Name: Mikrosonde Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry für einzellige Metabolomik in Live-Frosch (Xenopus Laevis) Embryonen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 16 s
Description: Erfahren Sie die Mikrosonden-Capillary-Electrophoresis-Massenspektrometrie zur Analyse von Metaboliten in einzelnen Zellen lebender Xenopus laevis-Embryonen. Diese schnelle, minimal-invasive Methode ermöglicht präzise metabolische Untersuchungen in der Entwicklungsbiologie.

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Diese Arbeit wurde unterstützt durch nationale Institute der Gesundheit Stipendien GM114854 (, P.N.) und CA211635 (um P.N.), Arnold und Mabel Beckman Stiftung Beckman Young Investigator gewähren (P.N.), die DuPont junge Professor Award (P.N.), der American Society for Mass Massenspektrometrie-Forschungspreis (, P.N.) und COSMOS Club Foundation Fellowships (zur R.M.O. und E.P.P.). Die Meinungen und Schlussfolgerungen in dieser Publikation sind ausschließlich diejenigen der Autoren und repräsentieren nicht unbedingt die offizielle Meinung der Finanzierungsquellen.

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Microprobe CE-ESI-MS ermöglicht die direkte Charakterisierung der Metaboliten in Einzelzellen Leben, frei zu Embryonen entwickeln. Das Herzstück des Konzepts sind zwei technische Unterkomponenten, nämlich in Situ Kapillare Microsampling und hoher Empfindlichkeit CE-ESI-MS. im Vergleich zum gesamten Zelle Dissektion, Kapillare Microsampling hat den Vorteil der schnellen Betrieb (einige Sekunden vs. 5 min / Zelle durch Dissektion), Kompatibilität mit der komplexen dreidimensionalen Morphologie von Embryonen und Sk...

