Name: Analyse der Kommunikation zwischen Monozyten und primären Brustkrebs-Zellen in einer extrazellulären Matrix (ECME) extrahieren-basiertes dreidimensionales System (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Erfahren Sie, wie ein 3D-Kokultursystem die Kommunikation zwischen primären Brustkrebszellen und Monozyten analysiert. Diese Methode untersucht Kollagendegradation, Immunzellrekrutierung und Tumorinvasion.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde durch CONACyT FONSEC SSA, IMSS/ISSSTE Projekt Nr. 233061, Ezequiel M. Fuentes-Pananá und Fondo de Apoyo a la Investigación, Krankenhaus Infantil de México Federico Gómez (Projektnummer HIM-2014-053) unterstützt. Espinoza-Sánchez NA ist Doktorand aus Programa de Doctorado de Ciencias Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM) und erhielt der 231663 Stipendium CONACYT. E-S-NA, auch der finanzielle Unterstützung durch das mexikanische Institut der sozialen Sicherheit (IMSS) anerkennen.

<ol><li>Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+understanding+tumor+hierarchy+and+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: understanding tumor hierarchy and heterogeneity.</a> Medicine (Baltimore). 95 (1), Suppl 1 2-7 (2016).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tumor+microenvironment+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Role of tumor microenvironment in tumorigenesis.</a> J Cancer. 8 (5), 761-773 (2017).</li>
<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nat Med. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li>
<li>Sica, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization+in+tumour+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization in tumour progression.</a> Semin Cancer Biol. 18 (5), 349-355 (2008).</li>
<li>Mantovani, A., Marchesi, F., Malesci, A., Laghi, L., Allavena, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-associated+macrophages+as+treatment+targets+in+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumour-associated macrophages as treatment targets in oncology.</a> Nat Rev Clin Oncol. , (2017).</li>
<li>Petersen, O. W., Ronnov-Jessen, L., Howlett, A. R., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+with+basement+membrane+serves+to+rapidly+distinguish+growth+and+differentiation+pattern+of+normal+and+malignant+human+breast+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Interaction with basement membrane serves to rapidly distinguish growth and differentiation pattern of normal and malignant human breast epithelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89 (19), 9064-9068 (1992).</li>
<li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30 (3), 256-268 (2003).</li>
<li>Debnath, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+apoptosis+in+creating+and+maintaining+luminal+space+within+normal+and+oncogene-expressing+mammary+acini%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The role of apoptosis in creating and maintaining luminal space within normal and oncogene-expressing mammary acini.</a> Cell. 111 (1), 29-40 (2002).</li>
<li>Muthuswamy, S. K., Li, D., Lelievre, S., Bissell, M. J., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11533657">ErbB2, but not ErbB1, reinitiates proliferation and induces luminal repopulation in epithelial acini.</a> Nat Cell Biol. 3 (9), 785-792 (2001).</li>
<li>Sameni, M., Dosescu, J., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+imaging+of+proteolysis%3A+stromal+and+inflammatory+cells+increase+tumor+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Functional imaging of proteolysis: stromal and inflammatory cells increase tumor proteolysis.</a> Mol Imaging. 2 (3), 159-175 (2003).</li>
<li>Sameni, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAME+models+for+4D+live-cell+imaging+of+tumor%3A+microenvironment+interactions+that+impact+malignant+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">MAME models for 4D live-cell imaging of tumor: microenvironment interactions that impact malignant progression.</a> J Vis Exp. (60), (2012).</li>
<li>Jedeszko, C., Sameni, M., Olive, M. B., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+protease+activity+in+living+cells%3A+from+two+dimensions+to+four+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing protease activity in living cells: from two dimensions to four dimensions.</a> Curr Protoc Cell Biol. 4, Chapter 4 Unit 4 20(2008).</li>
<li>Chimal-Ramirez, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP1%2C+MMP9%2C+and+COX2+expressions+in+promonocytes+are+induced+by+breast+cancer+cells+and+correlate+with+collagen+degradation%2C+transformation-like+morphological+changes+in+MCF-10A+acini%2C+and+tumor+aggressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">MMP1, MMP9, and COX2 expressions in promonocytes are induced by breast cancer cells and correlate with collagen degradation, transformation-like morphological changes in MCF-10A acini, and tumor aggressiveness.</a> Biomed Res Int. 2013, 279505(2013).</li>
