Name: Ein Maus-Modell der orthopädischen Chirurgie, Postoperative kognitive Dysfunktion und Geweberegeneration zu studieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Lernen Sie ein Mäusemodell orthopädischer Chirurgie mit Parabiose kennen, um postoperative kognitive Dysfunktion und Geweberegeneration im Alter zu untersuchen. Diese Methode erlaubt die Analyse von Neuroinflammation und Heilungsprozessen.

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Wir danken Kathy Gage, BS (Abteilung für Anästhesiologie, Duke University Medical Center, Durham, NC) für die redaktionelle Unterstützung. NT erkennt Unterstützung durch einen Traum-Innovation-Zuschuss von Duke Anästhesiologie und NIH/NIA R01 AG057525-01.

Alle Tierversuche wurden im Einklang mit den nationalen Instituten der Health Guide für die Pflege und Verwendung von Labortieren und genehmigt von der institutionellen Animal Care & Verwendung Committee (IACUC) an der Duke University.
(1) Versuchstiere
<ol><li>Halten Sie Mäuse in einer klimatisierten Umgebung mit 12-h-hell/dunkel-Zyklen und angemessenen Zugang zu standard Nahrung und Wasser. Haus nicht mehr als 5 Wurfgeschwistern pro Käfig, und vermeiden Sie Bedingungen, die die Kämpfe fördern könnte.</li>
	<li>Weibchen C57BL6/J Mäusen in 3 Monate alt (jung) oder 18 Monate alt (alt) verwenden.</li>
	<li>Akklimatisieren Sie für Parabiosis 2 Mäuse zusammen für mindestens zwei Wochen vor der Operation. Mäuse sind entweder Wild-Typ C57BL6/J oder eGFP +.</li>
	<li>Überprüfen Sie die Körperkondition und Gesamterscheinung der Mäuse täglich.</li>
</ol>2. präoperative Setup für Parabiosis und orthopädische Chirurgie
<ol><li>Wiegen Sie die 2 Mäuse.</li>
	<li>Allgemeinen Anästhesie über ein Anästhesiesystem mit einer konstanten O2 Flow Rate von 0,2 L/min. Einsatz 5 % Isofluran für Induktion in einer Induktion Kammer zu verwalten. Hinweis: Die Tiefe der Narkose kann mit einer Zehe Klemme bestätigt werden.</li>
	<li>Legen Sie die Mäuse auf eine beheizte in Rückenlage. Verwenden Sie eine rektale Sonde Körpertemperatur während des chirurgischen Verfahrens zu überwachen.</li>
	<li>Um Anästhesie erhalten, senken Sie die eingeatmete Konzentration von Isofluran auf 2,0 % in 0,2 L/min durch eine Gesichtsmaske. Monitor auf ausreichende Tiefe der Narkose zu gewährleisten.</li>
	<li>Physiologische Parameter (Atemfrequenz, Sauerstoffsättigung und Herz schlagen) nicht-invasiv mit einer Pulsoximeter (optional)zu überwachen.</li>
</ol>3. Parabiosis Chirurgie (Protokoll 1A)
<ol><li>Analgesie zu verwalten (Buprenorphin, SR/langsam loslassen, 0,1 mg/kg subkutan) nach Induktion und vor chirurgischen Manipulation. Bupivacain (0,25 %) an den Flanken kurz vor dem Öffnen zu injizieren. Wenden Sie Auge Schmiermittel. Hinweis: Das Parabiosis-Protokoll kann unabhängig von der tibiale Fraktur durchgeführt werden.</li>
	<li>Verwenden Sie für alle internen Körper Nähen 4-0 Polydioxanon Nahtmaterial. Verwenden Sie für alle externen vernähen Polypropylen Nahtmaterial 4-0.</li>
	<li>Rasieren Sie die 2 Mäuse entlang einer zusammenhängenden Linie von den Ellenbogen, die Flanke und das Knie auf der Seite verbunden werden. Mit Jod desinfizieren + 70 % Alkohol Haut Scheuern über 3 wechselnden Zyklen in der Vorbereitung für Schnitt. Verwendet autoklaviert Instrumente und pflegen einen sterilen Bereich. Hinweis: Der Wildtyp Maus auf der rechten Seite der eGFP Maus und der linken Flanke der Wildtyp Maus und die Rechte Flanke der eGFP Maus für Chirurgie (Abbildung 1) vorbereiten.</li>
	<li>Verwenden Sie auf jede Maus eine Schere, um einen Hautschnitt entlang der Flanke, proximal bis zum Knie, nur proximal bis zum Ellenbogen und ohne zu stören die Muskeln unter der Haut bis hin zu machen.</li>
	<li>Begleiten Sie die Trizeps der Tiere mit 2 unterbrochenen Nähten.</li>
	<li>Begleiten Sie die Wände entlang der Flanken mit einer laufenden, kontinuierliche Naht 7-9 Pässe.</li>
	<li>Begleiten Sie die Quadrizeps des Tieres mit 2 unterbrochenen Nähten.</li>
	<li>Schließen Sie die Haut von den 2 Parabionts mit unterbrochenen Nähten.</li>
	<li>Lassen Sie die Mäuse in der Umgebungsluft zu wecken.</li>
	<li>Um Erfolg dieses Protokolls zu gewährleisten, die Gesundheit der Paare einzuhalten: überwachen Sie die Paare täglich; durchführen Sie körperliche Verfassung erzielte zweimal wöchentlich; und wiegen die Paare zweimal in der Woche. Hinweis: Jedes Paar ist einzeln untergebracht. Hinweis: Wenn regelmäßige Buprenorphin (dh nicht SR/slow Release) verwenden dann verwalten Sie 0,1 mg/kg subkutan in 1 mL Kochsalzlösung pro Maus zweimal täglich für 3 Tage.</li>
	<li>Lassen Sie 4 Wochen Erholungszeit freigegebenen Verkehr zwischen Parabionts wenn tibiale Fraktur Chirurgie durchführen ermöglichen.</li>
</ol>4. tibiale Fraktur Chirurgie (Protokoll 1 b)
<ol><li>Analgesie zu verwalten (Buprenorphin, 0,1 mg/kg subkutan) nach Induktion und vor chirurgischen Manipulation. Bupivacain (0,25 %) an der Operationsstelle proximal bis zum Knie kurz vor der Eröffnung zu injizieren. Wenden Sie Auge Schmiermittel.</li>
	<li>Den mediale Aspekt der richtigen Hind Extremität der Maus auf den OP-Bereich setzen rasieren und desinfizieren mit Jod + 70 % Alkohol Haut Peeling über 3 Zyklen abwechseln. Pflegen Sie ein steriles Operationsfeld während des Verfahrens. Um Verschmutzung zu begrenzen; Verwenden Sie autoklaviert Instrumente und Handschuhe; Füllen Sie die Operation unter dem sezierenden Mikroskop (fakultativ); und verwenden Sie ein Heizkissen auf um Körpertemperatur zu halten. Hinweis: Wenn das Protokoll auf Parabionts durchgeführt wird, ist nur 1 Maus im Paar (der rechten Tibia von der rechten Maustaste) gebrochen. Siehe Abbildung 1 b für eine schematische Darstellung der Fraktur auf Parabionts.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Schere um einen Hautschnitt entlang der medialen Aspekt der richtigen Hind Extremität proximal bis zum Knie hinunter die Midshaft der Tibia auf die Rechte Maustaste.</li>
	<li>Setzen Sie die Midshaft der Tibia und lokalisieren Sie visuell der Diaphyse. Biegen Sie die Knie und visualisieren Sie die tibiale Plateau mit der Patella-femoralen Bänder als Wahrzeichen.</li>
	<li>Visualisieren Sie die Patellasehne; Bohren Sie manuell durch Walzen von Daumen und Zeigefinger ein 0,5-mm-Loch in der intramedullären Kanal mit einer 25-Gauge-Nadel. Hinweis: Die Bohrung wird parallel entlang der Tibia in die Tibia Plateau durchlaufen.</li>
	<li>Legen Sie eine 0,38 mm Edelstahl-Pin durch das Loch ca. 15 mm in die Markhöhle bis Widerstand spüren, und schneiden Sie bündig mit der Tibia Plateau mit einem Drahtschneider (siehe ergänzende Video 1 für eine 3D-Rekonstruktion).</li>
	<li>Mit geraden Bonn Schere, Fraktur der Tibia Midshaft (Diaphyse). Siehe Abbildung 1 für eine schematische Darstellung der Fraktur.</li>
	<li>Beobachten Sie visuell die Frakturstelle und angrenzenden Gewebe zur Stabilisierung der Fraktur Anblick zu inspizieren.</li>
	<li>Schließen Sie mit dermalen Heftklammern.</li>
	<li>Legen Sie die Mäuse auf beheizten Pads zu erholen vor der Rückgabe an einen Käfig sauber nach Hause. 1 mL vorgewärmt (37 ° C) normale Kochsalzlösung subkutan in jeder Maus für Flüssigkeitsersatz zu injizieren.</li>
	<li>Überprüfen Sie Mäuse täglich auf Anzeichen von Lahmheit, Infektionen oder Blutungen. Hinweis: Wenn regelmäßige Buprenorphin (dh nicht SR/slow Release) verwenden dann verwalten Sie 0,1 mg/kg subkutan in 1 mL Kochsalzlösung täglich für 3 Tage.</li>
</ol>

