Name: Unter Verwendung der modifizierten T-Maze um Funktionsgedächtnis Ergebnisse nach Herzstillstand zu bewerten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Erfahren Sie die modifizierte T-Maze-Methode zur Bewertung von Lernen und Gedächtnis nach zerebraler Ischämie durch Herzstillstand. Dieses einfache Verfahren ermöglicht zuverlässige Messungen von Kurzzeitgedächtnisdefiziten bei Nagetieren.

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Diese Arbeit wurde unterstützt durch die nationalen Institute der Gesundheit/National Institute of Neurological Disorders und Schlaganfall gewähren 1R01NS096225-01A1, gewährt der American Heart Association AHA-13SDG1395001413, AHA-17GRNT33660336, AHA-17POST33660174, die Louisiana State University Grant in Aid Research Council, The Malcolm Feist Cardiovascular Research Fellowship und Evelyn F. McKnight Brain Institute.

Alle experimentelle Verfahren wurden gemäß den Richtlinien des National Institutes of Health durchgeführt und durch die institutionelle Animal Care and Use Committee (LSU Health Sciences Center-Shreveport) für die Nutzung der männlichen Sprague-Dawley Ratten (genehmigt 300-350 g, 9-10 Wochen alt). Ratten wurden über Nacht vor der Operation ACA gefastet.
1. T-maze Apparat Design und Umgebung
Hinweis: Basieren Sie das T-maze-Design die Diakon und Rawlins' 2006 Modell31.
<ol><li>3D-Struktur des Labyrinths mit SketchUp32zu entwerfen. Um eine 3D-Struktur von der T-maze zu erstellen, konstruieren Sie die Start-Arm mit einer Außenlänge von 200 mm, breite 165 mm und Höhe von 148 mm passt in die Druckereien Dimensionen des 3D-Druckers. Verwenden Sie eine Wandstärke von 5,5 mm und 8 mm Bodendicke.</li>
	<li>Das Labyrinth mit einem 3D Drucker zu drucken (siehe Tabelle der Materialien)32. Wenn ein 3D-Drucker im Labor nicht verfügbar ist, verwenden Sie andere Materialien wie Holz, mitteldichte Holzfaserplatte oder einem Kunststoff (z. B. Polyvinylchlorid), die aus Baumärkten erworben werden können.<ol>
<li>Aufgrund von Höhenbeschränkungen im Druckbereich, konstruieren die Wände des Labyrinths in zwei separaten 3D-Drucke und gemeinsam bei der Labyrinth-Montage (d. h. eine zweite Wandhöhe wurde hinzugefügt, um die Labyrinth-Abschnitt auf der Höhe von 140 mm für eine gesamte Wandhöhe von 280 mm erhöhen). Jede separate 3D print-Basis enthalten eine "T" Form Verriegelungsmechanismus, wo verbunden einem Abschnitt zum nächsten.</li>
		<li>Erstellen Sie an der Kreuzung der Anfangsarm mit dem Ziel Wappen einen 165-mm breiten Abschnitt um die Breite des Start-Arm mit der Ziel-Waffen beizutreten. Konstruieren Sie die Ziel-Arme mit einem ähnlichen Design-Methode als die Anfangsarm; jedoch verringern Sie die Breite des Armes bis 100 mm pro das Design der Diakon und Rawlins.</li>
		<li>Detaillierten Schaltplan/Abmessungen der T-maze finden Sie in Abbildung 1 .</li>
		<li>Fügen Sie eine zentrale Partition in das Design an der Kreuzung des Anfangsarm und der Ziel-Arme. Verlängern Sie diese Partition aus der hinteren Wand der T-maze und 200 mm in den Start-Arm, die Ziel-Arme aufzuteilen. Diese Partition erweitert auch die Höhe des Labyrinths (Abbildung 1).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. asphyktisch Herzstillstand (ACA)
<ol><li>Autoklaven chirurgische Instrumente (121 ° C für 15 Minuten) vor Beginn der Operation. Desinfizieren Sie dem OP-Tisch von 70 % Ethanol zu 15 min. rasieren Tierhaare am Ort der Operation. Tragen Sie eine Betadine Lösung um Oberflächen für chirurgische Operation Haut auf.</li>
	<li>Anesthetization
	<ol>
<li>Ratten mit 4 % Isofluran und 30: 70 Mischung aus O2 und N2O (300 mL/min O2 und 700 mL/min N2O) per Maske zu betäuben.</li>
		<li>Geben Ratten Endotracheale Intubation für mechanische Lüftung (nach Intubation, wurden Ratten an ein Beatmungsgerät angeschlossen).</li>
		<li>Pflegen Sie Anästhesie durch Senkung der Isofluran von 4 % auf 2 % mit einer 30: 70-Mischung aus O2 und N2O. Verwendung der Pinch-Response-Verfahren auf die Tiefe der Narkose zu bestimmen.</li>
		<li>Tragen Sie Salbe auf Augen, Trockenheit während der Narkose zu verhindern. Regulae die Körpertemperatur durch ein Nagetier Heizkissen mit einer Analsonde als Temperatur Referenz.</li>
	</ol></li>
	<li>Endotracheale intubation
	<ol>
<li>Legen Sie die Ratte in der Induktion-Kammer. Betäuben Sie die Ratten mit 4 % Isofluran und 30: 70 Mischung aus O2 und N2O.</li>
