Name: Messung der Influenza neutralisierenden Antikörperantworten gegen a/H3N2-Viren im menschlichen Serum von Microneutralization Assays mit MDCK-SIAT1 Zellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 9 s
Description: Erfahren Sie, wie man mit MDCK-SIAT1-Zellen und Mikroneutralisationstests die neutralisierenden Antikörpertiter gegen H3N2-Influenzaviren im menschlichen Serum misst. Diese Methode ermöglicht die Bewertung der Impfimmunität.

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Wir danken Dr. Xiuhua Lu, Dr. Feng Liu und Frau Ashley Burroughs aus der Influenza-Division des CDC für ihre kritische Überprüfung und Unterstützung bei der Vorbereitung dieser Handschrift. Wir danken Dr. Adrian Reber von Influenza Division des CDC für seine Hilfe bei der Vorbereitung der Grafik in Abbildung 3. Zu guter Letzt bedanken wir uns bei Dr. M. Matrosovich, Marburg, Deutschland für die Bereitstellung der MDCK-SIAT1-Zellen.

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</ol>

Die Autoren berichten keinen Interessenskonflikt. Die Ergebnisse und Schlussfolgerungen in dieser Publikation sind diejenigen der Autoren und repräsentieren nicht unbedingt die Ansichten der Centers for Disease Control and Prevention und die Leistungsträger.

Die MN-Assay ist eines der wichtigsten Assays für Influenza Serologie zur Antikörperantworten nach Influenza-Infektion oder Impfung eingesetzt. Titer von MN-Assays generiert werden oft als die primären Endpunkt vieler Grippe Seroepidemiology Studien verwendet. MN-Assays sind auch für Sero-Diagnostik und der Bewertung der Impfstoff Immunogenität verbreitet. Internationalen Inter Lab Studien wurden durchgeführt, um MN Assays trat in mehreren Laboratorien14zu vergleichen.
...