<ol><li>Terrando, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+cognitive+decline+in+the+aging+population%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Perioperative cognitive decline in the aging population.</a> Mayo Clin Proc. 86 (9), 885-893 (2011).</li>
<li>Lord, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+systemic+immune+response+to+trauma%3A+an+overview+of+pathophysiology+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">The systemic immune response to trauma: an overview of pathophysiology and treatment.</a> Lancet. 384 (9952), 1455-1465 (2014).</li>
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<li>Han, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delirium+in+the+emergency+department%3A+an+independent+predictor+of+death+within+6+months%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Emerg+Med%22%5BJournal%5D)">Delirium in the emergency department: an independent predictor of death within 6 months.</a> Ann Emerg Med. 56 (3), 244-252 (2010).</li>
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<li>Terrando, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor-alpha+triggers+a+cytokine+cascade+yielding+postoperative+cognitive+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor-alpha triggers a cytokine cascade yielding postoperative cognitive decline.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (47), 20518-20522 (2010).</li>
<li>Harry, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+healing+of+open+tibial+fractures+covered+with+either+muscle+or+fasciocutaneous+tissue+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of the healing of open tibial fractures covered with either muscle or fasciocutaneous tissue in a murine model.</a> J Orthop Res. 26 (9), 1238-1244 (2008).</li>
<li>Hirsch, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+cerebrospinal+fluid+and+plasma+inflammatory+markers+after+orthopedic+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Perioperative cerebrospinal fluid and plasma inflammatory markers after orthopedic surgery.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 211(2016).</li>
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<li>Terrando, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspirin-triggered+resolvin+D1+prevents+surgery-induced+cognitive+decline%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Aspirin-triggered resolvin D1 prevents surgery-induced cognitive decline.</a> FASEB J. 27 (9), 3564-3571 (2013).</li>
<li>Baht, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+a+youthful+circulaton+rejuvenates+bone+repair+through+modulation+of+beta-catenin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Exposure to a youthful circulaton rejuvenates bone repair through modulation of beta-catenin.</a> Nat Commun. 6, 7131(2015).</li>
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<li>Terrando, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolving+postoperative+neuroinflammation+and+cognitive+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Resolving postoperative neuroinflammation and cognitive decline.</a> Ann Neurol. 70 (6), 986-995 (2011).</li>
<li>Terrando, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+the+alpha7+Nicotinic+Acetylcholine+Receptor+Protects+against+Neuroinflammation+after+Tibia+Fracture+and+Endotoxemia+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Stimulation of the alpha7 Nicotinic Acetylcholine Receptor Protects against Neuroinflammation after Tibia Fracture and Endotoxemia in Mice.</a> Mol Med. 20 (1), 667-675 (2015).</li>
<li>Vacas, S., Degos, V., Tracey, K. J., Maze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-mobility+group+box+1+protein+initiates+postoperative+cognitive+decline+by+engaging+bone+marrow-derived+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">High-mobility group box 1 protein initiates postoperative cognitive decline by engaging bone marrow-derived macrophages.</a> Anesthesiology. 120 (5), 1160-1167 (2014).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+mitochondrial+DAMPs+cause+inflammatory+responses+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Circulating mitochondrial DAMPs cause inflammatory responses to injury.</a> Nature. 464 (7285), 104-107 (2010).</li>
<li>Degos, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+bone+marrow-derived+macrophages+perturbs+the+innate+immune+response+to+surgery+and+reduces+postoperative+memory+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Depletion of bone marrow-derived macrophages perturbs the innate immune response to surgery and reduces postoperative memory dysfunction.</a> Anesthesiology. 118 (3), 527-536 (2013).</li>
<li>Zhang, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthopedic+surgery+modulates+neuropeptides+and+BDNF+expression+at+the+spinal+and+hippocampal+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Orthopedic surgery modulates neuropeptides and BDNF expression at the spinal and hippocampal levels.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (43), E6686-E6695 (2016).</li>
<li>Lu, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S100A8+contributes+to+postoperative+cognitive+dysfunction+in+mice+undergoing+tibial+fracture+surgery+by+activating+the+TLR4%2FMyD88+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">S100A8 contributes to postoperative cognitive dysfunction in mice undergoing tibial fracture surgery by activating the TLR4/MyD88 pathway.</a> Brain Behav Immun. 44, 221-234 (2015).</li>
<li>Feng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+mediate+postoperative+hippocampal+inflammation+and+cognitive+decline+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Microglia mediate postoperative hippocampal inflammation and cognitive decline in mice.</a> JCI Insight. 2 (7), e91229(2017).</li>
<li>Lugo, J. N., Smith, G. D., Holley, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+fear+conditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Trace fear conditioning in mice.</a> J Vis Exp. (85), (2014).</li>
<li>Kamran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+mice%3A+a+detailed+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in mice: a detailed protocol.</a> J Vis Exp. (80), (2013).</li>
<li>Ning, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgicallyinduced+mouse+models+in+the+study+of+bone+regeneration%3A+Current+models+and+future+directions+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med+Rep%22%5BJournal%5D)">Surgicallyinduced mouse models in the study of bone regeneration: Current models and future directions (Review).</a> Mol Med Rep. 15 (3), 1017-1023 (2017).</li>