		<li>Entfernen Sie die Ratte aus der Induktion-Kammer. Ort narkotisierten Tier in Rückenlage mit der Ratte Gesicht in Richtung der Anästhesie-Maske.</li>
		<li>Sanft bewegen Sie die Zunge in Richtung entweder links oder rechts des Tieres mit dem linken Daumen und Zeigefinger.</li>
		<li>Gleiten Sie einen 14er flexible intravenöse Katheter (49 mm langen) über eine stumpfe Spitze 17-Gauge Pipettieren Nadel (93 mm lang mit 10-Grad-Winkel an der Spitze der Nadel). Setzen Sie die 17-Gauge stumpfe Spitze Pipettieren Nadel in die Luftröhre.</li>
		<li>Ziehen Sie vorsichtig heraus das Pipettieren 17-Gauge-Nadel von der Luftröhre. Den 14-Gauge-Katheter-Hub an das Beatmungsgerät anschließen. Ventilator Schlagvolumen zu 0,67 mL/100 g und Atemfrequenz von 60 Atemzüge/min einstellen.</li>
		<li>Kopf und Körper Temperatur bei 37 ° C während des gesamten Verfahrens durch ein Nagetier Heizkissen mit Analsonde als Referenz Temperatur zu halten.</li>
	</ol></li>
	<li>Femoralen arteriellen und venösen Katheterisierung
	<ol>
<li>Rasieren Sie, Haare in der Nähe des leisten-(beide Seiten) und wenden Sie Betadine Oberflächen für den operativen Betrieb der Haut an.</li>
		<li>Die Ratte in der Rückenlage gelegt. Machen Sie einen Schnitt (10 mm) in der leisten-Gegend mit Chirurgische Scheren.</li>
		<li>Trennen Sie das Bindegewebe durch stumpfe Spitze Pinzette, bis der inguinalen Ligamentum ausgesetzt ist. Verwenden Sie eine Gefäßklemme, um leisten-Ligament zu erfassen. Die Femoral Arterie und Vene werden unterhalb der inguinalen Ligament.</li>
		<li>Verwenden Sie stumpfe Spitze Pinzette, um das Bindegewebe zu trennen, bis die Femoral Arterie und Vene freigelegt werden.</li>
		<li>Trennen Sie vorsichtig den femoralen Nerv führt entlang der Femoral Arterie über feine Spitze Pinzetten. Sorgfältig trennen die Femoral Arterie und Vene als Einheit über feine Spitze Pinzetten.</li>
		<li>Verwenden Sie feine Spitze Pinzette, um die Femoral Arterie aus der Vene zu trennen.</li>
		<li>Legen Sie 2 Stücke von 5-0 Seide Naht (eine in Richtung das Bein und der andere zum Körper hin) in die Vene.</li>
		<li>Knoten Sie einen losen seitlich am Körper. Verwenden Sie eine Gefäßklemme, halten und ziehen den Faden so weit wie möglich auf den gegenüberliegenden Seiten des Körpers.</li>
		<li>Verknoten Sie auf der Seite in der Nähe das Bein locker. Halten Sie und ziehen Sie den Faden in Richtung das Bein über eine Gefäßklemme erlauben die Vene mit Blut zu füllen.</li>
		<li>Machen Sie einen kleinen Schnitt in die Vene (ca. 0,1 mm) durch Mikro-sezieren Schere (in einem 45°-Winkel). Genießen Sie Blut mit steriler Gaze.</li>
		<li>Legen Sie eine stumpfe Spitze Nadel Spritze (gefüllt mit Kochsalzlösung mit 20 U/mL Heparin) auf einen PE-50-Katheter. Füllen Sie den PE-50-Katheter mit Kochsalzlösung mit 20 U/mL Heparin. Schneiden Sie in einem 45°-Winkel erstellen Sie einen Punkt oder scharfe Ende den PE-50-Katheter mit Dissektion Schere. Verwenden Sie stumpfe Spitze Pinzette an um das Ende des Katheters PE-50 zu halten. PE-50-Katheter vorsichtig in die femoral Ader einfügen</li>
		<li>Nachdem der Katheter vollständig eingeführt ist, verwalten Sie langsam 0,1 mL Heparin/Kochsalzlösung um sicherzustellen, dass es kein Leck. Knoten Sie fest Naht (Single-Knoten), PE-50 Katheter zu stabilisieren. Halten Sie die PE-50-Katheter für die kontinuierliche intravenöse (IV) Injektion von verschiedenen Drogen.</li>
		<li>Verwendung eine 1 mL Spritze verbunden mit einem 23 gauge Luer-Stub-Adapter, Vecuronium Bromid (0,67 mg/kg, verwaltet alle 10 Minuten) zu verwalten über die femoral Ader, die Ratte während des Verfahrens zu immobilisieren.</li>
		<li>Legen Sie 2 Stücke von 5-0 Seide Naht (eine in Richtung das Bein und der andere zum Körper hin) unter der Arterie.</li>
		<li>Verknoten Sie auf der Seite in der Nähe das Bein locker. Verwenden Sie eine Gefäßklemme, halten und ziehen den Faden so weit wie möglich auf das Bein.</li>
		<li>Knoten Sie einen losen seitlich am Körper. Halten Sie und ziehen Sie den Faden in Richtung des Körpers über einen Gefäßklemme erlauben die Arterie mit Blut zu füllen.</li>
		<li>Machen Sie einen kleinen Schnitt in der Arterie (ca. 0,1 mm) durch Mikro-sezieren Schere (in einem 45°-Winkel).</li>
