Name: Erwachsenen Maus DRG Explant und distanzierte Zellmodelle um Neuroplastizität und Antworten auf ökologische Beleidigungen einschließlich Virusinfektion zu untersuchen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Erfahren Sie die DRG-Explantat- und Zellkulturmethode zur Untersuchung von Neuroplastizität und Virusinfektionsantworten bei der Maus. Diese Technik ermöglicht präzise Analysen neuronaler Reaktionen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wir danken die Bildgebung Kern-Anlage am Midwestern University (MWU) und der Gruppe der Studierenden [Chanmoly Seng, Christopher Dipollina, Darryl Giambalvo und Casey Sigerson] für ihre Beiträge in Zellkultur und imaging-Arbeit. Diese Forschungsarbeit wurde unterstützt von der MWU Intramurales Zuschüsse, M.F. und Forschung Startkapital, V.T.

Alle Verfahren, einschließlich der Verwendung der Tiere sind durch die institutionelle Review Board genehmigten Protokolle (IACUC-Midwestern University) genehmigt worden.
1. Ernte DRG von Mäuseembryonen
<ol><li>
Einschläfern Sie die Erwachsenen Mäusen durch Erstickung Methode (CO2) gefolgt von Enthauptung. Fahren Sie sofort mit der Wirbelsäule operativ zu entfernen.
	<ol>
<li>Setzen Sie die Wirbelsäule durch eine Senkung der Hautschicht dorsal mit einer feinen Schere. Isolieren Sie die Wirbelsäule durch Schneiden durch die Rippen auf beiden Seiten der Spalte und durch das Kreuzbein der Wirbelsäule von der Rest des Tieres zu trennen.</li>
		<li>Montieren Sie die vertebrale Spalte (ventrale Seite nach oben) auf eine chirurgische Matte mit Hilfe der Nadeln/Pins.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Schneiden Sie ein Double mit feinen Schere machen auf beiden Seiten der Wirbelkörper, die Bauchseite den Wirbelkanal verfügbar zu machen.</li>
	<li>Unter einem Operationsmikroskop (set mit 4 X Vergrößerung) mit einer Schere vorsichtig bewegen das Rückenmark auf der Seite, die kontralateralen dorsalen spinalen Wurzeln freizulegen und die DRG, entlang der dorsalen Wurzeln der peripheren Nerven zu finden. Jedes Ganglion ist teilweise in die Bandscheiben Foramina versteckt.</li>
	<li>Zur Ernte der DRG, Dorsal Root (zwischen Rückenmark und die DRG) mit einer Zange zusammendrücken und der DRG von Bandscheiben Foramen vorsichtig herausziehen.</li>
	<li>Legen Sie die zweite Zange auf die Spinalnerven Peripherie zu der DRG und ziehen Sie die DRG zusammen mit den Spinalnerven und spinalen Wurzel zu.</li>
	<li>Legen Sie die gesammelten DRG in einem 35 mm Petrischale mit 3 mL eiskaltes Serum freie Medien (SFM)34.</li>
	<li>Übertragen Sie jedes einzelnen DRG in ein trockenes Glas Petrischale, unter einem Operationsmikroskop, reinigen Sie und schneiden Sie überschüssige Fasern und Bindegewebe, die noch an die DRG mit einer Klinge befestigt. Die DRG ist leicht erkennbar als eine bauchige transparente Struktur entlang der weißen Spinalnerven/Wurzel. Blutgefäße sind oft rund um die DRG gefunden.</li>
	<li>Legen Sie die gereinigte DRG in eine neue Petrischale mit eiskalten SFM-Medien.</li>
	<li>Verdünnen Sie die gallertartige Proteinmischung (siehe Tabelle der Materialien) im eiskalten SFM (1:1).</li>
	<li>Platte der DRG ex Vivo in 12-Well Platten vorbeschichtet mit 10/20 µL gallertartige Proteinmischung und setzte sie in die Brutmaschine für 30-60 min bei 37 ° C und 5 % CO2 .</li>
	<li>Fügen Sie 1,5-2 mL SFM sanft das Kultursystem zu decken die gesamte Explant Explantaten bei Kultivierung Bedingungen (37 ° C und 5 % CO2 hinzu). Hinweis: Dies ist ein entscheidender Schritt, da die DRG die Glasschalen nur durch die polymerisierten gallertartige Proteinmischung verankert ist. Zeitpunkt der Polymerisation und Pipettieren Fähigkeiten sind entscheidend für schwimmende zu vermeiden.</li>
	<li>Das Medium der wachsenden DRG alle 72 h verändern und lassen der DRG für wachsen, so lange wie nötig.</li>
</ol>2. isolieren einzelne Zelle Neuronen von DRG
<ol><li>Ort die DRG in einem 1,5 mL steriles Röhrchen mit 1,2 mL F12 Medien mit 1,25 mg/mL der Kollagenbildung IV gesammelt und bei 37 ° C und 5 % CO2 für 45 min. inkubieren wiederholen Sie diesen Schritt für weitere 45 Minuten nach der ersten Inkubation.</li>
	<li>Explantaten mit 2 mL F12 Medien mit Trypsin (0,025 %) für 30 min sofort nach der IV Kollagenase-Behandlung bei 37 ° C und 5 % CO2zu behandeln.</li>
