Name: Eine automatisierte rasche Iterative Negative Geotaxis Assay für die Analyse von Erwachsenen Klettern Verhalten in einem Drosophila -Modell der Neurodegeneration (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Lernen Sie eine automatisierte Methode zur Analyse von Kletterdefiziten bei Drosophila im Zusammenhang mit Neurodegeneration. Diese Technik ermöglicht präzise Verhaltensanalysen für neurologische Forschung.

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Wir danken der Bloomington Stock Center und den Drosophila RNAi in Wien für fliegen Bestände. Das Patent für das RING-Gerät gehört zur Shanghai Advanced Research Institut, chinesische Akademie der Wissenschaften. Anfragen für die RflyDetection-Software auf Fu-de Huang erfolgen soll (siehe Autorenliste). Diese Arbeit wurde unterstützt durch Zuschüsse aus dem National Basic Research Program of China (973 Programm 2013CB945602) und National Natural Science Foundation of China (31270825 und 31171043). Wir danken Ho-Lab-Mitglieder zur Diskussion und Kommentare.

1. fliegen Sammlung <ol><li>die fliegen auf standard fliegen Essen bei 25 ° C, 70 % Luftfeuchtigkeit und einer 12 h/12 h hell/dunkel-Zyklus zu erhalten.</li>
	<li>Sammeln FH-Dicer2; DDC-GAL4 fliegen Virginsunder Kohlendioxid (CO 2) Anästhesie.</li>
	<li>Überqueren Sie diese Jungfrauen auf 2 Tage alten erwachsenen männlichen fliegen tragen die folgenden Genotypen: FH-mCD8GFP (Kontrolle), AuxR 16182 (Aux RNAi) AuxGFP (Aux Überexpression), und AuxR 16182; AuxGFP (retten), mit einem Mann: weibliches Verhältnis von 1:2.</li>
	<li>Separat sammeln neu geschlüpften Männchen und Weibchen in 3 Fläschchen für jede Gruppe pro Experiment, indem 10 fliegen in jedes normale fliegen Fläschchen mit standard-Food bei 25 ° c</li>
	<li>Je nach dem Experiment, halten Sie die gesammelten fliegt bis zu 35 Tage und nutzen sie für automatisierte Analyse der RING am Tag 5, 15, 25 und 35.</li>
</ol> 2. Automatisierte RING Assay <ol><li>Transfer 10 gesammelten fliegen (Unisex) pro Genotyp in jedes Fläschchen, dann das Fläschchen mit einer Schraube sichern. Kontrolle fliegen und fliegen mit verschiedenen Genotypen zusammen für jeden Satz von Experimenten zu analysieren (bis zu 10 Ampullen gleichzeitig 10 fliegen in jedes Fläschchen).</li>
	<li>Schalten Sie die Digitalkamera vor dem Gerät platziert und Aufnahme einmal fliegen sind alle geladen und schussbereit.</li>
	<li>Nach Abzug 1 min für fliegen in Fläschchen zu begleichen, schalten Sie die Schritt-Steuerung, die den Schritt Treiber steuert, das treibt den kleinen Elektromotor steuern den Hebel befestigt, so dass es nacheinander erhebt sich und das Gerät 4 Mal in 2 klopft s. Siehe Abbildung 1.
	<ol><li>Nach dem Abstich, beachten Sie, dass die fliegen an die Wand zu steigen beginnen. Sicherzustellen, dass die Aufnahme wird fortgesetzt,.</li>
	</ol></li> <li>Wiederholen Sie die Synchronisierung wie unter Punkt 2.3 in 60 s-Intervall für 3 bis 5 aufeinander folgende Versuche beschrieben.</li>
	<li>Wiederhole das Experiment für 5, 15, 25 und 35 Tage alten fliegen. Mindestens 3 unabhängige Experimente für jede Gruppe, jedes Experiment mit mindestens 30 gesammelten fliegt (3 Ampullen).</li>
</ol> 3. Analyse der Daten <ol><li>aufgenommene Videos in den Computer zu importieren.</li>
	<li>Einen Schnappschuss des Videos bei 6 s nach dem Abstich, für jeden Versuch.</li>
	<li>Das Snapshotbild in die RflyDetection-Software importieren (siehe Abbildung 2), mit der &#39; Datei &#39; Menü.</li>
	<li>Festgelegten der oberen und unteren Grundlinien des Fläschchens genau mithilfe der Baseline-Symbol auf der Symbolleiste und dann mit dem Cursor, markieren Sie die obere und untere Baselines auf das Bild.</li>
	<li>Geben Sie die Anzahl der fliegen pro Vial (z. B. 10 hier) in der &#39; Flys in Rect &#39; Feld und Vial Länge (z. B. 14 cm hier) in der &#39; Röhre Höhe &#39; Feld in der Einstellungsleiste auf.
	<ol><li>Beachten Sie, dass die Fliege Einzelpositionen werden erkannt und mit Punkten auf dem Bildschirm für jedes Fläschchen gekennzeichnet. 
		Hinweis: Abbildung 2 zeigt die Positionen der alle Klicks auf die Schaltfläche Menü.</li>
	</ol></li> <li>Beachten Sie, dass die Software automatisch den Klettern Abstand für jede Fliege bestimmt und die gemittelten Werte von 10 fliegen in jedes Fläschchen in einer Tabelle an der rechten Seitenwand zeigt. (Siehe Abbildung 2)</li>
	<li>Klettern Anzahl mit Statistiksoftware (z.B. Prisma) für weitere statistische Auswertungen verarbeiten.</li>
	<li>Gegenwart, die die Daten als ± SEM meine.</li>
	<li>Berechnung der p-Werte von Bedeutung (mit Sternchen gekennzeichnet * p &#60; 0,05, ** p &#60; 0,01, *** p &#60; 0,001) mit One-Way ANOVA mit Bonferroni mehrere Vergleich Test</li>
</ol>

