Name: Quantifizierung der endogenen Auxin und Cytokinin während Internodium Kultur von Ipecac (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Erfahren Sie die Quantifizierung endogener Auxine und Cytokinine während der Adventivsprossbildung in Ipecac mittels LC-MS/MS. Diese hochsensitive Methode ermöglicht präzise Analysen für die Pflanzenbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wir sind dankbar, Herr Akira Murakami der Abteilung für Angewandte Biowissenschaften, Toyo University und Herr Koudai Taniguchi Gunma Agricultural Technology Center für ihre technische Unterstützung. Wir sind auch Professor Shosaku Kashiwada und Dr. Uma Maheswari Rajagopalan, Toyo University für ihre Anregungen dankbar. Diese Studie wurde teilweise durch das Forschungszentrum für Leben und Umweltwissenschaften, Toyo University unterstützt.

Hinweis: Ipecac (C. Ipecacuanha) wurde in dieser Studie verwendet, weil es die Analyse der endogenen Phytohormone erleichtert.
(1) Wachstumsbedingungen induzieren zufällige Triebe von Ipecac
<ol><li>Bereiten Sie Phytohormon-freie B5 Medium bis pH 5,710eingestellt zu, und 0,2 % Gellan Gum. Sterilisieren Sie durch Autoklavieren.</li>
	<li>Gießen Sie 25 mL des Mediums autoklaviert in eine sterile Petrischale (90 mm × 20 mm).</li>
	<li>8 mm Internodien Segmente von Ipecac Pflänzchen mit einem chirurgischen Skalpell mit Klinge Nr. 22 auf eine sterile Acrylplatte, und auf dem Medium (Abbildung 1).</li>
	<li>Kultur auf Phytohormon-freie B5 Medium bei 24 ° C unter 15 µmol m−2 s−1 des Lichts in einem 14-h Licht/10-h dunklen Zyklus für 5 Wochen.</li>
	<li>Regionen zu identifizieren ich (apikalen) bis IV (basal) in jedem Segment (Abbildung 1B). Die Anzahl der zufällige Triebe > 0,3 mm Länge in den einzelnen Regionen unter dem Mikroskop einmal pro Woche.</li>
</ol>(2) Extraktion und Reinigung von Phytohormonen
<ol><li>Setzen Sie eine 5 mm Zirkonia Perle in jeder der vier 2-mL-Probenröhrchen.</li>
	<li>Schneiden Sie die Segmente in Regionen I bis IV (je 2 mm in der Länge) mit einem chirurgischen Skalpell auf eine sterile Acrylplatte.</li>
	<li>Sammeln Sie acht Segmente der einzelnen Regionen in separaten Probenröhrchen (10-30 mg Frischgewicht).</li>
	<li>Wiegen, und dann Einfrieren der Proben in flüssigem Stickstoff.</li>
	<li>Die gefrorenen Proben unter Verwendung einer Perle-basierte Homogenisator zu vernichten.</li>
	<li>Aussetzen der zerkleinerten Proben in 1 mL Acetonitril mit 500 Pg der einzelnen internen Standards von Auxin und CKs (d5-IAA, d5- tZ, d5- tZR, d6- iP, d6- iPR) mit einem Vortex-Mixer.</li>
	<li>Halten Sie bei 4 ° C für 1 h und Zentrifugieren bei 3.500 × g für 5 min bei Raumtemperatur.</li>
	<li>Waschen Sie das Pellet in 80 % (V/V) Acetonitril mit Essigsäure 1 % (V/V). Zentrifuge wieder bei 3.500 × g für 5 min bei Raumtemperatur. Kombinieren Sie die Überstände (aus Schritt 2.7 und 2.8) in einer Einweg-Glasröhre.</li>
	<li>Fügen Sie 600 µL Wasser mit 1 % (V/V) Essigsäure zu jeder kombinierten überstand und verdunsten das mit einer Vakuum-Konzentrator Acetonitril.</li>