Influenza-Viren weiterhin Morbidität und Mortalität in der Bevölkerung jedes Jahr verursachen. HA ist die große Oberfläche Glykoprotein von Influenza-Viren. Neutralisierende Antikörper gezielt HA sind die wichtigsten Immunmechanismus, die mit dem Schutz der Influenza-Infektion1,2korreliert. Hämagglutination Inhibition (HI) Assays und MN-Assays sind zwei Methoden, die häufig verwendet, um Antikörperreaktionen im menschlichen Serum nach Grippe-Infektion oder Impfung3messen. Die HI-Assay misst Antikörper Hemmung der Virus Hämagglutination der roten Blutkörperchen und gilt als einen Surrogat-Assay. Im Gegensatz zu HI kann die MN-Assay direkt die Ebenen von Antikörpern im menschlichen Serum messen, die Influenza-Infektion in Zellkulturen zu neutralisieren. MDCK-Zellen dienen häufig Influenza Virus isoliert und MN assays4.
Influenza-Viren werden ständig Antigendrift und Shift, Erwerb von Mutationen auf HA-Proteine, die verbindliche Rezeptorspezifität Viren verändern können. Seit 2014 neue Cluster a/H3N2-Viren entstanden und weiter bis zur aktuellen Saison zirkulieren. Die meisten dieser Viren gehören zu den genetischen Gruppe 3C.2a und 3C.3a basierend auf phylogenetische Analyse der HA Proteine. Viele der zirkulierenden Viren 3C.2a Fähigkeit, die roten Blutkörperchen hemagglutinate reduziert hatte und daher können nicht von HI-Assays5geprägt sein. Neutralisation Assays müssen verwendet werden, um die Antikörperreaktionen auf diese Viren zu messen, die nicht6hemagglutinate. Darüber hinaus haben Studien gezeigt, dass diese zeitgenössischen a/H3N2-Viren Rezeptor bindende Eigenschaften im Vergleich zu früheren a/H3N2-Viren verändert und neigen dazu haben, Kultur angepasst Mutationen und Polymorphismus bei in in-vitro- Zellen passagiert akkumulieren Kulturen7,8,9. Verglichen mit konventionellen MDCK-Zellen, ist MDCK-SIAT1 eine Zell-Linie von Matrosovich Et Al. entwickelt durch stabile Transfektion von MDCK Zellen mit cDNA des menschlichen α2, 6-Sialtransferase (SIAT1). Diese Zelllinie drückt erhöhte Mengen an α2, 6-sialic Galaktose Moieties und geringere Mengen an α2, 3 sialic Acid Moieties als das übergeordnete Element MDCK Zellen10. MDCK-SIAT1 Zellen haben gezeigt, um Isolierung Preise für a/H3N2-Viren im Vergleich zu MDCK Zellen11zu verbessern. Vor kurzem, Lin Et al. berichtet, dass für frisch geschlüpfte 3C.2a und 3C.3a menschlichen a/H3N2 Influenzaviren, treuer Virus Replikationen und bessere Virus Infektiosität erreicht wurden, wenn Viren in MDCK-SIAT1-Zell-Linien im Vergleich zu MDCK Zellen7kultiviert wurden. Somit eignen sich die MDCK-SIAT1 Zellen besser in MN-Assays Antikörperantworten den jüngsten Clustern von a/H3N2-Viren zu charakterisieren.
Hier beschreiben wir eine MN-Assay mit MDCK-SIAT1 Zellen zu Antikörperreaktionen auf zeitgenössische 3C.2a und 3C.3a a/H3N2-Viren im menschlichen Serum messen. Viren, die in Eiern oder Zellen gewachsen können in diesem Test verwendet werden. Hitze inaktiviert Sera, neutralisierende Antikörper enthält sind zunächst seriell verdünnt, dann inkubiert mit 100 TCID50/gut von Influenza-a/H3N2-Virus Antikörper im Serum, um das Virus zu binden zu ermöglichen. MDCK-SIAT1 Zellen sind dann die Virus-Antikörper-Mischung hinzugefügt und für 18-20 h bei 37 ° C, 5 % CO2 erlauben das a/H3N2 Virus MDCK-SIAT1 Zellen infizieren und replizieren inkubiert. Nach der Inkubation über Nacht die Platten werden fixiert und der Virusmenge in jede Vertiefung wird von einem ELISA mit Anti-Grippe A NP monoklonalen Antikörpern quantifiziert. Die Erkennung von NP zeigt das Vorhandensein des Virus-Infektion und das Fehlen von neutralisierenden Antikörpern. Neutralisierende Antikörpertiter ist definiert als der Kehrwert der höchsten Serum Verdünnung, die ≥ 50 % Hemmung der Virus Infektiosität bereitstellt.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco' s Modifiziertes Eagle-Medium (DMEM) mit hohem Glukosegehalt</td><td>Life Science</td><td>11965</td><td>Ein kritischer Bestandteil von sterilen Zellkulturen, Virusvermehrungs- und Virusverdünnungsmedien</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Hyklon</td><td>SH30070,03</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA) Fraktion V, Protasefreies</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3117332001</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Life Science</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvat</td><td>Life Science</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Geneticin G-418 Disulfatsalz&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1720-5G&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Life Science</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Life Science</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>VWR</td><td>67-64-1</td><td>Wird in einer Konzentration von 80 %</td></tr><tr><td>verwendet Phosphat-Citrat-Puffer mit Natriumperborat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLBF2806V</td><td></td></tr><tr><td>O-Phenylendiamin Dihydrochlorid Tablette</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLBQ1086V</td><td>1 Tablette pro 100 ml Wasser in Zellkulturqualität</td></tr><tr><td>Schwefelsäure</td><td>Fisher Scientific</td><td>A510-P500</td><td>Verwendet 0,5 M Endkonzentration</td></tr><tr><td>Ethanol, denaturiert, 4L</td><td>VWR</td><td>EM-AX0422-3</td><td>Verwendet in einer Konzentration von 70 %</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Life Science</td><td></td><td></td>1748048</tr><tr><td>RDE II "Seiken"</td><td>Denka Seiken</td><td>370013</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Anti-NP Maus monoklonal Ab</td><td>Millipore Pool</td><td>MAB 8257 MAB 8258</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus IgG HRP&nbsp;</td><td>KPL</td><td>074-1802</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Platten mit flachem Boden</td><td>Thermo Scientific</td><td>3455</td><td></td></tr><tr><td>Plattenleser</td><td>Molekulares Gerät</td><td>Spectromax 384 plus</td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturflasche 162 cm2/Vent Cap</td><td>Corning/VWR</td><td>3151</td><td></td></tr></tbody></table>

messung der influenza neutralisierenden antikörperantworten gegen a/h3n2-viren im menschlichen serum von microneutralization assays mit mdck-siat1 zellen

