Name: Stenose der minderwertigen Vena Cava: ein Mausmodell der tiefen Venenthrombose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Lernen Sie eine chirurgische Methode zur Erzeugung einer Stenose der Vena Cava inferior bei Mäusen, die eine tiefe Venenthrombose simuliert und Mechanismen der Thrombusentstehung untersucht.

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Diese Arbeit wurde von der British Heart Foundation (PG/13/60/30406) und der University of Birmingham unterstützt.

Alle tierische Verfahren wurden von Animal Welfare ethische Review Body und das britische Innenministerium (UK, Projekt Lizenz 40/3745) genehmigt. Mäuse auf C57BL/6 Hintergrund, 8-12 Wochen alt, 19-25 g Körpergewicht beider Geschlechter dienen.
1. Tier Anästhesie
<ol>
	<li>Legen Sie eine Maus in eine Induktion Kammer und induzieren Sie Anästhesie durch eine Mischung von 5 % Isofluran mit 100 % Sauerstoff zu. Verwendung eine Fließgeschwindigkeit von 0,5 L/min. warten, bis die Maus komplett nicht mehr bewegt und von der Häufigkeit der Atmung wird selten.</li>
	<li>Entfernen Sie die Maus aus der Kammer und Rasieren Sie den Bauch mit einer elektrischen Haarschneidemaschine. Entfernen Sie Haare aus dem Bauch so gründlich wie möglich zur Vermeidung von Kontaminationen im Bauchraum.</li>
	<li>Platzieren Sie den Mauszeiger in die Rückenlage und platzieren Sie der Maus Nase in einen Kegel mit der Anästhesiesystem verbunden. Verringern Sie den Prozentsatz der Isofluran auf 2-3 % (die genaue Prozent können von Tier zu Tier abweichen). Stellen Sie sicher, dass das Tier mit seiner Atemfrequenz niedriger als üblich, aber vermeiden keuchend schläft. Tritt nach Luft schnappen, verringern Sie den Prozentsatz der Isofluran um 0,5 %.
	<ol>
		<li>Überprüfen Sie das Pedale Reflex um richtige Anesthetization bestätigen und Operation zu starten, nur wenn es negativ ist. Wenden Sie Tierarzt Salbe auf die Augen, um Trockenheit zu verhindern.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wenden Sie eine Anti-bakterizide Lösung (1 % Hibitane) auf der Maus Bauch und wischen Sie die Fläche mit einem sterilen Baumwolle Knospe in einer Weise ausgenommen mögliche erneute Kontamination an der Operationsstelle (z.B., innen nach außen ein kreisförmig). Wiederholen Sie 3 Mal.</li>
</ol>
2. Anwendung der IVC Stenose und Maus Erholung
Hinweis: Alle Instrumente sowie als Materialien (Wattestäbchen, Gaze, Kochsalzlösung usw.) kommen in Kontakt mit den OP-Bereich muss steril sein. Der Betreiber muss scheuern sich vor der Operation und sterile Handschuhe und Kleid während des Verfahrens zu tragen. Mikroskop-Griffe sollte in einer sterilen Folie umwickelt werden.
<ol>
	<li>Geben Sie Mäuse eine Anti-Schmerz-Behandlung vor der Operation und während der gesamten Probezeit. Z. B. Buprenorphin 0,1 mg/kg subkutan 30 min vor der Operation und dann alle 12 Stunden, bis das Tier eingeschläfert wird. Als Thrombose in dieser Methode ähnlich, sterile Entzündung entwickelt, vermeiden Sie die Verwendung von Anti-inflammatory Drogen als eine Prämedikation.</li>
	<li>Decken Sie die Maus mit einem sterilen Tuch ab und machen Sie ein Loch in den Faltenwurf, die Website der Chirurgie verfügbar zu machen. Mit Schere, machen Sie einen Schnitt entlang der Abdominal-Midline, 1,5 cm nach unten aus dem Brustbein. Mit Wattestäbchen exteriorize den Darm auf der linken Seite der Maus und bedecken Sie sie mit steriler Gaze getränkt in warmen (37 ° C) Kochsalzlösung um Austrocknen zu vermeiden.</li>
	<li>Identifizieren Sie die IVC und seiner Seitenäste (möglicherweise 0, 1 oder 2 von ihnen) in die kaudalen Richtung von der Website der Fusion von der IVC mit der linken Nieren Ader. Verbinden Sie alle sichtbaren Seitenäste mit 7: 0 inert Prolene Fäden als in der Nähe der IVC wie möglich.
