Name: Methoden zur Inszenierung Pupal Perioden und Messung der Flügel Pigmentierung der Drosophila guttifera (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Erfahren Sie Methoden zur Inszenierung pupaler Perioden und Messung der Flügelpigmentierung bei Drosophila guttifera. Diese Technik liefert detaillierte Einblicke in morphologische Entwicklung und Pigmentierungsprozesse für vergleichende evolutionsbiologische Studien.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wir danken Sean B. Carroll und Thomas Werner für die Bereitstellung von fliegen Bestände, Naoyuki Sicherung für Ausrüstung, Byung Seok Jin für seine Hilfe bei Dreharbeiten, Kiyokazu Agata für mentoring und Elizabeth Nakajima zur englischen Bearbeitung. Diese Arbeit wurde durch KAKENHI unterstützt 17K 19427 und Takeda Science Foundation.

<ol><li>Carson, H. L., Hardy, D. E., Spieth, H. T., Stone, W. S. The evolutionary biology of the Hawaiian Drosophilidae. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarson%2C+HL+%22Essays+in+evolution+and+genetics+in+honor+of+Theodosius+Dobzhansky%22">Essays in evolution and genetics in honor of Theodosius Dobzhansky</a>. Hecht, M. K., Steere, W. C. , Springer (Meredith Corporation). New York. 437-543 (1970).</li>
<li>Markow, T. A., O'Grady, P. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarkow%2C+TA+%22Drosophila%3A+a+guide+to+species+identification+and+use%22">Drosophila: a guide to species identification and use</a>. , Academic Press. New York. (2006).</li>
<li>Patterson, J. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPatterson%2C+JT+%22The+Drosophilidae+of+the+southwest%22">The Drosophilidae of the southwest</a>. 4313, University of Texas Publication. 7-216 (1943).</li>
<li>Setoguchi, S., Takamori, H., Aotsuka, T., Sese, J., Ishikawa, Y., Matsuo, T. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10164-014-0399-z">Sexual dimorphism and courtship behavior in Drosophila prolongata.</a> J Ethol. 32 (2), 91-102 (2014).</li>
<li>Werner, T., Jaenike, J. <a target="_blank" href="http://humanities.lib.rochester.edu/drosophilaguide/">Drosophilids of the Midwest and Northeast</a>. , River Campus Libraries, University of Rochester. Rochester. (2017).</li>
<li>Arnoult, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+and+diversification+of+fly+pigmentation+through+evolution+of+a+gene+regulatory+module%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Emergence and diversification of fly pigmentation through evolution of a gene regulatory module.</a> Science. 339 (6126), 1423-1426 (2013).</li>
<li>Camino, E. M., Butts, J. C., Ordway, A., Vellky, J. E., Rebeiz, M., Williams, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+origination+and+diversification+of+a+dimorphic+gene+regulatory+network+through+parallel+innovations+in+cis+and+trans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">The evolutionary origination and diversification of a dimorphic gene regulatory network through parallel innovations in cis and trans.</a> PLoS Genet. 11 (4), e1005136(2015).</li>
<li>Gompel, N., Prud'homme, B., Wittkopp, P. J., Kassner, V. A., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chance+caught+on+the+wing%3A+cis-regulatory+evolution+and+the+origin+of+pigment+patterns+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chance caught on the wing: cis-regulatory evolution and the origin of pigment patterns in Drosophila.</a> Nature. 433 (7025), 481-487 (2005).</li>
<li>Glassford, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-option+of+an+ancestral+Hox-regulated+network+underlies+a+recently+evolved+morphological+novelty%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Co-option of an ancestral Hox-regulated network underlies a recently evolved morphological novelty.</a> Dev. Cell. 34 (5), 520-531 (2015).</li>
<li>Koshikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancer+modularity+and+the+evolution+of+new+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Enhancer modularity and the evolution of new traits.</a> Fly. 9 (4), 155-159 (2015).</li>
<li>Koshikawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gain+of+cis-regulatory+activities+underlies+novel+domains+of+wingless+gene+expression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Gain of cis-regulatory activities underlies novel domains of wingless gene expression in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (24), 7524-7529 (2015).</li>
<li>McGregor, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+evolution+through+multiple+cis-regulatory+mutations+at+a+single+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Morphological evolution through multiple cis-regulatory mutations at a single gene.</a> Nature. 448 (7153), 587-590 (2007).</li>
<li>Tanaka, K., Barmina, O., Kopp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+developmental+mechanisms+underlie+the+evolutionary+diversification+of+Drosophila+sex+combs%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinct developmental mechanisms underlie the evolutionary diversification of Drosophila sex combs.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (12), 4764-4769 (2009).</li>