<li>Espinoza-Sanchez, N. A., Chimal-Ramirez, G. K., Mantilla, A., Fuentes-Panana, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1beta%2C+IL-8%2C+and+Matrix+Metalloproteinases-1%2C+-2%2C+and+-10+Are+Enriched+upon+Monocyte-Breast+Cancer+Cell+Cocultivation+in+a+Matrigel-Based+Three-Dimensional+System%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-1beta, IL-8, and Matrix Metalloproteinases-1, -2, and -10 Are Enriched upon Monocyte-Breast Cancer Cell Cocultivation in a Matrigel-Based Three-Dimensional System.</a> Front Immunol. 8, 205(2017).</li>
<li>Li, Y., Wang, L., Pappan, L., Galliher-Beckley, A., Shi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1beta+promotes+stemness+and+invasiveness+of+colon+cancer+cells+through+Zeb1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">IL-1beta promotes stemness and invasiveness of colon cancer cells through Zeb1 activation.</a> Mol Cancer. 11, 87(2012).</li>
<li>Gallagher, S., Winston, S. E., Fuller, S. A., Hurrell, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoblotting+and+immunodetection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immunoblotting and immunodetection.</a> Curr Protoc Mol Biol. 10, Chapter 10 Unit 10 18(2008).</li>
<li>Troeberg, L., Nagase, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zymography+of+metalloproteinases%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Zymography of metalloproteinases.</a> Curr Protoc Protein Sci. 21, Chapter 21 Unit 21 15(2004).</li>
<li>Arevalo-Romero, H., Meza, I., Vallejo-Flores, G., Fuentes-Panana, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+CagA+and+IL-1beta+Promote+the+Epithelial-to-Mesenchymal+Transition+in+a+Nontransformed+Epithelial+Cell+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterol+Res+Pract%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori CagA and IL-1beta Promote the Epithelial-to-Mesenchymal Transition in a Nontransformed Epithelial Cell Model.</a> Gastroenterol Res Pract. 2016, 4969163(2016).</li>
<li>Reed, J. R., Leon, R. P., Hall, M. K., Schwertfeger, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1beta+and+fibroblast+growth+factor+receptor+1+cooperate+to+induce+cyclooxygenase-2+during+early+mammary+tumourigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1beta and fibroblast growth factor receptor 1 cooperate to induce cyclooxygenase-2 during early mammary tumourigenesis.</a> Breast Cancer Res. 11 (2), 21(2009).</li>
<li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+growth+factor+%28EGF%29+and+interleukin+%28IL%29-1beta+synergistically+promote+ERK1%2F2-mediated+invasive+breast+ductal+cancer+cell+migration+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Epidermal growth factor (EGF) and interleukin (IL)-1beta synergistically promote ERK1/2-mediated invasive breast ductal cancer cell migration and invasion.</a> Mol Cancer. 11, 79(2012).</li>
<li>Grande, S. M., Bannish, G., Fuentes-Panana, E. M., Katz, E., Monroe, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonic+B-cell+and+viral+ITAM+signaling%3A+context+is+everything%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Tonic B-cell and viral ITAM signaling: context is everything.</a> Immunol Rev. 218, 214-234 (2007).</li>
<li>Benton, G., Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Koblinski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel%3A+from+discovery+and+ECM+mimicry+to+assays+and+models+for+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Matrigel: from discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research.</a> Adv Drug Deliv Rev. 79-80, 3-18 (2014).</li>
<li>Worthington, P., Pochan, D. J., Langhans, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+Hydrogels+-+Versatile+Matrices+for+3D+Cell+Culture+in+Cancer+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Peptide Hydrogels - Versatile Matrices for 3D Cell Culture in Cancer Medicine.</a> Front Oncol. 5, 92(2015).</li>
<li>Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogels+as+extracellular+matrix+mimics+for+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Hydrogels as extracellular matrix mimics for 3D cell culture.</a> Biotechnol Bioeng. 103 (4), 655-663 (2009).</li>
<li>Schlaermann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+human+gastric+primary+cell+culture+system+for+modelling+Helicobacter+pylori+infection+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">A novel human gastric primary cell culture system for modelling Helicobacter pylori infection in vitro.</a> Gut. 65 (2), 202-213 (2016).</li>
<li>Pompaiah, M., Bartfeld, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastric+Organoids%3A+An+Emerging+Model+System+to+Study+Helicobacter+pylori+Pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gastric Organoids: An Emerging Model System to Study Helicobacter pylori Pathogenesis.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 400, 149-168 (2017).</li>
<li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li>
<li>Takasato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directing+human+embryonic+stem+cell+differentiation+towards+a+renal+lineage+generates+a+self-organizing+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Directing human embryonic stem cell differentiation towards a renal lineage generates a self-organizing kidney.</a> Nat Cell Biol. 16 (1), 118-126 (2014).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keinen Interessenkonflikt.