	<ol>
		<li>Versuchen Sie nicht, die Seitenäste mit der Zange direkt, sondern vielmehr sie hochziehen, das Fettgewebe umgibt sie mit einer Pinzette in der Hand halten und machen einen Tunnel unter der Verzweigung mit der Pinzette in der anderen Hand halten. Schließen Sie nicht die hinteren Zweige.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Sie umgebenden Gewebe mit Zange halten, ziehen Sie die IVC oben und links erzeugen Spannung in dem kleinen Bereich zwischen den IVC und die Aorta genau in den Winkel zwischen der IVC und die linken Nieren-Ader. Berücksichtigen Sie, dass es praktisch unmöglich, die Aorta von IVC noch 2-3 mm unterhalb (in Richtung kaudalen) zu trennen.</li>
	<li>Verwenden unterschiedliche Bewegungen mit Zange Tipps in Ihrer rechten Hand machen ein Loch zwischen der Aorta und der IVC. Denken Sie daran, dass die weitere Bewegungen gemacht, desto höheren ist den Chance das Schiff zu beschädigen. Im Idealfall versuchen Sie, die Zahl der Flugbewegungen auf 3-5 zu minimieren.</li>
	<li>Bereiten Sie ein Blatt 7-0 inert Prolene Faden von etwa 2 cm lang. Legen Sie sie in der Maus Bauchhöhle linksseitig des Betreibers in der Nähe der IVC.</li>
	<li>Ziehen Sie die IVC oben und links wieder ein. Legen Sie Ihre richtige Zange Tipps in das Loch zwischen der Aorta und der IVC, so dass die Spitzen auf der anderen Seite von der IVC erscheinen. Nehmen Sie die Naht und ziehen Sie es wieder durch das Loch(Abbildung 3).</li>
	<li>Machen Sie einen vorläufigen Knoten mit der Naht aber nicht schließen. Platzieren Sie 30G Nadel ("Spacer") in den Knoten als Haken gebogen und jetzt schließen Sie (Abb. 3B).</li>
	<li>Entfernen Sie das Distanzstück (Abb. 3C).</li>
	<li>Den Darm zurück in die Bauchhöhle mit einem Baumwoll Knospe und verteilen sie gleichmäßig darin zurück.</li>
	<li>Peritoneum mit 6-0 Vicryl Naht mit Endlosschleifen zu schließen. Schließen Sie die ersten und letzten Schleifen als einen Knoten.</li>
	<li>Enge Haut mit Metall-Klammern.</li>
	<li>Die Maus mit 0,5 mL Warm (37 ° C) zu injizieren Glukose Kochsalzlösung subkutan, das flüssige Gleichgewicht des Organismus wiederherzustellen.</li>
	<li>Platzieren Sie den Mauszeiger in einen einzelnen Käfig Warm (25 ° C) Kammer oder Zimmern und Speisen und gel Wasser in den Käfig. Beobachten Sie, bis die Maus (in der Regel ca. 1 h) vollständig wiederhergestellt ist.</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Hier ist ein Protokoll der IVC-Stenose, die Blut fließen Verzerrung, eine wichtige auslösende Faktor für DVT, imitiert präsentiert. Stenose der IVC induziert die Entwicklung von Thromben in 65-100 % der C57BL/6 Mäusen innerhalb von 48 h und 25-50 % der Mäuse innerhalb von 2-6 h6,8,23 (Brill A, unveröffentlichte Daten, 2016). Eine große Einschränkung der Methode ist die Variabilität der Thrombus Größe24 (Abbildung 4), die nach kurzfristigen (6 h) und langfristige (48 h) IVC Stenose beobachtet wird. Die Gründe für solche Variabilität (angesichts der Tatsache, dass die gleichen Bedingungen, wie z. B. das Distanzstück Anästhesie usw. dienen) bleiben dunkel, aber man kann spekulieren, dass anatomische Unterschiede zwischen den Mäusen (z.B. Breite der IVC, Anzahl und Position der seitlichen und hinteren Zweige) unterliegen diesem Phänomen. Die Variabilität in der Größe des Thrombus macht Thrombose Prävalenz (Prozent von Mäusen mit einen Thrombus) das Hauptergebnis. Thrombose-Prävalenz kann mit Hilfe einer Kontingenztabelle und die Fishers exakter Test verglichen werden. Eines der Experimente war eine Ausnahme, wenn reduzierte Thrombus Größe mit der gleichen Thrombose-Prävalenz nach Injektion von Podoplanin-hemmende Antikörper 7beobachtet wurde.