	<li>Equilibrate hydrophilen lipophil-ausgewogen (HLB) Spalte Patronen durch die Anwendung von 1 mL Acetonitril, Methanol und Wasser mit 1 % (V/V) Essigsäure.</li>
	<li>Gelten Sie eine Beispiellösung pro äquilibriert HLB Patrone.</li>
	<li>Waschen Sie die Patronen mit 1 mL Wasser mit 1 % (V/V) Essigsäure.</li>
	<li>Eluieren Sie alle Hormone mit 2 mL 80 % (V/V) Acetonitril mit 1 % (V/V) Essigsäure in einer Glasröhre.</li>
	<li>Verdunsten Sie Acetonitril in das Eluat Extrakt in Wasser mit 1 % (V/V) Essigsäure mit einem Vakuum Konzentrator zu erhalten. Hinweis: Nicht trocken Sie dies vollständig.</li>
	<li>Equilibrate gemischt-Modus, starken Kationenaustausch (MCX) Spalte Patronen durch die Anwendung 1 mL Acetonitril, 1 mL Methanol, 0,5 mL 0,1 M HCl und 1 mL Wasser mit 1 % (V/V) Essigsäure.</li>
	<li>Gelten Sie eine Beispiellösung pro äquilibriert MCX Patrone.</li>
	<li>Waschen Sie die Patronen mit 1 mL Wasser mit 1 % (V/V) Essigsäure.</li>
	<li>Eluieren Sie IAA mit 2 mL 30 % (V/V) Acetonitril mit 1 % (V/V) Essigsäure in einer Glasröhre.</li>
	<li>Waschen Sie die Patronen mit 2 mL 80 % (V/V) Acetonitril mit Essigsäure 1 % (V/V).</li>
	<li>Waschen Sie die Patronen mit 2 mL Wasser und 1 mL Wasser, 5 % wässriger Ammoniak enthält.</li>
	<li>Die CKs mit 2 mL 60 % (V/V) Acetonitril mit 5 % wässriger Ammoniak in einer Glasröhre eluieren.</li>
	<li>Verdunstet das Lösungsmittel der einzelnen Hormon-Fraktionen mit einem Vakuum Konzentrator und Lagern bei-30 ° C bis die LC-MS/MS-Analyse.</li>
</ol>(3) LC-MS/MS-Analyse der IAA und CKs
<ol><li>Jedes Hormon-Extrakt in einem Rohr mit 600 µL Methanol auflösen und die Lösung zu einem Schraube Hals völligen Heilung Fläschchen zu übertragen. Verdunsten Sie das mit einer Vakuum-Konzentrator Lösungsmittel.</li>
	<li>Auflösen der IAA Bruch in 20 µL 30 % (V/V) Acetonitril und die CK-Brüche in 20 µL Wasser mit 1 % (V/V) Essigsäure in Schraube Hals völligen Heilung Fläschchen.</li>
	<li>Analysieren Sie die Proben im positiven Ionen-Modus auf eine Triple-Quadrupol-MS-System mit einer HPLC-Anlage ausgestattet. Hinweis: Wir legen die HPLC-Bedingungen, wie in Tabelle 1aufgeführt.<ol>
<li>Für die IAA Elution verwendet einen binären Gradienten von 5-50 % Lösungsmittel B mehr als 7 min, dann erhöhen durch 98 % Lösungsmittel B 1 min warten und dann für 2 min bei 5 % Lösungsmittel B durch Nest Injektion equilibrate.</li>
		<li>Für die CK-Elution verwendet eine binäre Gefälle von 2 % - 40 % Lösungsmittel B mehr als 5 min, 40-70 % Lösungsmittel B in 7 min, dann erhöhen, indem Sie 95 % Lösungsmittel B 1 min warten und dann für 2 min bei 2 % Lösungsmittel B durch equilibrate Injektion zu verschachteln.</li>
		<li>Festlegen die Elektrospray-Ionisation (ESI)-MS-Parameter der Ionenquelle wie in Tabelle 2aufgeführt.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwenden Sie die mehrere Reaktion monitoring (MRM) Übergang zur Quantifizierung der einzelnen Analyten in Tabelle 3aufgeführten.</li>
	<li>Endogene IAA und CK-Ebene gegen eine Standardkurve des Verhältnisses der unbeschrifteten Deuterium-Label Standards zu quantifizieren.</li>
</ol>