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<li>Castellano, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+umbilical+cord+plasma+proteins+revitalize+hippocampal+function+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Human umbilical cord plasma proteins revitalize hippocampal function in aged mice.</a> Nature. 544 (7651), 488-492 (2017).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Frakturen sind ein gemeinsames klinisches Problem und bleiben eine der Hauptursachen für Morbidität, insbesondere die rasch wachsende ältere Bevölkerung. Hier stellen wir eine Schritt für Schritt Protokoll für ein Maus-Modell der tibiale Fraktur Mechanismen verantwortlich für postoperative Neuroinflammation und kognitiver Beeinträchtigung zu studieren. Dieses Modell ist kombinierbar mit Parabiosis Chirurgie, Neuro-immunen Interaktionen, Geweberegeneration und andere Signalisierung Prozesse zu studieren. Das Verständnis dieser Mechanismen bieten strategische Ziele zur Minimierung der Risiken für postoperative Komplikationen und Ergebnisse zu optimieren.
Verschiedene orthopädische Modelle wurden entwickelt, um Knochen-Reparatur in Nagetieren25zu studieren. Wir verabschiedeten und modifiziert diese tibiale Fraktur-Verfahren, das ursprünglich von Harry Et Al. beschrieben 8, Studie zu Auswirkungen der orthopädischen Chirurgie auf die Gehirnfunktion. Wir haben auch zur dieser Fraktur-Modell in Kombination mit unserem Parabiosis Modell um Faktoren zu untersuchen, die für die Knochenheilung und altersabhängigen Geweberegeneration verantwortlich sind. Wenn flüchtige Vollnarkose durchgeführt, dieses tibiale Fraktur-Verfahren erfordert nur ca. 15 min pro Tier, Ergebnisse in Null bis minimal Sterblichkeit (je nach Alter der Maus oder der zugrunde liegende genetische Empfindlichkeiten) und gemeinsame rekapituliert Beleidigungen mit langer Knochenbruch und orthopädische chirurgische Trauma verbunden. Somit ist dieses Modell ideal für Abfragen biologischer Signalwege und längs Bewertungen durchführen. Es ist jedoch wichtig, dass die Osteotomie und anheften reproduzierbar sind und die Schäden an den Weichteilen steht im Einklang. Weiches Gewebeschaden kann zum Beispiel durch Abstreifen der Knochenhaut und kneifen umgebende Muskeln um die Operation mehr traumatisch moduliert werden. Modelle der traumatische Fraktur durch stumpfes Trauma nicht fixierten oder drei-Punkt-Biegung induziert würde nicht solche Konsistenz und Genauigkeit liefern. Diese Verfahren führen oft zu Re-Verletzung, die zu anhaltenden Entzündungsreaktion führt. Umgekehrt haben Modelle der Fraktur mit starren Fixierung eine gemäßigtere Entzündung, die nicht vollständig die Schäden im Zusammenhang mit orthopädischen Chirurgie26,27rekapitulieren.
Andere Modelle mit Titan-Legierung anheften, eng mimischen menschlichen Endoprothetik entwickelt wurden und möglicherweise relevanter zu verhören Prothese Instabilität, Osteolyse und Prothese-assoziierten Komplikationen bei Mäusen28,29 . Bohrloch Modelle wie die hier vorgestellte bieten ausreichende Stabilisierung und Mäuse können in behavioral Paradigmen ohne erhebliche Defizite, die Aufgaben wie das durcheinander bringen konnte getestet werden fürchten Klimaanlage oder offenen Bereich Fortbewegung/Angst Tests6 ,7,11,15,19,20. Rotations-Deformitäten können jedoch auftreten, wenn die Fixierung nicht richtig verriegelt ist. Einige Modelle verwenden ein Fixateur externe, die bietet überlegene Stabilisierung, sondern ist eine Herausforderung, die Umsetzung in eine Maus Tibia, obwohl es in einer Maus Femur27erfolgreich umgesetzt werden kann.
Kognitive Beeinträchtigungen, einschließlich Delirium und postoperative kognitive Dysfunktion sind häufige Komplikationen nach orthopädischen Chirurgie zur Reparatur der Fraktur, insbesondere ältere und gebrechliche Patienten30. Diese klinisch relevante Mausmodell der tibiale Fraktur Chirurgie zeigt, dass postoperative systemische Zytokin Release6,7,17, Blut - Hirn-Schranke Funktion15,19 beeinträchtigt , und verändert Mikroglia Morphologie16,22, dazu beitragen, die Beeinträchtigung des Gedächtnisses, und möglicherweise kritische Funktionen der postoperativen neurologischen Komplikationen gesehen bei vielen Patienten nach orthopädischen Operationen dar. Es ist wichtig zu beachten, dass andere chirurgischen Verfahren eingesetzt wurden, um postoperative kognitive Dysfunktion bei Mäusen zu modellieren. Dazu gehören Bauch-31,32,33 und vaskuläre34 Chirurgie sowie oberflächliche Trauma35,36. Die Parabiosis Technik ist anwendbar auf alle Modelle, die teilen ähnliche Endpunkte, einschließlich Entzündung, glialen Aktivierung und Verhaltensstörungen Defizite, die durch gemeinsame Mechanismen vermittelt werden können.
Studien, die Parabiosis enthalten haben neue Rollen für zirkulierende Faktoren ergeben, die kognitive Funktion und Neuroinflammation Gewebe Verjüngung Alter Tiere37,38,39,40 auswirken können ,41,42. Wir haben gezeigt, dass die Parabiosis erfolgreich kombiniert werden kann, mit dem hier beschriebenen Verhören regenerative Wege und Mechanismen, bei denen Blut übertragbare Faktoren, die Einfluss Heilung und Fraktur12reparieren zu studieren tibiale Fraktur-Modell. Hier haben wir gezeigt, dass die Fraktur-Reparatur-Kapazität des Tieres im Alter von verjüngt werden kann, wenn das alte Tier, ein junges Tier anastomosieren ist. Diese Umkehrung der Alter wurzelte in der Engraftment des blutbildenden Zellen am Bruchaufstellungsort. Interessanterweise konnte diese Verjüngung auch durch Transplantation von jungen Knochenmark in Alter Mäuse erreicht werden. Knochenmark-Transplantation kann in dieser Hinsicht einen direkten und einfacheren alternativen Ansatz zur Parabiosis angesehen werden. Parabiosis ist jedoch ein robusteres Modell zur Untersuchung der Funktion der zirkulierenden Zellen und Faktoren. Wir erwarten, dass eine Kombination aus Parabiosis und orthopädische Chirurgie-Modelle eine wichtige Rolle bei der Beantwortung kritischer Fragen Perioperative Pflege und Biologie des Alterns.
Zusammenfassend lässt sich sagen stellen wir Ihnen eine Schritt für Schritt Protokoll für ein Maus-Modell der tibiale Fraktur Mechanismen verantwortlich für postoperative Neuroinflammation und kognitiver Beeinträchtigung nach orthopädischen Operationsverfahren zu studieren. Dieses Modell ist kombinierbar mit einem Parabiosis Verfahren, Neuro-immunen Interaktionen, Geweberegeneration und andere Wege zu studieren. Definieren diese Mechanismen bieten strategische Ziele zur Minimierung der Risiken für postoperative Komplikationen und Ergebnisse zu optimieren.