	<li>Mit 2 mL F12 Medien mit fetalen bovine Serum (FBS; 33 %) bei 37 ° C und 5 % CO2 für 15 min inkubieren.</li>
	<li>Waschen Sie Explantaten dreimal mit 2 mL F12 Medien zu, und fahren Sie mit mechanisch mit einer Glaspipette distanzieren, bis die Medien trübe werden. Hinweis: Dieses Verfahren beinhaltet die Sammlung von reinigen/getrimmt DRG des Tieres wie im vorherigen Abschnitt erläutert. Bei der mechanischen Dissoziation von Explantaten sanft sein und keine Gewalt anwenden, da es zu verschütten und Verlust von Arbeitsmaterial führen kann.</li>
	<li>Filtern Sie die dissoziierten Zellkultur durch einen 0,22 µm-Filter um überschüssiges Bindegewebe und Verunreinigungen zu entfernen. Zentrifugieren Sie die gefilterten Zelle lysate (2.500 x g) 2 min. lang.</li>
	<li>Entfernen den Überstand und Aufschwemmen der Zelle Pellet in 500 µL Neurobasal Medien mit Zuschlag für neuronale Kultur (1 X), antibiotische Mischung (1 X), L-Glutamat (0,5 mM), und Nerven-Wachstumsfaktor (5 µg/mL) (siehe Tabelle der Materialien).</li>
	<li>Platte die dissoziierten Zellen auf Laminin-beschichteten Abdeckung Dias (50 µg/mL; siehe Tabelle Material) auf eine bevorzugte Zelldichte. Bestimmen Sie die Zelldichte Zelle Zähler. Hinweis: Wir vernickelt Zellen auf 25.000 Zellen/Titeldia. Diese Technik ermöglicht Dissoziation von Neuronen und Gliazellen Satelliten. Die Glia Komponente CO kultiviert mit den pseudounipolar Neuronen spielt eine entscheidende Rolle für das neuronale überleben.</li>
</ol>3. HSV-1 Infektion der DRG Explantaten und DRG-abgeleitete dissoziierten Zellen
Hinweis: Diese Arbeit erfolgte durch streng nach den Biosafety Level-2 (BSL-2) Anforderungen, die haben wir ein voll ausgestattetes Labor, das vom Midwestern University Biosafety Committee genehmigt ist. Ein KOS-Stamm von HSV-1 wurde in dieser Studie verwendet. Bitte nehmen Sie entsprechende Messungen und Sicherheitsvorkehrungen gemäß lokalen Institutionen Richtlinien, wenn mit Virusstämmen arbeiten.
<ol><li>Bestimmen Sie und bereiten Sie das Virus in die korrekte Verdünnungen in SFM Medien, das Modell zu infizieren. Das Virus in dieser Studie verwendet wurde KOS Stamm von HSV-1. Beim Arbeiten mit DRG-abgeleitete Zellen getrennt, verwenden Sie 1 Einheit der Multiplizität der Infektion (MOI) für Infektion, d.h. die Anzahl der Virus gleich der Anzahl der Zellen.</li>
	<li>Wenn explants DRG zu infizieren, verwenden Sie die Anzahl der Virionen (z.B. 10.000 Virionen), da eine genaue Anzahl von Zellen in einem modellabhängigen nicht bestimmt werden kann.</li>
	<li>Legen Sie die modellabhängigen/Zellen mit Virus in eine sterile Zelle Platte oder Röhrchen mit einer Mischung von SFM Medien und Virus infiziert werden. Hinweis: Wir haben 25.000 Virionen für ein Titeldia mit 25.000 Zellen (1 MOI). Um eine Explant infizieren, verwenden wir 10.000 Virionen.</li>
	<li>Platzieren Sie die Zellplatte oder Röhrchen bei 37 ° C für eine Infektion stattfinden; virale Belichtungszeit variieren je nach virale Infektiosität. Hinweis: Virale Eintrag wurde mithilfe von ortho-Nitrophenyl-β-Galactoside (ONPG) und 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside (X-gal) Assays26bestätigt.</li>
</ol>4. Immunfluoreszenz
<ol><li>Befestigen Sie den Explantaten und einzelne Zellenproben in 4 % Formalin in Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) vorbereitet. Waschen Sie Proben 3 mal 10 min in PBS.</li>
	<li>Inkubieren Sie die Proben mit gewünschten primären Antikörper (Anti-β-Tubulin, Anti-Peripherin, Anti-Heparan Sulfat (HS) und/oder Anti-Glykoprotein D (gD) Antikörper; siehe Tabelle der Materialien für Verdünnungen) verdünnt in PBS-Puffer mit 0,3 % Triton-X (PBST) und 10 % normalem Ziegenserum. Speichern Sie die Proben bei 4 ° C über Nacht.</li>
	<li>Waschen Sie die Proben 3 mal 10 min mit PBS. Proben bei Raumtemperatur für 1 h in der entsprechenden Sekundärantikörper inkubieren (488 und/oder Cy3; Tabelle der Materialien finden Sie in Verdünnungen) in PBS verdünnt.</li>
	<li>Waschen Sie die Proben 3 mal 10 min mit PBS. 20 min vor Montage Schritt inkubieren Sie die Proben mit Hoechst Farbstoff (1,5 µM) in PBS.</li>
	<li>Montieren Sie die Proben auf Objektträgern mit einem Fluoreszenz-Eindeckmittel und Deckglas.</li>
</ol>