<li>Werner, T., Koshikawa, S., Williams, T. M., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+novel+wing+colour+pattern+by+the+Wingless+morphogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of a novel wing colour pattern by the Wingless morphogen.</a> Nature. 464 (7292), 1143-1148 (2010).</li>
<li>Wittkopp, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspecific+polymorphism+to+interspecific+divergence%3A+genetics+of+pigmentation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intraspecific polymorphism to interspecific divergence: genetics of pigmentation in Drosophila.</a> Science. 326 (5952), 540-544 (2009).</li>
<li>Lawrence, P. A., Morata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartments+in+the+wing+of+Drosophila%3A+a+study+of+the+engrailed+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Compartments in the wing of Drosophila: a study of the engrailed gene.</a> Dev Biol. 50 (2), 321-337 (1976).</li>
<li>Bainbridge, S. P., Bownes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+the+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 66, 57-80 (1981).</li>
<li>Ashburner, M., Golic, K. G., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Drosophila: A Laboratory Handbook</a>. , 2nd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (2005).</li>
<li>Fukutomi, Y., Matsumoto, K., Agata, K., Funayama, N., Koshikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pupal+development+and+pigmentation+process+of+a+polka-dotted+fruit+fly%2C+Drosophila+guttifera+%28Insecta%2C+Diptera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Pupal development and pigmentation process of a polka-dotted fruit fly, Drosophila guttifera (Insecta, Diptera).</a> Dev Genes Evol. 227 (3), 171-180 (2017).</li>
<li>Koshikawa, S., Fukutomi, Y., Matsumoto, K. Drosophila guttifera as a model system for unraveling color pattern formation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoshikawa%2C+S+%22Diversity+and+evolution+of+butterfly+wing+patterns%3A+an+integrative+approach%22">Diversity and evolution of butterfly wing patterns: an integrative approach</a>. Sekimura, T., Nijhout, H. F. , Springer. New York. in press (2017).</li>
<li>True, J. R., Edwards, K. A., Yamamoto, D., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+wing+melanin+patterns+form+by+vein-dependent+elaboration+of+enzymatic+prepatterns%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila wing melanin patterns form by vein-dependent elaboration of enzymatic prepatterns.</a> Curr Biol. 9 (23), 1382-1391 (1999).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Izumitani, H. F., Kusaka, Y., Koshikawa, S., Toda, M. J., Katoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogeography+of+the+Subgenus+Drosophila+%28Diptera%3A+Drosophilidae%29%3A+evolutionary+history+of+faunal+divergence+between+the+Old+and+the+New+Worlds%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Phylogeography of the Subgenus Drosophila (Diptera: Drosophilidae): evolutionary history of faunal divergence between the Old and the New Worlds.</a> PLoS ONE. 11 (7), e0160051(2016).</li>
<li>Resh, V. H., Cardé, R. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aResh%2C+VH+%22Encyclopedia+of+Insects%22">Encyclopedia of Insects</a>. , 2nd ed, Academic Press. Burlington. (2009).</li>
<li>DeLean, A., Munson, P. J., Rodbard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+analysis+of+families+of+sigmoidal+curves%3A+application+to+bioassay%2C+radioligand+assay%2C+and+physiological+dose-response+curves%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous analysis of families of sigmoidal curves: application to bioassay, radioligand assay, and physiological dose-response curves.</a> Am J Physiol. 235 (2), E97-E102 (1978).</li>
<li>Robertson, C. W. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jmor.1050590207/abstract">The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological changes.</a> J Morphol. 59 (2), 351-399 (1936).</li>
<li>McKinney, M. L., McNamara, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcKinney%2C+ML+%22Heterochrony%3A+the+evolution+of+ontogeny%22">Heterochrony: the evolution of ontogeny</a>. , Plenum Press. New York. (1991).</li>
<li>Hardie, D. C., Gregory, T. R., Hebert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+pixels+to+picograms%3A+a+beginners%27+guide+to+genome+quantification+by+Feulgen+image+analysis+densitometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">From pixels to picograms: a beginners' guide to genome quantification by Feulgen image analysis densitometry.</a> J Histochem Cytochem. 50 (6), 735-749 (2002).</li>
<li>Koshikawa, S., Miyazaki, S., Cornette, R., Matsumoto, T., Miura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+size+of+termites+%28Insecta%2C+Dictyoptera%2C+Isoptera%29+and+wood+roaches+%28Insecta%2C+Dictyoptera%2C+Cryptocercidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Genome size of termites (Insecta, Dictyoptera, Isoptera) and wood roaches (Insecta, Dictyoptera, Cryptocercidae).</a> Naturwissenschaften. 95 (9), 859-867 (2008).</li>
</ol>