Ein umfassendes Verständnis der embryonalen Entwicklung erfordert Charakterisierung aller molekularen Veränderungen, die in jeder Zelle von den sich entwickelnden Organismus zu entfalten. Während Next-Generation Sequenzierung mit molekulare Verstärkung ermöglicht ist tief Messung von einzelligen Transkriptom1 entwickelnde Systeme2,3, deutlich weniger über die Suite von kleineren Molekülen bekannt. produziert in einzelnen embryonalen Zellen, einschließlich Proteine und insbesondere Metaboliten (molekulare Masse &#60; ~ 1.500 Da). Mit einer schnellen und dynamischen Reaktion auf intrinsische und extrinsische Veranstaltungen dient das Metabolom als eine mächtige Deskriptor der molekularen Zustand einer Zelle. Das einzellige Metabolom wirft daher das Potenzial, die räumliche und zeitliche Entwicklung der Zelle Heterogenität im frühen Embryo zu verfolgen und um neue Moleküle für funktionelle Studien zu identifizieren. Erkennung von das Metabolom verlangt jedoch ohne molekulare Verstärkung für diese Moleküle, außergewöhnlichen Sensibilität mit Massenspektrometrie (MS), die die Technologie der Wahl für Metabolit-Analyse.
Einzellige MS ist eine Sammlung von Technologien mit ausreichender Empfindlichkeit zu Metaboliten in Einzelzellen zu messen (siehe Bewertungen 4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15). Reproduzierbare Entnahme von Zellen und effiziente Gewinnung von Metaboliten sind entscheidend für den erfolgreichen Nachweis von Metaboliten in einzelnen Zellen. Ganze Zelle Dissektion der identifizierten Zellen aus Embryonen Xenopus ermöglichte die Charakterisierung von kleinen Molekülen und Peptide16. Andere Ansätze beschäftigen Mikropipetten, gefolgt von Erkennung mit Electrospray Ionisierung (ESI) MS live Einzelzellen zu probieren. Beispielsweise wurden Metaboliten in Anlage oder Säugerzellen durch einzellige video MS17, Druck Sonde18, einzelne Sonde19und fluidische Kraft-Mikroskopie20, unter anderen Techniken21gemessen, 22,23,24. Darüber hinaus vereinfacht die Einbeziehung der chemische Trennung vor der Ionisierung in den einzelligen MS Workflow effizient das Metabolom somit Linderung mögliche Störungen während Ion Generation vor Erkennung. Wichtig ist, informiert Trennung auch substanzspezifischen in molekularen Identifikationen zu unterstützen. Kapillarelektrophorese (CE) wurde zur Metaboliten in einzelnen seziert25,26 oder Microsampled27Neuronen, Erfassung von kleinen Molekül Unterschiede zwischen Neuron Phänotypen erkennen. Wir haben vor kurzem CE an ESI Tandem MS die Ablaufverfolgungsebene Erkennung von Hunderten von Metaboliten in einzelnen Zellen aktivieren, die von den frühen Embryos von Xenopus Laevis16,28seziert wurden angepasst. Diese Studien zeigten sich überraschend metabolische Unterschiede zwischen embryonalen Zellen in einem frühen Stadium der Entwicklung und führte zur Entdeckung von Metaboliten mit bisher unbekannten entwicklungspolitischen Auswirkungen16.
Hier bieten wir eine Protokoll, die den Nachweis von Metaboliten in einzelnen Zellen direkt in einem live vertebrate Embryos mit Mikrosonde einzellige CE-ESI-MS29,30aktiviert. Der Modellorganismus ausgewählt ist die 8-32-Zell laevis Embryo, obwohl der Ansatz auch zu späteren Phasen der Entwicklung und andere Arten von Modellorganismen anwendbar ist. Dieses Protokoll verwendet geschärfte Kapillaren mit mehrachsigen translational Control unter Anleitung von einem hochauflösenden bildgebenden System, ein ~ 10 nL Teil der identifizierten Zellen in Situ die morphologisch Komplex sich entwickelnden Embryos Aspirieren. Diese Mikrosonde ist skalierbar, um kleinere Zellen und betreibt innerhalb von Sekunden, das ist schnell genug, um Zelle Linien im Embryo zu verfolgen. Nach dem Extrahieren von polar oder apolaren kleine Moleküle, wie z. B. Stoffwechselprodukte und Peptide aus der erhobenen Stichprobe in ~ 4-5 µL Extraktionslösung, ~ 10 nL von der daraus resultierenden Extrakt wird in einer speziell angefertigten CE-Plattform mit Bindestrich, ein ESI-Massenspektrometer analysiert. Bau und Betrieb von der CE-ESI-MS-Plattform baut auf Protokolle an anderer Stelle beschrieben. 31 , 32 die co-axial CE-ESI-Schnittstelle ist aufgebaut, wie an anderer Stelle beschrieben. 31 diese Plattform ist in der Kegel-Jet Spritzen Regime Tracelevel Empfindlichkeit mit einer Fähigkeit zur Quantifizierung über einen 4-5 Log-Bestellung Dynamikbereich (relative28,29,30 erreichen gepflegt. oder absolute16). Die CE-ESI-MS-Plattform bietet eine Untergrenze von 60-Amol mit 8 % relative Standardabweichung (RSD) in Quantifizierung über einen geprüften Bereich von 10 nM bis 1 µM für kleine Moleküle16, die ausreichen, um endogene Metaboliten in X zu charakterisieren. Laevis Zellen. Microprobed Zellen weiter teilen im Laufe des Embryo durch Entwicklung30, zulassend zeitlich und räumlich aufgelöste Analyse des zellulären Stoffwechsels. In der Tat können einzellige CE-ESI-MS verwendet werden, um metabolische Unterschiede zwischen den Zellen zu finden, die dorsal-Ventral16,29, Tier-pflanzlichen16, und rechts-links-28 Entwicklungsstörungen Achsen sowie Zellen zu besetzen die Nervengewebe fated dorsale Abstammung von einem gemeinsamen Stammvater Zelle in laevis30bilden. Neben der Abfrage metabolische Unterschiede zwischen einzelnen embryonalen Zellen in unterschiedlichen Entwicklungsstadien des Embryos laevis 30, wir erwarten, dass die hier beschriebenen Protokolle auf ein breites Spektrum von Biomolekülen anwendbar sind und einzelne Zellen Microsampled von verschiedenen Stadien der Embryonalentwicklung sowie andere Arten von Zellen und Modellorganismen. Darüber hinaus könnte die Mikrosonde für Microsampling verwendet werden, während eine andere Plattform kompatibel mit winzigen Proben für Trennung und/oder Charakterisierung von Biomolekülen verwendet werden könnten.