Epithelzellen wachsen in eine 3D räumliche Konformation und deren Wechselwirkung mit den ECM-Proteinen ist von zentraler Bedeutung für die Gewebe-Homöostase. Viele Krebs-Studien basieren auf Zellen in Monolayer (2D) angebaut und obwohl sie für ein Verständnis von vielen Aspekten der Tumorbildung und Progression entscheidend gewesen sind, kann Monolagen nicht rekapitulieren die Merkmale, denen Zellen, für die ECM auferlegt Instanz: Begrenzung der Verbreitung, Haftung-abhängige Zelle überleben, apikalen basolateralen Polar...

Tumorbiologie ist weit komplizierter, als bisher angenommen. Montage Beweise zeigt, dass Tumorzellen mehr als eine bloße Bulk unkontrolliert wuchernde Zellen; Vielmehr scheinen verschiedene neoplastische Zellen verschiedene Aufgaben anzeigen hoher Organisation und Hierarchie innerhalb der Tumor-1. Tumorzellen sind auch in intime Kommunikation mit nicht-transformierten Zellen: Makrophagen, Endothelzellen, Fibroblasten, Lymphozyten, Fettzellen zwischen den anderen Zellen sind alle eingetaucht in das Gerüst Proteine und Polysaccharide, die das ECM darstellen. Zahlreiche direkte und indirekte Wechselwirkungen entstehen zwischen den transformierten und nicht-transformierten Zellen und mit der ECM, die einen starken Einfluss auf die Krankheit Ergebnis2,3ausübt. Im konkreten Fall des BrC ist es besonders wichtig, die Kommunikation der BrC Zellen mit TAMs, wenn man bedenkt, dass TAMs gefunden wurden, um eine entscheidende Rolle in der Entwicklung des Tumors, wodurch das Risiko von Metastasen und Wiederauftreten der Krankheit4 zu zergliedern ,5.
Intra-Tumor Interaktionen und ihre möglichen Ergebnisse zu analysieren, neue 3D in-vitro- Ansätze wurden basierend auf den Einsatz von ECM-Extrakte, die eine sehr viel komplexere Mikroumgebung bieten näher an der Realität der Tumorbiologie, im Vergleich zu die konventionelle Monolage Zellkulturen, in denen die Zellen wachsen, befestigt an Kunststoff. Petersen und Bissell6 hat das erste Modell der Vorsteherdrüse und bösartige Mamma Epithelzellen kultiviert auf einer Basalmembran Laminin-reiche und waren die ersten, die 3D organotypischen Strukturen zu beschreiben, die Vorsteherdrüse Menschen diskriminieren Brust Epithelzellen von ihren bösartigen Pendants. Ein Jahrzehnt später, das Modell von Debnath, Muthuswamy, entwickelt und Brugge7,8,9 vorgesehen ein wertvolles Instrument um die biologischer Signalwege beeinträchtigt bei malignen Transformation von Drüsen Azini, erhellen diese als große Azini Formation durch Wildwuchs, Verlagerung der tight Junction-Proteine als Beweis für Sehbehinderte Zelle Polarisation und Verlust der Azini Lumen durch Zellresistenz, Anoikis, tritt ein programmierter Zelltod, die in Anchorage-abhängige Zellen, wenn sie von den umliegenden ECM zu lösen. Die Modelle der Sameni, Jedeszko und Sloane konzentrierten sich auf bildgebende proteolytische Aktivität von Zellen, die Invasivität, eine weitere wichtige Eigenschaft von Tumor Malignität10,11,12in engem Zusammenhang. Diese Modelle setzen auf Protein-Matrizen mit verschiedenen Fluoreszenz abgeschreckt Protein Substrate gemischt (DQ-Gelatine, DQ-Kollagen I und DQ-Kollagen IV), in welche fluoreszierende Signale sind bezeichnend für den proteolytischen Abbau von Kollagen. 3D-Modelle kann werden auch verwendet, um Stammzellen Eigenschaften beider nicht transformiert und Tumorzellen, in welcher Zelle Aggregate, auch genannt Sphäroide zu studieren, kultiviert in Suspension oder ECM-ähnliche Proteine für Mechanismen der Zelldifferenzierung, asymmetrische Verhören Zellteilung, Einhaltung von Zelle zu Zelle und Zelle Motilität13,14. Invasion-Assays ermöglichen testen die innere Aggressivität des Tumors und die Identifikation der Moleküle, die als Chemoattractants während der invasiven Verfahren15 dienen. Insgesamt, 3D Modelle repräsentieren eine erschwingliche Diversifikation in Vitro Zellkultur, die normal und onkogenen Gewebe Morphogenese genauer zu reflektieren.
Wir haben ein 3D Co Zellkultursystem basierend auf der oben genannten Modelle7,10,11, entworfen mit beiden menschliche kommerzielle BrC Zelllinien des bekannten aggressiven Potenzial (luminalen und Triple-negativen Typen) und primäre Zellen von BrC Patienten explantiert. Wir zuerst ein Modell entwickelt, wo waren entweder nicht-aggressive (MCF-7) oder aggressive (MDA-MB-231) BrC Zellen Co kultiviert mit U937 Monozyten im Auszug extrazelluläre Matrix (ECME)-basierten 3D System, das erlaubt direkten Zell-Zell-Interaktionen. Diese Ko-Kulturen wurden verwendet, um festzustellen, wie die Kommunikation zwischen diesen beiden Linien die Transkription einer Reihe von Genen im Zusammenhang mit Krebs aggressives Verhalten beeinflusst. Eine deutliche Steigerung der Cyclooxygenase-2 (COX-2) Abschrift wurde beobachtet, die fiel mit einer erhöhten Produktion von eines seiner Produkte, Prostaglandin E2 (PGE2), ein Befund, die die Rolle der Entzündung in der Tumorprogression hervorgehoben. Erhöhter Transkription von MMP wurde auch beobachtet, dass mit mehr Kollagen Proteolyse korreliert, wenn aggressive MDA-MB-231 Zellen zusammen mit U937 Monozyten in DQ-Kollagen IV-haltigen Kulturen gezüchtet wurden. Der Hinweis unterstützte unsere Ko-Kulturen nicht die Annahme, dass Zell-Zell-Interaktion-Mechanismen für den Abbau von Kollagen benötigt werden. Es schlug eher, dass die Kommunikation zwischen den beiden Linien durch sekretierten Moleküle vermittelt wurde. Darüber hinaus enthalten die Überstände geerntet aus dieser Kokultur Assays lösliche Faktoren, die Drüsen gebildet durch nicht-transformierten MCF-10A Zellen13Azini unorganisiert. Es wurde festgestellt, dass aggressive und primäre BrC Zellen abgesondert erhöhte Niveaus der Monocyte chemotaktische Moleküle MCP-1, GM-CSF und RANTES. So skizziert wir eine 3D Culture in der Zellen in Zelle Kultur Einsätze, Zell-Zell-Interaktionen zu verhindern getrennt wurden. Diese Kulturen wurden verwendet, um die indirekte Kommunikation zwischen BrC Zellen und Monozyten zu adressieren. Für diese Tests, nicht-aggressive und aggressive kommerzielle BrC-Zell-Linien und primären BrC Zellen und drei verschiedene Arten von menschlichen Monozyten: kommerzielle U937 und THP-1 Zellen und primäre Monozyten (PMs) aus dem peripheren Blut von gesunden Spendern (alle isoliert Monozyten im nicht aktivierten Zustand verwendet wurden) wurden verwendet. Erhöhte Konzentrationen von inflammatorischen Zytokinen IL-1β und IL-8 wurden beobachtet, um in Kokultur angereichert werden. Ebenso wurde festgestellt, dass MMP-1, MMP-2 und MMP-10 auch in der BrC-Zellen-Monocyte-Ko-Kulturen und damit verstärkenden zurück Ergebnisse14erhöht wurden. In diesem Manuskript ist ein Punkt-für-Punkt-Workflow Erstisolierung BrC Zellen und Erprobung in 3D Kulturen zusammen mit repräsentative Ergebnisse vorgestellt. Diese Arbeit ist ein gutes Beispiel für das große Potenzial, das in-vitro- 3D Zellsysteme bereitstellen, um spezifische Aspekte der Tumorbiologie zu befragen.