<ol><li>Muratori, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+new+neurons+in+dorsal+root+Ganglia+in+adult+rats+after+peripheral+nerve+crush+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">Generation of new neurons in dorsal root Ganglia in adult rats after peripheral nerve crush injury.</a> Neural Plast. , 860546(2015).</li>
<li>Dellarole, A., Grilli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+dorsal+root+ganglia+sensory+neurons+express+the+early+neuronal+fate+marker+doublecortin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Adult dorsal root ganglia sensory neurons express the early neuronal fate marker doublecortin.</a> J Comp Neurol. 511 (3), 318-328 (2008).</li>
<li>Devor, M., Govrin-Lippmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+adult+rat+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in adult rat dorsal root ganglia.</a> Neurosci Lett. 61 (1-2), 189-194 (1985).</li>
<li>Farel, P. B., Boyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+effects+of+nerve+injury+on+estimates+of+sensory+neuron+number+in+juvenile+bullfrog%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Transient effects of nerve injury on estimates of sensory neuron number in juvenile bullfrog.</a> J Comp Neurol. 410 (2), 171-177 (1999).</li>
<li>Geuna, S., Borrione, P., Poncino, A., Giacobini-Robecchi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometrical+changes+in+dorsal+root+ganglion+neurons+innervating+the+regenerated+lizard+tail%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometrical changes in dorsal root ganglion neurons innervating the regenerated lizard tail.</a> Int J Dev Neurosci. 16 (2), 85-95 (1998).</li>
<li>La Forte, R. A., Melville, S., Chung, K., Coggeshall, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+neurogenesis+of+adult+rat+dorsal+root+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosens+Mot+Res%22%5BJournal%5D)">Absence of neurogenesis of adult rat dorsal root ganglion cells.</a> Somatosens Mot Res. 8 (1), 3-7 (1991).</li>
<li>Pannese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigations+on+the+Ultrastructural+Changes+of+the+Spinal+Ganglion+Neurons+in+the+Course+of+Axon+Regeneration+and+Cell+Hypertrophy+I.+Changes+during+Axon+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Z+Zellforsch+Mikrosk+Anat%22%5BJournal%5D)">Investigations on the Ultrastructural Changes of the Spinal Ganglion Neurons in the Course of Axon Regeneration and Cell Hypertrophy I. Changes during Axon Regeneration.</a> Z Zellforsch Mikrosk Anat. 60, 711-740 (1963).</li>
<li>Popken, G. J., Farel, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+neuron+number+in+neonatal+and+adult+rats+estimated+by+means+of+stereologic+and+profile-based+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Sensory neuron number in neonatal and adult rats estimated by means of stereologic and profile-based methods.</a> J Comp Neurol. 386 (1), 8-15 (1997).</li>
<li>Tandrup, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+estimates+of+number+and+size+of+rat+dorsal+root+ganglion+cells+in+studies+of+structure+and+cell+survival%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Unbiased estimates of number and size of rat dorsal root ganglion cells in studies of structure and cell survival.</a> J Neurocytol. 33 (2), 173-192 (2004).</li>
<li>Sarikcioglu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+severe+crush+injury+on+axonal+regeneration%3A+a+functional+and+ultrastructural+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reconstr+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Effect of severe crush injury on axonal regeneration: a functional and ultrastructural study.</a> J Reconstr Microsurg. 23 (3), 143-149 (2007).</li>
<li>Varejao, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J Neurotrauma. 21 (11), 1652-1670 (2004).</li>
<li>Hanack, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+blocks+pathological+but+not+acute+TRPV1+pain+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">GABA blocks pathological but not acute TRPV1 pain signals.</a> Cell. 160 (4), 759-770 (2015).</li>
<li>Pagadala, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+NR1+subunit+of+NMDARs+in+primary+sensory+neurons+leads+to+hyperexcitability+and+pain+hypersensitivity%3A+involvement+of+Ca%282%2B%29-activated+small+conductance+potassium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Loss of NR1 subunit of NMDARs in primary sensory neurons leads to hyperexcitability and pain hypersensitivity: involvement of Ca(2+)-activated small conductance potassium channels.</a> J Neurosci. 33 (33), 13425-13430 (2013).</li>
<li>Zhang, X. L., Albers, K. M., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+increase+in+nicotinic+acetylcholine+receptor+current+in+cutaneous+nociceptive+DRG+neurons+from+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced increase in nicotinic acetylcholine receptor current in cutaneous nociceptive DRG neurons from the adult rat.</a> Neuroscience. 284, 483-499 (2015).</li>
<li>Zhu, Y., Lu, S. G., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+inflammation+increases+GABA-induced+depolarization+of+rat+cutaneous+dorsal+root+ganglion+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Persistent inflammation increases GABA-induced depolarization of rat cutaneous dorsal root ganglion neurons in vitro.</a> Neuroscience. 220, 330-340 (2012).</li>
<li>Amir, R., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cross-excitation+between+afferent+A-+and+C-neurons+in+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional cross-excitation between afferent A- and C-neurons in dorsal root ganglia.</a> Neuroscience. 95 (1), 189-195 (2000).</li>
<li>Kim, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupled+Activation+of+Primary+Sensory+Neurons+Contributes+to+Chronic+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Coupled Activation of Primary Sensory Neurons Contributes to Chronic Pain.</a> Neuron. 91 (5), 1085-1096 (2016).</li>
<li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li>
<li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-Region-Specific+Organoids+Using+Mini-bioreactors+for+Modeling+ZIKV+Exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Brain-Region-Specific Organoids Using Mini-bioreactors for Modeling ZIKV Exposure.</a> Cell. 165 (5), 1238-1254 (2016).</li>
