Name: Mikro-Dissektion der Emaille-Orgel von Unterkiefer Schneidezahn von Ratten, Umweltgifte ausgesetzt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Lernen Sie die Mikrodissektion des Schmelzorgans von Ratten zur Untersuchung von Ameloblastenaktivität und Schmelzpathologien. Diese Methode ermöglicht quantitative Analysen ohne Vorbehandlung.

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Diese Arbeit wurde von der Universität Paris-Diderot, der französische National Institute of Health und medizinische Forschung (INSERM) und das französische Institut für zahnärztliche Forschung (IFRO) finanziert.

Alle Versuchstiere in der vorliegenden Studie wurden in Übereinstimmung mit Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren vom französischen Ministerium für Landwirtschaft (A-75-06-12) beibehalten.
1. Tier Exposition gegenüber Toxinen
<ol><li>Holen Sie vor der Durchführung dieses Protokolls der notwendigen institutionellen Genehmigung ein und achten Sie darauf, alle Tierpflege-Richtlinien entsprechen.</li>
	<li>Wenden Sie das Design der Forschungs-Protokoll, so dass die Verfassung der verschiedenen Versuchsgruppen um die Auswirkungen der Schutzmechanismus untersucht auf Ameloblast Sekretion Phase und die Ameloblast-Reifung-Phase zu testen. Hier wurden vier Gruppen von männlichen Wistar-Ratten je nach Gefährdung durch Fluorid (NaF) in Kombination oder nicht mit BPA (Abbildung 1A)2konstituiert. Alle Tiere wurden beobachtet und seziert am Tag 65 (Abbildung 1 b).</li>
</ol>2. Präparation der Hemi-Mandibeln von erwachsenen Ratten
<ol><li>Einschläfern Sie Ratten durch CO2 ersticken, optional gefolgt von Enthauptung auf den getrennten Kopf vom Rest des Körpers. Ratten, die CO2 für 5 min in eine eigene Box16aussetzen.</li>
	<li>Entfernen Sie die Haut von den unteren Lippen mit einem Skalpell #11 um einfachen Zugriff auf die unteren Schneidezähne zu bekommen.</li>
	<li>Mit dem gleichen Skalpell einen Einschnitt zwischen den beiden unteren Schneidezähne mit einem leichten Druck machen und der Unterkiefer wird in zwei Hälften aufgeteilt werden.</li>
	<li>Schneiden Sie das zeitliche mandibuläre Gelenk mit einem Skalpell, den Kiefer zu lösen, und halten Sie die Hemi-Unterkiefer mit einer feinen Pinzette.</li>
	<li>Schneiden Sie die umliegenden Weichteile mit einem Skalpell und entfernen Sie alle Muskeln, Sehnen und Bänder mit einem Schaber, bis die Knochen vollständig sauber ist.</li>
</ol>3. Isolation der Schneidezahn17,18
<ol><li>Rasieren Sie vorsichtig den Knochen indem man die Klinge parallel zur großen Längsachse der Schneidezahn ab. Starten Sie am knöchernen Kamm in der Nähe von den Spitzen der Schneidezahn (proximales Ende) bis zum Ende der Schneidezahn in der Nähe der zervikalen Schleife. Die Schnitt-Bewegung geht von der proximalen, distale Richtung.</li>
	<li>Machen Sie einen ersten Schnitt nach distal der zervikalen Schleife mit dem Skalpell zu entfernen die Gonion Hemi-Unterkiefer und Ausziehen der Schneidezahn leicht ohne Beschädigung der zervikalen Schleife oder der sekretorischen Phase der Fibrillen (rote Linie in der Abbildung 2) zu ermöglichen.</li>