<table><tbody><tr><td>U937</td><td>American Type Culture Collection ATCC&nbsp;</td><td>CRL-1593.2</td><td>Monozytäre Zelllinie/histiozytäres Lymphom</td></tr><tr><td>THP-1</td><td>Amerikanische Schriftkultur-Sammlung ATCC&nbsp;</td><td>TIB-202</td><td>Monozytäre Zelllinie/akute monozytäre Leukämie&nbsp;</td></tr><tr><td>MCF-10A</td><td>Amerikanische Schriftkultur-Sammlung ATCC&nbsp;</td><td>CRL-10317</td><td>Nicht transformierte Brustzelllinie</td></tr><tr><td>MCF-7</td><td>Amerikanische Kultursammlung ATCC&nbsp;</td><td>HTB-22</td><td>Brustkrebs-Zelllinie</td></tr><tr><td>T47D</td><td>Kultursammlung amerikanischer Typ ATCC&nbsp;</td><td>HTB-133</td><td>Brustkrebs-Zelllinie</td></tr><tr><td>HS578T</td><td>Amerikanische Kultursammlung ATCC&nbsp;</td><td>HTB-126</td><td>Brustkrebs-Zelllinie</td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>Amerikanische Typkultur-Kollektion ATCC&nbsp;</td><td>HTB-26</td><td>Brustkrebs-Zelllinie</td></tr><tr><td>RPMI 1640 mittel</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Hoher Glukose&nbsp;</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>11964-092</td><td>4,5 g/L Glukose</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>11039-021</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotikum/Antimykotikum</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>15240-062</td><td>100 U/ml Penicillin, 100 & Mikro; g/mL Streptomycin und 0,25 &micro; g/mL Fungizone</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Pferdeserum</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>16050114</td><td></td></tr><tr><td>0,05 % Trypsin-EDTA 1X</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>25300-062</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1X (phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td>) <td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF)</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15 (1,00 mg)</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>I1882-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>H088-5G</td><td></td></tr><tr><td>Choleratoxin Vibrio cholerae</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>C8052-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel&nbsp;</td><td>Corning Inc</td><td>356237</td><td>Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) Maussarkom, extrazellulärer Matrixextrakt, Lagerung bei -20 ° G; C bis zur Verwendung bei 4°; C</td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>PeproTech</td><td>300-03</td><td></td></tr><tr><td>MCP-1</td><td>PeproTech</td><td>300-04</td><td></td></tr><tr><td>RANTES</td><td>PeproTech</td><td>300-06</td><td></td></tr><tr><td>IL-8</td><td>PeproTech</td><td>200-08</td><td></td></tr><tr><td>IL-1&beta;</td><td>PeproTech</td><td>200-01B</td><td></td></tr><tr><td>Kristallviolett</td><td>Hycel M&eacute; xico</td><td>541</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Transwell permeable Stützen (Einsätze)</td><td>Corning Inc</td><td>3422</td><td>6,5 mm Durchmesser, 8 & Mikro; M Porengröße/24-Well-Platten&nbsp;</td></tr><tr><td>Transwell permeable Stützen (Einsätze)</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>140620</td><td>6,5 mm Durchmesser, 0,4 & Mikro; M Porengröße/24-Well-Platten&nbsp;</td></tr><tr><td>Monozyten-Isolationskit II für Menschen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-153</td><td></td></tr><tr><td>LS Säulen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>Humanes Zytokin/Chemokin Magnetic Bead Panel Kit 96 Well Plate Assay</td><td>EMD Millipore</td><td>HCYTOMAG-60K</td><td></td></tr><tr><td>Magpix mit xPonent Software (laserbasierte fluoreszierende analytische Testinstrumente)</td><td>Luminex Corporation</td><td>40-072</td><td></td></tr><tr><td>Lab-Tek Kammerobjektträger mit Abdeckung (8 well)</td><td>Nalge Nunc International</td><td>177402</td><td></td></tr><tr><td>Glasboden Mikrowelle 35mm Petri&nbsp; Schalen</td><td>MatTek Corp.</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr></tbody></table>

analyse der kommunikation zwischen monozyten und primären brustkrebs-zellen in einer extrazellulären matrix (ecme) extrahieren-basiertes dreidimensionales system

Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract (ECME)-based Three-dimensional System

Eingebettet in die extrazelluläre Matrix (ECM), normale und neoplastische epitheliale Zellen eng mit hämatopoetischen und nicht blutbildenden Zellen so stark beeinflussen Normalgewebe Homöostase und Krankheit Ergebnis kommunizieren. Bei Brustkrebs spielen Tumor-assoziierten Makrophagen (TAMs) eine entscheidende Rolle im Krankheitsverlauf, Metastasierung und Wiederholung; Daher ist es wichtig zur Bekämpfung der Krankheit, Verständnis der Mechanismen des Monocyte Chemoattraction Tumor Mikroumgebung und deren Wechselwirkungen mit Tumorzellen. Hier bieten wir eine detaillierte Beschreibung eines dreidimensionalen (3D) Kokultur Systems von menschlichen Brustkrebszellen (BrC) und menschlichen Monozyten. BrC-Zellen produziert hohe basale geregelten auf-Aktivierung, normale T-Zelle ausgedrückt und abgesondert (RANTES), Monocyte Lockstoffgradient Protein-1 (MCP-1) und Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierende Faktor (G-CSF), während in Kokultur mit Monozyten, Pro-inflammatorische Zytokine Interleukin (IL) -1 Beta (IL-1β) und IL-8 wurden zusammen mit Matrix-Metalloproteinasen (MMP)-1, MMP-2 und MMP-10 bereichert. Dieser Tumor Stroma Mikroumgebung gefördert Widerstand gegen Anoikis in MCF-10A 3D Azini-ähnliche Strukturen, Chemoattraction von Monozyten und Invasion der aggressiven BrC Zellen. Die hier vorgestellten Protokolle bieten eine kostengünstige Alternative zur Intra-Tumor Kommunikation studieren und sind ein Beispiel für das große Potenzial, das in-vitro- 3D Zellsysteme bereitstellen, um die Besonderheiten der Tumorbiologie im Zusammenhang mit Tumor zu verhören Aggression.

Morphologische Analyse des BrC Zellen in 3D Kulturen:
Die Morphologie des primären BrC Zellen wachsen in 3D Kulturen bei niedrigen und hohen dichten wurde über 5 Tage untersucht. Während der ersten 48 Std. Zellen halten die ECME und eine geringe Dichte zu erhalten. Zu diesem Zeitpunkt kann deutlich gewürdigt werden, dass Zellen eine längliche Spindel-ähnliche Form, einige mit zwei oder mehr langen zytoplasmatisc...

Hier beschreiben wir eine dreidimensionale Kultur-Methode, um die Morphologie des primären Brustkrebs-Zellen, sowie deren direkte/indirekte Wechselwirkungen mit Monozyten und die Ergebnisse wie Kollagen-Abbau, Immunzelle Rekrutierung, Zelle studieren analysieren Invasion, und Förderung der Krebs-in Verbindung stehenden Entzündung.

Analyse der Kommunikation zwischen Monozyten und primären Brustkrebs-Zellen in einer extrazellulären Matrix (ECME) extrahieren-basiertes dreidimensionales System