Chirurgie hat die medizinische Gesundheitssystem verwandelt und trägt kontinuierlich zur Spitzentechnologie, verbesserte Sicherheit und Lebensqualität gepflegt. Leider induziert Chirurgie auch pathophysiologische Reaktionen, die postoperative Komplikationen einschließlich Wundinfektionen, neurologische Beeinträchtigungen und sogar die Sterblichkeit, insbesondere in älteren Patienten1,2führen kann. Orthopädische Chirurgie erfolgt regelmäßig, vor allem bei älteren Erwachsenen, um Lebensqualität zu verbessern und gemeinsame Knochenverletzungen zu reparieren. Jedoch bis zu 50 % der orthopädischen Chirurgiepatienten, die 65 Jahre und älter Erfahrung neurologische Beeinträchtigungen wie postoperative Delirium. Dies erhöht konsequent korreliert mit schlechter Prognose, d. h., 5-fold erhöhtes Risiko für Mortalität nach 6 Monaten, anhaltende funktionelle Rückgang, Pflege-Zeit pro Patient, erhöhte Dauer des Krankenhausaufenthalts und höhere Raten von Pflegeheim Platzierung 3 , 4 , 5. einige Risikofaktoren, einschließlich des fortgeschrittenen Alters identifiziert worden, aber wenig bekannt über die Mechanismen, die für neurologische Beeinträchtigungen nach der Operation.
Da Frakturen sehr häufig bei älteren Menschen sind, haben wir ein Maus-Modell der tibiale Fraktur zu bestimmen, die Auswirkungen der peripheren Trauma auf postoperative Genesung, einschließlich Neuroinflammation und Gehirn Gesundheit (kognitive Funktion)6, etabliert. 7. dieses Modell ursprünglich von Harry Et Al. beschrieben 8, besteht aus intramedulläre anheften und tibiale Fraktur unter allgemeiner Anästhesie und Analgesie und imitiert somit die Hautverletzungen, Muskeltrauma, und Knochen reparieren verbunden mit gemeinsamen Frakturen der langen Röhrenknochen und reparieren beim Menschen. Nach dieser Prozedur Mäuse zeigen Veränderungen in Entzündungsmarker ähnlich wie Menschen9,10, sowie Mikroglia-Aktivierung im Hippocampus, die im Zusammenhang mit Defiziten im deklarativen Gedächtnisses beobachteten Veränderungen und hippocampal Neuroplastizität6,7,11. Bisher haben wir diese Fraktur-Modell mit Parabiosis kombiniert. Parabiosis ist eine chirurgische Modell in dem 2 Mäuse sind anastomosieren und deshalb ein Herz-Kreislauf-System. Dieses Modell hat einen Durchbruch im Verständnis der rechtlichen Auswirkungen der zirkulierenden Zellen und humorale Faktoren auf die Organfunktion im Zusammenhang von Alter und Krankheit12,13,14zur Verfügung gestellt. Mit diesem Ansatz haben wir systemische Faktoren im Zusammenhang mit altersabhängigen Frakturheilung12kürzlich entdeckt.
Hier stellen wir eine Protokoll, die verbindet das tibiale Fraktur-Modell mit Parabiosis, Knochen, Gehirn altersabhängigen Mechanismen zu untersuchen, die für regenerative Medizin und Neuroimmunologie relevant sind. Protokoll-1A beschreibt das Parabiosis Verfahren und die Protokolldetails 1 b das tibiale Fraktur Verfahren (Abbildung 1A). Diese können unabhängig voneinander oder in Kombination, je nach Art der Vernehmung durchgeführt werden.

