Systematische Bewertung des Wohlbefindens bei Mäusen für Verfahren mit Vollnarkose

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, das Wohlbefinden von Mäusen nach Eingriffen einschließlich Vollnarkose zu beurteilen und wissenschaftlich fundierte Daten zur Unterstützung der Schweregradeinstufung gemäß der EU-Richtlinie 2010/63 bereitzustellen. Dieses Protokoll kann dazu beitragen, wichtige Fragen zum Tierschutz im Bereich der Versuchstierkunde zu beantworten, wie z. B. den Grad der Belastung, die durch Verfahren mit Vollnarkose verursacht wird. Der Hauptvorteil dieses Protokolls besteht darin, dass das Wohlbefinden jeder einzelnen Maus auf tierbasierte wissenschaftliche Weise bewertet wird und dieses Protokoll leicht angepasst und in andere geplante Studien integriert werden kann.

Die Idee zu diesem Protokoll kam uns, als wir spekulierten, dass, wenn eine wiederholte Anästhesie bei Labormäusen mehr Stress verursacht als eine einmalige Exposition, wissenschaftlich fundierte Daten fehlen würden. Bereiten Sie in diesem Schritt einen Glaskasten mit einer Grundfläche von etwa 220 Millimetern x 290 Millimetern und einer Höhe von 390 Millimetern vor. Decken Sie den Boden mit etwa 0,5 Zentimetern Einstreumaterial ab.

Streuen Sie dann eine Handvoll gebrauchtes Einstreumaterial aus dem Käfig auf das neue Einstreumaterial, um die Belastung durch die neue Umgebung zu verringern. Mit Futter und Wasser versorgen. Setzen Sie die Maus vorsichtig in den Beobachtungskäfig und lassen Sie die Maus sich mindestens 30 Minuten lang an die neue Umgebung gewöhnen.

Verwenden Sie für die Maus-Grimassen-Skala eine hochauflösende Kamera zum Fotografieren. Nehmen Sie kontinuierlich etwa 30 bis 40 Fotos für jeden Zeitpunkt innerhalb von ein bis zwei Minuten auf. Um das Grabverhalten nach Deacon und Jirkof zu testen, bereiten Sie die Höhlen vor, indem Sie 140 Gramm Futterpellets in eine undurchsichtige Standard-Plastikwasserflasche geben.

Stellen Sie anschließend die mit Futterpellets gefüllte Plastikwasserflasche parallel zur Rückwand des Beobachtungskäfigs auf. Wiegen Sie nach zwei Stunden die im Bau verbliebenen Futterpellets. Führen Sie den Test zwei Tage vor dem Eingriff als Ausgangswert zweimal durch.

Bereiten Sie in diesem Schritt einen Käfig mit neuem Einstreumaterial für den 24-stündigen Beobachtungszeitraum vor, in dem die Mäuse einzeln untergebracht werden. Der 24-stündige Beobachtungszeitraum beginnt nach der Grimassenschuppe der Maus und dem Wühlverhalten. Die Dauer der Einzelunterbringung wird auf ein Minimum reduziert.

In der Zwischenzeit werden die Aktivität im Käfig zu Hause, die Nahrungsaufnahme, das Nestbauverhalten und der Gehalt an fäkalen Corticosteron-Metaboliten gemessen. Streuen Sie als Nächstes eine Handvoll gebrauchtes Einstreumaterial ohne Kot aus dem Käfig auf das neue Material, um die Belastung zu verringern. Stellen Sie ein standardisiertes quadratisches Baumwollnestchen mit einem definierten Gewicht nur als Bereicherung für die Umwelt zur Verfügung.

Montieren Sie danach den Infrarotsensor auf dem Käfig, um die Aktivität des Käfigs zu Hause zu messen. Stellen Sie handelsübliche Futterpellets und Wasser ad libitum bereit und setzen Sie die Maus in den Käfig. Am nächsten Morgen benoten Sie das Nest nach der Fünf-Punkte-Skala von Deacon etwa zwei Stunden, nachdem das Licht angeschaltet wurde.

Wiegen Sie außerdem alle unzerrissenen Nestlet-Stücke, die mindestens 5 % des ursprünglichen Nestchengewichts ausmachen. Platzieren Sie als Nächstes eine gegitterte Käfigspitze in einem Winkel von 45 Grad zur längeren Seite des Käfigs in den Käfig. Starten Sie den Timer und überwachen oder filmen Sie die Mäuse 10 Minuten lang aus einer Entfernung von ca. 1,5 Metern.

Notieren Sie sich alle Zeiten, in denen die Maus mit allen vier Pfoten auf der Käfigoberseite auf die Käfigoberseite klettert oder die Käfigoberseite mit einer oder mehreren Pfoten auf dem Käfigboden verlässt, gefolgt von der Analyse. Die einmalige Erfahrung mit einer Anästhesie sowie eine wiederholte Anästhesie erhöhten die Unterschiede auf der Maus-Grimasse-Skala im Vergleich zur Kontrolle 30 Minuten nach der Exposition. 150 Minuten nach der letzten Anästhesie kehrten die Unterschiede aller Mäuse auf der Grimasseskala der Maus auf das Kontrollniveau zurück.

Für das Wühlverhalten reduzierte nur eine wiederholte Anästhesie den prozentualen Gewichtsanteil der Futterpellets, die die Mäuse aus dem Bau im Vergleich zur Kontrolle entfernten, signifikant. Für das Nestbauverhalten gab es keine signifikanten Unterschiede in den Nestwerten zwischen einer einmaligen Anästhesieerfahrung, einer wiederholten Anästhesie und der Kontrolle. Im freien explorativen Paradigma reduzierte die wiederholte Anästhesie die Anzahl der Explorationen im Vergleich zur Kontrolle und die Gesamtdauer der Exploration im Vergleich zu einer Einzelanästhesie einen Tag nach der letzten Anästhesie signifikant.

Acht Tage nach der letzten Narkose gab es keine Unterschiede mehr zwischen den Studiengruppen. Beim Versuch dieses Protokolls ist es wichtig, daran zu denken, Mäuse mit Tunnel- und/oder Schröpfmethoden zu behandeln. Das Aufheben von Mäusen am Schwanz kann Stress und Angst auslösen, was sich wiederum auf das Wohlbefinden auswirkt und auch die Ergebnisse des Protokolls beeinflussen kann.

Dieses Protokoll kann leicht an geplante Studien angepasst und in diese integriert werden, um die Auswirkungen eines Verfahrens auf das Wohlbefinden von Mäusen zu bewerten. Je nach Verfahren und Studiendesign sollte der am besten geeignete Test dieses Protokolls gewählt werden. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, werden Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie das Wohlbefinden von Mäusen beurteilen können, die sich einer Vollnarkose unterzogen haben.

Das Protokoll hilft dabei, den Schweregrad des Eingriffs tierversuchswissenschaftlich einzuordnen.