<ol><li>Haberlandt, G. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen. Sitzungsber. Math.-Naturwiss. Kl. Akad. Wiss. Wien. 111, 69-92 (1902).</li>
<li>Skoog, F., Miller, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+regulation+of+growth+and+organ+formation+in+plant+tissues+cultured+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Symp+Soc+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro.</a> Symp Soc Exp Biol. 11, 118-130 (1957).</li>
<li>Ganeshan, S., Caswell, K. L., Kartha, K. K., Chibbar, R. N. <a target="_blank" href="NULL">Transgenic plants and crops</a>. Khachatourians, G. G., McHughen, A., Scorza, R., Nip, W. K. , CRC Press. Ch. 4 69-84 (2002).</li>
<li>Teshima, D., Ikeda, K., Satake, M., Aoyama, T., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+emetic+alkaloid+by+in+vitro+culture+of+Cephaelis+ipecacuanha%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Production of emetic alkaloid by in vitro culture of Cephaelis ipecacuanha.</a> Plant Cell Rep. 7 (4), 278-280 (1988).</li>
<li>Chatterjee, S. K., Nandi, R. P., Ghosh, N. C. Cultivation and utilixzation of medicinal plants. <a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Cultivation-Utilization-Medicinal-Plants-Kapur/dp/B001I6AQI6">Regional Research Laboratory, Council of Scientific and Industrial Research</a>. Atal, C. K., Kapur, B. M. , Jammu-Tawi, India. 295-301 (1982).</li>
<li>Bajaj, Y. P. S. <a target="_blank" href="http://www.cell.com/trends/biotechnology/abstract/0167-7799(94)90092-2">Biotechnology in Agriculture and Forestry 21, Medicinal and Aromatic Plants IV</a>. , Springer-Verlag. Berlin Heidelberg. 87-103 (1993).</li>
<li>Ideda, K., Teshima, D., Aoyama, T., Satake, M., Shimomura, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24241769">Clonal propagation of Cephaelis ipecacuanha.</a> Plant Cell Rep. 7 (4), 288-291 (1988).</li>
<li>Yoshimatsu, K., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+shoot+formation+on+internodal+segments+and+alkaloid+formation+in+the+regenerates+of+Cephaelis+ipecacuanha+A.+Richard%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient shoot formation on internodal segments and alkaloid formation in the regenerates of Cephaelis ipecacuanha A. Richard.</a> Plant Cell Rep. 9 (10), 567-570 (1991).</li>
<li>Koike, I., Taniguchi, K., Shimomura, K., Umehara, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00344-017-9684-8">Dynamics of endogenous indole-3-acetic acid and cytokinins during adventitious shoot formation in ipecac.</a> J. Plant Growth Regul. , (2017).</li>
<li>Gamborg, O. L., Miller, R. A., Ojima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrient+requirements+of+suspension+cultures+of+soybean+root+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells.</a> Exp. Cell Res. 50 (1), 151-158 (1968).</li>
<li>Watad, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0304423896008746">Adventitious shoot formation from carnation stem segments: a comparison of different culture procedures.</a> Scientia Hortic. 65 (4), 313-320 (1996).</li>
<li>Ajithkumar, D., Seeni, S. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s002990050418">Rapid clonal multiplication through in vitro axillary shoot proliferation of Aegle marmelos (L.) Corr., a medicinal tree.</a> Plant Cell Rep. 17 (5), 422-426 (1998).</li>
<li>Tiwari, V., Tiwari, K. N., Singh, B. D. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1023/A:1010652006417">Comparative studies of cytokinins on in vitro propagation of Bacopa monniera.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 66 (1), 9-16 (2001).</li>
<li>Rao, M. S., Purohit, S. D. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10535-006-0079-0">In vitro shoot bud differentiation and plantlet regeneration in Celastrus paniculatus Willd.</a> Biol. Plant. 50 (4), 501-506 (2006).</li>
<li>Sanikhani, M., Frello, S., Serek, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s11240-005-9050-6">TDZ induces shoot regeneration in various Kalanchoë blossfeldiana Poelln cultivars in the absence of auxin.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 85 (1), 75-82 (2006).</li>
<li>Yoshimoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+negatively+regulates+cell+death+by+controlling+NPR1-dependent+salicylic+acid+signaling+during+senescence+and+the+innate+immune+response+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Autophagy negatively regulates cell death by controlling NPR1-dependent salicylic acid signaling during senescence and the innate immune response in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 21 (9), 2914-2927 (2009).</li>
<li>Schaller, G. E., Bishopp, A., Kieber, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+yin-yang+of+hormones%3A+cytokinin+and+auxin+interactions+in+plant+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">The yin-yang of hormones: cytokinin and auxin interactions in plant development.</a> Plant Cell. 27 (1), 44-63 (2015).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte.

