Pentylenetetrazole-induzierten anzünden-Maus-Modell

Diese Methode kann bei der tiefgreifenden Analyse von Epilepsie helfen. Der Krampfanfall induziert histologische Veränderungen im Gehirn, die an den neuropsychiatrischen Entwicklungsstörungen beteiligt sein können. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass die selbstkonversive Dosis von PTZ besser kontrollierbare Anfälle induzieren kann als die anderen aktuellen Methoden.

Beginnen Sie mit der Vorbereitung der Injektion, indem Sie 2 Milligramm pro Milliliter PTZ in sterilem 0,9-prozentigem Natriumchlorid auflösen. Wiegen Sie das Tier und legen Sie es dann für eine 3-minütige Gewöhnungszeit in eine Beobachtungskammer. Als nächstes injizieren Sie PTZ interperitoneal mit einer 1-Milliliter-Spritze, die an einer 27-Gauge-Nadel befestigt ist, in den linken oder rechten Quadranten des Bauches des Tieres.

Beobachten Sie schließlich das Tier nach der PTZ-Injektion auf abnormales Verhalten. Besorgen Sie sich mindestens zwei zwei bis sechs Monate alte 129 SV-Mäuse, die das gleiche Geschlecht wie die Versuchsmäuse haben, um die fremde Maus zu sein. Jede fremde Maus muss separat aufbewahrt werden.

Lassen Sie die Maus für jede Trainingseinheit 15 Minuten lang zur Gewöhnung im Käfig. Reinigen Sie das gesamte Gerät in beiden Käfigen, indem Sie die Oberfläche mit 70% Ethanol abwischen. Stellen Sie dann die leeren Käfige in die beiden Seitenkammern des Dreikammergeräts und öffnen Sie die Türen zwischen den Kammern.

Um die Versuchsmaus zu gewöhnen, platzieren Sie die Versuchsmaus in der mittleren Kammer und lassen Sie die Maus frei durch das Gerät laufen, bis die Maus beide Käfige untersucht hat, plus weitere fünf Minuten. Nachdem das Tier in die mittlere Kammer gezogen ist, schließen Sie die Türen und lassen Sie die Maus fünf Minuten lang frei in der mittleren Kammer bewegen. Setzen Sie in dieser Zeit eine der 129 SV-Mäuse in einen Käfig, um sich an den Käfig zu gewöhnen.

Unmittelbar nach der Gewöhnungsphase der Versuchsmaus wird der Käfig mit der Maus 129 SV, der als Stranger One-Käfig bezeichnet wird, in eine der Seitenkammern und der leere Käfig, der als Objektkäfig bezeichnet wird, in die andere Seitenkammer gestellt. Öffnen Sie die Tür und überwachen Sie das Verhalten der Maus des Motivs. Lassen Sie die Maus des Motivs 10 Minuten lang frei bewegen und zeichnen Sie vier Verhaltensparameter auf.

Nummer eins, die Zeit, die in jeder Kammer verbracht wird, die Kammer des Fremden, die Objektkammer und die mittlere Kammer. Nummer zwei, die Zeit, die damit verbracht wird, jeden Käfig zu untersuchen, den Käfig von Stranger One und den Objektkäfig. Nummer drei, die Anzahl der Eingänge in jede Kammer und Nummer vier, die insgesamt zurückgelegte Strecke.

Nachdem sich die Maus in die mittlere Kammer bewegt hat, schließen Sie die Türen. Nachdem du die Käfige abgewischt hast, beginne die Analyse der sozialen Neuheit, indem du eine weitere 129 SV-Maus in einen der Käfige legst, den sogenannten Stranger Two-Käfig, und den Stranger Two-Käfig in eine der Kammern platzierst. Setze die Stranger One Maus in den anderen Käfig, den sogenannten Stranger One Käfig und setze den Stranger One Käfig in die andere Kammer.

Öffnen Sie abschließend die Tür und überwachen Sie das Verhalten der Motivmaus. Lassen Sie die Probandenmaus sich 10 Minuten lang frei bewegen und messen Sie die gleichen Verhaltensparameter, die für die Sozialitätsanalyse beschrieben wurden. Beginnen Sie damit, eine Maus in ein Konditionierungsgerät mit bestimmten Bedingungen zu setzen.

Zum Beispiel ein quadratisches Gerät mit klaren Plexiglaswänden, einem Metallgitterboden, einem Ethanolgeruch, 100 Lux Helligkeit und 65 Dezibel weißem Hintergrundrauschen. Konditionieren Sie die Maus dreimal im Verlauf von fünf Minuten mit einem pseudozufälligen Timing von 0,1 Milliampere Elektroschocks für zwei Sekunden. Bringen Sie die Maus dann nach der Konditionierung wieder in den Heimkäfig zurück.

Führen Sie am Tag nach der Konditionierung eine Gedächtnisbewertung durch, indem Sie die Maus in das gleiche Gerät wie den Schockzustand setzen und die Gefrierzeit über einen Zeitraum von fünf Minuten messen. Später am selben Tag setzen Sie die Maus in ein neuartiges Gerät und messen Sie die Gefrierzeit während einer fünfminütigen Bewertung. Vergleichen Sie abschließend die Gefrierzeit zwischen der gleichen und der neuen Bedingung.

Die Ergebnisse zeigten, dass der Anfallswert mit PTZ-Injektionen allmählich anstieg, während durch Kochsalzinjektionen keine Anfälle oder abnormale Verhaltensweisen hervorgerufen wurden. Darüber hinaus förderten wiederholte Anfälle die Bildung aberranter axonaler Äste oder das Sprossen von Moosfasern und die abnormale Migration von Körnerzellen im Hippocampus. PTZ-behandelte Mäuse zeigten eine normale Sozialität.

Die Mäuse verbrachten mehr Zeit in der Kammer des Fremden als in der Objektkammer und untersuchten den Käfig des Fremden mehr als den Objektkäfig. PTZ-behandelte Mäuse zeigten eine abnormale soziale Neuheit, was auf eine Beeinträchtigung des sozialen Gedächtnisses hinweist. PTZ-behandelte Mäuse zeigten auch im kontextuellen Angsttest eine Beeinträchtigung des Gedächtnisses.

Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Methoden wie das Morris-Wasserlabyrinth oder die anderen Gedächtnistests durchgeführt werden, um die zusätzlichen Fragen zur Beeinträchtigung des Gedächtnisses durch epileptische Anfälle zu beantworten. Nach ihrer Entwicklung ebnet diese Technik den Forschern auf dem Gebiet der Epilepsie den Weg, um den Mechanismus anfallsinduzierter neuropsychiatrischer Entwicklungsstörungen anhand von Modelltieren zu erforschen.