Diese Methode ist besonders nützlich, wenn venöse Thrombose Einleitung untersucht wird. Es ermöglicht eine frühe Ereignisse in der Gefäßwand, z. B. Einstellung von Zellen, was schließlich zu Thrombose zu untersuchen. Pro oder anti thrombotic Auswirkungen von Drogen können mit Hilfe dieses Modells mit Thrombose Prävalenz wird eine primäre Ausgabe ausgewertet werden. Stenose für 48 h gilt für eine Anti-thrombotische Phänotyp zeigen, während 6 h Stenose kann verwendet werden, wenn ein Prothrombotic Phänotyp erwartet wird. Histologische Analyse der Thrombus und IVC Umfassungsmauer kann auch durchgeführt werden.
Offen bleibt die Frage, ob Seite Zweige sollten ligiert oder links patent. Eine Gruppe hat gezeigt, dass die Unterbindung der Seitenäste vergrößern nicht Thrombus und Standort von einem Seitenast näher als 1,5 mm auf die IVC Ligatur Website dramatisch beeinträchtigt Thrombus Entwicklung25. Schließung der Seitenäste kann induzieren Endothelzellen Verletzungen in ihnen und auch die Zeit der Operation26erhöhen. In unseren Händen verringert Mangel an Seite Zweig Schließung wesentlich Thrombose Prävalenz (bis zu 10-30 % nach 48 h Stenose; Brill, unveröffentlicht) und deshalb verbinden wir alle sichtbare Seitenäste.
Im Idealfall sollten stellt Steuerelemente verwendet werden, wie Mäuse, sogar auf dem gleichen Hintergrund aber aus verschiedenen Quellen etwas anders Thrombose Prävalenz haben können. Wenn die Wirkung des DVT selbst auf alle Parameter (z. B. biochemischen) studiert ist, sollte Schein betrieben Tiere verwendet werden. Sham-betrieben Mäuse unterziehen das gleiche Verfahren aber die Ligatur um die IVC locker geschlossen und ließ dort ohne Stenose zu produzieren.
Die häufigste Fehler (ein kritischer Schritt) in diesem Protokoll ist ein Versuch, der Aorta und der IVC nicht genau in den Winkel zwischen den Schiffen aber etwas niedriger, was in der Regel zu Blutungen führt zu trennen. Wenn eine massive Blutung auftritt, gute Erholung der Maus wird unwahrscheinlich und es wird empfohlen, das Experiment zu stoppen und das Tier einzuschläfern. In der Regel Mäuse gut erholen, bewegen in den Käfig und verlieren Gewicht nicht wesentlich. Wir empfehlen die Verwendung von Mäusen über 20 g für Männer und Frauen und halten Tiere (besonders Männer) in einzelne Käfige nach der Operation bis zum Ende des Experiments zu kämpfen und Verletzungen zu vermeiden. Es wurde in einem anderen (elektrolytische) Modell des DVT berichtet, dass männliche Mäuse größere Thromben als Weibchen27 produzieren. Analyse der Daten ergab nicht wesentlichen Unterschied der Thrombose-Prävalenz zwischen männlichen und weiblichen Mäusen (Brill, unveröffentlicht). Forscher sind daher aufgefordert, Experimente mit dem IVC-Stenose-Modell bei Mäusen beiderlei Geschlechts durchzuführen.
Entwirren von Fäden oder Klammern kann nicht ausgeschlossen werden, insbesondere lange Experimente (eine Woche und länger). So Mäuse sollten mindestens zweimal täglich speziell für Naht Integrität überprüft werden und ein besonderes Augenmerk sollte auf das Aussehen des Blut-Spuren auf dem Käfig-Bett.
Es sei darauf hingewiesen, dass wie jedes andere Tier Modell, Stenose der IVC seine Grenzen in Bezug auf die Übersetzung in den Menschen hat. Zum Beispiel haben murinen IVCs keine Ventile, während menschliche DVT im Inneren Venenklappen entwickelt. Menschen haben auch vertikalen Ausrichtung der Wirbelsäulen mit der Muskelpumpe wird ein wichtiger Mechanismus beschleunigen Durchblutung Venen. Im Gegensatz dazu haben Mäuse horizontalen Wirbelsäulen Ausrichtung keine Rolle des die Muskelpumpe Blut zurück zum Herzen zu unterstützen. Diese Einschränkungen sollten bei Mausdaten mit der menschlichen Krankheit Übersetzung berücksichtigt werden.