<li>Lowery, L. A., Van Vactor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+trip+of+the+tip%3A+understanding+the+growth+cone+machinery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The trip of the tip: understanding the growth cone machinery.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10 (5), 332-343 (2009).</li>
<li>Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+axon+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of axon guidance.</a> Science. 298 (5600), 1959-1964 (2002).</li>
<li>Miller, C., Shanks, H., Witt, A., Rutkowski, G., Mallapragada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oriented+Schwann+cell+growth+on+micropatterned+biodegradable+polymer+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Oriented Schwann cell growth on micropatterned biodegradable polymer substrates.</a> Biomaterials. 22 (11), 1263-1269 (2001).</li>
<li>Clark, P., Connolly, P., Curtis, A. S., Dow, J. A., Wilkinson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographical+control+of+cell+behaviour%3A+II.+Multiple+grooved+substrata%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Topographical control of cell behaviour: II. Multiple grooved substrata.</a> Development. 108 (4), 635-644 (1990).</li>
<li>Antinone, S. E., Smith, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+axon+transport+of+herpes+simplex+virus+and+pseudorabies+virus%3A+a+live-cell+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Retrograde axon transport of herpes simplex virus and pseudorabies virus: a live-cell comparative analysis.</a> J Virol. 84 (3), 1504-1512 (2010).</li>
<li>Holland, D. J., Miranda-Saksena, M., Boadle, R. A., Armati, P., Cunningham, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterograde+transport+of+herpes+simplex+virus+proteins+in+axons+of+peripheral+human+fetal+neurons%3A+an+immunoelectron+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Anterograde transport of herpes simplex virus proteins in axons of peripheral human fetal neurons: an immunoelectron microscopy study.</a> J Virol. 73 (10), 8503-8511 (1999).</li>
<li>Sharthiya, H., Seng, C., Van Kuppevelt, T. H., Tiwari, V., Fornaro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HSV-1+interaction+to+3-O-sulfated+heparan+sulfate+in+mouse-derived+DRG+explant+and+profiles+of+inflammatory+markers+during+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurovirol%22%5BJournal%5D)">HSV-1 interaction to 3-O-sulfated heparan sulfate in mouse-derived DRG explant and profiles of inflammatory markers during virus infection.</a> J Neurovirol. 23 (3), 483-491 (2017).</li>
<li>Zerboni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+1+tropism+for+human+sensory+ganglion+neurons+in+the+severe+combined+immunodeficiency+mouse+model+of+neuropathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus 1 tropism for human sensory ganglion neurons in the severe combined immunodeficiency mouse model of neuropathogenesis.</a> J Virol. 87 (5), 2791-2802 (2013).</li>
<li>Koyuncu, O. O., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus+infections+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Virus infections in the nervous system.</a> Cell Host Microbe. 13 (4), 379-393 (2013).</li>
<li>Swanson, P. A. 2nd, McGavern, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+diseases+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Virol%22%5BJournal%5D)">Viral diseases of the central nervous system.</a> Curr Opin Virol. 11, 44-54 (2015).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+viral+infections+of+the+central+nervous+system%3A+part+2%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Emerging viral infections of the central nervous system: part 2.</a> Arch Neurol. 66 (9), 1065-1074 (2009).</li>
<li>Preston, C., Efstathiou, S., et al. Ch 33. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPreston%2C+C+%22Human+Herpesviruses+Biology%2C+Therapy%2C+and+Immunoprophylaxis%22">Human Herpesviruses Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis</a>. Campadelli-Fiume, G., Arvin, A., Mocarski, E., et al. , Cambridge University Press. (2007).</li>
<li>Roizman, B., Whitley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inquiry+into+the+molecular+basis+of+HSV+latency+and+reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An inquiry into the molecular basis of HSV latency and reactivation.</a> Annu Rev Microbiol. 67, 355-374 (2013).</li>
<li>Arvin, A., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWhitley%2C+R+%22Human+Herpesviruses%3A+Biology%2C+Therapy%2C+and+Immunoprophylaxis%22">Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis</a>. , (2007).</li>
<li>Fueshko, S., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LHRH+cells+migrate+on+peripherin+fibers+in+embryonic+olfactory+explant+cultures%3A+an+in+vitro+model+for+neurophilic+neuronal+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">LHRH cells migrate on peripherin fibers in embryonic olfactory explant cultures: an in vitro model for neurophilic neuronal migration.</a> Dev Biol. 166 (1), 331-348 (1994).</li>
<li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+heparan+sulphate+in+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of heparan sulphate in inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 6 (9), 633-643 (2006).</li>
<li>Zhang, X., Wang, B., Li, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+heparan+sulfate+and+heparanase+in+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol%22%5BJournal%5D)">Implications of heparan sulfate and heparanase in neuroinflammation.</a> Matrix Biol. 35, 174-181 (2014).</li>
<li>Du, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+GABAergic+signaling+within+sensory+ganglia+controls+peripheral+nociceptive+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Local GABAergic signaling within sensory ganglia controls peripheral nociceptive transmission.</a> J Clin Invest. 127 (5), 1741-1756 (2017).</li>
<li>Hughes, C. S., Postovit, L. M., Lajoie, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel%3A+a+complex+protein+mixture+required+for+optimal+growth+of+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture.</a> Proteomics. 10 (9), 1886-1890 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zur Offenlegung.