Die Autoren haben keinen Interessenkonflikt.

Wir beschreiben hier die Protokolle für die Definition von pupal Stadien entfernen der Puppenkammer für detaillierte Beobachtung, Messung der Dauer von pupal Stadien und Messung der Intensität der schwarzen Flecken auf einem Flügel in D. Guttifera. Diese Protokolle können viele Drosophila beantragt werden und im Zusammenhang mit Fliege Arten, vor allem mit Flügel Pigmentierung.
Eingehende Beobachtung und Beschreibung der detailliertere entwicklungspolitische Veranstaltungen k...

Einige der morphologischen Merkmale von Drosophila sind unter Arten1,2,3,4,5breit gefächert. Nähern wir uns der Frage wie morphologische Vielfalt entsteht durch den Vergleich der Mechanismen der Generation diese Morphologien. Beispiele für solche Morphologien sind Larven Trichome, adult Sex Kämme, externe Geschlechtsapparat, Abdominal-Pigmentierung und Flügel Pigmentierung6,7,8,9, 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15. um morphologische Unterschiede zwischen Erwachsenen zu studieren, Beobachtung und Analyse der pupal Stadien sind wichtig, weil das Schicksal der Erwachsenen Züge sich in der späten Larvenstadien richtet und anschließende Morphogenese den pupal Zeitraum geht.
In Studien der Entwicklungsbiologie von Drosophila Melanogaster"Stunden APF" (Stunden nach pupal Bildung) ist die übliche Methode um ein Puppenstadium16anzugeben. Dieses System absoluten Zeit nach pupal Bildung beschäftigt und ist sehr praktisch für routinemäßige Experimente. Allerdings Entwicklungs-Geschwindigkeit abweichen unter Puppen und durch leichte microenvironmental, genetische und epigenetische Unterschiede betroffen sein könnten, und daher mit den gleichen absoluter Zeit nach pupal Bildung garantiert nicht, dass Puppen gleichzeitig sind Entwicklungsstadium. In vielen Fällen sind die Phasen definiert durch morphologische Merkmale für den Vergleich von mehreren Personen vorzuziehen. Vor allem, erfordert ein Vergleich zwischen den Arten präzise Inszenierung und Vergleich unter entsprechenden (homologe) Stufen.
Bainbridge und Bownes17 erkannt 20 pupal Stadien (P1 bis P15(ii)) basierend auf morphologische Merkmale von Drosophila Melanogaster Puppen. Diese Inszenierung ist die am weitesten verbreitete System der morphologischen Entwicklungs-staging-18. In einer früheren Studie führten wir pupal Inszenierung von Drosophila Guttifera , um eine Grundlage für Flügel Pigmentierung Studien19zu schaffen. D. Guttifera hat eine schwarze Polka-Dot Muster auf den Flügeln und gehört der Gattung Modell für Flügel Pigmentierung Bildung20. Obwohl wir den morphologischen Kriterien beschrieben bezeichnet die Bainbridge und Bownes Forschung17, wir direkt gemessen Bühne Dauer durch serielle Beobachtungen19, anstatt Bainbridge und Bownes Schätzung der Bühne Dauer von der beobachteten Frequenz. Hier beschreiben wir die Methode der pupal Inszenierung und Messung der Dauer von pupal Stadien der Drosophila in Fukutomi Et Al19verwendet.
Um den Entwicklungsstörungen Mechanismus der Flügel Pigmentierung zu untersuchen, müssen wir wissen, tritt im pupal oder adulten Stadien die Pigmentierung. Fukutomi Et Al. 19 quantifiziert optische dichten (ODs) der Pigmentierung während pupal und adulten Stadien durch die Bildanalyse Flügel Bilder. Die Pigmentierung von Drosophila Flügel wird gedacht, um durch Ansammlung von schwarzen Melanin21verursacht werden. Für die Quantifizierung der ODs dienten Graustufenbilder und ImageJ Software (https://imagej.nih.gov/ij/)22 . Zu erkennen und quantifizieren die Spot-spezifische Pigmentierung (ΔOD), subtrahieren wir die OD außerhalb ein Spot aus der OD innerhalb einer Stelle. Um diese Methode reproduzierbar und objektiver zu gestalten, sollten die Orte der OD-Messung über Flügel Venen als Wahrzeichen ermittelt werden. In diesem Artikel beschreiben wir ausführlich diese Methode zur Quantifizierung der Flügel Pigmentierung in Drosophila Guttifera.