<ol><li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+locomotor%2C+learning%2C+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+assay+Drosophila+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Madabattula, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+of+Climbing+Defects+in+a+Drosophila+Model+of+Neurodegenerative+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders.</a> J Vis Exp. (100), e52741(2015).</li>
<li>Podratz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+climbing+apparatus+to+measure+chemotherapy-induced+neurotoxicity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Fly+%28Austin%29%22%5BJournal%5D)">An automated climbing apparatus to measure chemotherapy-induced neurotoxicity in Drosophila melanogaster.</a> Fly (Austin). 7 (3), 187-192 (2013).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+rapid+iterative+negative+geotaxis+assay+and+its+use+in+a+genetic+screen+for+modifiers+of+Abeta%2842%29-induced+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Bull%22%5BJournal%5D)">Automated rapid iterative negative geotaxis assay and its use in a genetic screen for modifiers of Abeta(42)-induced locomotor decline in Drosophila.</a> Neurosci Bull. 31 (5), 541-549 (2015).</li>
<li>Shen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SH2B1+is+Involved+in+the+Accumulation+of+Amyloid-beta42+in+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">SH2B1 is Involved in the Accumulation of Amyloid-beta42 in Alzheimer's Disease.</a> J Alzheimers Dis. 55 (2), 835-847 (2017).</li>
<li>Song, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxilin+Underlies+Progressive+Locomotor+Deficits+and+Dopaminergic+Neuron+Loss+in+a+Drosophila+Model+of+Parkinson%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Auxilin Underlies Progressive Locomotor Deficits and Dopaminergic Neuron Loss in a Drosophila Model of Parkinson's Disease.</a> Cell Rep. 18 (5), 1132-1143 (2017).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+RBO-PI4KIII%CE%B1+Facilitates+A%CE%B242+Secretion+and+Ameliorates+Neural+Deficits+in+A%CE%B242-Expressing+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Downregulation of RBO-PI4KIIIα Facilitates Aβ42 Secretion and Ameliorates Neural Deficits in Aβ42-Expressing Drosophila.</a> J Neurosci. 37 (19), 4928-4941 (2017).</li>
<li>Riemensperger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+dopamine+pathway+underlies+progressive+locomotor+deficits+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A single dopamine pathway underlies progressive locomotor deficits in a Drosophila model of Parkinson disease.</a> Cell Rep. 5 (4), 952-960 (2013).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Der automatisierte RING-Test hier beschriebenen ermöglicht gleichzeitig eine Hochdurchsatz-Analyse der Fliege negative Geotaxis Verhalten für Hunderte von fliegen. Bereits bestehende Strategien zur Analyse von Erwachsenen Klettern beinhalten Beobachtungen eine Fliege in einem einzelnen Fläschchen und fliegen Position manuell vom Auge erfasst. Dieses ziemlich langwierige Prozess kann manchmal Fehlinterpretation oder Fehlinterpretation von Daten sowie arbeitsintensiven Arbeit verursachen. Unsere automatisierten RING-Test b...