Das ex-Vivo DRG Modell ist äußerst nützlich, um ein breites Spektrum an Veranstaltungen wie Neuron-Glia-Interaktion sowie die Wirkung der Mikroumgebung auf beiden neuronalen und Glia-Stoffwechsel-37zu untersuchen. Darüber hinaus das DRG-Modell als ein kostengünstiges Instrument ließe sich relevante Fragen bezüglich pathogenetischen Mechanismen und die damit verbundenen Marker für akute chronische und latente Phase der Infektion oder in einer bestimmten Krankheit ex- Vivo -Systeme...

In diesem Manuskript berichten wir über eine Methode, um ein organotypischen Ex Vivo Modell der DRG Modellsystem Maus abgeleitet als eine erhaltene Gewebe-wie Mikroumgebung zu untersuchen, eine Vielzahl von biologischen Reaktionen auf PNS Beleidigungen von Neuron-Glia bis hin zu erhalten Interaktion, Neuroplastizität, Entzündungsmarker, Virusinfektion. Darüber hinaus haben wir ein Protokoll, um eine primäre Co DRG-abgeleitete einzelnen sensorischen Neuronen und Satellitenzellen Evaluierungskultur weiter entwickelt.
Die DRG sind Sat-grau-Materie-Einheiten außerhalb des zentralen Nervensystems (ZNS) entlang der dorsalen Wirbelsäulen Wurzeln der Spinalnerven. Die DRG, befindet sich in der Nähe der Bandscheiben Foramina, Haus pseudounipolar sensorischen Neuronen und Gliazellen Satelliten. Die pseudounipolar Neuronen verfügen über eine einzelne Neuriten, die teilt sich in einen peripheren Prozess mit somatischen und viszeralen Eingänge von peripheren Zielen zum Zellkörper und ein zentrales Verfahren, das sensorischen Informationen vom Zellkörper in das ZNS übermittelt. Eine verbindende Kapsel definiert und isoliert dieser peripheren Cluster von Neuronen und Gliazellen aus CNS. Keine postnatale Zellwanderung zur oder von der DRG hat jemals beschrieben und eine lokale Stammzellnische ist verantwortlich für neurogene Ereignisse im gesamten Leben1. Daher eignet sich dieses Modell besonders zu studieren adulten Neurogenese, Axonogenesis, Reaktion auf traumatische Läsion und Zelle Tod2,3,4,5,6,7 ,8,9 .
Auf dem Gebiet der Neuroregeneration der DRG von in Vivo geerntet und explantierten in Vitro reproduziert Axonotmesis, ein Verletzung Zustand in die Axone vollständig durchtrennt werden und die neuronale Zellkörper ist getrennt vom innervierten Ziel10 ,11. Es ist bekannt, dass periphere Nervenverletzung kann verringerte und erhöhte Genexpression in der DRG verursachen und viele dieser Veränderungen ein Ergebnis der regenerativen Prozesse sind aber viele möglicherweise auch eine Folge der Immunantwort oder eine andere Antwort von nicht-neuronalen Zellen. Mithilfe einer ex Vivo System der isolierten DRG, etwas von dieser Komplexität wird entfernt und mechanistische Wege leichter untersucht werden können.
Neben ihrer zentralen Rolle bei der Vermittlung der Sinneseindrücke, des ZNS, die Fülle der Rezeptoren für viele Neurotransmitter GABA12,13,14,15 auf der Ebene der neuronalen Soma einschließlich sowie Nachweis der interneuronale Kreuz-Erregung kann vorschlagen, dass DRG sind anspruchsvolle vorläufige Integratoren Sinneseindrücke16,17. Diese neuen Erkenntnisse verleihen der DRG Explant die Eigenschaften eines Mini-neuronalen Netzwerk-Systems ähnlich wie bei anderen "Mini-Brain"-Modelle, die nervös-Gewebe-spezifische Organellen verwendet für breitere Experimentierfelder Untersuchung sind und therapeutische Umgang mit neurologischen Erkrankungen18,19. Diese Beweise zusammen mit der Tatsache, dass die DRG ein diskret und gut definierte Cluster neuronale Gewebe umgeben von Bindegewebe Kapsel ist, machen es eine geeignete Orgel für ex-Vivo -Transplantation.
Kultivierung Maus DRG präsentiert mehrzelligen attraktiv, menschliche Krankheitszuständen durch strukturelle und genetische Ähnlichkeiten zwischen den Spezies zu modellieren. Darüber hinaus ist eine große Sammlung von transgenen Mausstämme sehr förderlich für zukünftige mechanistische Studien. Neurit Verlängerung während der Entwicklung und nach einer Verletzung erfordert mechanische Wechselwirkungen zwischen Wachstum Kegel und Substrat20,21. Nano - und Mikro-gemusterten Substrate wurden als Werkzeuge, direkte Neuriten Auswuchs und demonstrieren ihre Fähigkeit, auf topografische Merkmale in ihrer Mikroumgebungen verwendet. Neuronen haben gezeigt, zu überleben, zu halten, migrieren und ihre Axone um Oberflächeneigenschaften wie Rillen in Substraten22,23navigieren zu orientieren. Aber diese Studien haben in der Regel kultivierten Zelllinien verwendet und es ist schwer vorherzusagen, wie primäre neuronalen Zellen wird auf klar definierte, körperliche Signale in Vivo und ex Vivoreagieren.
Ex-Vivo Explant Modell Maus DRG verwendet für diesen Vorschlag imitiert die echte Zell-Zell-Interaktion und biochemische Hinweise rund um wachsende Axone. Unter vielen verschiedenen experimentellen Paradigmen von axonalen Regeneration, Neurosphäre Produktion, bis hin zu Neuroinflammation, DRG explant weiterhin Modell als ein wertvolles Instrument zu untersuchen, die virale Infektion und Latenz Aspekt innerhalb von sensorischen dienen Ganglien24,25,26,27.
Das Nervensystem (NS) ist in der Regel Ziel für virale Infektionen28,29,30. Die meisten Viren infizieren Epithelzellen und endotheliale Zelloberflächen und ihren Weg von der Oberfläche Gewebe zu NS über periphere Nerven sensorische und motorische Fasern. Vor allem die Herpes-Simplex-Virus Typ 1 (HSV-1) nach ein Erstinfektion in epithelialen Zellen stellt eine lebenslange Latenz in den sensorischen Ganglien vorzugsweise die DRG der PNS31,32. HSV-1 Neuroptropic-Fähigkeit der PNS zu infizieren führt letztendlich zu neurologischen Erkrankungen33.