<table><tbody><tr><td>Reagenzien für Embryonenkulturmedien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP 366-1</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumsulfat</td><td>Fisher Scientific</td><td>M 65-3</td><td></td></tr><tr><td>Calciumnitrat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1396</td><td></td></tr><tr><td>Cystein</td><td>MP Biomedicals</td><td>101444</td><td></td></tr><tr><td>Trizma Hydrochlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Fisher Scientific</td><td>5641-212</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Unternehmen<</td><td>>Katalognummer</td><td>Kommentare</td></tr><tr><td>Metabolit Extraktionslösungsmittel</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetonitril (LC-MS-Qualität)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A955</td><td></td></tr><tr><td>Methanol (LC-MS-Qualität)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A456</td><td></td></tr><tr><td>Wasser (LC-MS-Qualität)</td><td>Fisher Scientific</td><td>W6</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Unternehmen</td><td>Katalognummer</td><td>Kommentare</td></tr><tr><td>Lösungsmittel und Normen für CE-ESI-MS</td>Ameisensäure (LC-MS-Qualität<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A11710X1-AMP</td><td></td></tr><tr><td>Methanol (LC-MS-Qualität)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A456-4</td><td></td></tr><tr><td>Wasser (LC-MS-Qualität)</td><td>Fisher Scientific</td><td>W6</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Fisher Scientific</td><td>5641-212</td><td></td></tr><tr><td>Acetylcholinchlorid</td><td>Acros Organics</td><td>159170050</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company<</td><td>strong>Katalognummer</td><td>Kommentare</strong</td></tr><tr><td>>Mikrosonden-Herstellungseinrichtung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikropippette-Abzieher</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>Borosilikat-Kapillaren</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>B100-50-10</td><td></td></tr><tr><td>Feine, scharfe Pinzette: Dumont #5, Biologie/Dumoxel</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc</td><td>11252-30</td><td>Korrosionsbeständig und autoklavierbar.</td></tr><tr><td>Name</td><td><>Unternehmen</td><td>Katalognummer<</td><td>strong>Kommentare</td></tr><tr><td>Microprobe Sampling Setup</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Eppendorf, Hauppauge, NY</td><td>TransferMan 4r</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td>SMZ18</td><td>Sollte schwingungsisoliert sein.</td></tr><tr><td>Illuminator z.B. Schwanenhälse</td><td>Nikon</td><td>C-FLED2</td><td></td></tr><tr><td>Microinjector</td><td>Warner Instrument, Handem, CT</td><td>PLI-100A</td><td></td></tr><tr><td>Transferpipetten (Kunststoff, Einweg)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-7M</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale 60 mm und 80 mm</td><td>Fisher</td><td>Scientific S08184</td><td></td></tr><tr><td>Glaspasteurpipetten (Borosilikat, Einweg)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>Sorvall Legend X1R</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalognummer</td><td>Kommentare</td></tr><tr><td>><CE-ESI-MS Einrichtung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hochspannungsnetzteil</td><td>Spellman</td><td>CZE1000R</td><td>Das HVPS kann mit einem Niederspannungsprogramm ferngesteuert werden, das von einem PC erzeugt wird. Vorsicht: Hochspannung stellt die Gefahr eines Stromschlags dar; Alle Verbindungsteile müssen geerdet oder sorgfältig abgeschirmt werden, um eine versehentliche Exposition des Benutzers zu verhindern.</td></tr><tr><td>Spritzenpumpen (2)</td><td>Harvard Apparat</td><td>704506</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Amscope</td><td>SM-3BZZ</td><td>Stereomikroskop mit 4,5-facher Vergrößerung, ausgestattet mit einem Illuminator zur Überwachung des Sprühmodus der CE-ESI-Schnittstelle.</td></tr><tr><td>XYZ-Translationstisch</td><td>Thorlabs</td><td>PT3</td><td></td></tr><tr><td>XYZ-Translationstisch</td><td>Sonderanfertigung</td><td></td><td>Diese Plattform ist in der Lage, Nanoliter-Probenmengen durch hydrodynamische Injektion in die Trennkapillare zu laden und die BGE für CE zu versorgen. Beide Schnittstellen, die in dieser Arbeit beschrieben wurden, waren in der Lage, 6&ndash; 10 nL Probe innerhalb von 1 min in eine 1 m Trennkapillare</td></tr><tr><td>Probenfläschchen aus Edelstahl</td><td>Maßgeschneidertes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BGE-Fläschchen aus Edelstahl</td><td>Maßgeschneiderte</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kapillare aus Quarzglas (40 & Mikro; M/105 & Mikro; m ID/OD; 100 cm)</td><td>Polymicro technologies</td><td>TSP040105</td><td></td></tr><tr><td>Kapillare aus Quarzglas (75 & Mikro; M/360 & Mikro; m ID/OD; 100 cm)</td><td>Polymicro technologies</td><td>TSP075375</td><td></td></tr><tr><td>Strahler aus Edelstahl mit stumpfen Spitzen (130/260 & micro; m ID/OD)</td><td>Hamilton Co.</td><td>21031A</td><td>Für eine bessere Leistung können Sie die Emitterspitze mit dem Laser spalten und fein polieren.</td></tr><tr><td>Spritzen (gasdicht): 500 - 1000 &Mikro; L</td><td>Hamilton Co.</td><td>1750TTL</td><td></td></tr><tr><td>Digital-Multimeter</td><td>Fluke</td><td>Fluke 117</td><td></td></tr><tr><td>Hochauflösendes Massenspektrometer</td><td>Bruker Daltonics</td><td>Maxis Impact HD</td><td>Hochauflösendes Tandem-Massenspektrometer mit einer Atmosphären-Druck-Schnittstelle, konfiguriert für ESI</td></tr><tr><td>Tunning-Mischung für die Kalibrierung von Massenspektrometern</td><td>Agilent technologies</td><td>ESI-L G1969-85000</td><td></td></tr><tr><td>Datenanalyse Version 4.3 Software</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalognummer</td><td>Kommentare</strong</td></tr><tr><td>>Zusatzausrüstung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vakuumkonzentrator für den Betrieb bei 4&ndash; 10&Grad; C</td><td>Labconco</td><td>7310022</td><td></td></tr><tr><td>Analytische Mikrowaage (XSE105DU)</td><td>Fisher Scientific</td><td>01911005</td><td></td></tr><tr><td>Gefrierschrank (-20 &Grad; C)</td><td>Fisher Scientific</td><td>97-926-1</td><td></td></tr><tr><td>Gefrierschrank (-80 &Grad; C)</td><td>Fisher Scientific</td><td>88300ASP</td><td></td></tr><tr><td>Kühlbrutschrank</td><td>Fisher Scientific</td><td>11475126</td><td></td></tr><tr><td>Vortex-Mischer</td><td>Benchmark</td><td>BS-VM-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