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to A(H3N2) Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Neutralisierende Antikörper gegen Hämagglutinin (HA) von Influenza-Viren werden die wichtigsten Immunmechanismus angesehen, die mit Schutz für Influenza-Infektionen korreliert. Microneutralization (MN) Assays werden häufig verwendet, um neutralisierende Antikörperreaktionen im menschlichen Serum nach Influenza-Impfung oder Infektion zu messen. Verdeckte Darby Canine Kidney (MDCK) Zellen sind die häufigsten verwendeten Zelle Substrat für MN-Assays. Allerdings verändert die derzeit zirkulierenden 3C.2a und 3C.3a a/H3N2 Influenza Viren erworbenen Rezeptorspezifität Bindung. Die MDCK-SIAT1-Zell-Linie mit erhöhten α-2,6 sialic Galaktose Moieties auf der Oberfläche erweist sich verbesserte Infektiosität und treuere Repliken als herkömmliche MDCK-Zellen für diese zeitgenössischen a/H3N2-Viren zur Verfügung. Hier beschreiben wir eine MN-Assay mit MDCK-SIAT1 Zellen, die zu neutralisierende Antikörpertiter zu dieser zeitgenössischen a/H3N2-Viren quantifizieren optimiert wurde. In diesem Protokoll sind Hitze inaktiviert Sera, neutralisierende Antikörper enthält zunächst seriell verdünnt dann inkubiert mit 100 TCID50/gut von Influenza a/H3N2-Viren Antikörper im Sera binden an die Viren ermöglichen. MDCK-SIAT1 Zellen sind dann die Virus-Antikörper-Mischung hinzugefügt und inkubiert für 18-20 h bei 37 ° C, 5 % CO2 , a/H3N2-Viren MDCK-SIAT1 Zellen infizieren können. Nach der Inkubation über Nacht, sind Platten fixiert und der Virusmenge in jedem gut durch ein Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay (ELISA) mit Anti-Grippe quantifiziert ist ein monoklonaler Antikörper Nucleoprotein (NP). Neutralisierende Antikörpertiter ist definiert als der Kehrwert der höchsten Serum Verdünnung, die ≥50 % Hemmung der Virus Infektiosität bereitstellt.

Bestimmung der die Infektiosität der Virus Bestände ist der erste Schritt bei der MN-Assay. Abbildung 2 veranschaulicht die Platte Layout um die TCID50 der Virus Bestände zu bestimmen. Für Virus Bestände mit unbekannten Infektiosität kann das Virus aus mehreren Pre-Verdünnungen, z.B. 10-2 und 10-3, titriert werden, um die beste Titration Kurve zur Berechnung der Infektiosität des Virus zu erfassen. Die Virus-Menge in der MN-As...

Grippe neutralisierende Antikörper korrelieren mit dem Schutz der Influenza-Infektionen. Microneutralization Assays messen neutralisierende Antikörper im menschlichen Serum und dienen oft der menschlichen Grippe-Serologie. Wir beschreiben einen Microneutralization-Assay mit MDCK-SIAT1 Zellen um zu messen, neutralisierende Antikörpertiter zu zeitgenössischen 3C.2a und 3C.3a a/H3N2-Viren nach Influenza-Impfung oder Infektion.

Messung der Influenza neutralisierenden Antikörperantworten gegen a/H3N2-Viren im menschlichen Serum von Microneutralization Assays mit MDCK-SIAT1 Zellen

Neutralizing antibodies against hemagglutinin (HA) of influenza viruses are considered the main immune mechanism that correlates with protection for ...