<table><tbody><tr><td>Erwachsene Mäuse NIH/Swiss</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>35mm Petrischale</td><td>Cell Treat</td><td>229635</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel ECM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1270</td><td>gallertartige Proteinmischung</td></tr><tr><td>F12 Medien</td><td>Gibco</td><td>11765-054</td><td>*Teil von SFM Medien</td></tr><tr><td>Kollagenase IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6178</td><td></td></tr><tr><td>0,22um Filter</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasale Medien</td><td>Gibco</td><td>10888-022</td><td></td></tr><tr><td>B27 Ergänzung</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td>Ergänzung für neuronale Kultur</td></tr><tr><td>PSN-Antibiotika</td><td>Gibco</td><td>15640-055</td><td>*Teil von SFM media Antibiotika-Gemisch</td></tr><tr><td>L-Glutamat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td>*Teil der SFM-Medien</td></tr><tr><td>NGF</td><td>Alomone Labs</td><td>N-100</td><td>Nervenwachstumsfaktor</td></tr><tr><td>Laminin beschichtetes Deckglas</td><td>Neuvitro</td><td>GG-14-Laminin</td><td></td></tr><tr><td>ONPG-Subtrat</td><td>Pierce</td><td>34055</td><td></td></tr><tr><td>X-Gal</td><td>Invitrogen</td><td>15520034</td><td></td></tr><tr><td>Antikörper anti-B-Tubulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8328</td><td>1:2000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Antikörper anti-peripherin</td><td>Millipore</td><td>AB1530</td><td>1:1000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Hoechst Farbstoff</td><td>Thermo Fisher</td><td>62249</td><td>1,5 &micro; M Endkonzentration</td></tr><tr><td>Anti-Heparansulfat</td><td>US Biological</td><td>H1890-10</td><td>0,180555556</td></tr><tr><td>Anti gD Antikörper</td><td>Virostat</td><td>196</td><td>1:10 Verdünnung</td></tr><tr><td>BSA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153-100G</td><td>*Teil des SFM-Mediums</td></tr><tr><td>BME</td><td>Gibco</td><td>21010-046</td><td>*Teil des SFM-Mediums</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021-1KG</td><td>*Teil des SFM-Mediums</td></tr><tr><td>KIT (Insulin-Transferrin-Selen-A)</td><td>Gibco</td><td>51300-044</td><td>*Teil des SFM-Mediums</td></tr><tr><td>Vitamin-C</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td>*Teil des SFM-Mediums</td></tr><tr><td>Putrescine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7505</td><td>*Teil von SFM media</td></tr><tr><td>488 (Ziegen-Anti-Maus)</td><td>Life Technologies</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>Cy3 (Ziegen-Anti-Kaninchen)</td><td>Jackson Immunoresearch Laboratories</td><td>111-165-003</td><td></td></tr><tr><td>Normales Ziegenserum&nbsp;</td><td>Vector</td><td>S-1000</td><td></td></tr><tr><td>Formalin Solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT5014-120ML</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9284-500ML</td><td></td></tr><tr><td>VectaShield</td><td>Vector</td><td>H-1500</td><td>Flurescence Mount</td></tr><tr><td>Diamond White Glas Deckfolien</td><td>Globe Scientific</td><td>1380-20</td><td></td></tr></tbody></table>

erwachsenen maus drg explant und distanzierte zellmodelle um neuroplastizität und antworten auf ökologische beleidigungen einschließlich virusinfektion zu untersuchen

Adult Mouse DRG Explant and Dissociated Cell Models to Investigate Neuroplasticity and Responses to Environmental Insults Including Viral Infection