		<li>Legen Sie eine stumpfe Spitze Nadel Spritze (gefüllt mit Kochsalzlösung mit 20 U/mL Heparin) auf einen PE-50-Katheter. Füllen Sie den PE-50-Katheter mit Kochsalzlösung mit 20 U/mL Heparin. Schneiden Sie den PE-50-Katheter mit Dissektion Schere in einem 45-Grad-Winkel erstelle ich ein Punkt oder Sharp End. Verwenden Sie stumpfe Spitze Pinzette an um das Ende des Katheters PE-50 zu halten. Verwenden Sie stumpfe Spitze Pinzette an um das Ende des Katheters PE-50 zu halten. Den PE-50 Katheter vorsichtig in die Femoral Arterie einfügen</li>
		<li>Nachdem der Katheter vollständig eingeführt ist, langsam zurückziehen der Spritze um sicherzustellen, dass diese Katheter funktionsfähig ist. Knoten Sie fest Naht (Single-Knoten), PE-50 Katheter zu stabilisieren. Halten Sie den PE-50-Katheter für die kontinuierliche Aufnahme von arteriellen Druck und Blut Gasen.</li>
	</ol></li>
	<li>Asphyktisch Herzstillstand (ACA) Verfahren
	<ol>
<li>Passen Sie physiologische Parameter (z. B. pO2, pCO2, Blutdruck und pH-Wert an) nach Bedarf durch Modulation Schlagvolumen, O2 oder N2O Ebenen. Verwenden Sie normalen physiologischen Bereich dieser Parameter: pO2: 100 MmHg, pCO2: 35-40 MmHg, Blutdruck: 100 MmHg und pH: 7.4.</li>
		<li>Verwenden Sie eine 1 mL Spritze verbunden mit einem 23 Gauge Luer Stub Adapter Vecuronium Bromid (0,67 mg/kg, I.V.) über femoral Ader zu verwalten und warten auf 2 min. Stellen Sie sicher, dass der Blutdruck ist oder rund 100 MmHg vor der Durchführung der ACA.</li>
		<li>Apnoe (6 min) durch den Endotrachealtubus (14-Guage Katheter Hub) vom Beatmungsgerät trennen zu induzieren. Weitere blockieren Sie den Endotrachealtubus durch eine 1 mL Spritze um komplette Apnoe zu gewährleisten. Hinweis: Die 6-minütiger Asphyxie-Zeit bezeichnet den Zeitraum zwischen Beatmungsgerät Trennung und dem Beginn der Reanimation. Komplette Herzstillstand ist definiert als eine arterielle Mitteldruck niedriger als 10 MmHg.</li>
		<li>Während der letzten Minuten der Apnoe einstellen Sie Atemfrequenz des Ventilators auf 80 Atemzüge/min und erhöhen Sie O2 , 2 L/min mit 0 % N2O. Diese Aktion werden alle verbleibenden Isoflurane oder N2O bleiben im Beatmungsgerät ausblasen.</li>
		<li>min nach Apnoe, entfernen 1 mL Spritze aus den Endotrachealtubus. Schließen Sie den Endotrachealtubus an den Ventilator.</li>
		<li>Verwendung eine 1 mL Spritze verbunden mit einem 23 gauge Luer-Stub-Adapter zu Epinephrin (0,005 mg/kg, I.V.) über femoral Ader verwalten und administrieren manuelle Herzdruckmassage durch den Daumen, zeige- und Mittelfinger auf das Tier Brust mit leichten kreisenden Bewegungen auf das x und z-Achse (200/min) bis Rückkehr der spontanen Zirkulation (arterielle Mitteldruck ≥ 50 MmHg)33,34,35.</li>
		<li>Verwendung einer anderen 1 mL Spritze verbunden mit einem 23 gauge Luer-Stub-Adapter, Natriumbicarbonat (1 mmol/kg, I.V.) über femoral Ader sofort nach Rückkehr in die spontane Zirkulation zu verwalten (50 MmHg oder höher)33,34, 35 , Respiratorische Azidose zu lindern.</li>
		<li>Maßnahme Blut Gase wieder 10 min nach Reanimation zu bestimmen, den Säure-Basen-Status (pH-Wert nach ACA sollte ca. 7,35 um 7.40)</li>
		<li>Verwenden Sie eine Gefäßklemme Femoral Arterie und Vene einspannen. Entfernen Sie langsam und sanft arterielle und venöse Katheter mit stumpfe Spitze Pinzette. Verbinden Sie Femoral Arterie/Vene mit einer 5-0 Seide Naht um Blutungen zu verhindern. Schließen Sie die Haut über der Operationsstelle mit einer 3: 0 Seide Naht. Verwenden Sie die unterbrochene Box-Technik, um die Chancen der Wunde Wiedereröffnung zu minimieren.</li>
		<li>Warten Sie, bis die Ratte selbst (in der Regel 30 min bis 60 min nach Reanimation) atmet, trennen Sie die Ratte vom Beatmungsgerät und entfernen Sie vorsichtig den Endotrachealtubus.</li>
		<li>Ort der Ratte in den Baby-Inkubator (27 ° C, 50 % Luftfeuchtigkeit) über Nacht. Weiche Speisen (hergestellt durch Einweichen in Wasser) und Wasser in den Brutkasten Baby über Nacht.</li>
		<li>Die Ratte in den einzelnen Käfig zu übertragen und die Ratte in Tierhaus mit regelmäßigen Chow und Wasser zurück. T-Maze Tests beginnen 3 Tage nach der ACA.</li>
	</ol></li>
</ol>(3) T-maze
<ol><li>
Tierische Vorbereitung
	<ol>
<li>Behandeln Sie am Tag vor der Operation (Schein oder ACA), jede Ratte für 5 Minuten. Heben Sie nie Ratten aus ihrem Käfig (480 mm x 250 mm x 200 mm, Kunststoff transparent Käfig) wenn Handhabung (Abbildung 2).</li>