Das übergeordnete Ziel dieses Mikroneutralisationsassays ist es, neutralisierende Antikörperreaktionen auf zeitgenössische H3N2-Influenzaviren in menschlichen Seren mit MDCK-SIAT1-Zellen zu messen. Diese Methode kann verwendet werden, um Schlüsselfragen zur Bewertung der Influenza-Immunität zu beantworten. So kann beispielsweise festgestellt werden, ob die Grippeimpfung ausreichend neutralisierende Antikörperreaktionen auf zirkulierende H3N2-Viren hervorruft, um eine Infektion zu verhindern.Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass MDCK-SIAT1-Zellen und Mikroneutralisationsassays verwendet werden, um Antikörperreaktionen auf das Zurücksetzen antigener Cluster von H3N2-Influenzaviren nachzuweisen. Virusbestände sollten vor der Verwendung in Mikroneutralisationsassays auf hohe infektiöse Titer vermehrt werden. Beginnen Sie dieses Verfahren mit der Vermehrung von AH3N2-Viren in MDCK-SIAT1-Zellen, wie im Textprotokoll beschrieben.Tauen Sie am ersten Tag ein Fläschchen mit dem Virus bei Raumtemperatur auf und legen Sie das Virus sofort auf Eis. Um das Virus in zwei verschiedenen Anfangsverdünnungen zu testen, geben Sie zunächst 100 Mikroliter Virus zu 99 Millilitern Virusverdünnungsmittel für die 10:2-Vorverdünnung. Geben Sie dann 1 Milliliter der 10:2-Vorverdünnung zu 9 Millilitern Virusverdünnungsmittel für die 10:3-Vorverdünnung.Geben Sie mit zwei Mikrotiterplatten 100 Mikroliter Mikroverdünnungsmittel in alle Vertiefungen, mit Ausnahme der ersten Spalte der 96-Well-Mikrotiterplatte. Führen Sie als Nächstes 10 Verdünnungen mit halbem Logarithmus durch. Geben Sie 146 Mikroliter des Virus zu Beginn der Verdünnung in alle Vertiefungen in Spalte eins und übertragen Sie seriell 46 Mikroliter von Spalte eins bis Säule elf.Wechseln Sie die Pipettenspitzen zwischen den Säulen. Nach dem Mischen der elften Kolonne werden die Spitzen mit der 46-Mikroliter-Verdünnung verworfen. Verwenden Sie Spalte zwölf als Zellkontrolle, die nur Virusverdünnungsmittel enthält.Dann inkubieren Sie die Platte eine Stunde lang, bei 37 Grad Celsius, 5% Kohlendioxid. Bereiten Sie die MDCK-SIAT1-Zellen vor, wie im Textprotokoll beschrieben. Geben Sie 100 Mikroliter der verdünnten Zellen in jede Vertiefung der Mikrotiterplatten.Und decken Sie die Teller ab. Inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius, 5 % Kohlendioxid, für 18 bis 20 Stunden. Führen Sie am zweiten Tag den ELISA durch, indem Sie zuerst das Medium von den Mikrotiterplatten entfernen.Nachdem Sie jede Vertiefung mit 200 Mikrolitern PBS gewaschen haben, fügen Sie 300 Mikroliter kaltes 80%iges Aceton in jede Vertiefung hinzu. Und 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Entfernen Sie dann das Fixiermittel.Und lassen Sie die Platten an der Luft trocknen. Als nächstes verdünnen Sie den monoklonalen Anti-Influenza-A-Nukleoprotein-Antikörper auf die Zielkonzentration im Antikörperverdünnungsmittel. Waschen Sie die Platten dreimal mit 300 Mikrolitern Waschpuffer.Geben Sie dann 100 Mikroliter verdünnten Primärantikörper in jede Vertiefung. Inkubieren Sie die Platten eine Stunde lang bei Raumtemperatur. Für die sekundäre Antikörperzugabe verdünnen Sie das mit HRP-Antikörper konjugierte Ziegen-Anti-Maus-IgG auf die Zielkonzentration im Antikörperverdünnungsmittel.Waschen Sie die Platten dreimal mit 300 Mikrolitern Waschpuffer. Geben Sie 100 Mikroliter verdünnten Sekundärantikörper in jede Vertiefung, bevor Sie die Platte eine Stunde lang bei Raumtemperatur inkubieren. Waschen Sie die Platten anschließend fünfmal mit 300 Mikrolitern Waschpuffer.Tippen Sie auf ein fusselfreies Tuch. Geben Sie 100 Mikroliter frisch vorbereitetes Substrat in jede Vertiefung. Und inkubieren Sie bei Raumtemperatur, bis die Farbentwicklung gesättigt ist und die optische Dichte oder OD der Zellkontrollwells weniger als 0,2 beträgt.Geben Sie dann 100 Mikroliter Stopplösung in alle Vertiefungen. Lesen Sie den Außendurchmesser der Vertiefungen bei 490 Nanometern mit einem Mikroplatten-Spektralphotometer ab. Berechnen Sie die TCID50 des Virus mit der Reed-Muench-Methode, wie im Textprotokoll beschrieben.Tauen Sie die Seren am ersten Tag des MN-Assays in einem 37 Grad Celsius warmen Wasserbad auf und entfernen Sie sie sofort nach dem Auftauen. Erhitzen und aktivieren Sie die humanen Seren für 30 Minuten in einem 56 Grad Celsius heißen Wasserbad, wie im Textprotokoll beschrieben. Legen Sie dann die Seren auf Eis und geben Sie das Virusverdünnungsmittel zu den Seren, um eine Vorverdünnung von 1:10 zu erreichen.Um mit einem Virus zu testen, fügen Sie 50 Mikroliter Virusverdünnungsmittel in die Zeilen B bis H hinzu, mit Ausnahme der Spalten 11 und 12. Geben Sie dann 100 Mikroliter 1:10 verdünnte Seren in die Spalten A1 bis A10. Führen Sie eine zweifache