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Einzellige Ladungszustand im lebendigen intakten Zebrafisch
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JoVE Journal Developmental Biology
Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Einzellige Ladungszustand im lebendigen intakten Zebrafisch

Full Text
6,458 Views
09:49 min
March 19, 2018

DOI: 10.3791/57024-v

Lauren Green1,2, Cody J. Smith1,2

1Department of Biological Sciences,University of Notre Dame, 2Center for Stem Cells and Regenerative Medicine,University of Notre Dame

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll um zu zeigen, wie die Zelle Ladungszustand durch UV-Einwirkung auf bestimmte Bereiche, die mit dem Ausdruck des fluoreszierenden Proteins, Eos, in lebenden Tieren erreicht wird.

Das übergeordnete Ziel dieser Photokonversionstechnik ist es, einzelne Zellen in einem einzelnen Tier von anderen fluoreszierenden Zellpopulationen zu unterscheiden. Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Entwicklungsfragen in diesem Bereich zu beantworten und ermöglicht es uns, die Migration einzelner Zellen im Laufe der Zeit zu visualisieren. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie minimalinvasiv ist und zur Markierung einzelner Zellen oder größerer Populationen verwendet werden kann.

Darüber hinaus kann der Benutzer den spezifischen Interessenbereich auswählen und das gewünschte Ziel in Fotos konvertieren. Nach der Paarung von männlichen und weiblichen transgenen Zebrafischen, die ein photokonvertierbares Protein exprimieren und die Eier gemäß dem Textprotokoll sammeln, verwenden Sie ein Präpariermikroskop mit einer 488-Nanometer-Lichtquelle und GFP-Filtersets, um 24 HPF-Embryonen zu screenen. Dechorionieren Sie die Embryonen mit einer Nadel oder Pinzette manuell.

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