Eine Vielzahl von Protokollen und Methoden wurden für die Analyse von Drosophila Erwachsenen Klettern Verhalten entwickelt. Eher mühsam, die traditionelle Analyse meistens geht es darum eine Fliege in einem einzelnen Fläschchen und nutzt eine manuelle Kraft zu fliegen nach unten für Synchronisation1,2,3,4Tippen Sie auf. Es ist mühsam und zeitraubend, ungeeignet für große Hochdurchsatz-Studien und Variationsmöglichkeiten der verwendet, um die fliegen sowie andere Einschränkungen Tippen Sie auf manuelle Kraft hat. Um den Test zu verbessern, wurde ein schnelle Iterative Negative Geotaxis (RING) Assay entwickelt die Hochdurchsatz-Analyse über zahlreiche fliegen in der gleichen Zeit5ermöglicht. Der Test erfordert jedoch noch eine manuell auszuüben Kraft zu fliegen Aktion synchronisiert. Unsere Version des RING-Assays, überarbeitet nach der vorherigen Test enthält eine Metallbasis mehrere fliegen-haltigen Fläschchen automatisch gesteuert durch einen Elektromotor fliegen Synchronisation6fahren hosten. Bei der Aufnahme, die Fliege, die Besteigung sofort nach einer Synchronisation dann aufgezeichnet wird mit eine selbst entworfene Software analysiert. Unsere automatisierten RING-Assay hat eliminiert die mühsamen und arbeitsaufwändiger Prozess bei der Erhebung von Daten aus einer Fliege, einzeln nacheinander, und aktiviert die Datenerfassung effizienter. Darüber hinaus ist der automatisierte RING-Test in einer Reihe von Studien klären Mechanismus zugrunde liegenden Alzheimer und Parkinson, Validierung des Ansatzes mit hohem Wirkungsgrad7,8,9 beschäftigt .
In diesem Artikel zeigen wir die automatisierte RING-Assay mit DDC-Gal4 getrieben RNAi fliegen. DDC-Gal4 ist eine Gal4-Linie, die speziell mit dem Ausdruck (DA) dopaminergen und serotonergen Neuronen, stellvertretend für ein großartiges Werkzeug für die Analyse der Ziel-gen Auswirkungen im Zusammenhang mit motorischen Defizite begleitenden Neurodegeneration10. Darüber hinaus integrieren wir UAS-Dicer2, eine Fliegenschnur, die RNAi-Effizienz, um die FH-Dicer2 generieren erhöht; DDC-Gal4 Werkzeug Linie. Die RNAi fliegen wir wählen zu verwenden ist die Auxilin (Aux) RNAi v16182 (AuxR16182), ein Gen, das wir zuvor identifiziert haben, um einen Effekt auf ausstellen fliegen lokomotorische Aktivität8. AuxGFP fliegen sind auch bereit, für die Analyse von Auswirkungen auf die Aux -Überexpression. Wir zeigen, wie Sie mithilfe den automatisierten RING-Test messen fliegen negative Geotaxis, präsentieren die Ergebnisse und Auswirkungen gewonnenen Ergebnisse zu diskutieren.