serielle Verdünnung von den Reihen A bis H durch und verwerfen Sie die letzten 50 Mikroliter in Reihe H.Für die Viruskontrolle geben Sie 50 Mikroliter Virusverdünnungsmittel in die Vertiefungen A12, B12, C12 und D12.Für die Zellkontrolle geben Sie 100 Mikroliter Virusverdünnungsmittel in die Vertiefungen E12, F12, G12 und H12. Für die Kontrollseren werden 100 Mikroliter verdünnte Kontrollseren in die Vertiefung A-Spalte 11 gegeben. Und geben Sie 50 Mikroliter Virusverdünnungsmittel in die Vertiefungen B11 bis H11.Fahren Sie mit der seriellen Verdünnung fort. Decken Sie die Platten ab und inkubieren Sie bei 37 Grad Celsius, 5 % Kohlendioxid, bis sie für die Viruszugabe bereit sind. Für die Viruszugabe verdünnen Sie das Virus auf 100 TCID50 in 50 Mikrolitern mit Virusverdünnungsmittel.Geben Sie 50 Mikroliter verdünntes Virus in alle Vertiefungen, mit Ausnahme von Spalte 11 auf den hinteren Titrationsplatten und den Zellkontrollvertiefungen E12, F12, G12 und H12 auf allen Platten. 50 Mikroliter Virusverdünnungsmittel in alle Vertiefungen in Spalte 11 geben. Geben Sie dann 50 Mikroliter des Virus zu 100 TCID50 in 50 Mikroliter in die erste Vertiefung.Mischen Sie anschließend 50 Mikroliter und überführen Sie sie in aufeinanderfolgende Vertiefungen, um zweifache serielle Verdünnungen durchzuführen. Wechseln Sie die Pipettenspitzen zwischen den Vertiefungen, um eine Virusverschleppung zu vermeiden. 50 Mikroliter aus der Vertiefung H11 entsorgen.Geben Sie dann 50 Mikroliter Virusverdünnungsmittel in Spalte 11, um das endgültige Volumen auf 100 Mikroliter zu bringen. Tippen Sie zum Mischen auf die Teller. Inkubieren Sie die Platten eine Stunde lang bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid, bevor Sie am ersten Tag die MDCK-Zellzugabe und am zweiten Tag wie zuvor den ELISA durchführen.Nach Zugabe der primären und sekundären Antikörper, wie im Textprotokoll beschrieben, führen Sie die Substratzugabe und das Lesen der Platte durch. Waschen Sie die Teller fünfmal mit 300 Mikrolitern Waschpuffer und klopfen Sie auf ein fusselfreies Tuch. Geben Sie 100 Mikroliter frisch vorbereitetes OPD-Substrat in jede Vertiefung.Dann inkubieren Sie die Platten bei Raumtemperatur, bis die Vertiefungen der Viruskontrolle eine optische Dichte bei 490 Nanometern zwischen 0,8 und 3 erreichen, wobei die Zellkontrolle bei einem niedrigen Hintergrund-OD von weniger als 0,2 liegt. Geben Sie anschließend 100 Mikroliter der Stopplösung in alle Vertiefungen. Lesen Sie den Außendurchmesser der Vertiefungen bei 490 Nanometern mit einem Mikroplatten-Spektralphotometer ab.Bestimmen Sie abschließend den neutralisierenden Antikörpertiter jeder Serumprobe, wie im Textprotokoll beschrieben. Repräsentative Ergebnisse der Mikroneutralisationsassays sind hier dargestellt. Die OD in jeder Vertiefung stellt die Menge der Virusinfektion und -replikation in MDCK-SIAT1-Zellen in Gegenwart von seriell verdünnten Seren dar, die neutralisierende Antikörper enthalten.Der Neutralisations-Cutoff von 50 % ist definiert als der mediane OD der Viruskontroll-Wells plus der mediane OD der Zell-Kontroll-Wells, geteilt durch zwei, wobei der Kehrwert der höchsten Serumverdünnung, die eine Neutralisierung von mindestens 50 % erreicht, als Antikörpertiter für die Serumprobe gilt. In diesem Beispiel wurden gepaarte Seren, die vor und nach der Grippeimpfung von zwei Patienten gesammelt wurden, während der Grippesaison 2016 bis 2017 gegen das H3N2-Virus getestet, das im Impfstoff verwendet wurde. Bei Patient 1 vor der Impfung hemmte keine der Serenverdünnungen die Virusinfektion und wird daher als negativ angesehen.Nach der Impfung zeigten die Seren dieses Patienten eine Neutralisation. Die dritte Verdünnung aus diesen Seren ist die höchste Verdünnung unterhalb des Cutoff-Gehalts von 50 %, daher hat dieser Patient einen Titer von 40 nach der Impfung. Im Vergleich dazu enthält das Serum des zweiten Patienten vor der Impfung bereits vorhandene neutralisierende Antikörper mit einem Titer von 320.Nach der Impfung stieg der Titer auf mehr als 1280 an. In diesem Fall wurde bei einer Vorverdünnung des Serums von 1:10 kein Antikörper-Endtiter erreicht. Das Serum kann bei einer höheren Vorverdünnung erneut getestet werden, um einen Endtiter zu erreichen.Mikroneutralisationsassays mit MDCK-SIAT1-Zellen sind hochsensitiv, spezifisch und robust beim Nachweis neutralisierender Antikörperreaktionen für rezente antigene Cluster von H3N2-Influenzaviren. Durch die Verwendung regulärer MDCK-Zellen kann dieses Verfahren auch zum Nachweis von Antikörperreaktionen auf andere Stämme von H3N2-Viren und anderen Subtypen von Influenzaviren verwendet werden, um die schützende Immunität gegen Influenza zu beurteilen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