	<li>Machen Sie einen zweiten Schnitt unterhalb der zweiten Molaren, und legen Sie das Skalpell zwischen den Knochen und der medialen Fläche der Schneidezahn. Wenn der basalen Knochen aufgehoben wird, der Schneidezahn nach außen zu drehen und zu Emaille vorsichtig ausziehen Organgewebe beeinträchtigen mit einer feinen Pinzette.</li>
</ol>4. Mikro-Dissektion der Zahnschmelz-Organ unter binokularen Objektiv
<ol><li>Tropfen Sie 200 µL der Saline Phosphatpuffer (1 X PBS) auf dem Schneidezahn mit einer Pipette. Die labiale Fläche nach oben nehmen Sie die Schneidezahn mit einer feinen Pinzette mit. Machen Sie ein Skalpell zwischen die farblose und die orangefarbenen Teile des Gewebes zu markieren. Dieses Zeichen entspricht den zugrunde liegenden weißen Fleck ist danach zu beobachten (Abbildung 2).</li>
	<li>Kratzen Sie mit einem Bagger oder gleichwertige Werkzeug der Zelloberfläche von der Skalpell-Marke auf der apikalen Ende entsprechend Sekretion Bühne (farblos) Fibrillen, und von der Skalpell-Marke an der Spitze der Schneidezahn für die Reifung Stufe (Orange) Fibrillen.</li>
	<li>Entsprechend der Übergangsphase, wie zuvor beschrieben192-mm-Gewebe zu entfernen. Öffnen Sie den Schneidezahn nicht während Emaille Orgel Dissektion zur Vermeidung von Kontaminationen durch das Mesenchym.</li>
	<li>Schneiden Sie die zervikale Schleife befindet sich unmittelbar am apikalen Teil der Schneidezahn (Abbildung 2) als zuvor beschriebenen20.</li>
	<li>In 10 % Formalin oder Lyse Lösung für weitere Untersuchungen (siehe Tabelle der Materialien) sammeln.</li>
</ol>(5) Sammlung von getrennten Emaille Organ Gewebe für weitere Untersuchungen
<ol><li>Fallen Sie 200 µL PBS 1 X Puffer auf die Schneidezähne.</li>
	<li>Trennen Sie mit einer Skalpellklinge #11 sorgfältig dental Epithelzellen allmählich im Puffer, separat für jede Stufe mit Hilfe der zuvor Skalpell-Marke.</li>
	<li>Legen Sie für Zelle RNA und Protein-Extraktionen das Gewebe in eine Lyse Lösung, die Gewinnung von Proteinen und RNAs ermöglicht (siehe Tabelle der Materialien). Hinweis: Bereiten Sie hochwertige RNAs durch Drehen des Gewebe-Baggers in der Röhre, und dann schleifen die Zellen bis eine homogene Mischung zu erhalten. Die Mischung ist bereit für RNA und Protein Extraktion des Verfahrens des Herstellers, die zuvor beschriebenen2,8,17Jahre alt war. In der Regel über 5-10 µg Gesamt RNAs und 150 µg Gesamt Proteine wurden für jede Zubereitung erhalten.</li>
	<li>Für histologische Analysen setzen Immunhistochemie (IHC) und in Situ Hybridisierung (ISH), die Zellschicht in 10 % Formalin für 2 h, dann bei 4 ° C mit 1 X PBS-Puffer-Speicher. Das Gewebe kann dann in Wachs/Paraffin oder Gewebe OCT für Gefrierschnitte eingebettet werden.</li>
	<li>EMP-Extraktionen dauern Sie die Schneidezahn mit einer feinen Pinzette. Nach einer kurzen Exposition gegenüber Luft (leichte Dehydrierung) ist ein weißer Fleck um den mittleren Teil der labiale Fläche der Schneidezahn sichtbar die Einleitung der Emaille-Mineralisierung darstellt. Dieser weiße Fleck entspricht Übergang- / frühen Reife-Phase der Fibrillen, also verwenden Sie es als ein Indikator für die Extraktion von EMPs21.</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenlegen.