		<li>Nach dem Umgang mit der Ratte, sanft abholen die Ratte seinen Schwanz mit einer Hand mit der anderen Hand unterstützt seine "Beine. Lassen Sie sie von der Hand in den Käfig (100 mm Höhe) 5 Mal springen. Jede Ratte ist in einzelne Käfige zu trennen, damit sie nicht für Lebensmittel und/oder Kampf dominieren werden.</li>
		<li>Übertragen Sie drei Tage nach dem Schein oder ACA-Chirurgie (Abbildung 2), die Ratten mit dem Käfig in einen ruhigen und dunklen Raum vor dem Start des ersten Laufs. Nur eine low-Power-Schreibtischlampe schalten Sie und legen Sie sie an der Ecke der Testraum, Mindestbeleuchtung beizubehalten. Lassen Sie die Ratte Anpassung an Dunkelheit für 10 min.</li>
		<li>Durchführen Sie alle Experimente, am Nachmittag um eventuelle Auswirkungen der Tagesgang auf Ratten Performance zu vermeiden. Raten Sie den Bediener nicht auf die Ratte erhielt Schein oder ACA Operation.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Spontane Wechsel
	<ol>
<li>Verteilen Sie eine dünne Schicht von Betten (~ 10 mm dick), um die gesamte Etage des Labyrinths zu decken. Legen Sie dann die Ratte am Start Arm (unten auf der "T"), ist der Ausgangspunkt eines jeden ausgeführt und erlauben jedem Ratte 3 min, die Ziel der rechten oder linken Arm zu erkunden.</li>
		<li>Sobald die Ratte zu einem bestimmten Ziel Arm begeht (alle vier Pfoten der Ratte eingegeben haben den Ziel-Arm), blockieren der "T"-Kreuzung zwischen Start-Arm und den gegnerischen Ziel (Abbildung 1) zu verhindern, dass die Ratte in das gegnerische Tor-Arm. Lassen Sie die Ratte im Labyrinth für 30 Sekunden, dann holen Sie die Ratte und legen Sie es zurück in seinen Käfig für eine minimale Zeit (~ 30 Sekunden). Entfernen Sie dann die "T"-Kreuzung (125 mm X 230 mm X 65 mm, gemacht von einem 3D-Drucker) aus der T-maze zu blockieren.</li>
		<li>Legen Sie die Ratte am Start Arm und wiederholen Sie 3.2.2. Wechsel ist definiert als: Wenn die Ratte betritt den gegenüberliegenden Arm im Vergleich zu den vorherigen laufen36. Haben Sie Ratten 4 Fahrten pro Tag wie folgt durchführen: 1St laufen 2Nd laufen 10 min Pause 3rd Lauf 4th ausgeführt</li>
		<li>Ändern Sie die Bettwäsche in der 10-min-Pause und zwischen Tieren, Duft Vorurteile zu beseitigen. Reinigen Sie die T-maze mit 75 % Ethanol, gefolgt von destilliertem Wasser am Ende des experimentellen täglich.</li>
		<li>Wiederholen Sie die Schritte 3.2.1. -3.2.4. zwei weitere Tage (12 läuft insgesamt) wie in Abbildung 2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Wechsel-Rate und Seite Präferenz Berechnung
	<ol>
<li>Berechnen Sie die Abwechslung und die % Seite bevorzugt, wo L: die Ratten wählen Sie den linken arm R: die Ratten wählen Sie den rechten arm Wahl zu korrigieren: die 2Nd laufen unterscheidet sich von der 1St in einer gegebenen Menge (jedes Set enthält zwei Läufen) Falsche Wahl: die Ratten wählen den gleichen Arm, ähnlich wie bei der vorherigen Ausführung <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56694/56694eq1.jpg"> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56694/56694eq2.jpg"> Beispiel: Tag 1: L L / L L Tag 2: L L / L-R Tag 3: R L / L L Wechsel: 2 (richtige Entscheidungen) 6 (total Sätze durchgeführt) * 100 = 33,33 % Seite Präferenz: 10 (L, bevorzugte Seite) 12 (total Läufe durchgeführt) * 100 = 83,33 %</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Postoperative Pflege:
	<ol>
<li>Geben Ratten Buprenorphin (0,01 mg/kg IP) alle 12 Stunden für 2 Tage nach der Operation. Beobachten Sie Ratten für bis zu 1 h nach Herzstillstand.</li>
		<li>Legen Sie Ratten auf den Ventilator und Heizkissen, bis es ausreichend Bewusstsein zur Aufrechterhaltung der sternalen liegen wiedererlangt hat. Um die Körpertemperatur der Tiere nach der Operation zu erhalten, legen Sie die Ratte in einem Baby-Inkubator (eingestellt bei 27 ° C, 50 % Luftfeuchtigkeit).</li>
		<li>Bieten Sie weiche Chow (hergestellt durch Einweichen in Wasser) für Tiere für die ersten 24 h nach der Operation. Wären die Ratten nicht Trinkwasser, verwalten bakteriostatische Kochsalzlösung (100 mL/kg/Tag, i.p.), bis das Tier erholt sich und Trinkwasser frei.</li>
		<li>Geben Sie die Ratten topisches Antibiotikum mit Schmerzlinderung (Bacitracin und Lidocain-Salbe) auf alle Wunden. Verschieben Sie Ratten wieder in die Tierstation, nachdem sie vollständig zu erholen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Euthanasie-Methode
	<ol>
<li>Verwenden Sie 5 % Isofluran und 100 % N2O, die Tiere am Ende des Experiments einzuschläfern.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