<table><tbody><tr><td>Drosophila guttifera</td><td>The Drosophila Species Stock Center at the U.C. San Diego</td><td>15130-1971.10</td><td>Drosophila guttifera, eine Fruchtfliegenart, die in diesem Artikel verwendet</td></tr> wird <tr><td>Kunststofffläschchen</td><td>Hightech</td><td>MKC-30</td><td>Kunststofffläschchen für die Pflege von Fliegenvorräten</td></tr><tr><td>Buzz Plugs Fläschchen und Flaschenverschlüsse für Glasfläschchen</td><td>Fisher Scientific</td><td>AS-271</td><td>Zellulosestopfen, für die Pflege von Fliegenbeständen</td></tr><tr><td>Weißer Weichzucker</td><td>Mitsui Zucker</td><td>J-500g</td><td>Weißer Weichzucker, für Standard-Maismehl/Zucker/Hefe/Agar-Lebensmittel</td></tr><tr><td>Maismehl</td><td>Nippon Flour Mills</td><td>F</td><td>Maismehl, für Standard-Maismehl/Zucker/Hefe/Agar-Lebensmittel</td></tr><tr><td>Maisgrieß - C</td><td>Nippon Mehlmühlen</td><td>GC</td><td>Maisgrieß - C, für Standard-Maismehl/Zucker/Hefe/Agar-Lebensmittel</td></tr><tr><td>Agar-Pulver</td><td>Matsuki Kanten Sangyo</td><td>No.602</td><td>Agar Pulver, für Standard Maismehl/Zucker/Hefe/Agar Lebensmittel</td></tr><tr><td>Trockene Bierhefe</td><td>Asahi Food & Gesundheitswesen</td><td>Y2A</td><td>Biertrockenhefe für Standard-Maismehl/Zucker/Hefe/Agar-Lebensmittel</td></tr><tr><td>Butyl-p-Hydroxybenzoat</td><td>Nacalai Tesque</td><td>06327-02</td><td>Butyl-p-hydroxybenzoat, für Standard-Maismehl/Zucker/Hefe/Agar-Lebensmittel</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Wako</td><td>057-00456</td><td>Ethanol, für Standard-Maismehl/Zucker/Hefe/Agar-Lebensmittel</td></tr><tr><td>Mikroröhrchen mit flachem Boden</td><td>Ina Optica</td><td>CF-0150</td><td>1,5 mL Mikroröhrchen, für Puppensammlung</td></tr><tr><td>CAPSULEFUGE</td><td>Tomy</td><td>PMC-060</td><td>Mini-Mikrozentrifuge, zum Sammeln von Puppen</td></tr><tr><td>Sterilisierte Schale NB</td><td>Sansei Medical</td><td>01-013</td><td>Petrischale aus Kunststoff (Durchmesser 90 mm x Höhe 15 mm)</td></tr><tr><td>Serumröhrchengestell</td><td>Iwaki</td><td>9796-050</td><td>Wird als Feuchtkammer verwendet, für die Beobachtung von Puppen</td></tr><tr><td>Corning Falcon Easy-Grip Gewebekulturschale</td><td>Corning</td><td>353001</td><td>Petrischale aus Kunststoff (Durchmesser 35 mm x Höhe 10 mm)</td></tr><tr><td>Falcon Standard-Gewebekulturschale</td><td>Corning</td><td>353002</td><td>Petrischale aus Kunststoff (Durchmesser 60 mm x Höhe 15 mm)</td></tr><tr><td>Stecknadel</td><td>Kokuyo</td><td>51233709</td><td>Stecknadel zum Bohren von Nadellöchern auf dem Deckel des Mikroröhrchens</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Stereomikroskop für die morphologische Beobachtung</td></tr><tr><td>Digitalkamera</td><td>Olympus</td><td>DSE-330-A</td><td>Digitalkamera, für die Bildgebung</td></tr><tr><td>NICETACK doppelseitiges Klebeband</td><td>Nichiban</td><td>NW-15SF</td><td>Doppelseitiges Klebeband, zum Entfernen von Puppen</td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinzetten Fine</td><td>Science Tools</td><td>11252-20</td><td>Pinzette, zum Entfernen von Puppen</td></tr><tr><td>Van Gogh VISUAL Pinsel</td><td>Talens Japan</td><td>GWVR-#5/0</td><td>Pinsel, zum Entfernen von Puppen</td></tr><tr><td>Greiner CELLSTAR 12 Well Zellkulturplatte</td><td>Merck</td><td>665-180</td><td>12-Well-Zellkulturplatte, zur Messung der Duration der Puppenperiode</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Wako</td><td>191-01665</td><td>NaCl, für PBS</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Nacalai Tesque</td><td>285-14</td><td>KCl, für PBS</td></tr><tr><td>Na2HPO4&middot; 12H2O</td><td>Wako</td><td>196-02835</td><td>Na2HPO4&middot; 12H2O, für PBS</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Nacalai Tesque</td><td>28721-55</td><td>KH2PO4, für PBS</td></tr><tr><td>Stufen-Neutraldichtefilter (ND) 0,04 - 3,0</td><td>Edmund Optics</td><td>64-384</td><td>Stufendichtefilter, zur Kalibrierung der Pigmentierungsmessung</td></tr><tr><td>ImageJ Software</td><td>NIH</td><td>1.8.0-101</td><td>ImageJ Software, zur Messung der Intensität von schwarzen Flecken auf einem Flügel (https://imagej.nih.gov)</td></tr><tr><td>FINE FROST Objektträger</td><td>Matsunami Glas Ind</td><td>FF-001</td><td>Objektträger, zur Messung der Intensität von schwarzen Flecken auf einem Flügel</td></tr><tr><td>Quadratisches Mikroskop Deckglas 18 x 18</td><td>Matsunami Glas Ind</td><td>C018181</td><td>Deckglas, zur Messung der Intensität von schwarzen Flecken auf einem Flügel</td></tr></tbody></table>