Veränderte Ameloblast Aktivität und/oder gestörten Ameloblast Proliferation, Differenzierung und Reifung Prozesse führen zu irreversiblen Schmelz Mängel und im Gegenzug, die Charakterisierung der Schmelz Mängel kann helfen entwickeln Verständnis für die geänderten Ameloblast Aktivität während Amelogenesis. So sind die Studien an isolierten Emaille Orgel Determinante, die pathologische Ereignisse führt zu defekten unabhängig ihrer Herkunft, Umwelt- oder genetische Schmelz aufzuklären.
Diese Tec...

Viele Entwicklungsstörungen Schmelz Mängel können Belastung durch Umweltgifte und/oder unangemessenen Lebensstil1,2,3,4ergeben. Charakterisierung der Störung Ereignisse und Moleküle der Amelogenesis mit dem derzeit beschriebenen Verfahren fördert die Nutzung der daraus resultierenden Schmelz Mängel als frühe Marker der Exposition gegenüber mehreren Schadstoffen und kann dazu beitragen, die Geschichte der Gesundheit wiederherzustellen jeder Patient während der Perinatalperiode Emaille dazu1,2 wird. Emaille-Synthese kann in vier Hauptphasen je nach Ameloblast Aktivität5unterteilt werden. Der erste Schritt enthält Vorläufer Zell- und Pre-Ameloblast Verbreitung. Im zweiten Schritt absondern differenzierte Fibrillen Emaille Matrixproteine (EMPs), vor allem Amelogenin, enamelin und Ameloblastin, die die Dicke der letzte Schmelz zu bestimmen. So führt eine Unterbrechung der EMP-Synthese auf quantitative Defekte des Zahnschmelzes. Nach der Absetzung der Dicke voller Schmelz beginnt die Reifung. Während dieser Phase kann Apatit-Kristallit-Wachstum in der Breite und Dicke den Schmelz, das höchste Mineralisierung Verhältnis gefunden in einem biologischen Gewebe, mit bis zu 96 % nach Gewicht zu erreichen. Störenden Ereignisse, die während der Reifung Bühne führen zu qualitativen auftreten Emaille Mängel. Schließlich Fibrillen in eine Phase der Post-Reifung, auch genannt Pigmentierung bei Nagetieren, eintreten und Apoptose während Zahndurchbruch machen Schmelz Mängel (falls vorhanden) nicht wieder gutzumachenden und unumkehrbar, defekte bieten somit potenzielle Retrospektive Erfassung der Ameloblast betont. Bei Nagetieren folgt Amelogenesis eine ähnliche Abfolge von Ereignissen mit der Besonderheit, die ihre Schneidezähne kontinuierlich wachsen, wodurch sie ein geeignetes Modell, den allgemeinen Prozess der Amelogenesis zu studieren. Somit entsteht eine Unterbrechung des Amelogenesis in Veränderungen der Emaille Qualität und/oder Quantität, je nach dem Zeitfenster des störenden Ereignisses. In diesem Sinne gezeigt Exposition gegenüber Dioxin, Blei und endokrine Störung Chemikalien (EDZ) wie Bisphenol A (BPA), Genistein und Vinclozolin, Emaille Hypomineralizations1,2,3 generieren ,6,7,8. Asymmetrische Weiße undurchsichtige Flecken wurden auf die Schneidezähne von Ratten ausgesetzt, eine niedrig dosierte BPA Dosis während der fetalen und den ersten Monat nach der Geburt1identifiziert. Diese Emaille-Mängel bei Ratten, und die menschlichen Molaren Schneidezahn Hypomineralization (MIH), teilen ähnliche klinische, strukturelle und biochemische Eigenschaften. MIH ist eine kürzlich beschriebenen Zahnschmelz Pathologie, für die bleibt der Ätiologie noch unklar9,10 trotz vielen ursächlichen Faktoren gewesen theoretisiert9,10,11 ,12.
Ein weiterer wichtiger Emaille Hypomineralization Pathologie auf Umweltfaktoren zurückzuführen ist Dentalfluorose (DF), die die Folge der übermäßigen Fluorid Absorption ist (> 0,1 mg/kg/Tag)13,14. Die Hauptquelle von Fluorid ist Trinkwasser, der entweder ergänzt oder natürlich mit Fluorid angereichert. Fluorid ist auch häufig verschrieben, um Karies zu verhindern, aber die prophylaktische Dosis beträgt nur 50 % niedriger als die giftigen ein (≤0.05 mg/kg/Tag). MIH und DF, zwei häufige Krankheiten, die infolge der Exposition gegenüber Umweltfaktoren, können Gemeinsamkeiten zu präsentieren, die durch die Potenzierung der Hypomineralizing Wirkung von Fluorid in Kombination mit anderen Schadstoffen wie EDZ2 gekennzeichnet werden müssen oder Amoxicillin15.
Mikro-Dissektion der Ratte Emaille Orgel mit Fibrillen in verschiedenen Differenzierung Phasen hilft um zu verstehen, den Wirkmechanismus von Molekülen Ameloblast Aktivität zu stören und dazu führen, dass Schmelz Mängel nach dem Zahndurchbruch diagnostiziert werden können. Das heißt, die Charakterisierung der Veränderungen der Emaille gen Ausdruck und Zahnschmelz Matrix Zusammensetzung durch Umweltgifte ermöglicht die Wiederherstellung der Geschichte der Exposition gegenüber Toxinen und erleichtert die Überwachung der ökologischen Sicherheit für öffentliche Gesundheit.

