Routine-Screening Methode für Mikropartikel in Thrombozytentransfusionen

Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, Thrombozytentranfusionen durch Routinetests zu charakterisieren, die in Spenderzentren oder Blutbanken von Krankenhäusern durchgeführt werden können, um den Einsatz dieser Blutprodukte bei Blutungs- oder Blutkrebspatienten zu optimieren. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen in der Transfusionsmedizin zu beantworten, z. B. ob eine Blutplättchentransfusion aktivierte oder nicht aktivierte Blutplättchen enthält. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie ein schnelles und genaues Screening des Mikropartikelgehalts als nachgewiesenen Indikator für die Thrombozytenaktivierung bietet.

Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, müssen lernen, wie man Proben aus Schlauchsegmenten von Beuteln entnimmt, da dies derzeit nicht routinemäßig durchgeführt wird. Wir hatten die Idee zu dieser Methode, als wir sahen, dass Blutplättchen von verschiedenen Spendern eine hohe Variabilität im Aktivierungsstatus aufwiesen, was sich auf den Patienten auszuwirken schien. Es gibt drei Methoden, um eine Probe aus einem Thrombozytenkonzentrat zu gewinnen.

Um eine Probe aus einem Beutel zu nehmen, mischen Sie den Inhalt des Blutplättchenbeutels durch sanfte horizontale Bewegung fünf Sekunden lang gut und kippen Sie fünfmal von einem Ende zum anderen. Öffnen Sie die Klemme zum Beutel, der Beutel wird evakuiert und füllt sich von selbst. Es ist nicht notwendig, den Beutel vollständig zu füllen, da nur eine 100-Mikroliter-Probe für die dynamische Lichtstreuung oder DLS-Prüfung benötigt wird.

Trennen Sie den Beutel vom Beutel, indem Sie den Verbindungsschlauch mit einem Schlauchversiegeler heißversiegeln. Vergewissern Sie sich bei der Probenahme aus leeren Schläuchen, dass der Blutplättchenbeutelschlauch leer gelagert wurde und dass der Schlauchblock noch an Ort und Stelle ist. Überprüfen Sie den Schlauch visuell, um sicherzustellen, dass sich kein Thrombozytenkonzentrat im Schlauch befindet.

Schließen Sie den Schlauchabisolierer auf dem Schlauch, so nah wie möglich am Schlauchblock, indem Sie die Griffe zusammendrücken, um den Schlauch zwischen die Rollen zu drücken, während Sie den Abisolierer geschlossen halten, und lösen Sie den Schlauchblock. Ziehe den Abisolierer langsam den leeren Schlauch hinunter, so dass sich der Schlauch langsam hinter dem Abstreifer füllt. Fahren Sie fort, bis sich der Abschnitt unter dem Abstreifer vollständig aufgeblasen hat oder bis sich der Abstreifer innerhalb eines Zentimeters vom Ende des Schlauchs befindet.

Es ist wichtig, die Griffe des Abisolierers fest zusammenzudrücken und den Abisolierer langsam den Schlauch hinunter zu ziehen. Sobald der Stopppunkt mit dem Abisolierer erreicht ist, verwenden Sie den Schlauchversiegeler, um den Schlauch einen Zentimeter über dem Abisolierer heiß zu versiegeln. Lassen Sie nun die Griffe des manuellen Abisolierers los.

Versiegeln Sie erneut ein bis zwei Zoll über der vorherigen Versiegelung, um das Testsegment zu erstellen. Schneiden Sie dann das Testsegment von der Thrombozyteneinheit ab. Dieses Segment wird für DLS-Tests verwendet.

Wenn Sie Proben aus einem Schlauch nehmen, der nicht leer ist, hängen Sie den Beutel senkrecht auf und lösen Sie den Schlauchblock, falls er an Ort und Stelle ist. Überprüfen Sie den Schlauch visuell, um festzustellen, ob signifikante feste Klumpen vorhanden sind. Wenn feste Klumpen vorhanden sind, verschließen Sie sie darüber, so dass sie nicht in den Beutel abgezogen werden können.

Schließen Sie als Nächstes den Abisolierer auf dem Schlauch, so nah wie möglich am abgedichteten Ende des Schlauchs. Entfernen Sie den Inhalt des Schlauchs in den Beutel, indem Sie die Griffe zusammendrücken, um den Schlauch zwischen die Rollen zu drücken. Bewegen Sie den Schlauchabisolierer unter Beibehaltung der Klemmkraft entlang des Schlauchs in Richtung Beutel.

Nehmen Sie den Plättchenbeutel vom Aufhängehaken und mischen Sie den Beutel vorsichtig fünf Sekunden lang, indem Sie ihn fünfmal von einem Ende zum anderen kippen, während Sie den geschlossen halten. Hängen Sie den Beutel senkrecht auf, während Sie den Abisolierer geschlossen halten. Ziehe den Abisolierer langsam den leeren Schlauch hinunter, so dass sich der Schlauch langsam hinter dem Abstreifer füllt.

Fahren Sie fort, bis sich der Abschnitt unter dem Abstreifer vollständig aufgeblasen hat oder bis sich der Abstreifer innerhalb eines Zentimeters vom Ende des Schlauchs befindet. Sobald der Stopppunkt mit dem Abisolierer erreicht ist, verwenden Sie den Rohrversiegeler, um den Schlauch einen Zoll über dem Abisolierer heiß zu versiegeln. Versiegeln Sie nach dem Lösen des Abstreifers erneut ein bis zwei Zoll über der vorherigen Versiegelung, um das Testsegment zu erstellen.