Embedded in the extracellular matrix (ECM), normal and neoplastic epithelial cells intimately communicate with hematopoietic and non-hematopoietic cells, ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, die direkte und indirekte Kommunikation zwischen primären Brustkrebszellen und Monozyten in einem dreidimensionalen Co-Kultursystem zu untersuchen. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen in der entzündlichen Mikroumgebung des Brustkrebsbereichs zu beantworten, z. B. wie Immunzellen abgebaut und aktiviert werden, wie diese Zellen dazu beitragen, die entzündliche Mikroumgebung des Tumors aufrechtzuerhalten und wie diese Mikroumgebung die Invasion von Tumorzellen erleichtert. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine erschwingliche Alternative zur Untersuchung der Intratumorkommunikation darstellt und das Potenzial von in vitro 3-D-Zellsystemen für die Abfrage spezifischer Merkmale der Tumorbiologie veranschaulicht.Insbesondere solche, die mit Tumoraggression zusammenhängen. Kultivieren Sie zunächst zweimal 10 bis sechs U937- und THP1-Monozyten in 10 Millilitern RPMI1640 Medium, ergänzt mit 10 Prozent FBS und einem Prozent Antibiotikum, Antimykotikum. Kultivieren Sie auch frische PMs in ergänztem DMEMF12 Medium.Inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius in einer befeuchteten Umgebung mit fünf Prozent Kohlendioxid. Platte viermal 10 bis zum fünften Monozyten in einen Milliliter pro Vertiefung des entsprechenden Mediums. Legen Sie in jede Vertiefung einen Einsatz und geben Sie 900 Mikroliter der viermal 10 zur fünften BrC-Zellsuspension in das entsprechende Medium.Inkubieren Sie die Kulturen fünf Tage lang bei 37 Grad Celsius in einer befeuchteten Umgebung mit fünf Prozent Kohlendioxid und bergen Sie die Überstände. Entnahme der Zellen durch Trypsinisierung, wenn eine anschließende Analyse durchgeführt wird. Fügen Sie Kontrollen einzelner Zellkulturen mit den jeweiligen Medien hinzu.Um BrC-Zellen und Monozyten vor der Zellkultur mit kommerziell erhältlichem Cumerin und Rhodamin zu markieren, bereiten Sie eine Monoschicht von zwei mal 10 bis zur sechsten BrC-Zellen von Interesse vor und ersetzen Sie das Standardmedium durch ausreichende, vorgewärmte Arbeitslösung des Fluoreszenzfarbstoffs. Inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius in einer befeuchteten Umgebung mit fünf Prozent Kohlendioxid für 30 Minuten. Aspirieren Sie dann die Farbstofflösung und verwenden Sie ausreichend XPBS, um die Zellen vorsichtig zu spülen.Aspirieren Sie das PBS und fügen Sie das Standardmedium hinzu. Um die Zellen zu trypsinisieren, geben Sie zwei Milliliter 05 Prozent Trypsin und 0,48 millimolare EDTA in den Kolben und inkubieren Sie die Zellen fünf bis 10 Minuten lang bei 37 Grad Celsius. Fügen Sie 200 Mikroliter FBS hinzu, um die Trypsinisierung zu stoppen, und sieben Milliliter des entsprechenden Mediums ohne Zusätze.Suspendieren Sie die Zellen durch Pipettieren, übertragen Sie dann 10 Mikroliter der Zellen in eine Nuebauer-Kammer und zählen Sie sie. Als nächstes pelletieren Sie die Zellen fünf Minuten lang bei 430-facher g-Temperatur und Raumtemperatur, verwerfen Sie dann den Überstand und verwenden Sie drei Milliliter vorgewärmte Fluoreszenzfarbstoff-Arbeitslösung, um die Zellen wieder zu suspendieren. Inkubieren Sie die Zellsuspension bei 37 Grad Celsius in einer befeuchteten Umgebung mit fünf Prozent Kohlendioxid für 30 Minuten.Nachdem Sie die Zellen erneut pelletiert haben, entsorgen Sie die Farbstoffarbeitslösung und verwenden Sie fünf bis sieben Milliliter eines XPBS, um die Zellen vorsichtig wieder zu suspendieren. Nachdem Sie die Zellen erneut pelletiert und das PBS verworfen haben, suspendieren Sie die Zellen wieder in fünf bis sieben Millilitern Standardmedium. Zählen Sie 10 Mikroliter der Zellsuspension.Richten Sie eine Co-Kultur ein, indem Sie genügend ECME auf den Boden des Wells verteilen, um in jedem Well eines Schiebesystems mit vier Kammern eine gleichmäßige Schicht zu bilden. Platte 20 Mikroliter einer Einzelzellsuspension, die fünf mal 10 bis fünfte markierte BrC-Zellen pro Vertiefung enthält. Nach 15 bis 20 Minuten bei 37 Grad Celsius wird eine Suspension von 2,5 mal 10 zu den fünften markierten Monozyten in 80 Mikrolitern Testmedium gegeben, die mit 60 Prozent ECME ergänzt sind.Lassen Sie die ECME 15 bis 20 Minuten lang bei 37 Grad Celsius erstarren. Geben Sie nun einen Milliliter einer Eins-zu-Eins-Mischung aus den BrC-Zellen und dem Monozyten-Kulturmedium hinzu. Inkubieren Sie die Co-Kulturen bei 37 Grad Celsius in einer befeuchteten Umgebung mit fünf Prozent Kohlendioxid für 24 Stunden, 48 Stunden oder fünf Tage, um Veränderungen zu verschiedenen Zeitpunkten zu verfolgen.Um die EZM-Proteine abzubauen und die Zellen aus den