methoden zur inszenierung pupal perioden und messung der flügel pigmentierung der drosophila guttifera

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Vielfältige Arten von Drosophila (Fruchtfliege) bieten Möglichkeiten, die Mechanismen der Entwicklung und genetische Veränderungen für evolutionäre Veränderungen verantwortlich zu studieren. Insbesondere ist die adult-Stadium eine reiche Quelle von morphologischen Merkmalen auf interspezifischen Abgleich, einschließlich Flügel Pigmentierung Vergleich. Um Entwicklungsstörungen Unterschiede zwischen den Arten zu studieren, sind detaillierte Beobachtung und entsprechende Inszenierung für präzisen Vergleich erforderlich. Hier beschreiben wir Protokolle für die Inszenierung von pupal Perioden und Quantifizierung der Flügel Pigmentierung eine gepunktete Fruchtfliege Drosophila Guttifera. Zunächst beschreiben wir die Methode für die genaue morphologische Beobachtung und Definition von pupal Stadien basierend auf Morphologien. Diese Methode beinhaltet eine Technik zur Entfernung der Puppenkammer, ist die Radula Außenhülle der Puppe, um detaillierte Beobachtung der pupal Morphologien zu ermöglichen. Zweitens, beschreiben wir die Methode zur Messung der Dauer der definierte pupal Stadien. Schließlich beschreiben wir die Methode zur Quantifizierung der Flügel Pigmentierung basierend auf Bildanalyse mit digitalen Bildern und ImageJ-Software. Mit diesen Methoden können wir eine solide Basis für den Vergleich von Entwicklungsprozessen von Erwachsenen Züge während pupal Stadien feststellen.