In der vorliegenden Studie im Vergleich zu Deacon und Rawlins Protokoll31wurden Änderungen vorgenommen. Der 3D-Drucker wurde verwendet, um die T-maze zu bauen. Der 3D-Druck bietet erschwingliche und kostengünstige Alternativen zu kommerzialisierten T-maze. Um Ratten Angst während des Tests zu reduzieren, wurde die T-maze in den dunklen Raum mit Mindestbeleuchtung durchgeführt. Sobald die Ratte einem der Arme Ziel eingegeben, blockiert wir sanft den gegnerischen Arm. Dies vermeidet möglich Stress T...

Laut der American Heart Association (2017), Herzstillstand (CA)-induzierte Mortalität tritt alle vier Minuten und wirkt sich auf mehr als 400.000 Menschen pro Jahr in den Vereinigten Staaten1. Es ist gut dokumentiert, dass CA dazu führen, neuronale Hirnschädigung infolge unzureichender Blut Perfusion2,3,4 dass kann. CA-induzierten-Hirn-Trauma auftritt in der Ischämie-Sensitive CA1-Region des Hippocampus5,6,7, die Neuronen, die für lernen und Gedächtnis8,9von entscheidender Bedeutung sind, 10,11,12. Darüber hinaus spielt der Verlust der dendritischen Spine Stromdichte, ischämischen Bedingungen im Hippocampus (d.h. CA1 Neuronen), eine entscheidende Rolle in räumliche Gedächtnis Beeinträchtigung13,14,15. Aufgrund dieser pathologischen Veränderungen nach CA Verhaltens Störungen wie: Angst, Depression, posttraumatische Belastungsstörung und Gedächtnisverlust kommen häufiger. Zwar gab es Fortschritte in der Medizintechnik (d.h. effiziente ambulante Dienst), die mit verbesserter CA-Überlebensraten korrelieren, scheitern die meisten neuroprotektive Behandlungen (mit Ausnahme von Hypothermie) zur Verbesserung der funktionellen Ergebnisse nach CA16 ,17. CA Überlebenden in der Regel haben eine schlechte Qualität des Lebens, und sind mit zusätzlichen medizinischen16Ausgaben belastet.
Kognitiven Status Bewertungen für zerebrale Ischämie über Verhaltensstörungen Tests sind wichtig für beide Wirksamkeit von Medikamenten zu bestimmen und letztlich eine erfolgreiche klinische Studie zu entwickeln. In den 1940er Jahren entwarf Edward Tolman die erste Verhalten-Studie, Hippocampus-basierte räumliche Gedächtnis18zu studieren. Anschließend wurden verschiedene Labyrinthe (d. h. Morris Wasser-Irrgarten, radiale Labyrinth, T oder Y-Labyrinth, und Barnes Labyrinth) entwickelt, um hippocampal-basierte räumliche lernen und Gedächtnis bei Ratten19,20,21,22 bewerten ,23. Eines der gängigsten Verhaltens Test ist der Morris-Wasser-Irrgarten, der räumlichen Lernens untersucht und Speicher in der Ratte Modelle24. Der Morris-Wasser-Irrgarten erfordert jedoch die Ratte zu schwimmen und volle Motorik und Kontrolle ausüben. Für Ischämie Experimente wie das Modell asphyktisch Herzstillstand (ACA, einem Rattenmodell der CA) Kanülierung der Femoral Arterie/Vene müssen wichtige Blutdruck, Blutgase und Einführung von verschiedenen Drogen zu erhalten. Der Morris-Wasser-Irrgarten sind möglicherweise nicht das geeignetste, kognitive Beeinträchtigungen unter ACA zu testen, da Femoral Arterie/Vene Kanülierung Bein Mobilität Rendern die Ratte Fähigkeit, richtig zu schwimmen hemmen kann.
Das Barnes Labyrinth ist der anderen weit verbreiteten Verhaltens Test, räumliche lernen und Gedächtnis bei Nager-Modelle zu prüfen. Das Barnes Labyrinth erfordert keine Anstrengung der vollen motorischen Funktion und Kontrolle, und damit weniger belastend als Morris Wasser-Irrgarten. In der Vergangenheit führten wir Experimente mit dem Barnes Labyrinth um festzustellen, ob lernen/Funktionsgedächtnis Unterschiede zwischen auftreten Kontrolle oder Schein versus ACA-induzierte Ratten. Die Daten erhalten, für das Barnes Labyrinth nicht die Auflösung testen kognitive Beeinträchtigungen nach leichten bis moderaten ACA, da das Barnes Labyrinth weit verbreitet ist, Messen Sie Referenz (langfristig) Speicher25,26, zwar ACA-induzierte neurokognitive Defizite mehr eng mit arbeiten (kurzfristig) Speicher27,28,29,30 darauf hindeutet, dass das Barnes Labyrinth weniger rentabel für die Beurteilung der Memory-Funktion in unseren ACA Modell.
Wir haben somit eine modifizierte T-maze mit spontanen Wechsel Test auszuwertende arbeiten (Kurzzeitgedächtnis) nach ACA entwickelt. Modifizierter T-maze spontane Wechsel Test Hauptvorteil ist seine Einfachheit und minimale Belastung auf die Ratten im Vergleich zu anderen Verhaltensstörungen Tests, da die modifizierte T-maze keine tierischen Vorbildung als auch so schwer rechnerische erfordert Analyse oder Sub-Routinen (d.h. video Imaging der Ratte) je nach Bedarf durch den Morris Wasser-Irrgarten und Labyrinth Barnes. Hier zeigen wir, dass die modifizierte T-maze spontane Wechsel Test eine einfache und doch hoch effiziente Verhaltens Testversion Paradigma, die bieten genügend Auflösung genau zu erkennen und bewerten hippocampal Funktion in Krankheiten, die Verlust des phosphoreszierenden Gedächtnisses führen (d. h. ACA).