<table><tbody><tr><td>Forma Environmental Chamber</td><td>Thermo</td><td>3949</td><td></td></tr><tr><td>Kohlendioxidflaschen</td><td>FuLian GAS Technology</td><td>GB/T6052</td><td></td></tr><tr><td>HDR-Camcorder</td><td>SONY</td><td>HDR-CX220E</td><td></td></tr><tr><td>Binokulares Stereomikroskop</td><td>Xin Zhen</td><td>SMZ-168BL</td><td></td></tr><tr><td>Elektronische Waagen</td><td>MinQiao</td><td>SL1002N</td><td></td></tr><tr><td>Kühlschrank</td><td>Haier</td><td>SC-350</td><td></td></tr><tr><td>Agar-Agar-Pulver</td><td>Sinopharm</td><td>10000561</td><td></td></tr><tr><td>Glukose</td><td>Sinopharm</td><td>10010518</td><td></td></tr><tr><td>Maisgrieß</td><td>Sinopharm</td><td>5464654</td><td></td></tr><tr><td>Brauner Zucker</td><td>LiuCaiYuan</td><td>45467936</td><td></td></tr><tr><td>Instant Trockenhefe</td><td>AB MAURI</td><td>20886</td><td></td></tr><tr><td>AuxR16182</td><td>VDRC</td><td>7187</td><td></td></tr><tr><td>UAS-Dicer2</td><td>Bloomington</td><td>24650</td><td></td></tr><tr><td>UAS-mCD8GFP</td><td>Bloomington</td><td>32185</td><td></td></tr><tr><td>DDC-Gal4</td><td></td><td></td><td>Ein Geschenk von Fude Huang</td></tr><tr><td>AuxGFP</td><td></td><td></td><td>Ein Geschenk von Henry Chang</td></tr></tbody></table>

eine automatisierte rasche iterative negative geotaxis assay für die analyse von erwachsenen klettern verhalten in einem drosophila -modell der neurodegeneration

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

Neurodegenerative Erkrankungen gehen häufig einher mit einem fortschreitenden Verlust der Bewegungsfähigkeit, reduzierten Lebensdauer und altersabhängigen Neurodegeneration. Um zu verstehen, den Mechanismus dieser zelluläre Ereignisse und ihre kausale Beziehungen zueinander, Drosophila Melanogaster, mit seiner genetischen Spezialtools und vielfältige Verhaltensstörungen Funktionen, Krankheitsmodelle für die Beurteilung dienen als Neurodegenerative Phänotypen. Hier beschreiben wir eine Hochdurchsatz-Methode zur Drosophila Erwachsene negative Geotaxis Verhalten, als Hinweis auf mögliche motor Mängel verbunden mit neurodegenerativen Erkrankungen zu analysieren. Eine automatische Maschine konzipiert und entwickelt für Antrieb fliegen Synchronisierung verwenden einen ersten elektrischen Impuls, so dass später die Aufnahme der negative Geotaxis Verhalten über einen Verlauf von Sekunden bis Minuten. Bilder von Digital aufgenommenen Videos werden dann mit der selbst gestalteten RflyDetection-Software für statistische Datenmanipulation verarbeitet. Anders als die manuell gesteuerte negative Geotaxis Assay basierend auf Fliege, präzise, schnell und Hochdurchsatz-Protokolls ermöglicht Datenerfassung von mehr als Hunderte von fliegen, gleichzeitig eine effiziente Herangehensweise voraus unsere Verständnis in den zugrunde liegenden Mechanismus der motorischen Defizite verbunden mit neurodegenerativen Erkrankungen.

Dieser Artikel beschreibt die Verwendung von einen automatisierten RING-Test bei der Beurteilung der Fliege negative Geotaxis Verhalten. Im Gegensatz zu den vorherigen RING-Assay, unser Test beinhaltet eine automatisierte Vorrichtung, die eine elektrische Kraft zu fliegen Aktion synchronisiert und analysiert bis zu Hunderte von fliegen gleichzeitig (Abbildung 1). Analyse der Dicer2; DDC &#62; AuxR16182 fliegen zeigten einen altersabhängig...