Ermittlung die Verteilung von Phytohormonen unbedingt beteiligt Organogenese verwenden Pflanzenmaterial in denen Organogenese auf Phytohormon-freies Medium beobachtet werden kann, weil wenn Phytohormone Explantaten zur Induktion exogen zugewiesen werden Triebe oder Wurzeln, beeinflussen sie das ganze Explant, macht es schwierig, die inhärente Plastizität der Pflanzen in Zell-Differenzierung und Organogenese zu bewerten. Zufällige Triebe können auf Phytohormon-freie Kulturmedien in andere Pflanzenarten wie Dianthus Ca...

Gottlieb Haberlandt (1854-1945) vorgeschlagen, das Konzept der "Totipotenz", von welchem Werk Zellen teilen können, unterscheiden, und ganze Pflanzen auch nach deren vorherige Differenzierung in bestimmten Zelltypen reifen Pflanzen1zu regenerieren. In der Gewebekultur wird ob Pflanze Regeneration induziert werden kann durch die Kombination und Konzentration von EXOGEN angewandte Phytohormonen in das Wachstumsmedium bestimmt. Skoog und Miller gefunden, dass zufällige Aufnahmen von Tabak Kallus auf Nährmedium enthält ein hohes Verhältnis von CKs, Auxine, induziert werden konnte, während zufällige Wurzeln auf ein niedriges Verhältnis2-haltigem Medium induziert werden konnte. Seit dieser Feststellung hat Gewebekultur für die Ausbreitung der wirtschaftlich bedeutenden Kulturen und für die Regeneration von transgenen Pflanzen3verbreitet. Zufällige Triebe können von Gewebe als Shooting Sprossapikalmeristem Meristem, wie Blätter, Wurzeln und Internodien induziert werden. Phytohormon Behandlung ist erforderlich für die Induktion von zufällige Aufnahmen in den meisten Pflanzenarten. Allerdings unterscheiden sich die optimale Konzentrationen und Kombinationen nach Arten und unter Gewebe als Explantaten verwendet. So geht viel Aufwand in der Bestimmung der optimalen Konzentrationen und Kombinationen von Phytohormonen für Experimente.
Carapichea ipecacuanha (Brot.) L. Andersson (Ipecac) ist eine Heilpflanze, die Alkaloide wie Emetine und Cephaeline, hauptsächlich in den Wurzeln4enthält. Wurzelextrakten dienen als schleimlösend, ein Brechmittel und eine Amoebicide5. Obwohl Ipecac natürlich in den tropischen Regenwäldern von Brasilien wächst, es ungern Samen in Kultur gesetzt, und die Keimrate verringert während der Lagerung der Samen in Japan mit seinen kälteren Klima6. Stattdessen ist es durch Gewebekultur fortgepflanzt, in denen zufällig schießen Formation auf Internodien ist die effizienteste Methode7,8. Interessanterweise können zufällige schießt in dieser Spezies ohne Phytohormon Behandlung8induziert werden.
Zufällige Triebe bilden sich auf der Epidermis in der apikalen Region der Internodien Segmente ohne callusing, aber nicht in den basalen Region9. Dieser Unterschied zeigt Gewebe Polarität in der Internodien Segmente, die wahrscheinlich unter phytohormonal Regelung. Das Ipecac-Kultur-System ermöglicht eine einzigartige Gelegenheit, Änderungen im endogenen Phytohormon Ebenen während zufällig schießen Bildung zu analysieren. Hier stellen wir unsere Methode für die Analyse der endogenen Ebenen ein Auxin (Indol-3-acetic Acid (IAA)) und vier CKs (Isopentenyl Adenin (iP), Isopentenyl Adenin Riboside (iPR), Trans-Zeatin (tZ) und Trans-Zeatin Riboside (tZR)) in Internodien Segmente durch den Einsatz von LC-MS/MS.