mikrosonde capillary electrophoresis mass spectrometry für einzellige metabolomik in live-frosch (xenopus laevis) embryonen

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog (Xenopus laevis) Embryos

Die Quantifizierung von kleinen Molekülen in Einzelzellen wirft neue Potenziale für ein besseres Verständnis der grundlegenden Prozesse, die Embryonalentwicklung zugrunde liegen. Aktivieren einzellige Untersuchungen direkt in live Embryonen, neue analytische Ansätze erforderlich sind, insbesondere die sensiblen, selektive quantitative, robust und skalierbar zu verschiedenen Zellgrößen. Hier präsentieren wir eine Protokoll, die die in Situ -Analyse des Stoffwechsels in einzelnen Zellen bei der Entwicklung von Embryonen von der südafrikanischen krallenbewehrten Frosch (Xenopus Laevis), ein leistungsfähiges Modell in Zell- und Entwicklungsbiologie frei ermöglicht. Dieser Ansatz nutzt eine Kapillare Mikrosonde um einen definierten Teil aus einzelnen identifizierten Zellen des Embryos, die benachbarte Zellen intakt für die spätere Analyse Aspirieren. Die gesammelten Zellinhalt wird durch eine Microscale Kapillarelektrophorese Electrospray Ionisierung (CE-ESI) Schnittstelle gekoppelt mit einem hochauflösenden Tandem-Massenspektrometer analysiert. Dieser Ansatz ist skalierbar, um verschiedenen Zellgrößen und kompatibel mit den komplexen dreidimensionalen Struktur des sich entwickelnden Embryos. Als Beispiel zeigen wir, dass Mikrosonde einzellige CE-ESI-MS die Aufklärung der metabolischen Zelle Heterogenität, die entfaltet sich ermöglicht wie eine Vorfahr Zelle Nachkommen während der Entwicklung des Embryos entstehen. Neben Zell- und Entwicklungsbiologie sind einzellige Analyseprotokolle hier beschriebenen anderen Zellengrößen, Zelltypen oder Tiermodellen zugänglich.