Dieses schrittweise Protokoll analysiert Drosophila negative Geotaxis Verhalten mit einem automatisierten Multi-Zylinder-System, das beherbergt hunderte von fliegen und synchronisiert ihre Aktion durch einen Elektromotor. Bei der Synchronisation ist fliegen negative Geotaxis Verhalten untersucht, digital erfasst und analysiert mit Hilfe der selbst entworfenen RflyDetection-Software.

Eine automatisierte rasche Iterative Negative Geotaxis Assay für die Analyse von Erwachsenen Klettern Verhalten in einem Drosophila -Modell der Neurodegeneration

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. ...

Das übergeordnete Ziel dieses automatisierten, schnellen iterativen negativen Geotaxis-Assays besteht darin, Kletterdefizite von Drosophila-Adulten, die mit Neurodegeneration assoziiert sind, zu analysieren. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Bereich der Neurowissenschaften zu beantworten, wie zum Beispiel den Mechanismus der lokomotorischen Defizite, die mit der Neurodegeneration assoziiert sind. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass die Kletteraktivität der Fliegen auf eine automatisierte und professionell hochwertige Weise analysiert werden kann.Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Therapie und Diagnose der Neurodegeneration, da neurodegenerative Krankheiten häufig mit einem fortschreitenden Verlust der Bewegungsfähigkeit und einer verkürzten Lebensdauer sowie einer altersabhängigen Neurodegeneration assoziiert sind. Wir hatten zuerst die Idee für diese Methode. Wir wollten die lokomotorische Aktivität von Drosophila-Adulten genauer messen.Um die Fliegensammlung durchzuführen, beginnen Sie damit, die Fliegen bei 25 Grad Celsius, 70% Luftfeuchtigkeit und einem Zyklus von 12 Stunden Licht und 12 Stunden Dunkelheit auf Standard-Fliegenfutter zu halten. Sammeln Sie UAS-Dicer2 DDC-GAL4 Fliegenjungfern unter Kohlendioxid-Narkose. Kreuzen Sie die Jungfern mit zwei Tage alten männlichen Adulten, die die folgenden Genotypen tragen, mit einem Männchen/Weibchen-Verhältnis von eins zu zwei.Sammeln Sie getrennt die frisch geschlüpften Männchen und Weibchen in drei Röhrchen für jede Gruppe pro Experiment, wobei Sie 10 Fliegen in jedes reguläre Fliegenröhrchen mit Standardfutter geben. Stellen Sie dann die Röhrchen auf 25 Grad Celsius. Um den automatisierten RING-Assay durchzuführen, übertragen Sie 10 gesammelte Unisex-Fliegen pro Genotyp in jedes Röhrchen.Sichern Sie dann das Röhrchen mit einer Schraube. Analysieren Sie Kontrollfliegen und Fliegen mit verschiedenen Genotypen zusammen für jede Reihe von Experimenten. Schalten Sie die digitale Kamera ein, die vor dem Apparat platziert ist, und beginnen Sie mit der Aufnahme, sobald die Fliegen geladen und bereit sind.Die Kamera sollte horizontal platziert und der Abstand zur RING-Apparatur sollte angemessen sein, um die Positionen aller Fliegen an relativ genauen Stellen zu erfassen. Nachdem Sie den Fliegen eine Minute Zeit gegeben haben, sich in den Röhrchen zu setzen, schalten Sie den Schrittcontroller ein, der den Schrittantrieb steuert. Dies treibt den kleinen Elektromotor an, um den angeschlossenen Hebel zu steuern, sodass er viermal hintereinander in zwei Sekunden das Apparat anhebt und antippt.Beachten Sie nach dem Antippen des Apparats, dass die Fliegen beginnen, die Wand hochzuklettern. Bei eingeschalteter Aufnahme wiederholen Sie die Synchronisation, wie gerade demonstriert, in 60-Sekunden-Intervallen für drei bis fünf aufeinanderfolgende Versuche. Wiederholen Sie das Experiment für fünf, 15, 25 und 35 Tage alte Fliegen.Führen Sie für jede Gruppe mindestens drei unabhängige Experimente für jedes Experiment durch, mit mindestens 30 gesammelten Fliegen oder drei Röhrchen. Um die Daten zu analysieren, importieren Sie das aufgenommene Video in den Computer. Für jeden Versuch machen Sie einen Schnappschuss des Videos sechs Sekunden nach dem Antippen.Verwenden Sie im R-fly-Erkennungssoftware die Datei-Menü-Option, um das Schnappschuss-Bild zu importieren. Verwenden Sie dann das Baseline-Symbol auf der Symbolleiste, um die oberen und unteren Baselines des Röhrchens genau festzulegen, und markieren Sie dann mit dem Cursor die oberen und unteren Baselines im Bild. Geben Sie in der Einstellungsleiste im Feld "Fliegen im Rechteck" die Anzahl der Fliegen pro Röhrchen ein und im Feld "Röhrchenhöhe" die Länge des Röhrchens.Individuelle Fliegenpositionen werden für jedes Röhrchen mit Punkten auf dem Bildschirm erkannt und gekennzeichnet. Beachten Sie, dass die Software automatisch in einer Tabelle auf der rechten Seite die Kletterstrecke für jede Fliege bestimmt und die Durchschnittswerte von 10 Fliegen in jedem Röhrchen anzeigt. Präsentieren Sie die Daten als Mittelwert plus oder minus SEM.Berechnen Sie die P-Werte der Signifikanz mit einer Einfaktor-ANOVA mit einem Bonferroni-Multiple-Comparison-Test. Die Analyse der Dicer2-Fliegen unter Verwendung des automatisierten RING-Assays, der in diesem Video vorgestellt wird, zeigte eine altersabhängige Abnahme der Kletterstrecke in einem Sechs-Sekunden-Zeitrahmen für sowohl männliche als auch weibliche Fliegen, was darauf hindeutet, dass die aux-Expression in dopaminergen oder DA-Neuronen entscheidend für die Lokomotoraktivität der Fliegen ist. Die Kletterfähigkeit scheint bei der Überexpression von auxGFP in DA-Neuronen und der Koexpression von auxR und auxGFP in DA-Neuronen, die vom RNAi-Phänotyp gerettet werden, nicht beeinflusst zu sein.Sobald die Technik gemeistert wurde, kann dies in zwei bis drei Stunden durchgeführt werden, wenn es richtig gemacht wird. Dieses Verfahren ist nun eine Möglichkeit für Forscher im Bereich der Neurowissenschaften, die Neurodegeneration in Drosophila melanogaster zu untersuchen. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit dem elektrischen RING-Apparat extrem gefährlich sein kann und jeder Behälter sollte fest und sorgfältig überprüft werden, bevor Sie dieses Verfahren durchführen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Behavior