<table><tbody><tr><td>[2H5]Indol-3-essigsäure</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>031 1531</td><td>Interner Standard für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>[2H5]trans-zeatin</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0301</td><td>Interner Standard für LC-MS/</td></tr><tr><td>MS[2H5]trans-Zeatin-Ribosid</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0311</td><td>Interner Standard für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>[2H6]N6-isopentenyladenin</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0161</td><td>Interner Standard für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>[2H6]N6-isopentenyladenosin</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0171</td><td>Interner Standard für LC-MS/</td>MS-Indol-3-essigsäure</tr><tr><td></td><td>Wako</td><td>098 00181</td><td>Standard für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>Trans-Zeatin</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>Z0876 5MG</td><td>Standard für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>Trans-Zeatin-Ribosid</td><td>Wako</td><td>262 01081</td><td>Standard für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>N6-isopentenyl Adenin</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>D7674 1G</td><td>Standard für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>N6-isopentenyl adenosin</td><td>ACROS ORGANICS</td><td>22648 1000</td><td>Standard für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>Acetonitril hypergrade für LC-MS LiChrosolv</td><td>MERCK</td><td>1.00029.1000</td><td>Lösungsmittel für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>Wasser für die Chromatographie LiChrosolv</td><td>MERCK</td><td>1.15333.1000</td><td>Lösungsmittel für LC-MS/MS</td></tr><tr><td>HPLC</td><td>SHIMADZU</td><td>Prominence</td><td></td></tr><tr><td>MS</td><td>Sciex</td><td>3200QTRAP</td><td></td></tr><tr><td>Oasis HLB 30 mg/1 cc</td><td>Wasser</td><td>WAT094225</td><td>Kartuschensäule</td></tr><tr><td>Oasis MCX 30 mg/1 cc</td><td>Wasser</td><td>186000252</td><td>Kartuschensäule</td></tr><tr><td>Schraubhals Fläschchen mit Totalrückgewinnung</td><td>Wasser</td><td>186002805</td><td></td></tr><tr><td>blau, 12 x 32 mm Schraubverschluss und PTFE/Silikon-Septum</td><td>Wasser</td><td></td><td></td>186000274</tr><tr><td>Acquity UPLC BEH C18, 2,1x100 mm</td><td>Waters</td><td>186002350</td><td>UPLC Säule</td></tr><tr><td>Proshell 120 EC-C18, 2,1x50 mm</td><td>Agilent</td><td>699775-902</td><td>UPLC Säule</td></tr><tr><td>Digitalmikroskop</td><td>Leica</td><td>DHS1000</td><td></td></tr><tr><td>TissueLyser II</td><td>QIAGEN</td><td>85300</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Klinge</td><td>Feder</td><td>Nr. 22</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellstiel</td><td>Feather</td><td>No. 4</td><td></td></tr><tr><td>Savant SpeedVac/Gekühlte Dampffalle</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SPD111/RVT4104</td><td>Vakuumkonzentrator</td></tr><tr><td>Einweg-Glasbehälter (13x100 mm)</td><td>IWAKI</td><td>9832-1310</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Petrischale</td><td>INA OPTICA</td><td>I-90-20</td><td></td></tr></tbody></table>

quantifizierung der endogenen auxin und cytokinin während internodium kultur von ipecac

Quantification of Endogenous Auxin and Cytokinin During Internode Culture of Ipecac

Zufällige Shooting Bildung ist eine wichtige Technik für die Ausbreitung der wirtschaftlich bedeutenden Kulturen und für die Regeneration von transgenen Pflanzen. Phytohormon Behandlung ist erforderlich für die Induktion von zufällige Aufnahmen bei den meisten Arten. Ob zufällig Triebe induziert werden können wird bestimmt durch das Gleichgewicht zwischen Auxin und Cytokinin (CK) Ebenen. Viel Aufwand geht in der Bestimmung der optimalen Konzentrationen und Kombinationen von Phytohormonen in jedem Gewebe als Explantaten verwendet und bei jedem Pflanzenarten. In Ipecac können jedoch zufällig Triebe auf Internodien Segmente in Kulturmedium ohne Phytohormon Behandlung induziert werden. Dies ermöglicht die inhärente Plastizität von Ipecac für Zelldifferenzierung ausgewertet werden. Um zufällige Triebe in Ipecac induzieren, kultivierten wir Internodien Segmente bei 24 ° C unter 15 µmol m−2 s−1 des Lichts in einem 14-h Licht/10-h dunklen Zyklus auf Phytohormon-freie B5 Medium verfestigt mit 0,2 % Gellan Gum für 5 Wochen. Um Phytohormon Dynamik während zufällig schießen Bildung zu untersuchen, haben wir gemessen endogenen Indol-3-acetic Acid und CKs in den Segmenten durch flüssige Chromatographie-Tandem-Massenspektrometrie LC-MS/MS. Diese Methode ermöglicht die Analyse der endogenen Indol-3-acetic Säure und CKs Ebenen auf einfache Weise. Es kann angewendet werden, um die Dynamik der endogenen Auxin und CK während der Organogenese in anderen Pflanzenarten zu untersuchen.