Wir Beschäftigten vor kurzem Mikrosonde einzellige CE-ESI-MS Metaboliten in einzelnen identifizierten Zellen bei der Entwicklung von Xenopus Laevis Embryonen29,30frei zu charakterisieren. Die Mikrosonde ermöglicht die schnelle (~ 5 sec/Zelle), in Situ Aspiration von ~ 10 nL aus einer einzelnen Zelle, mehrere Bestrebungen der gleichen Zelle oder mehrere verschiedene Zellen in den gleichen oder späteren Stadien der...

Wir beschreiben Schritte, mit denen schnell in Situ Probenahme von einen kleinen Teil einer einzelnen Zelle mit hoher Präzision und minimalen Invasion mit Kapillar-basierten Mikro-Probenahme, chemische Charakterisierung einer Momentaufnahme der metabolischen Aktivität in zu erleichtern Embryonen mit einer speziell angefertigten Einzelzelle Kapillarelektrophorese und Massenspektrometrie-Plattform zu leben.

Mikrosonde Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry für einzellige Metabolomik in Live-Frosch (Xenopus Laevis) Embryonen

The quantification of small molecules in single cells raises new potentials for better understanding the basic processes that underlie embryonic ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist die Charakterisierung von Metaboliten in lebenden Zellen sich entwickelnder Embryonen durch in situ Mikroprobenahme, Kapillarelektrophorese und Massenspektrometrie. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Zell- und Entwicklungsbiologie zu beantworten, da sie die Analyse des Stoffwechsels in einzelnen Zellen direkt in lebenden sich entwickelnden Embryonen ermöglicht. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie schnell und skalierbar auf verschiedene Zellgrößen ist und eine minimalinvasive Probenahme einzelner Zellen in lebenden Embryonen ermöglicht.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da einige Schritte schwer zu erlernen sind, da sich der Embryo relativ schnell entwickelt und ein speziell angefertigtes Kapillarelektrophorese-Elektrospray-Ionisationsinstrument verwendet wird. Beginnen Sie diesen Vorgang mit der Zubereitung von 2%Agarose in einer 1X Steinberg-Lösung. Beschichten Sie den Boden von 60-Millimeter-Petrischalen mit der Lösung, solange er noch flüssig ist.Sobald das Agarose-Gel abgekühlt und fest geworden ist, flammen Sie das Ende einer sechs Zoll großen Pasteu

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Research

Forschung

JoVE Journal

Chemistry

Chemie

Xenopus embryonalen Epithelien sind ein ideales Modellsystem, um die Zelle Verhaltensweisen wie Polarität Entwicklung und Formänderung beim epithelialen Morphogenese zu studieren. Traditionelle Histologie des festen Proben wird zunehmend durch Live-Cell-konfokale Bildgebung ergänzt. Hier zeigen wir Methoden, um Frosch Gewebe zu isolieren und zu visualisieren leben Epithelzellen und deren Zytoskelett mit Live-cell konfokalen Mikroskopie.

Live-Cell-Imaging und Quantitative Analyse der embryonalen Epithelzellen in Xenopus laevis</em

Hier präsentieren wir Protokolle zur Durchführung sowohl der Umgebungsmassenspektrometrie-Bildgebung (MSI) von Geweben als auch der In-situ-Live-Einzelzell-MS (SCMS)-Analyse mit der Einzelsonde, einem miniaturisierten multifunktionalen Gerät für die MS-Analyse.

Anwendungen der Einzel-Sonde: Mass Spectrometry Imaging und Einzelzellanalyse unter Umgebungsbedingungen

Für den Einsatz in Verbindung mit einem Einzelsonden-Massenspektrometrie-Setup wird eine integrierte Zellmanipulationsplattform für die Online-Analyse einzelner Suspensionszellen unter Umgebungsbedingungen entwickelt.

Integrierte Zellmanipulationsplattform gekoppelt mit der Single-Sonde zur Massenspektrometrie-Analyse von Medikamenten und Metaboliten in einzelförmigen Suspensionszellen

Hier präsentierten wir eine multiplexierte einzellige mRNA-Sequenzierungsmethode, um die Genexpression in embryonalen Geweben der Maus zu profilieren. Die tropfenbasierte einzelzellbasierte mRNA-Sequenzierung (scRNA-Seq) in Kombination mit Multiplexing-Strategien kann Einzelne Zellen aus mehreren Proben gleichzeitig profilieren, was die Reagenzkosten deutlich reduziert und experimentelle Chargeneffekte minimiert.

