu identifizieren, um leckartigedarme Syndrome und entzündliche Darmerkrankungen zu heilen.

Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans

Junge erwachsene Caenorhabditis elegans Nematoden sind 2-24 h lang unterschiedlichen Konzentrationen kommerzieller Pestizide oder anderer Giftstoffe ausgesetzt. Dann können verschiedene Neuronen mit fluoreszierenden exprimierenden Stämmen sichtbar gemacht werden. Dieses Papier zeigt, wie man Nematoden Pestiziden aussetzt und Neuronenschäden bewertet.

Untersuchung der Wirkung von Pestiziden auf Caenorhabditis elegans Neuronen

In dieser Arbeit stellen wir eine allgemeine Methode vor, um die embryonale Lebensfähigkeit und die Gesamtzahl der produzierten Embryonen (Brut) mit dem Modellorganismus C. elegans zu bestimmen.

Messung der Embryonalviabilität und Brutgröße bei Caenorhabditis elegans

Lernen Sie die Bewertung chemischer Toxizität mit Caenorhabditis elegans für toxikologische Studien. Diese kostengünstige Methode unterstützt die Arzneimittelentwicklung und Umweltrisikobewertung.

Messung der Wirkung von Chemikalien auf das Wachstum und die Vermehrung von Caenorhabditis elegans

Weitere Videos entdecken