Tiefe Venenthrombose (DVT) ist die Entwicklung von Thromben in den tiefen Venen in der Regel (aber nicht nur) in Beinen. In Konjunktionen mit Lungenembolie (PE; gekennzeichnet zusammen als Venöse Thromboembolien, VTE) jährlich rund 900.000 Amerikanern entwickelt und stellt ein ernstes Gesundheitsproblem und wirtschaftliche Problem1,2. PE, eine Komplikation der Thrombose, tritt auf, wenn ein Thrombus losgelöst von seiner ursprünglichen Lage wird und erreicht die Lunge, die respiratorische Insuffizienz und zum Tod führen können. Die Zahl der Todesopfer von VTE überschreitet Sterblichkeit an AIDS, Brustkrebs Krebs und Verkehrsunfälle, kombinierte3.
Der wichtigste Faktor verursacht DVT neben ist bekannt Gründe, wie Krebs oder Trauma, der Mangel an Mobilität 4,5. Dadurch kann von Chirurgie (vor allem orthopädische), Lähmungen, Langstrecken-Flügen oder aus anderen Gründen. Blutfluss in den Venen hängt die Muskelpumpe und daher Gliedmaßen Ruhigstellung Ergebnisse in stehendes Blut fließen in Venenklappen, führt zu Thrombose. Die hier beschriebene Methode soll solche Blut fließen Verzerrung6,7zu rekapitulieren. Teilstrom-Einschränkung in der unteren Hohlvene (IVC) imitiert Bedingungen im menschlichen Venenklappen und führt zur Bildung eines Thrombus in der Struktur ähnlich wie menschliche Thromben6erstellt. Der Großteil der einen Thrombus ist rot und besteht aus roten Blutkörperchen, Fibrin und Einbeziehung der Blutplättchen. Thromben haben eine kleine "weiße Teil" bereichert in Thrombozyten (Abbildung 1), die "Lines of Zahn" in menschlichen venösen Thromben beschriebenen ähneln. Beide Teile von den Thrombus enthalten auch Neutrophile8, die gehören zu den ersten Zellen am Ort der zukünftigen Thrombus6,9eingestellt werden. Neutrophilen Granulozyten in den roten Bereich zu vertreiben Neutrophilenzahl extrazelluläre Traps (NETs), während neutrophilen Granulozyten in den weißen Teil scheinen Netze8sein. In ähnlicher Weise zu menschlichen DVT, Thrombose in den Mäusen erhöhter D-Dimer-Plasmaspiegel (Abbildung 2) begleitet. Niedermolekularen Heparin (Enoxaparin), verwendet für TVT-Prophylaxe bei Patienten, verhindert auch Thrombosen bei Mäusen. Ein wichtiger Vorteil dieser Methode ist Abwesenheit von endothelialen Denudation9, charakteristisch für menschliche DVT-10. Diese Eigenschaft macht IVC Stenose mehr klinisch relevante Modellcharakter für die DVT als beispielsweise Induktion von Thrombosen durch Eisenchlorid, induziert die endotheliale Denudation und in denen Thromben bestehen vorwiegend aus Thrombozyten11, 12,13. Ein Modell der kompletten Stillstand in der IVC wird von mehreren Teams14,15,16bevorzugt. Im Gegensatz zur Stenose, in dem Restvolumenstrom in das Gefäß gehalten wird Anwendung der Stasis vollständig stoppt der Wasserfluss und schränkt damit die Zugänglichkeit der systemisch verabreichten Stoffe, die Thrombose-Website. Auch, es scheint, dass die Mechanismen, die Thrombosen induziert durch Stenose und Stasis unterscheiden: Stenose führt zu die Entwicklung der lokalen Entzündung (Aktivierung des Endothels, Freisetzung von Weibel-Palade Körperinhalt, Rekrutierung von Immunzellen und Thrombozyten an die Gefäßwand) verursacht "Immunothrombosis"6,9,17, Stase erscheint eher Thrombose induzieren vor allem auf Gewebe Faktor und andere Koagulation beruht und Fibrinolyse-bezogene Mechanismen18,19,20. Somit reflektieren die Stenose und Stasis Modelle leicht unterschiedliche Aspekte der venösen Thrombus Entwicklung, obwohl ihre Mechanismen sicherlich überschneiden können. Elektrolytische IVC-Modell (EIM) von DVT21,22 induziert einen Thrombus nur teilweise Verschließen der Gefäßwand. Daher ist es praktisch für die Prüfung der Auswirkungen der systemischen Verabreichung von verschiedenen Medikamenten auf Thrombus Wachstum. Dieses Modell übernimmt jedoch Störungen der IVC Wand Integrität (Einfügung einer Nadel) und Induktion von Thrombosen durch elektrischen Strom macht die pathophysiologische Relevanz dieses Mechanismus zumindest fragwürdig.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 Mäuse</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 - 10 Wochen alt, Bothe Geschlechter</td></tr><tr><td>Schere</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>Schere</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 Pinzette</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Prolene Naht</td><td>Ethicon</td><td>W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl Naht</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>Wattestäbchen</td><td>Spar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Milltupfer, steril&nbsp;</td><td>Millpledge Veterinärmedizin&nbsp;</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>Tücher</td><td>Kruuse</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>Glukose Kochsalzlösung3</td><td>Tierpflege</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>Klar H20 HydroGel 98% steriles Wasser&nbsp; </td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane Vaporizer</td><td>General Anaesthetic Services</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W/W Inhalationsdampf, Flüssigkeit</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizer Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Olympus SZX10</td><td>Olymp</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stenose der minderwertigen vena cava: ein mausmodell der tiefen venenthrombose