<table><tbody><tr><td>3D-Drucker</td><td>MakerBot</td><td>Replicator</td><td></td></tr><tr><td>3D-Drucker Filament</td> der fünften Generation <td>Hatchbox</td><td></td><td>PLA, 1,75 mm Filamentdurchmesser</td></tr><tr><td>200 Proof Pure Ethanol</td><td>Koptec</td><td>V1005SG</td><td></td></tr><tr><td>Sani-Chips</td><td>PJ Murphy-Forest Produkte</td><td></td><td>Größe: 8 bis 20 mesh; 2,2 Kubikfuß/Packung; autoklavierbare Beutel</td></tr><tr><td>Rat</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Sprague-Dawley</td><td></td></tr><tr><td>Vecuroniumbromid</td><td>Sun Pharmaceutical</td><td>47335-931-40</td><td>10 mg</td></tr><tr><td>Adrenalin</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>42023-103-01</td><td>Adrenalinchlorid Lösung 1 mg/ml, 1:1000</td></tr><tr><td>Buprenorphin Hydrochlorid Injektion</td><td>Pfizer</td><td>00409-2012-32</td><td>0,3 mg/ml</td></tr><tr><td>SketchUp</td><td>Trimble Inc.</td><td></td><td>3D-Modellierungssoftware</td></tr><tr><td>VentElite Small Animal Ventilator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>55-7040</td><td>Tiere in der Größe von der Maus bis zum Meerschweinchen (10 g bis 1 kg)</td></tr><tr><td>PowerLab 8/35</td><td>Adinstruments</td><td>PL3508</td><td>8 analoge Eingangskanäle &ndash; 4 davon können im Differenzialmodus verwendet werden.</td></tr><tr><td>Bio Amps</td><td>Adinstruments</td><td>FE132</td><td>Der Bio Amp ist ein galvanisch getrennter, leistungsstarker differentieller Bioverstärker, der für die Messung unterschiedlichster biologischer Signale wie EKG-, EMG- und EEG-Aufzeichnungen optimiert ist.</td></tr><tr><td>Quad-Brückenverstärker</td><td>Adinstruments</td><td>FE224</td><td>Ein vierkanaliger, nicht isolierter Brückenverstärker, der für den Anschluss des PowerLab an die meisten DC-Brückenwandler entwickelt wurde.</td></tr><tr><td>LabChart 8</td><td>Adinstruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ABL80 FLEX CO-OX Blutgasanalysator</td><td>Radiometer</td><td></td><td>pH / p CO2 / p O2</td></tr><tr><td>SURFLO Teflon-IV-Katheter</td><td>Terumo</td><td>sc-361556</td><td>Verwenden Sie nur den flexiblen dünnwandigen Katheter (49 mm lang)</td></tr><tr><td>Pipet-/Infusionsnadel</td><td>Hamilton</td><td>7748-03</td><td>Kaliber 17; 93 mm lang; 10-Grad-Winkel</td></tr><tr><td>Classic T3 Vaporizer</td><td>SurgiVet</td><td>VCT302</td><td>Classic T3 Isofluran Trichterfüllung</td></tr><tr><td>ENVIRO-PURE Aktivkohlekanister</td><td>SurgiVet</td><td>32373B10</td><td>Entwickelt zur Aufnahme von Anästhesieabfällen</td></tr><tr><td>O2 Einzel-Durchflussmesser</td><td>SurgiVet</td><td>32375B1</td><td>0-1000 mL</td></tr><tr><td>N2O Durchflussmesser</td><td>VetEquip</td><td>401721</td><td>0-4LPM</td></tr><tr><td>Clay Adams Intramedic Luer-Stub Adapter (steril)</td><td>Becton Dickinson</td><td>427565</td><td>23 Gauge</td></tr><tr><td>Mikropinzette</td><td>Schwarz und schwarz chirurgisch</td><td>B3FRC-18 RM-8</td><td>7 1/4" (18 cm), 8mm RH, Gegengewicht mit Führungsstift 2mm, Plattform 6 x .3 mm, gebogen.</td></tr><tr><td>Halstead Moskito-Pinzette</td><td>Roboz</td><td>RS-7111</td><td>gebogen; 5" Länge, 1,3 mm Spitzendurchmesser, 2,1 mm Maulbreite</td></tr><tr><td>Mixter Pinzette</td><td>Roboz</td><td>RS-7291</td><td>5,25" gebogen Extra zart, 1,1 mm Spitzen</td></tr><tr><td>Castroviejo Mikro-Präparierfederschere</td><td>Roboz</td><td>RS-5650</td><td>Gerade, scharfe Spitzen; 9 mm Schneide; 0,15 mm Spitzenbreite; 3 1/2" Gesamtlänge</td></tr><tr><td>Mayo-Stille Schere</td><td>Roboz</td><td>RS-6891</td><td>5,5" Runde gebogene</td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinzette</td><td>Roboz</td><td>RS-5058</td><td>45 Grad Dumoxel Spitze Größe .10 x .06 mm</td></tr><tr><td>Olsen-Hegar Kombination Scheren- und Nadelhalter</td><td>Roboz</td><td>RS-7884</td><td>Kreuz Verzahnung; 5,5" Länge</td></tr><tr><td>Moloney Pinzette</td><td>Roboz</td><td>RS-8254</td><td>gezahnt; Leichte Kurve; 4,5" Länge</td></tr></tbody></table>