Die pupal Zeitraum von D. Guttifera gliedert sich in 17 Stufen (P1 - P15(ii), Bilder von drei Vertreter, die Phasen (P1, P5 - 6, P10) gezeigt werden, Abbildung 3und alle 17 Stufen sind in Abbildung 4dargestellt). Obwohl Bainbridge und Bownes17 20 Etappen in D. Melanogastererkannt, könnten einige dieser Phasen nicht auf D. Guttiferaangewendet werden. Die Reihenfolge der beiden ent...

Protokolle für die Inszenierung pupal Perioden und Messung der Flügel Pigmentierung der Drosophila Guttifera werden beschrieben. Inszenierung und Quantifizierung der Pigmentierung bieten eine solide Grundlage für das Studium Entwicklungsmechanismen von Erwachsenen Züge und interspezifischen Vergleich der Eigenschaft Entwicklung ermöglichen.

Methoden zur Inszenierung Pupal Perioden und Messung der Flügel Pigmentierung der Drosophila guttifera

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

Das übergeordnete Ziel dieses Experiments ist es, die Puppenperioden zu inszenieren und die Flügelpigmentierung von Drosophila guttifera zu messen. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Bereich der evolutionären Entwicklungsbiologie zu beantworten, z. B. wie sich Pigmentierungsmuster bei Drosophila entwickeln. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass wir detaillierte Informationen über die morphologische Entwicklung und den Pigmentierungsprozess erhalten können.Obwohl diese Methode einen Einblick in die morphologische Entwicklung und den Pigmentierungsprozess von Drosophila guttifera geben kann, kann sie auch auf andere Drosophila-Arten angewendet werden. Um mit der Entfernung der Puppen zu beginnen, kleben Sie ein Stück doppelseitiges Klebeband auf ein Stück Papiertuch. Lege eine Puppe mit der Bauchseite nach oben auf das doppelseitige Klebeband.Lokalisieren Sie den Raum zwischen der vorderen Seite des Pupariums und der inneren Puppe. Fassen und entfernen Sie das Puparium um diesen Spalt herum mit einer Pinzette. Und legen Sie die vordere Seite des Kopfes der Puppe frei.Führen Sie die Spitze einer Pinzette ein, indem Sie sie parallel zur vorder-hinteren Achse be

methods-for-staging-pupal-periods-measurement-wing-pigmentation

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Phänotypische Variation für Züge können durch Mutationen in cis-regulatorisches Element (CRE)-Sequenzen, die Kontrolle Genexpressionsmuster führen. Methoden für den Einsatz in Drosophila melanogaster abgeleitet werden können quantitativ vergleichen Sie die Ebenen der räumlichen und zeitlichen Muster der Genexpression durch modifizierte oder natürlich vorkommende Varianten CRE vermittelt.

Quantitativen Vergleich der Cis-Regulatory Element (CRE) Aktivitäten in transgenen Drosophila melanogaster</em

Eine Methode zur Immunfärbung und visualisieren Chordotonalorganen in Larven und Puppen...

Visualisierung von Propriozeptoren in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven und Puppen

Dieser Artikel beschreibt eine Technik, um die Puppe eines Insekts zu entfernen, während die innere Puppe intakt bleibt und daher für weitere Untersuchungen geeignet bleibt. Das Beispielprotokoll zeigt die Vorgehensweise mit Drosophila guttifera; Diese Technik ist jedoch auch auf andere Drosophila-Arten anwendbar.

Entfernung von Insektenpuppen: Eine Methode zur Untersuchung von Puppen

Dieses Papier zeigt die Verwendung eines schnellen konfokalen Mikroskop, um Bildzelle Verhalten direkt durch die Puppenhülle. Nach dem Verlassen der Puppenhülle intakt ist, erlaubt dieses Verfahren die Beobachtung und Messung von dynamischen Zellprozesse im Stadium der Drosophila-Entwicklung, die schwer direkt zu studieren.

