5. Januar 2018
Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung einer modifizierten T-maze lernen/Funktionsgedächtnis in Asphyxie Herzstillstand-induzierte zerebraler Ischämie zu bewerten.
Das übergeordnete Ziel dieses modifizierten T-Labyrinths ist es, funktionelles Lernen und Gedächtnis nach Herzstillstand induzierter zerebraler Ischämie zu evaluieren. Diese modifizierten Teamkollegen können helfen, die Funktion des Hippocampus bei Krankheiten zu beantworten, die Kurzzeitgedächtnisdefizite verursachen, wie z. B. Herzstillstand. Der große Vorteil des modifizierten T-Labyrinths ist sein relativ einfaches Design.
Das ist leistungsfähig genug, um das funktionelle Lerngedächtnis nach Ischämie zu messen. Darüber hinaus ist die Datenanalyse einfach und unkompliziert. Da ein asphyxialer Herzstillstand hauptsächlich zu Defiziten des Kurzzeitgedächtnisses führt, kann das modifizierte T-Labyrinth auch auf andere Erkrankungen des zentralen Nervensystems angewendet werden, die zu Defiziten des Kurzzeitgedächtnisses führen.
Wie Alzheimer-Krankheit, Parkinson-Krankheit und transitorische ischämische Attacke. Passen Sie nach der femoralen, arteriellen und venösen Katheterisierung die physiologischen Parameter nach Bedarf an, indem Sie das Schlagvolumen, den Sauerstoff- oder Lachgasspiegel modulieren. Verwenden Sie dann eine Ein-Milliliter-Spritze, die mit einem 23-Gauge-Köder-Stub-Adapter verbunden ist, um Vecuroniumbromid über die Oberschenkelvene zu verabreichen, und warten Sie zwei Minuten.
Stellen Sie sicher, dass der Blutdruck bei oder um 100 Millimeter Quecksilbersäule liegt. Induzieren Sie sechs Minuten lang Apnoe, indem Sie den Endotrachealtubus vom Beatmungsgerät trennen. Blockieren Sie den Endotrachealtubus weiter mit einer Ein-Milliliter-Spritze, um eine vollständige Apnoe zu gewährleisten.
Stellen Sie in der letzten Minute der Apnoe die Atemfrequenz des Beatmungsgeräts auf 80 Atemzüge pro Minute ein und erhöhen Sie den Sauerstoffgehalt auf zwei Liter pro Minute mit null Prozent Distickstoffmonoxid, um das verbleibende Isofluran oder Distickstoffmonoxid im Beatmungsgerät auszublasen. Entfernen Sie nach den sechs Minuten Apnoe die Ein-Milliliter-Spritze aus dem Endotrachealtubus. Schließen Sie den Endotrachealtubus wieder an das Beatmungsgerät an.
Verwenden Sie als Nächstes eine Ein-Milliliter-Spritze, die mit einem 23-Gauge-Köder-Stub-Adapter verbunden ist, um Adrenalin über die Oberschenkelvene zu verabreichen. Führen Sie manuelle Herzdruckmassagen mit Daumen, Zeige- und Mittelfinger auf der Brust des Tieres in leicht kreisenden Bewegungen auf der X- und Z-Achse durch, bis die Spontanzirkulation zurückkehrt. Verwenden Sie dann eine weitere Ein-Milliliter-Spritze, die mit einem 23-Gauge-Köder-Stub-Adapter verbunden ist, um Natriumbicarbonat über die Oberschenkelvene zu verabreichen, unmittelbar nach der Rückkehr in den spontanen Kreislauf, um die respiratorische Azidose zu lindern.
10 Minuten nach der Wiederbelebung erneut die Blutgase messen, um den Säurebasenstatus zu bestimmen. Verwenden Sie ein Hämostatmittel, um die Oberschenkelarterie und die Vene abzuklemmen. Entfernen Sie langsam und vorsichtig arterielle und venöse Katheter mit einer Pinzette mit stumpfer Spitze.
Legieren Sie dann die Oberschenkelarterie und -vene mit einer 5 O Seidennaht, um Blutungen zu vermeiden. Verschließen Sie die Haut über der Operationsstelle mit einer 3-Grad-Seidennaht mit der unterbrochenen Nahttechnik, um die Wahrscheinlichkeit einer erneuten Wundöffnung zu minimieren. Nachdem die Ratte 30 bis 60 Minuten nach der Wiederbelebung selbstständig zu atmen beginnt, trennen Sie sie vom Beatmungsgerät und entfernen Sie vorsichtig den Endotrachealtubus.