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Tiefe Venen Thrombose (TVT) und seine verheerenden Komplikationen, Lungenembolie, sind schwere gesundheitliche Problem mit hoher Sterblichkeit. Mechanismen der Thrombusbildung in Adern bleiben dunkel. Mangelnde Mobilität (z. B.nach einer Operation oder Langstreckenflüge) ist einer der wichtigsten Faktoren führt zu DVT. Die pathophysiologische Folge der mangelnden Mobilität ist Blut fließen Stagnation der Venenklappen. Hier wird ein Modell beschrieben, das solche Strömung Störung als Thrombose-treibende Faktor nachahmt. In diesem Modell entsteht Teilstrom Einschränkung (Stenose) in der unteren Hohlvene (IVC). Schließung von etwa 90 % der IVC Lumen für 48 h ergibt sich in der Entwicklung von Thromben strukturell ähnlich wie beim Menschen. Die Ähnlichkeiten sind: (i) die meisten der Thrombus Volumen ist rot, d. h. besteht aus roten Blutkörperchen und Fibrin, Ii) das Vorhandensein eines weißen Teils (Zeilen Zahn), Iii) nicht entblößt endotheliale Monolage, iv) erhöhter D-Dimer-Plasmaspiegel und V) die Möglichkeit, zu verhindern Thrombose durch niedermolekularen Heparin. Einschränkungen beinhalten Variable Größe von Thromben und die Tatsache, dass ein bestimmter Prozentsatz von Wildtyp Mäusen (0 - 35 %) produzieren vielleicht keinen Thrombus. Neben der visuellen Beobachtung und Messung können Thromben durch nicht-invasive Technologien, wie z. B. Sonographie, sichtbar gemacht werden die für die Überwachung der Dynamik der Thrombus Entwicklung ermöglicht. In kürzer Zeitpunkte (1-6 h), intravitalen Mikroskopie kann angewendet werden, um Ereignisse (z.B. Einstellung von Zellen in der Gefäßwand) direkt beobachten vor Thrombusbildung. Verwendung dieser Methode von mehreren Teams auf der ganzen Welt machte es möglich, grundlegende Mechanismen der DVT-Initiation zu entdecken und identifizieren mögliche Ziele, die für die Prävention von Vorteil sein könnte.