1St Woche hatte keine zufällige Triebe gebildet. Bei der 2Nd Woche erschienen kleine Triebe. Die Anzahl der schießt auf die 3rd und 4th Wochen erhöhte meist in den apikalen Regionen (I und II) (Abb. 2A). Inder 5 Woche die Zahl der Triebe war etwa 7 in Region ich und 5 in Region II (Abbildung 2B). Im Gegensatz dazu bildeten sich nur ein paar T...

Zufällige Triebe können auf Internodien Segmente der Ipecacuanha ohne Phytohormon Behandlung induziert werden. Um Phytohormon Dynamik während zufällig schießen Bildung zu bewerten, haben wir endogenen Auxin und Cytokinin in Internodien Segmenten von LC-MS/MS gemessen.

Quantifizierung der endogenen Auxin und Cytokinin während Internodium Kultur von Ipecac

Adventitious shoot formation is an important technique for the propagation of economically important crops and for the regeneration of transgenic plants. ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, zu beschreiben, wie sich der endogene Phytohormonspiegel während der zufälligen Sprossbildung in Ipecac verändert. Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Fragen im Zusammenhang mit der Geweberegeneration im pflanzlichen Gewebekulturrad zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist der endogene Gehalt an Indol-3-essigsäure und Cytokininen können einfach und mit hoher Sensitivität analysiert werden.Die Auswirkungen dieser Technik erstrecken sich auf die gesamte Etablierung der Degeneration des Pflanzengewebes, da Veränderungen des endogenen Phytohormonspiegels die zufällige Sprossbildung auslösen. Bereiten Sie zunächst ein phytohormonfreies B5-Medium vor und fügen Sie 0,2 Prozent Gellangummi hinzu. Autoklavieren Sie dann das Medium, um es zu sterilisieren.Schneiden Sie mit einem chirurgischen Skalpell auf einer sterilen Acrylplatte acht Millimeter große Internodiensegmente von Ipecac-Pflänzchen in Scheiben und legen Sie sie auf das Medium. Kultivieren Sie dann die Ipecac-Segmente bei 24 Grad Celsius unter 15 Mikromol pro Quadratmeter Sekunden Licht in einem 14-stündigen Licht- und 10-Stunden-Dunkelzyklus für fünf Wochen. Ide

quantification-endogenous-auxin-cytokinin-during-internode-culture

Research

Forschung

JoVE Journal

Environment

Umwelt

Dieses Video zeigt den Assay zur Hemmung des Sämlingswachstums in der Pflanze Arabidopsis thaliana. Der Einfluss einer erhöhten Konzentration des Immunpeptid-Elicitors auf das Wachstum der Sämlinge wird bestimmt.

Messung der immuninduzierten Hemmung des Sämlingswachstums

Das Lateral Root Inducible System (LRIS) ermöglicht die synchrone Induktion von Seitenwurzeln und wird für Arabidopsis thaliana und Mais vorgestellt.

Seitenwurzel induzierbaren Systems in<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Und Mais

Dieser Artikel beschreibt die Methoden für die Gene Screening plasmodesmal Permeabilität und damit Auxin Gradienten während tropischen Reaktion zu steuern. Dies beinhaltet die Messung des Grades der Tropic Reaktion in Hypokotyl   von Arabidopsis thaliana und plasmodesmal Permeabilität von 8-Hydroxypyren-1,3,6-trisulfonsäure (HPTS) Laden und schließlich Kallose- Ebene Beurteilung zu überprüfen.