unter verwendung der modifizierten t-maze um funktionsgedächtnis ergebnisse nach herzstillstand zu bewerten

Utilizing the Modified T-Maze to Assess Functional Memory Outcomes After Cardiac Arrest

Hintergrund: Bewertung leichte bis moderate kognitive Beeinträchtigung in einem globalen zerebralen Ischämie (d.h. Herzstillstand) Modell kann wegen schlechten Fortbewegung nach der Operation sein. Z. B. Ratten, die chirurgische Eingriffen unterzogen werden und unterliegen der Morris-Wasser-Irrgarten zu schwimmen, möglicherweise nicht so stornieren das Experiment.
Neue Methode: Wir etabliert einen veränderten Verhaltens spontane Wechsel-T-maze-Test. Der große Vorteil des modifizierten T-maze-Protokolls ist seine relativ einfaches Design, das stark genug, um lernen/Funktionsgedächtnis nach Ischämie zu bewerten ist. Darüber hinaus ist die Datenanalyse einfach und unkompliziert. Wir haben die T-maze bestimmen, die Ratten lernen/Gedächtnisdefizite sowohl in das Vorhandensein oder Fehlen von leicht bis mittelschwer (6 min) asphyktisch Herzstillstand (ACA). Ratten haben eine natürliche Tendenz zur Exploration und untersuchen die Alternative Arme in der T-maze, während hippocampal lesioned Ratten neigen dazu, anzunehmen, eine Seite-Präferenz führt verringerte spontane Wechsel Verhältnisse, enthüllt die hippocampal-bezogenen Lernen/Funktionsgedächtnis in das Vorhandensein oder Fehlen von ACA.
Ergebnisse: ACA Gruppen haben höhere Seite Preference-Verhältnisse und unteren Wechsel im Vergleich zur Kontrolle.
Vergleich mit bestehenden Methode(n): The Morris Wasser und Barnes Labyrinth sind prominenter zur Beurteilung lernen/Memory-Funktion. Der Morris-Wasser-Irrgarten ist jedoch mehr Stress als andere Labyrinthe. Das Barnes Labyrinth ist weit verbreitet, Referenz (Langzeit-) Speicher, zu messen, während ACA-induzierte neurokognitive Defizite zu arbeiten (Kurzzeitgedächtnis) näher verwandt sind.
Fazit: Wir haben eine einfache, aber effektive Strategie, um abzugrenzen, arbeiten (Kurzzeitgedächtnis) über die T-maze in unserem globalen zerebralen Ischämie-Modell (ACA) entwickelt.

ACA (globalen zerebralen Ischämie) verursacht vor allem arbeiten (kurzfristig) Speicher Defizite28,29. Um die Funktion von lernen und Gedächtnis nach ACA zu bewerten, haben wir den modifizierten spontane Wechsel Test auszuwertende arbeiten (kurzfristig) Speicher30verwendet. Ergebnisse aus spontanen Wechsel Test deuten darauf hin, dass der Wechsel von drei aufeinander folgenden Tagen in der ACA-Gruppe (26,19...

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung einer modifizierten T-maze lernen/Funktionsgedächtnis in Asphyxie Herzstillstand-induzierte zerebraler Ischämie zu bewerten.

Unter Verwendung der modifizierten T-Maze um Funktionsgedächtnis Ergebnisse nach Herzstillstand zu bewerten

Background: Evaluating mild to moderate cognitive impairment in a global cerebral ischemia (i.e. cardiac arrest) model can be difficult due to poor ...

Das übergeordnete Ziel dieses modifizierten T-Labyrinths ist es, funktionelles Lernen und Gedächtnis nach Herzstillstand induzierter zerebraler Ischämie zu evaluieren. Diese modifizierten Teamkollegen können helfen, die Funktion des Hippocampus bei Krankheiten zu beantworten, die Kurzzeitgedächtnisdefizite verursachen, wie z. B. Herzstillstand. Der große Vorteil des modifizierten T-Labyrinths ist sein relativ einfaches Design.Das ist leistungsfähig genug, um das funktionelle Lerngedächtnis nach Ischämie zu messen. Darüber hinaus ist die Datenanalyse einfach und unkompliziert. Da ein asphyxialer Herzstillstand hauptsächlich zu Defiziten des Kurzzeitgedächtnisses führt, kann das modifizierte T-Labyrinth auch auf andere Erkrankungen des zentralen Nervensystems angewendet werden, die zu Defiziten des Kurzzeitgedächtnisses führen.Wie Alzheimer-Krankheit, Parkinson-Krankheit und transitorische ischämische Attacke. Passen Sie nach der femoralen, arteriellen und venösen Katheterisierung die physiologischen Parameter nach Bedarf an, indem Sie das Schlagvolumen, den Sauerstoff- oder Lachgasspiegel modulieren. Verwenden Sie dann eine Ein-Milliliter-Spritze, die mit einem 23-Gauge-Köder-Stub-A

utilizing-modified-t-maze-to-assess-functional-memory-outcomes-after

Research

Forschung

JoVE Journal

Behavior

Verhalten

Cognitive Impairment, die aus der strahlentherapeutischen Management von Hirntumoren stellt eine klinisch hartnäckigen Bedingung, dass schädliche Auswirkung auf die Lebensqualität. Die Fähigkeit, kritisch zu bewerten potenzieller Interventionen zur Besserung Strahlung induzierten kognitiven verringert, hängt letztlich von der Fähigkeit, rigorose quantitative Einschätzungen der Erkenntnis zu unternehmen.