Lege die Ratte über Nacht in den Baby-Inkubator. Setzen Sie die Ratte schließlich in den Einzelkäfig um und bringen Sie die Ratte mit normalem Futter und Wasser in die Tiereinrichtung zurück. Fassen Sie am Tag vor der Operation jede Ratte fünf Minuten lang an und heben Sie die Ratte niemals aus dem Käfig, wenn Sie sie anfassen.
Dann hebst du es mit einer Hand vorsichtig am Schwanz hoch, während die andere Hand seine Beine stützt, und lässt es fünfmal von der Hand in den Käfig springen. Trennen Sie jede Ratte in einzelne Käfige, damit sie nicht dominieren, um Nahrung zu finden und/oder zu kämpfen. Bringen Sie dann drei Tage nach der Schein- oder ACA-Operation die Ratte mit dem Käfig in einen ruhigen und dunklen Raum, bevor Sie mit dem ersten Lauf beginnen.
Schalten Sie nur eine Schreibtischlampe mit geringer Leistung ein und platzieren Sie sie in der Ecke des Testraums, um eine minimale Beleuchtung aufrechtzuerhalten. Lassen Sie die Ratte 10 Minuten lang an die Dunkelheit gewöhnen. Verteilen Sie dann eine dünne Schicht Einstreu, um den gesamten Boden des Labyrinths zu bedecken, und platzieren Sie die Ratte am Startarm.
Lass jeder Ratte drei Minuten Zeit, um den rechten oder linken Torarm zu erkunden. Nachdem sich die Ratte auf einen der Torarme festgelegt hat und alle vier Pfoten der Ratte in den Torarm eingedrungen sind, verriegeln Sie die T-Verbindung zwischen dem Startarm und dem gegnerischen Torarm, um zu verhindern, dass die Ratte in den gegnerischen Torarm eindringt. Lass die Ratte 30 Sekunden lang im Labyrinth.
Hebe dann die Ratte auf und setze sie für etwa 30 Sekunden wieder in ihren Käfig. Entfernen Sie dann den T-Verbindungsblock aus dem T-Labyrinth. Setzen Sie die Ratte wieder an den Startarm und wiederholen Sie den Test, um den spontanen Wechsel zu bestimmen.
Lassen Sie Ratten vier Läufe pro Tag mit einer 10-minütigen Pause nach den ersten beiden Läufen durchführen. Wechseln Sie schließlich die Einstreu während der 10-minütigen Pause und zwischen den Tieren, um Geruchsverzerrungen zu vermeiden. Reinigen Sie das T-Labyrinth mit 75 % Ethanol, gefolgt von destilliertem Wasser am Ende eines jeden Versuchstages.
Die Ergebnisse des Spontanalternationstests deuten darauf hin, dass die Wechselrate von drei aufeinanderfolgenden Tagen in der ACA-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant niedriger war. Dies ist auf die Tatsache zurückzuführen, dass Ratten, die ACA ausgesetzt waren, im Vergleich zu Kontrollen eine erhöhte Seitenpräferenz entwickelten. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie dieses modifizierte T-Labyrinth verwenden können, um das Kurzzeitgedächtnisdefizit nach zerebraler Ischämie bei einem Nagetier zu bewerten.
Beim Versuch, dieses modifizierte T-Labyrinth zu versuchen, ist es wichtig, den gegenüberliegenden Arm vorsichtig zu blockieren, nachdem die Ratte in einen der Zielarme eingedrungen ist. Zusätzlich sollte das T-Labyrinth in einem dunklen Raum mit minimaler Beleuchtung durchgeführt werden, was die Angst der Ratte reduziert.
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Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung eines modifizierten T-Labyrinths zur Beurteilung funktionellen Lernens und Gedächtnisses nach zerebraler Ischämie, die durch einen Herzstillstand ausgelöst wurde. Die Konstruktion des modifizierten T-Labyrinths ist einfach, aber effektiv für die Messung von Gedächtnisdefiziten, die mit einer Ischämie assoziiert sind.
Die Beurteilung von kurzzeitigen Gedächtnisdefiziten in präklinischen Modellen des Herzstillstands unterstützt die Zielvalidierung für neuroprotektive Therapien. Das modifizierte T-Labyrinth bietet eine reproduzierbare, schonende Methode zur Messung hippokampal-abhängigen Arbeitsgedächtnisses und ermöglicht ein mechanistisches De-Risiko-Management in der frühen Entdeckungsphase. Dieser Ansatz erhöht die Vorhersagesicherheit bei der Bewertung von Substanzen hinsichtlich kognitiver Erholung nach Ischämie.
Das modifizierte T-Labyrinth fügt sich in die Entdeckungskontinuum von der Target-Validierung bis zur Lead-Optimierung ein, insbesondere für ZNS-Programme, die ischämische oder neurodegenerative Indikationen adressieren.