Verhalten

Behavior-Assays zur Messung der lokomotorischen Funktionen, Lern-und Gedächtnisleistung...

Assaying Bewegungsapparat, Lernen und Gedächtnis Defizite in Drosophila Modelle von Neurodegeneration

Drosophila melanogaster ist eine genetisch und auf der Verhaltensebene praktische Zwecke geeigneten Modells, das verwendet wurde, um die molekularen und zellulären Grundlagen von vielen wichtigen biologischen Prozessen seit über einem Jahrhundert ein zu verstehen. Drosophila wurde auch genutzt, um Einblicke in die genetischen Grundlagen der Fliege Verhalten zu gewinnen.

Methoden zum Test Drosophila Verhalten

Dieses Video beschreibt eine einfache Methode zur Quantifizierung der Fortbewegung von Fliegen und zeigt den durchgeführten Kletter-Assay. Der Fly-Climbing-Assay ist ein allgemeiner Test der motorischen Funktion, der auf einer negativen Geotaxis-Reaktion beruht.

Fly Climbing Assay: Eine Methode zum Testen der allgemeinen Fortbewegung bei Drosophila melanogaster

Hier beschreiben wir zwei Tests, die getroffen wurden, um altersabhängige Neurodegeneration dopaminerger (DA) in Neuronen zu...