Hier ist ein Modell für eine TVT induziert durch Strömung Verzerrung in der IVC beschrieben. Induktion der Stenose in der IVC initiiert Verzerrung und Stagnation des Blutflusses und nach einer Weile (in diesem Fall, 48 h) führt die Entwicklung einen Thrombus, strukturell ähnlich menschlichen DVT Thromben (Abb. 1A). Das Vorhandensein von einen Thrombus innerhalb der IVC ist optisch leicht zu erkennen (Abbildung 1B). Eine wichtige Ähnlichkeit zwischen Modell und menschlichen DVT ist erhöhter D-Dimer-Plasmaspiegel (Abbildung 2). D-Dimer ist ein Produkt von Fibrin Abbau und seine Präsenz im Blut deutet darauf hin, dass ein aktiver thrombotischer Prozess vor sich geht.
Das Modell ist in Abbildung 3-A-CSchritt für Schritt vorgestellt. Die IVC sorgfältig ausgesetzt ist, wird ein Loch zwischen die IVC und der Aorta gemacht und eine Naht (Prolene 7-0) wird durch das Loch unter der IVC gezogen. Dann ist die IVC durch die Naht über einen Abstandhalter (30 G Nadel, Abbildung 3D) ligiert, nachdem die Abstandhalter entfernt ist. Mit diesem Verfahren können etwa 90 % Schließung des IVC lumens verlassen die restliche 10 % patent. Dadurch ist Blut fließen Stagnation führt schließlich zu einer Thrombose.
Abbildung 4 zeigt den Hauptnachteil des Modells, Variable Thrombus Größe. Alles, was diese Thromben im gleichen Experiment gewonnen wurden auf Wildtyp männliche Mäuse der gleichen Herkunft, Alter und ähnliche Körpergewicht durchgeführt. Obwohl alle Mäuse Thromben (Thrombose Prävalenz von 100 %) hergestellt, variiert ihre Größe deutlich in einem breiten Spektrum.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
Abbildung 1: Repräsentative Thrombus nach 48 h Beschränkung/Stenose. (A) einen typischen Thrombus nach 48 h IVC Stenose. Hinweis: rote (Erythrozyten angereichert) und weiß (Thrombozyten angereichertem) Teile. (B) IVC mit (links) und ohne (rechts) einen Thrombus. Skalieren von Balken = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
Abbildung 2 : Erhöhte D-Dimer-Plasmaspiegel nach IVC Stenose Anwendung. Mäuse wurden IVC Stenose unterzogen. Blut abgenommen wurde, zu den angegebenen Zeitpunkten wurde, stabilisierte 1:9 mit 3,8 % Natrium-Citrat, Plasma durch Zentrifugation (2.300 x g, 5 min) und D-Dimer Ebenen wurden durch einen ELISA-Kit nach Herstellerangaben bestimmt. Kreise bestimmen Augenwischerei betrieben Mäuse, Kreuze bezeichnen IVC Stenose. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
Abbildung 3: Einschränkung/Stenose in der unteren Hohlvene (IVC) Modell der DVT bei Mäusen fließen. Aufeinander folgenden Stufen des Modells werden vorgestellt. (A) ein Loch zwischen die IVC und der Aorta erfolgt und eine Naht ist es um die IVC durchgezogen. (B) eines Knotens wird über ein Distanzstück (30 G-Nadel) geschlossen. (C) der Abstandhalter entfernt: die letzte Ansicht, die der Chirurg sieht vor dem Schließen der Maus. Die gestrichelte gelbe Linie markiert die IVC. LRV steht für linken renal Vene. Skalieren von Balken = 0,2 mm. (D) das Distanzstück (30 G-Nadel). Skalieren von Balken = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
Abbildung 4 . Variabilität der Thrombus Größe. Mäuse wurden 48 h IVC Stenose unterzogen. Vorgestellt werden Thromben im gleichen Experiment gewonnen. Skala bars 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