Schneiden Sie den letzten Teil des Schlauchs ab und entsorgen Sie ihn. Schneiden Sie dann das Testsegment von der Thrombozyteneinheit ab. Dieses Segment wird für DLS-Tests verwendet.

Schneiden Sie mit einem Spritzschutz und einer sauberen, trockenen Schere ein Ende des Beutelschlauchs oder des Testsegments ab. Füllen Sie die Kapillare sofort, indem Sie das Probenahmewerkzeug verwenden, um die Probe direkt aus dem geöffneten Beutel oder Schlauchsegment in die Kapillare zu entnehmen. Versiegeln Sie den Boden der gefüllten Kapillare, indem Sie sie vorsichtig in die Kapillarrohrdichtung drücken, während Sie eine sanfte Drehung und etwas Druck auf die Schale ausüben.

Trennen Sie dann die 100-Mikroliter-Pipette und die Spitze mit festem Volumen von der Kapillare und stellen Sie sicher, dass die Kapillare fest in der Dichtmasse des Kapillarrohrs eingebettet bleibt. Nehmen Sie die Kapillare aus der Kapillarrohr-Dichtstoffschale und wischen Sie sie mit einem Isopropylalkohol-Pad ab. Stellen Sie sicher, dass keine Luftblasen eingeschlossen werden, indem Sie vorsichtig auf den Boden der Kapillare schnippen.

Setzen Sie abschließend die Kapillare in das DLS-System ein. Starten Sie zunächst die Konsole, folgen Sie den Anweisungen auf dem Touchscreen, um sich anzumelden, und wählen Sie die Option Mikropartikel- oder MP-Test aus, um einen neuen DLS-Test zur Messung des Mikropartikelgehalts einer Thrombozytenprobe zu starten. Geben Sie die Probeninformationen mit einem Barcode-Scanner ein oder geben Sie sie manuell ein.

Setzen Sie die Kapillare bei Anweisung in das DLS-System ein und starten Sie den Test. Wenn der Test abgeschlossen ist, nehmen Sie die Probe aus dem Kapillarhalter und entsorgen Sie die Verbrauchsmaterialien ordnungsgemäß gemäß den Richtlinien der Einrichtung. Markieren Sie den Blutplättchenbeutel mit der Farbe, die dem Ergebnis entspricht.

Zum Beispiel Orange für nicht aktiviert und Pink für aktiviert. Die dynamische Lichtstreuung misst die Geschwindigkeit von Partikeln, die sich durch die Brownsche Bewegung in Suspension bewegen. Aufgrund der unterschiedlichen Geschwindigkeiten bewegen sich kleine Partikel schnell und große Partikel langsam.

Diese Technologie bestimmt die Größenverteilung einer Probe. DLS bestimmen, dass diese Transfusion nicht aktivierte Blutplättchen enthält, die auf einem Mikropartikelgehalt von weniger als 15 % basieren. Tatsächlich. Meist waren diskoide Blutplättchen mit sehr wenigen Mikropartikeln mikroskopisch sichtbar.

Eine andere Blutplättchentransfusion, die mit bloßem Auge genauso aussieht wie der erste Beutel, enthielt jedoch aktivierte Blutplättchen, basierend auf einem Mikropartikelgehalt von mehr als 15 %. In dieser Probe waren verschiedene Thrombozytenmorphologien, kleine Aggregate und viele Mikropartikel mikroskopisch sichtbar. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie eine Probe nichtinvasiv aus einem Thrombozytenbeutel entnehmen, die Kapillare füllen und die Probe auf Mikropartikelgehalt testen, um eine optimierte Verwendung eines Thrombozyteninventars zu ermöglichen.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, den Beutel gut zu mischen, um eine gute, repräsentative Probe zu erhalten. Und nach diesem Verfahren können Sie auch andere Methoden, wie z. B. die Durchflusszytometrie, anwenden, um Fragen nach dem zellulären Ursprung von Mikropartikeln zu beantworten. Einmal gemeistert, kann diese Technik in etwa zweieinhalb Minuten ausgeführt werden.

Zusammen mit dem Fünf-Minuten-Test können Thrombozytentransfusionen in weniger als acht Minuten charakterisiert werden. Nach ihrer Entwicklung ermöglichte diese Technik den Blutbanken in Krankenhäusern, ihren Blutplättchenbestand zu screenen, Hämatologie-/Onkologiepatienten nur mit nicht aktivierten Blutplättchen zu behandeln und eine Verringerung der verwendeten Thrombozytentransfusionen zu beobachten. Wie wir sagen, ist die sicherste Transfusion diejenige, die nicht verabreicht wird.

Obwohl diese Methode einen Einblick in die Charakterisierung von Blutplättchen vor der Transfusion bietet, kann sie auch verwendet werden, um plättchenreiches Plasma direkt von den Spendern zu testen. Die Auswirkungen dieser Technik erstrecken sich auf die Behandlung von Blutkrebspatienten, da sie von nicht aktivierten Thrombozytentransfusionen profitieren, die das Risiko verringern, refraktär zu werden.