Mikrosonde Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry für einzellige Metabolomik in Live-Frosch (Xenopus Laevis) Embryonen

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist die Charakterisierung von Metaboliten in lebenden Zellen sich entwickelnder Embryonen durch in situ Mikroprobenahme, Kapillarelektrophorese und Massenspektrometrie. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Zell- und Entwicklungsbiologie zu beantworten, da sie die Analyse des Stoffwechsels in einzelnen Zellen direkt in lebenden sich entwickelnden Embryonen ermöglicht. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie schnell und skalierbar auf verschiedene Zellgrößen ist und eine minimalinvasive Probenahme einzelner Zellen in lebenden Embryonen ermöglicht.

visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da einige Schritte schwer zu erlernen sind, da sich der Embryo relativ schnell entwickelt und ein speziell angefertigtes Kapillarelektrophorese-Elektrospray-Ionisationsinstrument verwendet wird. Beginnen Sie diesen Vorgang mit der Zubereitung von 2%Agarose in einer 1X Steinberg-Lösung. Beschichten Sie den Boden von 60-Millimeter-Petrischalen mit der Lösung, solange er noch flüssig ist.