Kulturen zu gewinnen, aspirieren und verwerfen Sie das Medium und geben Sie dann 0,5 Milliliter eines XPBS mit 0,1 Prozent Trypsin und 0,25 Prozent EDTA in die Kultur. Inkubieren Sie die Zellen drei Stunden lang bei 37 Grad Celsius. Nach der Inkubation fügen Sie 0,5 Milliliter eines XPBS mit 10 Prozent FBS hinzu, um das Trypsin zu neutralisieren, und resuspendieren Sie die Zellen durch kräftiges Pipettieren, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten.Nach dem Pelletieren der Zellen wird der Überstand verworfen und die Zellen in fünf Millilitern eines XPBS mit 10 Prozent FBS wieder suspendiert. Wiederholen Sie diesen Schritt einmal. Prüfen Sie die Zellsuspension mit dem entsprechenden Gerät einem Fax.Stellen Sie sicher, dass die Endpopulationen zu mindestens 95 Prozent rein sind. In jeder Vertiefung eines Objektträgersystems mit acht Vertiefungskammern wird eine 40-Mikroliter-Base ECME verteilt und 30 Minuten lang bei 37 Grad Celsius erstarren gelassen. Keimen Sie 800 MCF10 A-Zellen pro Well in 400 Mikroliter ergänztem DMEM F12-Kulturmedium gemäß dem Textprotokoll.Fügen Sie dann 400 Mikroliter konditioniertes Medium hinzu oder ergänzen Sie DMEM F12-Kulturmedium mit 20 Nanogramm pro Milliliter humanem rekombinantem IL1 beta. Setzen Sie den Objektträger in eine Petrischale aus Glas ein, in der sich eine 35-Milliliter-Petrischale befindet, die mit zwei Millilitern PBS gefüllt ist. Die MCF 10A-Zellen sollten in jeder Vertiefung sehr langsam ausgesät werden, um eine Beschädigung der ECME-Basis zu vermeiden und zu verhindern, dass sich die Zellen absetzen und ein Monoly bilden.Mit einem optischen Mikroskop wird die Bildung von Drüsenacini alle 24 Stunden für 14 Tage aufgezeichnet. Nach 14-tägiger Kultivierung werden 100 Mikroliter 100 nanomolare Proben in ein XPBS gegeben und die Proben 25 Minuten lang bei Raumtemperatur unter ständigem Rühren inkubiert. Spülen Sie die Proben mit einem XPBS bei Raumtemperatur, dreimal für jeweils fünf Minuten unter ständigem Rühren.Verwenden Sie zum Einbetten der Präparate ein Eindeckmedium, das speziell für die Fluoreszenzfärbung geeignet ist. Versiegeln Sie dann die montierten Proben mit transparenter Politur und bewahren Sie die Objektträger bei vier Grad Celsius lichtgeschützt auf. Vadim Perez, ein Forscher des National Laboratory of Advanced Microscoping, wird das Verfahren im konfokalen Mikroskop demonstrieren.Analysieren Sie die Acini mit einem konfokalen Mikroskop, indem Sie Bilder von transversalen Stapeln in verschiedenen Tiefen der Acini aufnehmen. Visualisieren Sie verschiedene zelluläre Proteine in den Acini mit den richtigen Färbeprotokollen. Zum Beispiel wurde hier Caheren gefärbt, um die Zell-zu-Zell-Adhäsion, die Zellpolarität und die orale Bildung zu beurteilen.Die Morphologie von primären BrC-Zellen, die in 3D-Kulturen bei niedriger und hoher Dichte wachsen, wurde über fünf Tage untersucht. Während der ersten 48 Stunden haften die Zellen mit einer länglichen Spindelform an der ECME und bilden nach fünf Tagen gestrickte Strukturen. Nach fünf Tagen in 3D-Co-Kulturen bildeten sowohl MCF7- als auch MDA-MB-231-kommerzielle BrC-Zellen unorganisierte Aggregate.Aggressive MDA-MB-231-Zellen eignen sich jedoch für Aggregate mit länglichen Formen, während nicht-aggressive MCF7-Zellen für Aggregate mit abgerundeten Formen verwendet werden, die dichter verdichtet sind als MDA-MB-231-Zellen. Die Überstände aus primären 3D-BrC-Kulturen mit indirekter Interaktion und ihre fünftägigen Co-Kulturen mit primären Monozyten wurden geerntet. Signifikant erhöhte Spiegel von IL1 beta und IL8 wurden in den primären BrC-Zell-Monozyten-Cokulturen beobachtet.Beides sind wichtige und entzündliche Zytokine, die bisher mit malignem Fortschreiten in Verbindung gebracht wurden. MCF10A-Zellen wurden mit zwei verschiedenen Überständen aus zwei primären BrC-Zelllinien kultiviert, um die Lumenbildung als Maß für die Resistenz gegen Anoykis zu beobachten. Im Gegensatz zu MCF10A-Zellen, die unter Standardbedingungen gezüchtet wurden, zeigen die bikonfokalen Schnitte der Sphäroide am Tag 14, dass MCF10A-Zellen der Anoykis entgingen, gemessen durch Zählen der Anzahl der zentralen Zellen in den Acini.Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Methoden wie die medizinische Analyse durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten. Testen Sie die Signalwege bei beiden Krebsmigrationen. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Tumormikroumgebungen, um die Kommunikation von Brustkrebszellen mit Massenzellen, Fibroblasten, Neutrofilen oder sogar verschiedenen Klonen von Tumorzellen in 3D-Co-Kultursystemen zu erforschen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie ein 3D-Kultursystem zur Modellierung der Tumormikroumgebung einrichten können.