Dieses Protokoll beschreibt eine ex Vivo Modell Maus abgeleitet Dorsal Root Ganglien (DRG) Explant und in-vitro- DRG-abgeleitete Co Kultur der dissoziierten sensorischen Neuronen und Gliazellen Satelliten. Dies sind nützliche und vielseitige Modelle, eine Vielzahl von biologischen Reaktionen im Zusammenhang mit physiologischen und pathologischen Bedingungen des peripheren Nervensystems (PNS) von Neuron-Glia-Interaktion, Neuroplastizität bis hin zu untersuchen, Neuroinflammation und Virusinfektion. Die Nutzung der DRG Explant ist wissenschaftlich vorteilhaft im Vergleich zu simpel Einzelzellen Modellen aus mehreren Gründen. Beispielsweise als eine organotypischen Kultur ermöglicht die DRG Explant ex Vivo Übertragung von ein ganzes neuronalen Netzwerk einschließlich der extrazellulären Mikroumgebung, die eine wichtige Rolle in der neuronalen und glialen-Funktionen. DRG-Explantaten können darüber hinaus auch beibehalten werden, ex Vivo für mehrere Tage und die Kulturbedingungen als gestört werden können die gewünschte. Darüber hinaus kann die geerntete DRG weiter in eine in-vitro- Co Kultur der primären sensorischen Neuronen und Glia Satellitenzellen untersuchen neuronale Glia Interaktion, Neuritogenesis, axonalen Kegel Interaktion mit der extrazellulären getrennt werden Mikroumgebung, und allgemeiner, jeden Aspekt der neuronalen Stoffwechsel zugeordnet. Daher bietet das DRG-Explant System ein hohes Maß an Flexibilität, eine Vielzahl von Veranstaltungen im Zusammenhang mit biologischen, physiologischen und pathologischen Bedingungen in einer kosteneffektiven Weise zu studieren.

DRG und eine Einzelzelle dissoziierten Kultur Modell können mehrere Aspekte der Neuroplastizität und Neuron-Umwelt-Interaktion untersucht werden. Wir begannen die Untersuchungen durch die Isolierung einer DRG Explant und DRG-abgeleitete dissoziierten Zellen wie schematisch in Abbildung 1dargestellt. Gewebe und Einzelzellen-Modelle können mit einer Vielzahl von molekularen Techniken wie Immunfluoreszenz, Western-Blot, genomische Assays und andere analytische Techniken je nach Art der Versuchs...

In diesem Bericht werden die Vorteile des organotypischen Kulturen und dissoziierten Primärkulturen von Maus-abgeleitete Dorsal Root Ganglien hervorgehoben, um eine Vielzahl von Mechanismen, die Neuron-Glia-Interaktion, Neuroplastizität zugeordnet zu nehmen, Neuroinflammation und Antwort auf virale Infektion.

Erwachsenen Maus DRG Explant und distanzierte Zellmodelle um Neuroplastizität und Antworten auf ökologische Beleidigungen einschließlich Virusinfektion zu untersuchen

This protocol describes an ex vivo model of mouse-derived dorsal root ganglia (DRG) explant and in vitro DRG-derived co-culture of dissociated sensory ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein ex vivo-Modell von Spinalganglien-Explantaten und/oder ein DRG-abgeleitetes primäres dissoziiertes Zellmodell zu erstellen, um neuronale Reaktionen auf Umweltreize zu untersuchen. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet der Neuroplastizität oder Neuroinflammation als Reaktion auf die Exposition von Krankheitserregern zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass die Explantate der Spinalganglien die organähnliche Komplexität beibehalten, die nützlich ist, um den Zellzyklus in Gang zu setzen und sich aufgrund spezifischer Behandlungen in die interzelluläre Mikroumgebung zu verändern.Die sorgfältige Demonstration dieser Methode ist sehr wichtig, da sowohl die Identifizierung von DRGs als auch deren Ernte aufgrund ihrer Größe und Lage recht schwierig sein können. Um diesen Vorgang zu beginnen, legen Sie die Wirbelsäule frei, indem Sie die Hautschicht des Tieres dorsal mit einer feinen Schere abschneiden. Isolieren Sie anschließend die Wirbelsäule, indem Sie die Rippen auf beiden Seiten der Säule und durch das Kreuzbein durchtrennen und die Wirbelsäule vom Rest des Tieres trennen.Montieren Sie

adult-mouse-drg-explant-dissociated-cell-models-to-investigate

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Entwicklung von dorsalen Wurzelganglien oder DRG-Explantatkulturen und DRG-dissoziierten Zellmodellen unter Verwendung von isoliertem Maus-DRG-Gewebe. Diese Modelle helfen dabei, verschiedene Mechanismen der Neuron-Glia-Interaktionen in einer kontrollierten Umgebung zu untersuchen.

Generierung von Explantat und dissoziierter Zellkultur aus dem Spinalganglion

Dieses Video zeigt die Generierung eines neuronalen Verletzungsmodells in primären Kleinhirngranulaneuronen der Maus. Es werden die Schritte beschrieben, die bei der Induktion von neuronalen Verletzungen unter Verwendung von NMDA, einem exzitatorischen Neurotransmitter-Rezeptor-Agonisten, und Glycin, einem Co-Agonisten, erforderlich sind. NMDA und Glycin binden an spezifische neuronale Rezeptoren, was zu deren Überstimulation führt und zu einem massiven intrazellulären Kalziumeinstrom führt,...

Modellierung neuronaler Schädigung in primären zerebellären Körnerneuronen der Maus

Dieses Video zeigt die Generierung eines neuronalen Verletzungsmodells unter Verwendung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in primären Kleinhirn-Körnerneuronen der Maus. Es beschreibt den Prozess der Induktion von oxidativem Stress durch Zugabe hoher Konzentrationen von Wasserstoffperoxid. Die ROS-Exposition führt zu DNA-Strangbrüchen und genomischer Instabilität. Darüber hinaus beeinträchtigt die Oxidation zellulärer Proteine deren Funktionen, während die Lipidperoxidation die Integrität...