Wir beschreiben hier Stenose in der minderwertigen Vena Cava als ein Mausmodell der tiefen Venenthrombose. Dieses Modell rekapituliert Blut fließen Einschränkung, einer der wichtigsten Auslöser von venösen Thrombosen in den Menschen.

Stenose der minderwertigen Vena Cava: ein Mausmodell der tiefen Venenthrombose

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs ist es, eine Stenose der unteren Hohlvene zu schaffen, um eine Durchblutungsverzerrung für die Einleitung einer tiefen Venenthrombose nachzuahmen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Venenthrombose zu den Mechanismen der Entstehung tiefer Venenthrombosen zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine Durchblutungsstörung simuliert, einen Schlüsselmechanismus für die Thromboseauslösung in den Venen.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da die Trennung der unteren Hohlvene von der Aorta und das Schaffen des Lochs zwischen diesen Geweben verbal schwer zu erklären sind. Beginnen Sie damit, den Bauch einer acht bis 12 Wochen alten, betäubten 19 bis 25 Gramm schweren Maus zu rasieren und legen Sie die Maus in Rückenlage auf ein Heizkissen. Desinfizieren Sie die exponierte Haut mit einem sterilen Wattestäbchen dreimal mit einer antibakteriellen Lösung.Bestätigen Sie den angemessenen Sedierungsgrad durch fehlendes Ansprechen auf das Einklemmen der Zehen und bedecken Sie die Maus mit einem sterilen Tuch mit einem Loch über der Operationsstelle. Machen Sie unter einem Präpariermikroskop einen Schnitt entlang der Bauchmittellinie, beginnend 1,5 Zentimeter unterhalb des Brustbeins, und verwenden Sie Wattestäbchen, um den Darm auf der linken Seite des Tieres nach außen zu verlegen. Decken Sie das Darmgewebe mit steriler Gaze ab, die in 37 Grad heißer Kochsalzlösung getränkt ist.Platzieren Sie Geweberetraktoren, um den Schnitt zu erweitern und die untere Hohlvene (IVC) und ihre Seitenäste kaudal zur linken Nierenvene zu lokalisieren. Ziehe mit einer Pinzette am Fettgewebe, das die Seitenäste umgibt, nach oben und verwende dann eine zweite Pinzette, um einen Tunnel unter dem Ast zu graben. Und ligieren Sie alle Seitenäste so nah wie möglich an der IVC mit 7-0 inerten Prolene-Nähten.Halten Sie das umgebende Gewebe mit einer Pinzette fest und ziehen Sie die IVC nach oben und links, um in dem kleinen Bereich zwischen der IVC und der Aorta, genau zwischen der IVC und der linken Nierenvene, Spannung zu erzeugen. Führen Sie eine zweite Pinzette zwischen der Aorta und der IVC ein und öffnen und schließen Sie die Pinzette nicht mehr als drei- bis fünfmal, um ein Loch zu bohren. Es ist sehr wichtig, das Loch genau an der Stelle zu bohren, an der die IVC mit der linken Nierenvene zusammentrifft.Platzieren Sie mit der linken Hand ein zwei Zentimeter langes Stück 7-0 inertes Prolen-Naht in die linke Seite der Bauchhöhle, in der Nähe der IVC, und ziehen Sie die IVC nach oben und wieder nach links. Führen Sie die zweite Pinzette in das Loch zwischen der Aorta und der IVC ein, so dass die Spitzen auf der anderen Seite der IVC erscheinen, und ziehen Sie die Naht zurück durch das Loch. Machen Sie einen lockeren provisorischen Knoten und setzen Sie einen 30 Gauge Nadelabstandshalter, zu einem Haken gebogen, in den Knoten ein.Nachdem Sie den Knoten festgezogen haben, entfernen Sie den Abstandshalter und verwenden Sie ein Wattestäbchen, um den Darm wieder in die Bauchhöhle zu bringen. Verschliessen Sie das Peritoneum mit einer 6-0 VICRYL-Naht und verschließen Sie die Haut mit Metallklammern. Injizieren Sie der Maus subkutan 0,5 Milliliter 37 Grad Celsius Glucosalin.Setzen Sie dann die Maus in einen einzelnen Käfig in einer 25 Grad Celsius heißen Kammer, in der sich Futter und Gelwasser befinden, und überwachen Sie sie, bis sie sich vollständig erholt. Die Induktion einer Stenose in der IVC führt zu einer Verzerrung und Stagnation des Blutflusses, die zur Entwicklung eines Thrombus führt, der strukturell den beim Menschen beobachteten tiefen Venenthromben ähnelt und makroskopisch leicht sichtbar gemacht werden kann. Darüber hinaus wird in diesem IVC-Stenosemodell ein erhöhtes D-Dimer, ein Produkt des Fibrinabbaus, im Plasma beobachtet, was auf das Vorhandensein eines aktiven thrombotischen Prozesses hinweist, der dem beim Menschen beobachteten ähnelt.Obwohl die meisten Versuchstiere in diesem Modell Thromben produzierten, ist ein großer Nachteil die Variabilität innerhalb der Größe der Thromben, die zwischen den Tieren beobachtet wird. Einmal gemeistert, kann diese Technik in 15 Minuten abgeschlossen werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Venenthrombose, um die Mechanismen der TVT im Mausmodell zu erforschen.