Multiplexed Single Cell mRNA Sequenzierungsanalyse von Mausembryonalzellen

In dieser Arbeit beschreiben wir eine massenspektrometriebasierte proteomische Charakterisierung von Zelllinien mit bekannten Gewebeschicksalen im Embryo von Xenopus laevis im Wirbeltier.

Zellliniengesteuerte Massenspektrometrie-Proteomik im sich entwickelnden (Frosch-)Embryo

Dieses Protokoll zielt darauf ab, Zellmetaboliten für die Einzelzell-Massenspektrometrie (SCMS) zu konservieren, indem es das Waschen flüchtiger Salzlösungen, das schnelle Abschrecken von flüssigem Stickstoff, die Gefriertrocknung und die Lagerung bei -8 °C kombiniert. Es zeigt, dass die Abschreckung von flüssigem Stickstoff für die Aufrechterhaltung von Metabolitenprofilen unerlässlich ist, während eine längere Kühllagerung minimiert werden sollte, um metabolische Veränderungen zu vermeiden.

Probenvorbereitung für Einzelzell-Massenspektrometrie-Metabolomik-Studien: Kombiniertes Waschen, Abschrecken, Trocknen und Lagern von Zellen

Die nicht-gezielte Erstellung von Metabolitenprofilen durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie in Verbindung mit Massenspektrometrie (UPLC-MS) ist eine leistungsfähige Technik zur Untersuchung des Stoffwechsels.  In diesem Artikel wird ein typischer Arbeitsablauf für die Erstellung von nicht-zielgerichteten Metabolitenprofilen von Serum beschrieben, einschließlich Probenorganisation und -vorbereitung, Datenerfassung, Datenanalyse, Qualitätskontrolle und Metabolitenidentifizierung.

Large Scale Non gezielte Metabolomic Profiling von Serum von Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (UPLC-MS)

Untargeted metabolomics stellt eine Hypothese generieren Momentaufnahme eines metabolischen Profils. Dieses Protokoll wird zeigen, die Extraktion und Analyse von Metaboliten von Zellen, Serum oder Gewebe. Eine Reihe von Metaboliten werden mit flüssigem befragten-Flüssigphasenextraktion, Mikroströmungsfühler UltraPerformance Flüssigkeits-Chromatographie / hochauflösende Massenspektrometrie (UPLC-HRMS), gekoppelt mit Differential-Analyse-Software.

Untargeted Metabolomics aus biologischen Quellen Mit UltraPerformance Flüssigkeits-Chromatographie-hochauflösender Massenspektrometrie (UPLC-HRMS)

Freie Lösung Kapillarelektrophorese ist eine schnelle, kostengünstige und robuste Analysemethode, die die quantitative Überwachung chemischer Reaktionen in Echtzeit ermöglicht. Die Nützlichkeit für eine schnelle, bequeme und präzise Analyse wird hier durch die Analyse von kovalenten Peptidtransplantaten auf Chitosanfilme für eine verbesserte Zelladhäsion demonstriert.

Kapillarelektrophorese zum Monitor Peptid Verpflanzen auf Chitosanfilme in Echtzeit

Wir beschreiben Sie ein Verfahren zur Detektion von chemischen Elementen vorhanden in Situ in menschlichen Zellen sowie deren Quantifizierung in Vitro . Die Methode eignet sich gut für jeden Zelltyp und eignet sich besonders zur quantitativen chemischen Analyse in einzelnen Zellen nach in-vitro- Metall-Oxid-Nanopartikel-Exposition.

In Situ Erkennung und Quantifizierung der einzelnen Zelle von Metall-Oxid-Nanopartikel mit nuklearen Mikrosonde Analyse

Erfahren Sie die Mikrosonden-Capillary-Electrophoresis-Massenspektrometrie zur Analyse von Metaboliten in einzelnen Zellen lebender Xenopus laevis-Embryonen. Diese schnelle, minimal-invasive Methode ermöglicht präzise metabolische Untersuchungen in der Entwicklungsbiologie.

Mikrosonde Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry für einzellige Metabolomik in Live-Frosch (Xenopus Laevis) Embryonen

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