Methoden zur Inszenierung Pupal Perioden und Messung der Flügel Pigmentierung der Drosophila guttifera

Das übergeordnete Ziel dieses Experiments ist es, die Puppenperioden zu inszenieren und die Flügelpigmentierung von Drosophila guttifera zu messen. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Bereich der evolutionären Entwicklungsbiologie zu beantworten, z. B. wie sich Pigmentierungsmuster bei Drosophila entwickeln. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass wir detaillierte Informationen über die morphologische Entwicklung und den Pigmentierungsprozess erhalten können.

Obwohl diese Methode einen Einblick in die morphologische Entwicklung und den Pigmentierungsprozess von Drosophila guttifera geben kann, kann sie auch auf andere Drosophila-Arten angewendet werden. Um mit der Entfernung der Puppen zu beginnen, kleben Sie ein Stück doppelseitiges Klebeband auf ein Stück Papiertuch. Lege eine Puppe mit der Bauchseite nach oben auf das doppelseitige Klebeband.

Lokalisieren Sie den Raum zwischen der vorderen Seite des Pupariums und der inneren Puppe. Fassen und entfernen Sie das Puparium um diesen Spalt herum mit einer Pinzette. Und legen Sie die vordere Seite des Kopfes der Puppe frei.

Führen Sie die Spitze einer Pinzette ein, indem Sie sie parallel zur vorder-hinteren Achse bewegen. Hebe die Spitze der Pinzette an, um das Puppenholz lokal zu brechen. Wiederholen Sie diesen Vorgang, bis der Bruch den hinteren Teil des Pupariums erreicht.

Achten Sie darauf, dass zwischen den Puppen- und Puppenbeinen eine Lücke entsteht. Und brechen Sie die ventrale Seite des Pupariums, während Sie die Schädigung der inneren Puppe minimieren. Nachdem Sie die Puppe so weit wie möglich zerbrochen haben, nehmen Sie die Puppe mit einem feinen Pinsel heraus.

Legen Sie die Puppe auf ein mit ddH2O angefeuchtetes Stück Seidenpapier und legen Sie sie in eine Petrischale aus Plastik. Machen Sie sofort Fotos, da die freiliegende Puppe verletzlich ist und leicht trocknet. Fahren Sie mit der Bildvorbereitung fort und entfernen Sie den vorderen Teil des Pupariums mit einer Pinzette.

Nehmen Sie die Puppe heraus und legen Sie sie in eine phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) in einer Petrischale aus Plastik. Als nächstes schneidest du das Grundgelenk eines Flügels ab. Wenn der Flügel zusammengeklappt ist, legen Sie ihn in eine mit ddH2O gefüllte Plastik-Petrischale, um ihn durch osmotischen Druck zu verlängern.

Sammeln Sie alle 10 Minuten neu geschlossene Erwachsene aus einer Archivdatei. Betäuben Sie eine Fliege mit einem CO2-Betäubungspad. Bestätigen Sie die Anästhesie durch Immobilität und schneiden Sie das Basalgelenk eines Flügels.

Geben Sie 10 Mikroliter PBS auf einen Objektträger. Lege den Flügel in den Drop. Und decken Sie den Tropfen mit einem Deckglas ab.

Schalten Sie anschließend das Licht des Stereomikroskops ein und stellen Sie es auf Maximum ein. Stellen Sie die Objektivlinse auf 11,5x und die Blende auf den am weitesten geöffneten Zustand ein. Schalten Sie dann die Kamera ein und stellen Sie die Kamera ein.

Fokussieren Sie auf die Probe, indem Sie den Fokusknopf des Mikroskops bewegen. Drücken Sie den Auslöser der Fernbedienung, um ein Bild aufzunehmen. Nehmen Sie ein Bild des Flügels, zentriert ein campaniformes Sensillum, wobei Sie den distalen Teil des Flügels auf der linken Seite und den inneren Teil des Flügels auf der Oberseite positionieren.

