Chirurgische Techniken zur Platzierung des Katheters und 5/6 Nephrektomie in murinen Modellen der Peritonealdialyse

Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Fragen im Bereich der Peritonealdialyse zu peritonealen oder systemischen Veränderungen als Reaktion auf Flüssigkeitsexposition entweder unter urämischen oder nicht-urämischen Bedingungen zu beantworten. Die Hauptvorteile dieser Technik bestehen darin, dass über einen langen Behandlungszeitraum große Mengen Flüssigkeit intraperitoneal injiziert werden können und dass sie den Einsatz von gentechnisch veränderten Tieren ermöglicht. Die Implikation dieser Technik erstreckt sich auf die Therapie und Diagnostik der strukturellen und funktionellen Peritonealverschlechterung, da sie potenzielle, therapeutische strategische Tests und die Bewertung von Biomarkern ermöglicht.

Wir hatten die Idee zu dieser Methode, als wir die Notwendigkeit erkannten, genetisch veränderte Mäuse zu verwenden, um die molekularen Signale zu starten, die an der Peritonealschädigung beteiligt sind. Bestätigen Sie für die Platzierung des Katheters nach der Rasur der rechten Flanken und des Rückens jedes Tieres, dass es keine Reaktion auf das Einklemmen der Zehen gibt, und tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf. Legen Sie anschließend das erste Tier auf die linke Flanke auf den Operationstisch und desinfizieren Sie die exponierte Haut mit 1%iger Chlorhexidingluconatlösung.

Verwenden Sie eine stumpfe Schere, um einen 0,5 Zentimeter langen Schnitt an der rechten Flanke des Körpers zu machen. Trennen Sie dann vorsichtig die Haut von der angrenzenden Muskelschicht, bis die Haut, die den gesamten Rücken des Tieres bedeckt, gut getrennt ist. Machen Sie einen Schnitt mit einem Durchmesser von einem Millimeter in der Muskelschicht durch den Hautschnitt und führen Sie die Spitze des Katheters und den ersten Kunststoffring in den Muskelschnitt ein.

Vernähen Sie die Peritonealwand mit der nicht resorbierbaren Naht 5-0 oder 6-0 fest um den Katheter, wobei sich ein Kunststoffring in der Bauchhöhle und der andere zwischen Muskel und Haut befindet. Die Nähte sollten vor dem Schnitt vorbereitet werden und der Muskel sollte erst nach dem Einführen des Katheters gelöst werden. Da der Schnitt sonst sehr klein ist, könnte es schwierig sein, ihn wiederzufinden.

Führen Sie den Zugangsport in den subkutanen Raum in Richtung Schwanz der Maus ein und verschließen Sie die Wunde mit einer zweiten Naht. Bringen Sie das Tier dann nach dem vollständigen Liegen des Brustbeins in seinen Käfig zurück. Vier bis sieben Tage später, um die Peritonealdialysebehandlung einzuleiten, befüllen Sie zunächst eine Spritze mit zwei Millilitern Peritonealdialyseflüssigkeit und desinfizieren Sie die Haut um den Port herum mit 1%iger Chlorhexidingluconatlösung.

Halten Sie das Tier dann mit einer Hand am Schwanz und der Zugangsöffnung fest und injizieren Sie die Flüssigkeit mit der anderen Hand mit einer abgeschrägten Nadel in die Öffnung. Für eine 5/6-Nephrektomie und Katheterplatzierung wird nach der Vorbereitung der Tiere auf die Operation, wie gezeigt, ein 0,5 Zentimeter langer Hautschnitt auf der linken Seite des Tieres in der Nähe der Unterseite der Rippen vorgenommen. Öffnen Sie einen kleinen Schnitt im Muskel, um die linke Niere aus dem Bauchfell zu extrahieren, und entfernen Sie die Kapsel und die Nebenniere.

Verwenden Sie einen Kauterisator, um die Extremitäten der Niere zu verbrennen und zu schneiden und die Niere wieder in die Bauchhöhle zu führen. Verschließen Sie dann die Muskel- und Hautwunden mit unlöslichen 5-0- oder 6-0-Nähten und bringen Sie das Tier in seinen Käfig zurück, wenn es sich vollständig erholt hat. Machen Sie am nächsten Tag einen 0,5 Zentimeter großen Hautschnitt auf der rechten Seite des Tieres und trennen Sie die Haut am Rücken des Tieres vom Muskel, wie gezeigt.

Machen Sie einen 0,3 bis 0,4 Zentimeter großen Schnitt in den Muskel und extrahieren Sie die rechte Niere aus der Bauchhöhle. Entfernen Sie die Kapsel und die Nebenniere und verwenden Sie eine nicht resorbierbare 5-0- oder 6-0-Naht, um die Nierenvene, die Arterie und den Harnleiter zu ligieren. Entfernen Sie nun die Niere vollständig und führen Sie den Katheter so ein, dass der Muskel wie gezeigt zwischen den beiden Kunststoffringen gehalten wird, bevor Sie die Muskelwunde schließen.

Führen Sie den Zugangsport in den subkutanen Raum ein und schließen Sie die Haut, wie gezeigt. Bringen Sie dann das Tier unter Überwachung in seinen Käfig zurück, bis es sich vollständig erholt hat, und lassen Sie das Tier mindestens 10 Tage lang genesen, bevor Sie die hyperosmotische Flüssigkeit wie gezeigt verabreichen. Periale Peritonealgewebe der Maus, das aus dem entferntesten Bereich des Katheters gewonnen wurde, zeigt eine erhöhte Dicke und Zellrekrutierung während der Dialyse, die sich bei den nephrektomierten Tieren weiter verschlimmert.

Thymus-Epithelzellen weisen auch eine veränderte Morphologie auf, die auf den durch die Peritonealdialyse induzierten Abbau der interzellulären Vereinigung zurückzuführen ist. Serumproben von nephrektomisierten Mäusen deuten darauf hin, dass eine 5/6-Nephrektomie einen urämischen Zustand induziert, der die Harnstoffstickstoffspiegel im Verlauf des Experiments im Vergleich zum Ausgangswert erhöht. Darüber hinaus bleiben die Harneinstickstoffspiegel bei voll funktionsfähigen Nieren ähnlich wie im basalen Zustand, selbst bei Mäusen, die der Peritonealdialyseflüssigkeit ausgesetzt sind.

Diese Techniken können in fünf bis sieben Minuten abgeschlossen werden. Ohne Nephrektomie 15 bis 20 Minuten. Für die Kauterisation der linken Niere 20 bis 25 Minuten.

Für die richtige Nierenentfernung und Katheterplatzierung, wenn die Methodik richtig angewendet wird. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Peritonealdialyse, um therapeutische Optionen für die Peritonealkonservierung bei Nierenpatienten zu erforschen, die einer Peritonealdialysebehandlung unterzogen wurden.