Quantifizierung Kognitive Dekrementiert von Cranial Strahlentherapie verursachten Schäden

Dieser Artikel stellt das Protokoll von T-Labyrinth-Tests unter Verwendung eines modifizierten automatisierte Vorrichtung zur Beurteilung der Lern-und Gedächtnis-Funktionen bei Mäusen.

T-Labyrinth Erzwungener Wechsel und die Links-Rechts-Discrimination Aufgaben für die Beurteilung der Arbeitsbedingungen und Referenz-Gedächtnis bei Mäusen

Das achtarmige radiale Wasserlabyrinth wurde entwickelt, um die Referenz- und Arbeitsgedächtnisleistung gleichzeitig zu bewerten, indem von den Probanden verlangt wird, Extra-Labyrinth-Signale zu verwenden, um Fluchtplattformen zu lokalisieren und die Einschränkungen zu beheben, die bei landgestützten radialen Armlabyrinth-Designs beobachtet wurden.

Verwendung eines achtarmigen radialen Wasserlabyrinths zur Beurteilung des Arbeits- und Referenzgedächtnisses nach einer Hirnverletzung bei Neugeborenen

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die räumliche Wahrnehmung bei Nagetieren zu untersuchen. Das Doppel-H-Wasserlabyrinth ist ein neuartiger Test, der besonders nützlich ist, um die verschiedenen Komponenten des Lernens, der Konsolidierung und des Gedächtnisses sowie das Zusammenspiel der Gedächtnissysteme aufzuklären.

Die Doppel-H Maze: A Robust Verhaltenstest für Lernen und Gedächtnis in Nagetiere

Um die komorbiden Alzheimer-Krankheit (AD) und Schlaganfall Zustand in einem neuen Modell zu untersuchen, werden drei Verhalten Aufgaben beschrieben, die sowohl die Motorsteuerung und kognitive Verhalten beurteilen. Zu diesen Aufgaben gehören die Strahl zu Fuß Aufgabe, Zylinder Aufgabe und Morris-Wasserlabyrinth.

Motor und Hippokampus-Dependent Spatial Learning und Referenz-Gedächtnis-Bewertung in einem transgenen Mausmodell der Alzheimer-Krankheit mit Schlaganfall

Hier stellen wir ein Protokoll für einen mausspezifischen Test der Kognition vor, der kein Schwimmen erfordert. Dieser Test kann verwendet werden, um kontrollierte kortikale Auswirkungen-induzierte traumatische Hirnverletzung Mäuse von Scheinkontrollen erfolgreich zu unterscheiden.

Beurteilung der räumlichen Gedächtnisstörung in einem Mausmodell der traumatischen Gehirnverletzung unter Verwendung eines Radialwasserlaufstreifens

Traumatische Hirnverletzungen (TBI) sind häufig mit Gedächtnisstörungen verbunden. Hier stellen wir ein Protokoll zur Bewertung des räumlichen Arbeitsgedächtnisses nach TBI über eine metrische Aufgabe vor. Ein Metriktest ist ein nützliches Werkzeug, um räumliche Arbeitsgedächtnisstörungen nach TBI zu untersuchen.

Ein metrischer Test zur Beurteilung des räumlichen Arbeitsgedächtnisses bei erwachsenen Ratten nach traumatischer Hirnverletzung

Dieses Protokoll beschreibt das Modell der transienten fokalen zerebralen Ischämie bei Mäusen durch intraluminalen Verschluss der mittleren Hirnarterie. Darüber hinaus werden Beispiele für die Ergebnisbewertung mit Hilfe von Magnetresonanztomographie und Verhaltenstests gezeigt.

Transienter mittlerer Hirnarterienverschluss Modell des Schlaganfalls

Die meisten Verhaltensexperimente für Nagetiere wurden ursprünglich für Ratten entwickelt. Aufgrund der Verhaltensunterschiede zwischen Ratten und Mäusen sind bei Mäusen manchmal Modifikationen erforderlich. Wir stellen eine Methode vor, um das räumliche Arbeitsgedächtnis bei Mäusen zu testen und den Stress während der Arbeitsgedächtnisaufgabe zu minimieren.

Eine appetitive räumliche Arbeitsgedächtnisaufgabe für Mäuse in einem halbautomatischen 8-Arm-Radiallabyrinth, die die ängstliche Gedächtnisassoziation im Labyrinth reduziert

Dieses Manuskript beschreibt ein Morris Water Maze (MWM) Protokoll, das auf die Verwendung mit einem häufig verwendeten Mausmodell der Alzheimer-Krankheit zugeschnitten ist. Das MWM wird häufig in transgenen Mausmodellen eingesetzt. Die Implementierung eines Verfahrens, das empfindlich auf die Hintergrundbelastung des Mausmodells reagiert, ist für die Erkennung von Gruppenunterschieden unerlässlich.

Morris Wasser-Labyrinth-Test: Optimierung für Mausstamm und Testumgebung

Erfahren Sie die modifizierte T-Maze-Methode zur Bewertung von Lernen und Gedächtnis nach zerebraler Ischämie durch Herzstillstand. Dieses einfache Verfahren ermöglicht zuverlässige Messungen von Kurzzeitgedächtnisdefiziten bei Nagetieren.

Unter Verwendung der modifizierten T-Maze um Funktionsgedächtnis Ergebnisse nach Herzstillstand zu bewerten

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