<table><tbody><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-017-25</td><td>Andere flüchtige Wirkstoffe oder injizierbare Anästhesie können ebenfalls verwendet werden</td></tr><tr><td>Buprenorphin</td><td>Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals</td><td>NDC 12496-6757-1</td><td>Optional und abhängig von den individuellen Empfehlungen des Institutional Animal Care and Use Committee</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-451</td><td>70% ige Lösung zur antiseptischen Behandlung von Haut und Reinigung</td></tr><tr><td>10% Povidon Jod</td><td>Dynarex</td><td></td><td>Zur antiseptischen Behandlung der Haut</td></tr><tr><td>SomnoSuite</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-01</td><td>Low Flow&nbsp; Anästhesiesystem</td></tr><tr><td>MouseSTAT</td><td>Kent Scientific</td><td>PS1161</td><td>Pulsoximeter & Pulsmesser</td></tr><tr><td>Rasierer</td><td>Wahl</td><td>9854L</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>MZ6</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellgriff</td><td>Fine-Science-Werkzeuge</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellklingen - #11</td><td>Fine-Science-Werkzeuge</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Adson-Pinzette</td><td>Fine-Science-Werkzeuge</td><td>11006-12</td><td>Benötigt zum Entfernen der Periost-Iris</td></tr><tr><td> Pinzette</td><td>Fine-Science-Werkzeuge</td><td>11066-07</td><td>Nützlich (1x2 Zähne) zur Verursachung von lokalisierten Muskel-/Weichteiltraumata</td></tr><tr><td>Bonn-Schere (gerade)</td><td>Feinwissenschaftliche Werkzeuge</td><td>14084-08</td><td>Gut für die Osteotomie, beachten Sie, dass Sie regelmäßig wechseln, da sie stumpf werden</td></tr><tr><td>Feine</td> Schere <td>Fine-Science-Werkzeuge</td><td>14058-09</td><td>Scharfe Schere zum Schneiden von Nähten</td></tr><tr><td>22G x 3,5 Zoll Quincke&nbsp; Spinal Needle</td><td>BD</td><td>405181</td><td>Verwenden Sie den Innenstab zum Anstecken</td></tr><tr><td>von Nadelhaltern</td><td>Fine Science Tools</td><td>12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Fature</td><td>Look</td><td>1079B</td><td></td></tr><tr><td>C57BL6/J</td><td>Jackson Laboratory</td><td>&nbsp; Best.-Nr. 000664</td><td></td></tr><tr><td>eGFP+ (exprimiert ubiquitär verstärktes grün fluoreszierendes Protein)</td><td>Jackson Laboratory</td><td>&nbsp; Lager-Nr. 003291</td><td></td></tr></tbody></table>