Imaging Durch die Puppenhülle von<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dieses Protokoll stellt eine effiziente Methode zur Bildgebung des lebenden Neuroepithels des Puppenaugen von Drosophila dar. Diese Methode kompensiert Gewebebewegungen und ungleichmäßige Topologie, verbessert die Visualisierung von Zellgrenzen durch die Verwendung mehrerer GFP-markierter Verbindungsproteine und verwendet ein einfach zu montierendes Bildgebungsgerät.

Live-Bilder aus dem Drosophila Pupal Augen

Die Fähigkeit, präzise Abschriften oder Proteine in Drosophila Gewebe erkennen ist entscheidend für die Untersuchung ihrer Fülle und Lokalisierung, die im Zusammenhang mit den Entwicklungsprozess. Hier ist die Beschreibung eines einfachen Verfahrens pupal Flügel zu sezieren. Diese Flügel können als Muster in verschiedenen Techniken (PCR-Assay, Immunohistochemistry, etc.) verwendet werden.

Eine schnelle und effiziente Methode, um Pupal Flügel von Drosophila geeignet für Immunodetections oder PCR-Assays sezieren

Drosophila Eierstock ist ein hervorragendes Modell für Stammzell-Nische Entwicklung zu studieren. Obwohl Methoden für die Larven und adulten Eierstöcke sezieren veröffentlicht wurden, erfordern pupal Eierstock Sezierungen verschiedene Techniken, die nicht im Detail veröffentlicht wurden. Hier beschreiben wir ein Protokoll zum sezieren, Beizen und Montage pupal Eierstöcke.

Präparation und Färbung von Drosophila Pupal Eierstöcke

Hier präsentieren wir eine einfach zu bedienende und vielseitige Methode ausführen live imaging von Entwicklungsprozessen im allgemeinen und Muskel-Sehnen-Morphogenese insbesondere in lebenden Drosophila Puppen.

In Vivo Bildgebung der Muskel-Sehnen-Morphogenese in Drosophila Puppen

Dieses Protokoll ist für die Bildgebung und Analyse der Dynamik der Zellorientierung und des Gewebewachstums in der Drosophila-Bauchepithelie konzipiert, während die Fruchtfliege einer Metamorphose unterzogen wird. Die hier beschriebene Methodik kann auf die Untersuchung verschiedener Entwicklungsstadien, Gewebe und subzellulärer Strukturen in Drosophila oder anderen Modellorganismen angewendet werden.

Bildgebung und Analyse der Gewebeorientierung und Wachstumsdynamik in der Entwicklung drosophila Epithelia während der Pupal-Stadien

In dieser Arbeit wird ein Protokoll für die Langzeit-Live-Bildgebung des Drosophila-Beins während des Puppenstadiums vorgestellt, bei dem das Puparium vollständig entfernt wird. Dieses Protokoll kann auch auf andere Gewebe angewendet werden.

Langzeit-Live-Bildgebung der Entwicklung der Puppenbein von Drosophila nach Entfernung der Puppen

Drosophila ist ein leistungsfähiges Modell, um die grundlegenden Mechanismen der Myogenese zu verstehen. Dieses Protokoll für die Dissektion und Präparation von Thorax-Hemisektionen ermöglicht die mikroskopische Analyse des indirekten Flugmuskels sowohl im Puppen- als auch im Erwachsenenstadium. Dieses Protokoll ermöglicht die konfokale Bildgebung der zellulären Morphologie, der Proteinlokalisierung, der Muskelstruktur und mehrerer anderer Aspekte der Myogenese.

Dissektion von Drosophila melanogaster Indirekte Flugmuskulatur für Mikroskopie-Ansätze

Erfahren Sie Methoden zur Inszenierung pupaler Perioden und Messung der Flügelpigmentierung bei Drosophila guttifera. Diese Technik liefert detaillierte Einblicke in morphologische Entwicklung und Pigmentierungsprozesse für vergleichende evolutionsbiologische Studien.

Methoden zur Inszenierung Pupal Perioden und Messung der Flügel Pigmentierung der Drosophila guttifera

Weitere Videos entdecken