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Dieses Video zeigt einen Immunfluoreszenz-Assay, der zur Messung der Neutralisation des humanen Cytomegalievirus (HCMV) entwickelt wurde. Virusspezifische Antikörper werden mit dem Virus gemischt und mit menschlichen Fibroblastenzellen inkubiert. Die Antikörper neutralisieren das Virus, so dass es die Wirtszellen nicht infizieren kann, während nicht neutralisierte Viren die Zellen infizieren. Nach der Inkubation wird das Ausmaß der Neutralisation durch Quantifizierung der virusinfizierten...

Eine Immunfluoreszenzmethode zur Messung der Neutralisation des humanen Cytomegalievirus

Wir beschreiben den Enzyme-linked Lectin Assay (ELLA) zur Messung von Influenza-Neuraminidase (NA)-Inhibitions-Antikörpertitern in Seren. Der Assay verwendet Erdnuss-Agglutinin, um Galaktose-Rückstände zu quantifizieren, die zugänglich werden, wenn NA Sialinsäure von Fetuin-beschichteten 96-Well-Platten entfernt.

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Diese Studie beschreibt ein   Imaging-basierte Mikroneutralisationstest auf die antigenen Beziehungen zwischen Viren zu analysieren. Das Protokoll verwendet einen Flachbettscanner und hat vier Schritte, einschließlich der Titration Titration Quantifizierung, Neutralisierung und Neutralisierung Quantifizierung. Der Test funktioniert gut mit aktuellen zirkulierenden Influenza A (H1N1) pdm09, A (H3N2) und B-Viren.

Optimierung eines Assay Quantitative Mikroneutralisations

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Influenza A-Viren (IAVs) sind wichtige Humanpathogene Atemwege. Die Pathogenität von IAVs verstehen und neuartigen Impfstoff präklinischen Erprobung durchführen, sind Tiermodelle imitiert menschliche Physiologie erforderlich. Hier beschreiben wir Techniken zur Bewertung IAV Pathogenese, humorale Reaktionen und Wirksamkeit des Impfstoffes mit einem Maus-Modell der Infektion.

Influenza-A-Virus-Studien in einem Mausmodell der Infektion

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Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Verpackung von Pseudoviren und die Messung der Antikörper-neutralisierenden Aktivität.

Herstellung von pseudotypisierten H5-Aviären Influenzaviren mit Calciumphosphat-Transfektionsmethode und Messung der Antikörperneutralisationsaktivität

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Messung der Influenza neutralisierenden Antikörperantworten gegen a/H3N2-Viren im menschlichen Serum von Microneutralization Assays mit MDCK-SIAT1 Zellen (Video) | JoVE Journal

Messung der Influenza neutralisierenden Antikörperantworten gegen a/H3N2-Viren im menschlichen Serum von Microneutralization Assays mit MDCK-SIAT1 Zellen

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