ein maus-modell der orthopädischen chirurgie, postoperative kognitive dysfunktion und geweberegeneration zu studieren

A Mouse Model of Orthopedic Surgery to Study Postoperative Cognitive Dysfunction and Tissue Regeneration

Chirurgie wird häufig zur Verbesserung und Erhaltung der Lebensqualität. Bei gefährdeten Patienten wie ältere Menschen, können leider Komplikationen auftreten und das Ergebnis deutlich zu verringern. In der Tat, nach Routine orthopädische Chirurgie, eine Fraktur zu reparieren, weniger als 50 % der älteren Patienten leiden neurologische Komplikationen wie Delirium. Auch die Fähigkeit zu heilen und regenerieren Gewebe nach der Operation mit dem Alter abnimmt, und kann Auswirkungen auf die Qualität der Fraktur Reparatur- und sogar knöcherner Integration von Implantaten. So könnte ein besseres Verständnis der Mechanismen, die diese Altersabhängige Veränderungen bieten strategische Ziele zur Risikominimierung für solche Komplikationen und Ergebnisse zu optimieren. Hier stellen wir eine klinisch relevante Mausmodell der tibiale Fraktur. Die postoperative Veränderungen in diesen Mäusen ahmen einige der kognitiven Beeinträchtigungen häufig nach Routine orthopädische Chirurgie beim Menschen beobachtet. Kurz gesagt, ist ein Schnitt in der rechten hinteren Extremität unter streng aseptischen Bedingungen durchgeführt. Muskeln sind aufgehoben, und eine 0,38 mm Edelstahl-Pin in das obere Wappen der Tibia, im Inneren der intramedullären Kanal eingefügt wird. Osteotomie erfolgt dann, und die Wunde wird geheftet. Wir haben dieses Modell verwendet, um die Auswirkungen der chirurgische Trauma auf postoperative Neuroinflammation und Verhaltensänderungen zu untersuchen. Durch die Anwendung dieser Fraktur-Modell in Kombination mit Parabiosis, eine chirurgische Modell, in dem 2 Mäuse anastomosieren sind, haben wir untersucht, Zellen und sezernierten Faktoren, die systemisch Organ Funktion und Geweberegeneration nach Verletzungen zu regenerieren. Folgen Sie unserer Schritt für Schritt-Protokoll, diese Modelle mit hoher Wiedergabetreue reproduziert werden können, und lässt sich zu vielen biologische Bahnen zu befragen, die durch chirurgische Trauma verändert werden.