Modellierung des durch reaktive Sauerstoffspezies induzierten neuronalen Todes in zerebellären Körnerneuronen der Maus

Zellkulturmodelle bieten detaillierte Kontrolle über Umweltbedingungen und damit eine leistungsfähige Plattform, um zahlreiche Aspekte neuronaler Zellbiologie aufzuklären. Wir beschreiben eine schnelle, kostengünstige und zuverlässige Methode, um von Hühnerembryonen zu isolieren, zu dissoziieren, und die Kultur sensorischen Neuronen. Details der Substrate Vorbereitung und Immunzytochemie sind ebenfalls vorhanden.

Isolation und Kultur der Dissoziierte sensorischen Neuronen aus Hühnerembryonen

In diesem Artikel beschreiben wir ausführlich ein Protokoll zur Erzeugung von Neurosphärenkulturen aus postnatalen mausneuronischen Stammzellen, die aus den wichtigsten neurogenen Nischen der Maus abgeleitet sind. Neurosphären werden verwendet, um neuronale Stammzellen aus Hirngewebe zu identifizieren, was die Schätzung von Vorläuferzellzahlen ermöglicht. Darüber hinaus können diese 3D-Strukturen unter differenziativen Bedingungen plattiert werden, was zu Neuronen, Oligodendrozyten und...

Isolierung und Expansion von Neurosphären aus postnatalen (P1-3) Maus neurogenen Nischen

Das Footpad-Impfmodell ist ein wertvolles Werkzeug zur Charakterisierung viral-induzierter neuroentzündlicher Reaktionen in vivo. Insbesondere bietet es eine klare Bewertung der viralen Kinetik und der damit verbundenen immunpathologischen Prozesse, die im peripheren Nervensystem eingeleitet wurden.

Maus Footpad Inokulation Modell zur Untersuchung viral-induzierte neuroentzündliche Reaktionen

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur In-vitro-Isolierung mehrerer Gliazellpopulationen aus einem Maus-ZNS. Diese Methode ermöglicht die Segregation von regionalen Mikroglia, Oligodendrozytenvorläuferzellen und Astrozyten, um die Phänotypen jedes einzelnen in einer Vielzahl von Kultursystemen zu untersuchen.

Dissektion und Isolierung von murinen Glia aus mehreren Regionen des zentralen Nervensystems

Wir präsentieren ein In-vitro-Modell zur Beurteilung der olfaktorischen Ensheathing Glia (OEG) neuroregenerativen Kapazität, nach neuronalen Verletzungen. Es basiert auf einer Kokultur von axotomisierten adulten retinalen Ganglion neuronen (RGN) auf OEG-Monolayer und anschließende Studie der axonalen Regeneration, durch die Analyse von RGN axonalen und somatodendritischen Markern.

Cokultur von Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons mit olfactory Ensheathing Glia, als In-Vitro-Modell der erwachsenen axonalen Regeneration

Dieses Protokoll stellt eine einzigartige Möglichkeit dar, Zellkulturen des Zentralnervensystems aus embryonalen Tag-17-Mäusegehirnen für die neuro(immun)ologische Forschung zu generieren. Dieses Modell kann mit verschiedenen experimentellen Techniken analysiert werden, darunter RT-qPCR, Mikroskopie, ELISA und Durchflusszytometrie.

Etablierung gemischter neuronaler und glialer Zellkulturen aus embryonalen Mäusegehirnen zur Untersuchung von Infektionen und angeborener Immunität

Dieses Protokoll beschreibt die viral vermittelte ektopische Expression von Neurod1 nach einem kortikalen ischämischen Schlaganfall. Neurod1 wird (1) mit dem Cre-Flex AAV-System in Wildtyp-Mäusen während der subakuten Phase nach dem Schlaganfall (7 Tage) und (2) unter Verwendung eines einzelnen AAV-Vektors in bedingten Reportermäusen während der chronischen Phase nach dem Schlaganfall (21 Tage) verabreicht.

AAV-Systeme und Mausmodelle zur Untersuchung der ektopischen Expression von Neurod1 in transduzierten Zellen zu subakuten und chronischen Zeitpunkten nach ischämischem Schlaganfall

Hier stellen wir eine detaillierte Methodik zur Isolierung der Netzhaut vom Mausauge für erweiterte ex vivo-Experimente zur Verfügung. Dieses Protokoll unterstreicht die Zugänglichkeit dieses technisch anspruchsvollen Ansatzes für Forscher, die die Forschungsmöglichkeiten nutzen möchten, die sich durch die In-situ-Haltung von retinalen Gliazellen in lebendem Gewebe bieten.

Ein ex vivo Explantatmodell zur Untersuchung von glialen Wechselwirkungen in der Netzhaut der Maus

Erfahren Sie die DRG-Explantat- und Zellkulturmethode zur Untersuchung von Neuroplastizität und Virusinfektionsantworten bei der Maus. Diese Technik ermöglicht präzise Analysen neuronaler Reaktionen.

Erwachsenen Maus DRG Explant und distanzierte Zellmodelle um Neuroplastizität und Antworten auf ökologische Beleidigungen einschließlich Virusinfektion zu untersuchen (Video) | JoVE Journal

Erwachsenen Maus DRG Explant und distanzierte Zellmodelle um Neuroplastizität und Antworten auf ökologische Beleidigungen einschließlich Virusinfektion zu untersuchen

Weitere Videos entdecken