Eine Strategie zur Validierung der Rolle der Kallose-vermittelten Plasmodesmal Gating im Tropic Antwort

Die hierin beschriebenen Protokolle erleichtern die bequeme Untersuchung bakterieller Ethylenreaktionen durch die Verwendung von 2-Chlorethylphosphonsäure (CEPA).  Ethylen wird in situ durch die Zersetzung von CEPA in einem wässrigen bakteriellen Wachstumsmedium hergestellt, wodurch der Bedarf an reinem Ethylengas umgangen wird.

Unter Verwendung der Ethylen-freisetzenden Verbindung, 2-Chlorethylphosphonsäure, als Werkzeug Ethylen-Antwort in Bakterien zu studieren

Das beschriebene hydroponische Kokultivierungssystem unterstützt intakte Pflanzen mit Metallgittersieb und kokultiviert sie mit Bakterien. Pflanzengewebe, Bakterien und sezernierte Moleküle können dann separat für nachgeschaltete Analysen geerntet werden, wobei gleichzeitig die molekularen Reaktionen sowohl der Pflanzenwirte als auch der interagierenden Mikroben oder Mikrobiome untersucht werden können.

Ein Hydroponisches Co-Kultivierungssystem zur gleichzeitigen und systematischen Analyse von Pflanzen- / Mikroben-Molecular-Wechselwirkungen und Signalgebung

Das hier beschriebene Protokoll ist eine Methode zur Messung der Endoreduplikation innerhalb Knollen der Kartoffel (Solanum Tuberosum). Freuen Sie sich auf Plasmolyse und Protoplasten Extraktion Schritte um die Lärm und Schmutz in nachgeschalteten durchflusszytometrischen Analyse verringern.

Messung der Endoreduplikation durch Durchflusszytometrie von isolierten Knolle Protoplasten

Gibberellin Wahrnehmung Sensor 1 (GPS1) ist der erste Förster Resonanz Energie Transfer-basierten Biosensor zur Messung der zellulären Ebenen der Gibberellin Phytohormone mit hoher räumlich-zeitliche Auflösung. Dieses Protokoll berichtet über die Methode zu visualisieren und zelluläre Gibberellin Ebenen mit Hilfe der genetisch codierten nlsGPS1 Biosensor in Arabidopsis Hypocotyle und Wurzelspitzen zu quantifizieren.

Visualisierung zellulären Gibberellin-Ebenen mit NlsGPS1 Förster Resonance Energy Transfer (FRET) Biosensor

Hier beschreiben wir starke Anionenaustausch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie von [3H]- Myo-Inositol-markierten Sämlingen, die eine hochempfindliche Methode zum Nachweis und quantifizieren von Inositolpolyphosphaten in Pflanzen...

Extraktion und Quantifizierung von löslichen, radioaktiv markierten Inositolpolyphosphaten aus verschiedenen Pflanzenarten mit SAX-HPLC

In dieser Arbeit werden zwei Phänotypisierungsmethoden ohne die Verwendung von epidermalen Peelings beschrieben, um die Gene zu charakterisieren, die die Entwicklung der Stomata steuern. Die erste Methode zeigt, wie ein stomataler Phänotyp unter Verwendung einer Toluidinblau-O-gefärbten Pflanzenepidermis analysiert werden kann. Die zweite Methode beschreibt, wie man stomatale Liganden identifiziert und ihre biologischen Aktivitäten überwacht.

Identifizierung der Gene, die an der Entwicklung der Stomata beteiligt sind, mittels epidermalem Phänotyp-Scoring

Hier beschreiben wir ein fortschrittliches Werkzeug zur Überwachung der Chlorophyllbiosynthese in den frühen Stadien der Arabidopsis-Keimlingsentetiolierung.   Die neuartige Methodik ermöglicht eine nicht-invasive Echtzeit-Chlorophyll-Fluoreszenz-Bildgebung mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung.

Nicht-invasiver Assay zur Bestimmung der Chlorophyll-Biosynthese-Kinetik in frühen Stadien der Arabidopsis-De-etiolation

Erfahren Sie die Quantifizierung endogener Auxine und Cytokinine während der Adventivsprossbildung in Ipecac mittels LC-MS/MS. Diese hochsensitive Methode ermöglicht präzise Analysen für die Pflanzenbiologie.

Quantifizierung der endogenen Auxin und Cytokinin während Internodium Kultur von Ipecac

Weitere Videos entdecken