Beurteilung Neurodegenerative Phänotypen in<em&gt; Drosophila</em&gt; Dopaminergen Neuronen durch Klettern Assays und Whole Brain Immunostaining

Hier beschreiben wir ein Verfahren zum schnellen und genauen Messung der Flugleistung in Drosophila, was eine Hochdurchsatz-Screening.

Ein verbessertes Verfahren für genaue und schnelle Messung der Flugleistung in<em&gt; Drosophila</em

Wir präsentieren einen optimierten, kostengünstigen und zuverlässigen negativen Geotaxis-Assay in Drosophila melanogaster als Modell für neurodegenerative Erkrankungen. Da dieser Assay empfindlicher auf leichte Defekte des Bewegungsapparates reagiert, hilft er bei der Suche nach potenziellen genetischen Wechselwirkungen und Wirkstoffzielen.

Quantitative Analyse der Kletter Defekte in einem Drosophila Modell von neurodegenerativen Erkrankungen

Die Insel-Assay ist ein relativ neuer, kostengünstiger Assay, der verwendet werden, um der Bewegungsorgane Grundverhalten von Drosophila Melanogasterzu bewerten. Dieses Manuskript beschreibt Algorithmen für die automatische Datenverarbeitung und objektive Quantifizierung der Insel Assay Daten, so dass dies eine sensible, Hochdurchsatz-Auslesen für große genetische oder pharmakologische Bildschirme assay.

Hochdurchsatz-Analyse des Bewegungsapparates Verhaltens in der Drosophila -Insel-Assay

Wir präsentieren ein Protokoll mit einem vorwärts genetischen Ansatz, um Mutanten zu überprüfen, die Neurodegeneration in Drosophila melanogasterzeigen. Es beinhaltet einen Klettertest, histologische Analysen, Genkartierung und DNA-Sequenzierung, um letztendlich neue Gene im Zusammenhang mit dem Prozess des Neuroprotektions zu identifizieren.

In Vivo Forward Genetic Screen zur Identifizierung neuartiger neuroprotektive gene in Drosophila melanogaster

Das vorliegende Protokoll bewertet die Bewegungsaktivität von Drosophila , indem es die Bewegung von Fliegen in einer handgefertigten Arena unter Verwendung der Open-Source-Software Fidschi verfolgt und analysiert, die mit Plugins kompatibel ist, um Pixel jedes Frames basierend auf hochauflösenden Videoaufzeichnungen zu segmentieren, um Parameter wie Geschwindigkeit, Entfernung usw. zu berechnen.

Eine einfache Technik zur Bestimmung der lokomotorischen Aktivität in Drosophila

Das Protokoll stellt eine kostengünstige Methode mit hohem Durchsatz zur Beurteilung der Neurotoxizität in der Fruchtfliege durch die Quantifizierung der Bewegungsstörung als Alternative zu herkömmlichen Säugetiermodellen dar. Ziel ist es, die neurotoxischen Wirkungen von pharmazeutischen Wirkstoffen, Umwelteinflüssen oder genetischen Veränderungen anhand eines sensitiven, reproduzierbaren und ethisch günstigen Modells zu bewerten.

Verhaltensanalyse der lokomotorischen Dysfunktion bei Drosophila melanogaster als Aussage für Neurotoxizität

Lernen Sie eine automatisierte Methode zur Analyse von Kletterdefiziten bei Drosophila im Zusammenhang mit Neurodegeneration. Diese Technik ermöglicht präzise Verhaltensanalysen für neurologische Forschung.

Eine automatisierte rasche Iterative Negative Geotaxis Assay für die Analyse von Erwachsenen Klettern Verhalten in einem Drosophila -Modell der Neurodegeneration (Video) | JoVE Journal

Eine automatisierte rasche Iterative Negative Geotaxis Assay für die Analyse von Erwachsenen Klettern Verhalten in einem Drosophila -Modell der Neurodegeneration

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