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Die elektrolytische Induktion der endothelialen Aktivierung der inneren Oberfläche der Inferior Vena Cava Ergebnisse im venösen Typ Thrombusbildung durch eine endotheliale Aktivierung und teilweisen Blut-Stase, zwei Komponenten der Virchow-Trias.

Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) von Venenthrombosen

Die Maus komplette Stase Modell der unteren Hohlvene Thrombose liefert quantifizierbare Mengen Venenwand Gewebe und Thrombus. Es hat sich bewährt für die Bewertung Wechselwirkungen zwischen der Venenwand und der okklusiven Thrombus und bei der Beurteilung der Progression von akuten zu chronischen Entzündungen sinnvoll.

Maus Komplette Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombose

Nach unserer Kenntnis der zellulären und molekularen neotissue Bildung zu verbessern, wurde ein Maus-Modell der TEVG vor kurzem entwickelt. Die Transplantate wurden als infrarenalen Vena cava Zwischen Transplantate in C57BL / 6 Mäusen implantiert. Dieses Modell erzielt ähnliche Ergebnisse wie in unserer klinischen Untersuchung erreicht wird, sondern über einen weit verkürzt Zeitverlauf.

Die Implantation von Vena Cava Interposition Graft in Maus-Modell

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zum Venenthrombose mit einem Stasis-Modell zu erhalten. Darüber hinaus verwenden wir eine nicht-invasive Methode um thrombusbildung und Auflösung im Laufe der Zeit zu messen.

Tiefe Venenthrombose, induziert durch Stauung in den Mäusen durch Hochfrequenz-Sonographie überwacht

Eine aortocavale Fistel wurde durch Daspunktieren der murinen Infra-Nieren-Aorta durch beide Wände in die untere Vena cava geschaffen und es folgte die Schaffung einer Stenose in ihrem Abfluss durch partielle Ligation der unteren Vena cava. Dieses reproduzierbare Modell kann verwendet werden, um zentrale venöse Stenose zu studieren.

Murine Modell der zentralen venösen Stenose mit Aortocaval Fistel mit einem Abfluss Stenose

Dieser Artikel zielt darauf ab, eine optimierte Methode zur Beurteilung von Venenthrombosen in einem Mauskrebsmodell vorzustellen, bei der Gefäßclips verwendet werden, um eine venöse Ligatur zu erreichen. Die Optimierung minimiert die Variabilität bei thrombosebedingten Messungen und erhöht die Relevanz für krebsassoziierte Venenthrombosen beim Menschen.

Venöser Thrombose-Assay in einem Mausmodell für Krebs

Das Protokoll stellt ein Überlebensmodell für Nagetiere vor, um Venoplastik-Ballon-Eingriffe (VB) in nicht-thrombotischen, thrombotischen und postthrombotischen tiefen Venen zu testen.

Nagetier untere Vena Cava Venoplastik Ballonmodell

In diesem Video zeigen wir, das Verfahren der CD40-Aktivierung und Expansion von murinen B-Zellen aus Splenozyten von C57BL / 6 Mäusen, die als Modell-Antigen-präsentierende Zellen (APC) zur Induktion der Immunität Studie verwendet werden können.

Mausmodell der CD40-Aktivierung von B-Zellen

Murine Knochenmark-Transplantation ist eine weit verbreitete Technik, um immunologische Mechanismen für Graft-versus-Host-Krankheit beim Menschen zu studieren. Die Fähigkeit zur T-Zell-Trafficking-Muster zu...

Induktion der Graft-versus-Host-Krankheit und<em&gt; In Vivo</em&gt; T-Zell-Überwachung mit einem MHC-matched Mausmodell

Experimentelle Mausmodellen von allergischem Asthma bieten neue Möglichkeiten zur Untersuchung von Krankheitsentstehung und die Entwicklung neuer Therapeutika. Diese Modelle sind gut, um Mess-Faktoren, die die allergische Immunantwort, Entzündung der Atemwege, Lungen-und Pathophysiologie geeignet.

Mausmodell von Allergen-induzierte Asthma

Lernen Sie eine chirurgische Methode zur Erzeugung einer Stenose der Vena Cava inferior bei Mäusen, die eine tiefe Venenthrombose simuliert und Mechanismen der Thrombusentstehung untersucht.

Stenose der minderwertigen Vena Cava: ein Mausmodell der tiefen Venenthrombose

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