Nachdem transversale Osteotomien unter sterilen Bedingungen mit stetigen einsetzen der Stifte und richtige Naht sorgfältig durchgeführt wurden, zeigten Mäuse keinerlei Anzeichen von Lahmheit, Infektionen oder Blutungen in das linke Bein nach der Operation. Orthopädische Heilung wurde anhand radiographische Analyse und Histomorphometrie nach Safranin-O Färbung (Abbildung 2). Röntgenbilder der midshaft gebrochenen Tibiae angegeben mehr Gewebe Ablagerung in der Fraktur Schwielen von jungen Mäusen als in der Fraktur Schwielen von gealterten Mäusen. Fraktur Schwielen waren entkalkt und eingebettet in Paraffin in Vorbereitung für die histologische Analyse. Abschnitte wurden mit Safranin-O befleckt und Gewebe Abscheidung wurde quantifiziert mittels Histomorphometrie Analyse. Fraktur Schwielen von jungen Mäusen enthalten mehr Knochen und weniger fibrotische Gewebe als Fraktur Schwielen von gealterten Mäusen.
Tibiale Fraktur induziert systemische und zentrale Entzündung6,7,11,15,16. In der Tat sind periphere Ebenen von Pro-inflammatorischen Zytokinen und Gefahr-assoziierte molekulare Muster (DAMPs) schnell nach orthopädischen Operationen, sowohl in Mäusen und Menschen7,17,18erhöht. Dies trägt zur Aktivierung der Mikroglia-Zellen in das Gehirn über mehrere Signalisierung Mechanismen, bei denen humorale, zelluläre und neuronale Bahnen7,15,19,20, 21. Nach Chirurgie, endothelialen Dysfunktion, Öffnung der Blut - Hirn-Schranke und peripheren Makrophagen Infiltration beitragen, akute hippocampal Neuroinflammation in Wild-Typen und Ccr2RFP / + Cx3cr1GLP / + erwachsener Mäuse15 , 19, und nachfolgende Gedächtnisdefizite, die menschlichen Delirium und postoperative kognitive Dysfunktion15,19,22ähneln zugeordnet wurden. Verschlimmert wird diese schwere Reaktion bei alten Tieren mit erheblichen Änderungen in der Mikroglia Morphologie, wie von IBA-1 Immunostaining (Abbildung 3) erkannt.
Mit Hilfe der tibiale Fraktur-Modells beschrieben hier fanden wir auch vorübergehend beeinträchtigt hippocampale Neurogenese, wie einen Rückgang der Doublecortin (DCX) Immunostaining im dentate Gyrus20belegt. Elektrophysiologische Messungen der Langzeitpotenzierung (LTP), ein Surrogat für Memory-Funktion, offenbart eine Unterbrechung des zeitabhängigen Neuroplastizität postoperativ11. Mäusen nach der Operation zeigen auch Beeinträchtigungen im Hippokampus-abhängige Memory-Funktion, zum Beispiel mit Angst Konditionierung behavioral Beurteilung (Abbildung 4). Bei der Konditionierung von Angst, sind Mäuse in eine Kammer gelegt und eine auditive Cue, gefolgt von einen aversiven Reiz (d.h. Fußreiz) ausgesetzt. Drei Tage nach der Operation tibiale, Mäuse sind in der Klimaanlage Kammer, diesmal ohne auditive oder aversive Stimulation, getestet und Einfrieren Verhalten wird als Index des Speichers (für ein detailliertes Protokoll siehe23) aufgezeichnet.
Fortgeschrittenen Alter ist ein Risikofaktor für Speicher Rückgang. Doch wenn wir älter werden, verringert sich die Kapazität für die Reparatur von Gewebe und Regeneration auch obwohl diese Mechanismen schlecht verstanden bleiben. So wir verwendet die Protokolle, die hier beschriebenen Heterochronic Parabiosis (jung/alt Tiere Paarung) ausführen und Frakturheilung innerhalb der alten Maus (für eine detaillierte Parabiosis Protokoll siehe24) bewertet. Blut-sharing zwischen parabiotischer Paaren wurde bestätigt und festgestellt, dass gleich12. Exposition gegenüber einer jugendlich Zirkulation verbessert Knochen Reparatur mit früheren Union erhöht Knochen Ablagerung und Fibrose (Abbildung 5)12verringert. Diese Verjüngung der Knochenregeneration aufgetreten ist unabhängig von der endogenen Osteocalcin-positiven Osteoblasten (Abbildung 5, braun-Zellen), aber eher auf CD45-positiven Zellen, die von den jungen Parabiont (Abbildung 5, blaue Zellen) migriert . Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die CD45-positiven hämatopoetischen Zellen junge und gesunde Nische, absondern, die gealterten osteoblastischen Zellen veranlassen signalisieren, aktiver zu werden vermag.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56701/56701fig1.jpg"> Abbildung 1: Schematische Darstellung der Parabiosis und tibiale Fraktur Chirurgie. (A) Zeitplan für die Durchführung von Parabiosis und tibiale Fraktur (Protokoll 1A) oder tibiale Fraktur allein (Protokoll 1 b). (B) Tibiae von 20 Monate alten Mäusen Isochronic oder Heterochronic parabiotischer paarweise waren gebrochen (rechtes Bein von der rechten Maustaste ist gebrochen, wie mit einem X gekennzeichnet). Graue Mäuse zeigen Wildtyp-Mäusen, während grüne Mäuse eGFP-Mäusen zeigen. (C) schematische Darstellung der tibiale Fraktur Modell mit intramedullären anheften und die Mitte Welle Frakturierung. Siehe auch ergänzende Video 1 für eine 3D-Rekonstruktion der hinteren Gliedmaßen und fixieren des Schienbeins. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56701/56701fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56701/56701fig2v2.jpg"> Abbildung 2: tibiale Frakturheilung innerhalb von jung und alt Mausmodellen. Die Tibiae von jungen oder alten Mäusen waren gebrochen und Fraktur Schwielen waren untersuchten 21 Tage Post Verletzungen. (A) radiologische Bildgebung und histologische Färbung (Safranin-O) wurden verwendet, um die Fraktur Schwielen 21 Tage Post Fraktur zu bewerten. Färbung zeigt kollagenen Gewebe in blau und Proteoglykane (Knorpel enthaltenen) in rot. Gestrichelte Linien zeigen ungefähre Lage der Fraktur Kallus. (B) Histomorphometrie wurde verwendet, um die Menge von Knochen, Knorpel und fibrotische Gewebe innerhalb der Fraktur Kallus 21 Tage Post Fraktur hinterlegt zu beurteilen. Daten werden ausgedrückt als ± 95 %-Konfidenzintervall bedeuten * P &lt; 0,05, statistisch signifikant (One-Way ANOVA, Dunnett Test), Maßstabsleisten repräsentieren 2 mm, und Bilder wurden mit einem Mikroskop, 1,25 X Objektiv. n = 9 für jede Probe. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56701/56701fig2v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56701/56701fig3.jpg"> Abbildung 3: Operation induzierte altersabhängigen Mikroglia-Aktivierung im Hippocampus. Tibiale Fraktur Chirurgie induziert größere hippocampal Neuroinflammation im Alter Mäuse (20 Monate alt) im Vergleich zu 4-Monate-alten C57BL6/J Mäusen. Gehirn-Abschnitt mit Mikroglia Marker IBA-1 Färbung zeigt mehr positive Zellen und morphologische Veränderungen im operativen Gruppen 24 h nach der Operation. Bilder wurden mit einem Epifluorescent Mikroskop mit einer Vergrößerung von 100 X.; Maßstabsleiste stellt 10 µm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56701/56701fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56701/56701fig4.jpg"> Abbildung 4: Neurogenese Langzeitpotenzierung und Memory-Funktion nach der tibiale Fraktur Operation beeinträchtigt. (A) DCX, ein quantitativer Marker für die Neurogenese, im Hippocampus dentate Gyrus bei 24 h nach der Operation deutlich reduziert. Bilder wurden mit einem konfokalen Laserscanning-Mikroskop-Ziel mit einer Vergrößerung von 10 X erhalten; Skala bar stellt 10 µm. (B) Elektrophysiologie in hippocampal Scheiben von Steuerelementen oder Mäuse 24 h nach der Operation. Langzeitpotenzierung (LTP) wurde induziert durch hochfrequente Stimulation (HFS) und verzeichnete mehr als 1 h Feld exzitatorischen postsynaptischen Potenziale (fEPSPs) wurden von der CA1 Stratum Radiatum mit einer extrazellulären Aufnahme Pipette gefüllt mit regelmäßigen künstliche Liquor cerebrospinalis. 24 Stunden nach der Operation ist LTP Induktion bemerkenswert im Vergleich zu Kontroll-Mäusen reduziert. Daten sind als Mittelwert ± s.e.m n ausgedrückt = 3, * p &lt; 0,05 1-Way ANOVA. (C) Hippocampal-abhängige Memory-Funktion (definiert als % des Einfrierens mit Trace fürchten Klimaanlage) ist bei Mäusen nach der Operation im Vergleich zu Kontrollen und Tieren auf die Anästhesie nur eingeschränkt. Daten sind als Mittelwert ± s.e.m n ausgedrückt = 9-10, * p &lt; 0,05 1-Way ANOVA. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56701/56701fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56701/56701fig5.jpg"> Abbildung 5: Parabiosis Chirurgie führt zur Verjüngung der Bruch heilen, Blut-sharing und Spender-Zelle Engraftment. Isochronic und Heterochronic Parabiosis-Paarungen wurden errichtet und die alte Maus in jedem Paar war gebrochen und für die Knochenheilung bewertet. (A) Fraktur Schwielen mit radiologischen Bildgebung untersucht wurden. Gestrichelte Linien zeigen ungefähre Lage der Fraktur Kallus. (B) Engraftment eGFP + Zellen bestätigte sich im Knochenmark. (C) Immunohistochemistry der Fraktur Kallus wurde verwendet, um die Spenderzellen eGFP+ (blau) und Osteocalcin+ osteoblastischen Zellen (braun) aus der Parabiont zu identifizieren. Maßstabsleisten repräsentieren 50 µm und Bilder wurden mit einem 40 X Objektiv. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56701/56701fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
Ergänzende Video 1: 3D-Rekonstruktion der hinteren Extremität und fixieren des Schienbeins. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56701/parte_slow.wmv">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterladen.</a>