analyzing-communication-between-monocytes-primary-breast-cancer-cells

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Wir haben 3D-Kokultur-Modelle für Live-Cell-Imaging entwickelt in Echtzeit von Interaktionen zwischen Brust-Tumor-Zellen und andere Zellen in ihrer Mikroumgebung, die Einfluss auf Progression zu einem invasiven Phänotyp. Diese Modelle können als Bildschirme für präklinische Arzneimittel auf parakrine-induzierte proteolytische, Chemokin / Zytokin-und Kinase-Signalwege in Invasivität-Ziels dienen.

MAME Modelle für die 4D-Bildgebung lebender Zellen von Tumor: Mikroumgebung Wechselwirkungen, die Einfluss auf maligne Progression

Eine einfache Methode ist für die Analyse von Auswirkungen von Fibroblasten aus dem Bindegewebe auf verbundene Epithelzellen beschrieben. Die Kombination dieser Verfahren und dreidimensionalen Gewebekultur Analyse von Zellen nach der Isolierung aus 3D zu erleichtern. Die Technik ist für Zellen unterschiedlicher maligne Potential, so dass systematische Untersuchung der Wirkungen von Tumor-assoziiertem Stroma auf Tumorzellen.

Isolierung von Brustepithelzellen aus dreidimensionalen Mixed-Zelle Spheroid Co-Kultur

Dieses Video beschreibt die 3D-Co-Kultur von Brustkrebszellen mit Monozyten, um ihre Interaktion in einer auf extrazellulären Matrixextrakt (ECME) basierenden Umgebung zu untersuchen. Diese Methode hilft bei der Untersuchung spezifischer Merkmale wie Kollagenabbau, Rekrutierung von Immunzellen und Zellinvasion.

3D-Co-Kultur mit direkter Interaktion: Co-Kultivierung von Krebszellen mit Monozyten, um deren Interaktion zu untersuchen

In Standardkulturverfahren, Zellen aus ihrer physiologischen Umgebung genommen und auf die Kunststoffoberfläche einer Schale gezüchtet. Um das Verhalten von primären humanen Knochenmarkzellen untersuchen wir eine 3-D-Kultur-System, wo Zellen unter Bedingungen rekapituliert die native Mikroumgebung des Gewebes gewachsen erstellt.

Eine dreidimensionale Zellkulturmodell zu primären humanen Knochenmark und seine Malignome Studieren

Dieser Artikel enthält detaillierte Methoden für die Verwendung von dreidimensionalen (3D-) Assays auf Brustkrebszellinvasion zu quantifizieren. Insbesondere diskutieren wir die Verfahren erforderlich, um solche Tests einrichten, Quantifizierung und Datenanalyse, sowie Methoden, um den Verlust der Membranintegrität, die bei Zellen eindringen tritt zu untersuchen.

Quantifizierung der Brustkrebs-Zelle Invasivität Mit einem Drei-dimensionale (3D) Modell

Wir demonstrieren eine Methode zur Erzeugung von 3D-Brustkrebs-Surrogaten, die mit einem Perfusionsbioreaktorsystem kultiviert werden können, um Sauerstoff und Nährstoffe zu liefern. Nach dem Wachstum werden Surrogate fixiert und zu Paraffin verarbeitet, um die interessierenden Parameter zu bewerten. Die Auswertung eines solchen Parameters, der Zelldichte, wird erläutert.

Herstellung und Analyse von<em&gt; In Vitro</em&gt; Three Dimensional Mammakarzinoms Surrogates

Wir haben einen durchlässigen mikroporösen Membraneinsatz angepasst, um die Tumormikroumgebung (TME) nachzuahmen. Das Modell besteht aus einer gemischten Zellkultur, ermöglicht die vereinfachte Generierung hochangereicherter individueller Zellpopulationen ohne Verwendung von Fluoreszenzmarkierung oder Zellsortierung und ermöglicht die Untersuchung der interzellulären Kommunikation innerhalb der TME unter Normal- oder Stressbedingungen.

Ein Mimic des Tumor-Microenvironment: Eine einfache Methode für Enriched Zellpopulationen Generierung und Untersuchung der interzellulären Kommunikation

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Isolierung des gesamten, intakte Maus Milchdrüsen um Ausdruck der extrazellulären Matrix (ECM) und duktale Morphologie zu untersuchen. Maus #4 Bauch-Drüsen wurden von ca. 8-10 Wochen alten weiblichen nulliparous Mäusen, in neutral gepuffertem Formalin fixiert, geschnitten und gefärbt mit Immunohistochemistry für ECM Proteine extrahiert.

Isolierung von intakt, ganze Maus Milchdrüsen zur Analyse der extrazellulären Matrix Ausdruck und Drüse Morphologie

Der Zweck der hier vorgestellten Methode ist es, zu zeigen, wie Mikroumgebungsmikroarrays (MEMA) hergestellt und verwendet werden können, um die Auswirkungen von Tausenden von einfachen kombinatorischen Mikroumgebungen auf den Phänotyp kultivierter Zellen abzufragen.

Verwendung von Mikroarrays zur Vernehmung von Mikroumweltauswirkungen auf zelluläre Phänotypen bei Krebs

Dieses Protokoll beschreibt den Aufbau eines mikrophysiologischen In-vitro-Systems zur Untersuchung von Brustkrebs unter Verwendung von primärem menschlichem Brustgewebe mit Handelsmaterialien.

Modellierung von Brustkrebs im menschlichen Brustgewebe mit einem mikrophysiologischen System

Erfahren Sie, wie ein 3D-Kokultursystem die Kommunikation zwischen primären Brustkrebszellen und Monozyten analysiert. Diese Methode untersucht Kollagendegradation, Immunzellrekrutierung und Tumorinvasion.

Analyse der Kommunikation zwischen Monozyten und primären Brustkrebs-Zellen in einer extrazellulären Matrix (ECME) extrahieren-basiertes dreidimensionales System (Video) | JoVE Journal

Analyse der Kommunikation zwischen Monozyten und primären Brustkrebs-Zellen in einer extrazellulären Matrix (ECME) extrahieren-basiertes dreidimensionales System

Weitere Videos entdecken