Öffnen Sie ein Bild mit einem campaniformen Sensillum-Fleck in der Mitte. Klicken Sie auf Bild, geben Sie 1 (8-Bit) ein, um das Bild in ein 8-Bit-Bild zu konvertieren. Klicken Sie in den Bereichsauswahlwerkzeugen auf ein Rechteck und zeichnen Sie ein Rechteck.

Setze die rechte Seite des Rechtecks so an, dass sie sich rechts vom campaniformen Sensillum-Fleck befindet. Klicken Sie auf Bearbeiten, Auswahl, Zu Manager hinzufügen und aktivieren Sie dann die Spalte Alle anzeigen. Klicken Sie anschließend in den Linienauswahlwerkzeugen auf das Winkelwerkzeug.

Zeichnen Sie die erste Linie auf der hinteren Linie der dritten Längsvene. Legen Sie die linken Endpunkte der Linie auf den Scheitelpunkt des zuvor gezeichneten Rechtecks fest. Zeichnen Sie die zweite Linie auf der oberen Seite des Rechtecks.

Drücken Sie die Taste M, um den Winkel zwischen den beiden in diesem Schritt gezeichneten Linien zu messen. Klicken Sie auf das Fenster des Bildes auf dem Bildschirm des Computers. Klicken Sie auf Bearbeiten, Auswahl, Zu Manager hinzufügen.

Klicken Sie in den Bereichsauswahlwerkzeugen auf ein Rechteck und zeichnen Sie ein Rechteck, das etwa 1/9 der Größe des Bildfensters beträgt. Klicken Sie auf Bearbeiten, Auswahl, Drehen. Schreiben Sie die Minusgrade des zuvor gemessenen Winkels in die Spalte Winkel und klicken Sie auf OK, um das in diesem Schritt gezeichnete Rechteck zu drehen.

Verschieben Sie das mit den Pfeiltasten gezeichnete Rechteck und legen Sie den Endpunkt der hinteren Linie der zweiten Längsvene auf die linke Seite des Rechtecks. Und die untere Seite des Rechtecks an der hinteren Linie der dritten Längsvene befestigen. Bestätigen Sie, dass eine senkrechte Linie vom Endpunkt der zweiten Längsvene zur hinteren Linie der dritten Längsvene gezeichnet wurde.

Definieren Sie den Fuß der senkrechten Linie als Punkt A.Notieren Sie die X-Koordinate und die Y-Koordinate von Punkt A, die unter den Bereichsauswahlwerkzeugen angezeigt wird, wenn Sie den Cursor auf Punkt A platzieren.Öffnen Sie das Bild mit Punkt A in der Mitte. Klicken Sie auf Bild, Typ, 8-Bit, um das Bild in ein 8-Bit-Bild zu konvertieren. Klicken Sie in den Bereichsauswahlwerkzeugen auf das Rechteck und zeichnen Sie ein Rechteck von etwa 1/9 der Größe des Bildfensters.

Klicken Sie auf Bearbeiten, Auswahl, Angeben. Aktivieren Sie die Option Ovale und zentrierte Spalte. Schreiben Sie 100 Pixel in die Spalten Breite und Höhe.

Schreiben Sie die X-Koordinaten von Punkt A in die Spalte X-Koordinaten und die Y-Koordinaten von Punkt A in die Spalte Y-Koordinaten, und klicken Sie dann auf OK. Klicken Sie anschließend auf Analysieren und messen. Wenn die Kalibrierung bereits abgeschlossen ist, werden die Außendurchmesser in der Spalte Mittelwert angezeigt. Der Vergleich der Daten mehrerer Stadien ergab, dass das Stadium P12 der Zeitpunkt des Beginns der Pigmentierung ist und dass die Pigmentierung 12 Stunden nach der Eklosion abgeschlossen ist.

Nach ihrer Entwicklung ebnet diese Technik Forschern auf dem Gebiet der evolutionären Entwicklungsbiologie den Weg, Unterschiede in der Puppenentwicklung und im Pigmentierungsprozess zwischen Drosophila-Arten zu untersuchen.