Dieses Protokoll beschreibt ein Maus-Modell der orthopädischen Chirurgie, die verwendet wurde, um die Mechanismen der postoperativen Neuroinflammation und Verhaltensänderungen und in Kombination mit Parabiosis, Geweberegeneration während des Alterns zu studieren studieren.

Ein Maus-Modell der orthopädischen Chirurgie, Postoperative kognitive Dysfunktion und Geweberegeneration zu studieren

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and ...

Das übergeordnete Ziel dieser chirurgischen Methoden ist es, die Auswirkungen von Traumata auf Multiorgandysfunktionen zu beobachten, insbesondere wird die Parabiose verwendet, um eine junge und eine alte Maus zusammen zu anastomosieren, was zu einer gemeinsamen Blutversorgung führt. Eine der Mäuse in diesem Modell wird dann gebrochen, um die regenerativen Effekte und den Effekt auf die kognitive Funktion in Bezug auf das gemeinsame System der jungen und alten Maus zu beobachten. Diese Methoden können dazu beitragen, Schlüsselfragen im Zusammenhang mit der Immunologie, dem Altern, der Geweberegeneration und der kognitiven Funktion zu beantworten.Der Hauptvorteil des orthopädischen Verfahrens ist die klinische Anwendbarkeit dieser Befunde auf häufige Komplikationen nach Operationen, zum Beispiel Delir und postoperative kognitive Dysfunktion. Halten Sie die Mäuse vor dem Experiment in einer klimatisierten Umgebung mit 12-stündigen Hell- und Dunkelzyklen und ordnungsgemäßem Zugang zu Standardfutter und Wasser. Halten Sie nicht mehr als fünf Wurfgeschwister pro Käfig und vermeiden Sie Bedingungen, die Kämpfe begünstigen könnten.Verwenden Sie eine weibliche Maus im Alter von drei Monaten und eine alte Maus im Alter von 17 Monaten. Für die Parabiose akklimatisieren Sie zwei Mäuse mindestens zwei Wochen lang zusammen, bevor Sie operiert werden. Überprüfen Sie täglich den Körperzustand und das allgemeine Erscheinungsbild von Mäusen.Um sich auf die Operation vorzubereiten, wiegen Sie die beiden Mäuse. Legen Sie die Mäuse nach der Vollnarkose in Rückenlage auf ein beheiztes Pad. Halten Sie schließlich das richtige Anästhesieniveau für jede Maus aufrecht.Als nächstes rasieren Sie jede der beiden Mäuse entlang einer durchgehenden Linie vom Ellenbogen, der Flanke und dem Knie an der zu verbindenden Seite. Desinfizieren Sie mit Jod plus 70% Alkohol Hautpeeling in drei abwechselnden Zyklen zur Vorbereitung des Schnitts. Beginnen Sie mit der Verabreichung einer Analgesie nach der Einleitung und vor der chirurgischen Manipulation.Injizieren Sie 0,25% Bupivacain an den Flanken kurz vor dem Öffnen. Verwenden Sie bei jeder Maus ein Skalpell, um einen Hautschnitt entlang der Flanke zu machen, der proximal zum Knie bis gerade proximal zum Ellbogen reicht, ohne die Muskeln unter der Haut zu stören. Verbinden Sie den Trizeps der Tiere mit zwei unterbrochenen Nähten.Verbinden Sie dann die Körperwände entlang der Flanken mit einer durchgehenden Naht von sieben bis neun Durchgängen. Verbinden Sie dann den Quadrizeps des Tieres mit zwei unterbrochenen Nähten und schließen Sie die Haut der beiden Parabionten mit unterbrochenen Nähten. Unterbrechen Sie die Nähte mit der Maus in Bauchlage.Lassen Sie die Mäuse in der Umgebungsluft erwachen. Halten Sie jedes Paar einzeln und achten Sie darauf, die Paare täglich zu überwachen, indem Sie zweimal wöchentlich eine Körperzustandsbewertung durchführen und die Paare zweimal wöchentlich wiegen. Planen Sie schließlich eine Erholungszeit von vier Wochen ein, um eine gemeinsame Durchblutung zwischen den Parabionten zu gewährleisten, wenn Sie eine Tibiafrakturoperation durchführen.Rasieren Sie anschließend den medialen Aspekt der rechten hinteren Extremität der Maus, um den Operationsbereich freizulegen, und desinfizieren Sie sie mit Jod plus 70% Alkohol Hautpeeling über drei abwechselnde Zyklen. Beginnen Sie mit der Verabreichung einer Analgesie nach der Einleitung und vor der chirurgischen Manipulation. Injizieren Sie 0,25% Bupivacain an der Operationsstelle proximal des Knies kurz vor der Öffnung.Halten Sie während des gesamten Eingriffs ein steriles Operationsfeld aufrecht, indem Sie autoklavierte Instrumente verwenden. Machen Sie mit einer Schere einen Schnitt proximal zum Knie entlang der medialen Seite der rechten Hintergliedmaße bis zum mittleren Schaft der Tibia bei der linken Maus. Legen Sie den Mittelschaft des Schienbeins frei und lokalisieren Sie die Diaphyse visuell.Beugen Sie das Knie und visualisieren Sie das Tibiaplateau mit dem patellofemoralen Band als Orientierungspunkt. Visualisieren Sie die Patellasehne. Bohren Sie dann manuell mit einer 25-Gauge-Nadel und einer rollenden Bewegung des Fingers und des Daumens ein Loch in den Markkanal.Führen Sie dann einen 0,38 Millimeter großen Edelstahlstift durch das Loch etwa 15 Millimeter in die Markhöhle ein, bis ein Widerstand zu spüren ist, und schneiden Sie das Fleisch mit dem Tibiaplateau mit einem Drahtschneider ein. Verwenden Sie dann eine Schere mit gerader Bindung, um den Tibia-Mittelschaft zu brechen. Beobachten Sie die Frakturstelle und das angrenzende Gewebe visuell, um die Stabilisierung der Frakturstelle zu überprüfen.Verschließen Sie dann die Haut mit Hautklammern. Zum Schluss injizieren Sie jeder Maus einen Milliliter vorgewärmte normale Kochsalzlösung bei 37 Grad Celsius subkutan zum Flüssigkeitsersatz. Legen Sie die Mäuse auf beheizte Pads, um sich zu erholen, bevor Sie sie in einen sauberen Heimkäfig zurückbringen.Untersuchen Sie Mäuse täglich auf Anzeichen von Lahmheit, Infektionen oder Blutungen. Röntgenaufnahmen der gebrochenen Tibia im Mittelschaft zeigten mehr Gewebeablagerungen in den Frakturschwielen junger Mäuse als in den Frakturschwielen älterer Mäuse. Darüber hinaus enthielten Frakturschwielen junger Mäuse mehr Knochen und weniger fibrotisches Gewebe als Frakturschwielen von gealterten Mäusen.Eine Operation an Tibiafrakturen führte bei 20 Monate alten Mäusen im Vergleich zu vier Monate alten Mäusen zu einer stärkeren Neuroinflammation im Hippocampus. Darüber hinaus zeigen Mäuse nach einer Operation auch Beeinträchtigungen der hippocampusabhängigen Gedächtnisfunktion, z.B. durch die Bewertung des Verhaltens der Angstkonditionierung. Die Exposition gegenüber einer jugendlichen Durchblutung verbesserte die Knochenreparatur mit früherer Vereinigung, erhöhte Knochenablagerung und verringerte Fibrose.Diese Verjüngung der Knochenregeneration erfolgte unabhängig von den endogenen Osteocalcin-positiven Osteoblasten, sondern stützte sich auf CD45-positive Zellen, die aus dem jungen Parabionten migrierten. Sobald die Parabiose-Technik gemeistert ist, kann sie innerhalb von 1-1/2 Stunden und das Tibiafrakturmodell innerhalb von 15 Minuten durchgeführt werden. Bei Bedarf können die beiden Verfahren auch unabhängig voneinander durchgeführt werden.Während des Versuchs der Tibiafraktur ist es wichtig, ein sterilisiertes Operationsfeld aufrechtzuerhalten und die richtige Platzierung des Stifts und die richtige Osteotomie sicherzustellen. Denken Sie schließlich daran, die Mäuse während der gesamten Lebensdauer der Studie sorgfältig zu überwachen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie das Parabiosemodell und die Tibiafrakturoperation durchführen.

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Forschung

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Standardisierte histomorphometrische Bewertung von Osteoarthritis in einem chirurgischen Mausmodell

Wir simulierten klinische Operationen, um ein Protokoll der direkten Anastomose von bilateralen Plexusnerven brachialis über den präspinalen Weg in Mäusen zu erstellen und trugen so zur Untersuchung der neuronalen Mechanismen bei, die der Rehabilitation nach kreuzendem Nerventransfer nach Verletzungen des zentralen und peripheren Nervensystems zugrunde liegen.

Ein Mausmodell der direkten Anastomose über den präspinalen Weg für die kreuzende Nerventransferchirurgie

Hier wird ein neuartiges automatisiertes Gerät zur Quetschung von Rückenmarksverletzungen für Mäuse vorgestellt, das Modelle für Rückenmarksverletzungen mit unterschiedlichem Grad genau herstellen kann.

Automatisierter Impaktor für das Modell einer kontusiven Rückenmarksverletzung bei Mäusen

Die Nadelmethode der asymmetrischen bilateralen Stenose der Arteria carotis communis wird vorgeschlagen, um ein Mausmodell für vaskuläre kognitive Beeinträchtigungen und Demenz zu schaffen. Es führt zu längerfristigen Ergebnissen im Vergleich zu bisher etablierten Modellen und ist mit der Live-MRT kompatibel. Die visuelle Darstellung, die das Verfahren demonstriert, bietet eine Anleitung zur Beherrschung der Operation.

Ein Mausmodell für vaskuläre kognitive Beeinträchtigung und Demenz basierend auf einer nadelgesteuerten asymmetrischen bilateralen Stenose der Arteria carotis communis

Lernen Sie ein Mäusemodell orthopädischer Chirurgie mit Parabiose kennen, um postoperative kognitive Dysfunktion und Geweberegeneration im Alter zu untersuchen. Diese Methode erlaubt die Analyse von Neuroinflammation und Heilungsprozessen.

Ein Maus-Modell der orthopädischen Chirurgie, Postoperative kognitive Dysfunktion und Geweberegeneration zu studieren

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