<table><tbody><tr><td>Bisphenol A</td><td>Sigma Aldrich, Saint Louis MO</td><td>239658</td><td></td></tr><tr><td>Formalin 10%</td> <td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO</td><td>HT5012</td><td></td></tr><tr><td>Tri-Reagenz</td><td>Euromedex, Frankreich</td><td>TR118</td><td></td></tr><tr><td>RLT-Puffer</td><td>Qiagen, Les Ulis, Frankreich</td><td>74126</td><td>RNeasy Protect Mini Kit</td></tr><tr><td>Androgenrezeptor-Antikörper</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)</td><td>sc-816</td><td>polyklonaler Kaninchen-Antikörper</td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>EUOMEDEX</td><td>ET330. A</td><td></td></tr><tr><td>Natriumfluorid (NaF)</td><td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO</td><td>S-1504</td><td></td></tr><tr><td>paraplast reguläre</td><td>Leica microsystems, Nanterre cedex,&nbsp; Frankreich</td><td>39601006</td><td>im Textgewebe als was/parafin bezeichnet</td></tr><tr><td>OCT</td><td>VWR, Fontenay-sous-Bois, Frankreich</td><td>411243</td><td></td></tr><tr><td>Extra feine Bonner Schere - Gerade/8,5 cm</td><td>PHYMEP , Paris, Frankreich</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Griff für Skalpellklingen - 12,5 cm</td><td>PHYMEP, Paris, Frankreich</td><td>10035-12</td><td></td></tr><tr><td>Gebogene Skalpellklinge</td><td>PHYMEP , Paris, Frankreich</td><td>10035-20</td><td></td></tr><tr><td>Präpariermesser - Feine/gerade Spitze</td><td>PHYMEP , Paris, Frankreich</td><td>10055-12</td><td></td></tr><tr><td>Kreismesser</td><td>PHYMEP, Paris, Frankreich</td><td>10059-15</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellklingen n&deg; 11 Swann-Morton</td><td>VWR, Fontenay-sous-Bois, Frankreich</td><td>233-0024</td><td></td></tr><tr><td>binokulare Linse</td><td>Leica biosystems, Nanterre cedex,&nbsp; Frankreich</td><td>MZFLIII</td><td></td></tr></tbody></table>

mikro-dissektion der emaille-orgel von unterkiefer schneidezahn von ratten, umweltgifte ausgesetzt

Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants

Schmelz Mängel aufgrund von Umweltbedingungen und Lebensweisen sind öffentliche Gesundheit Bedenken wegen ihrer hohen Prävalenz. Diese Mängel ergeben sich durch veränderte Aktivität von Zellen verantwortlich für Emaille-Synthese genannt Fibrillen, die in Emaille Orgel präsentieren. Während Amelogenesis folgen Fibrillen eine spezifische und präzise Abfolge von Ereignissen der Proliferation, Differenzierung und Tod. Eine Ratte, die stetig wachsende Schneidezähne ist ein geeignetes experimentelles Modell Ameloblast Aktivität und Differenzierung Stufen unter physiologischen und pathologischen Bedingungen zu studieren. Hier beschreiben wir eine zuverlässige und konsistente Methode, um Mikro-sezieren Emaille-Orgel von Ratten, Umweltgifte ausgesetzt. Die Mikro-seziert dental Epithelien enthalten Sekretion und Reifung-Bühne Fibrillen, die für qualitative Experimente wie Immunohistochemistry Assays und in Situ Hybridisierung, sowie für Quantitative Analysen wie verwendet werden kann RT-qPCR, RNA-Seq und westliche Beflecken.

Viele Mängel, Emaille, wie z. B. Dentalfluorose12,13, kann vor Umwelteinflüssen durch übermäßige Fluorid Absorption oder Emaille Hypomineralization ähnlich MIH aufgrund der Exposition gegenüber einigen EDZ-1, 7,22. Diese Entwicklungsstörungen Schmelz Mängel können experimentell auf Ratten (Abbildung 1)<sup c...

Schmelz Bildung und mögliche Veränderungen zu verstehen, erfordert das Studium der Ameloblast Aktivität. Hier beschreiben wir eine zuverlässige und konsistente Methode, um Mikro-sezieren Emaille Organe mit Sekretion und Reifung-Bühne Fibrillen, die für die weitere quantitative und qualitative experimentelle Vorgehensweise verwendet werden können.

Mikro-Dissektion der Emaille-Orgel von Unterkiefer Schneidezahn von Ratten, Umweltgifte ausgesetzt

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, das Schmelzorgan der Ratte zu mikrodisparieren und das Zahnepithel nach den Hauptstadien der Zelldifferenzierung während der Schmelzsynthese zu trennen. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet der Schmelzerkrankungen wie Zahnfluorose, Hyperemaillierung der molaren Schneidezähne und Vererbung des Zahnschmelzes genesis imperfectum zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht in der Möglichkeit, die Zahnzellen mit quantitativen Experimenten wie Immunhistochemie ohne vorherige Behandlungen sowie konsequenten Untersuchungen wie Diese Methode kann jedoch einen Einblick in die molekulare Mechanisierung endogener und exogener Moleküle geben, die in der Lage sind, die Hämogenese zu stören.Nachdem Sie eine Versuchsratte eingeschläfert haben, entfernen Sie mit einem Skalpell mit der Nummer 11 die gesamte Haut von den Unterlippen, um einen einfachen Zugang zu den unteren Schneidezähnen zu erhalten. Machen Sie dann mit demselben Skalpell einen Schnitt zwischen den beiden unteren Schneidezähnen. Durch leichten Druck teilt sich der Unterkiefer dann in zwei Hälften.Anschließend schneiden Sie mit dem Skalpell das Schläfen-Unterkiefer-Gelenk ab, um den Kiefer zu lösen, während Sie den Halbunterkiefer mit einer feinen Pinzette festhalten. Schneide dann die umliegenden Weichteile mit einem Skalpell ab und entferne alle Muskeln, Sehnen und Bänder mit einem Schaber, bis der Knochen vollständig sauber ist. Um den Schneidezahn zu isolieren, rasieren Sie den Knochen vorsichtig ab, indem Sie die Klinge parallel zur Längsachse des Schneidezahns platzieren.Beginnen Sie mit der Rasur am knöchernen Kamm in der Nähe der Spitzen des Schneidezahns und arbeiten Sie sich zum anderen Ende des Schneidezahns in der Nähe der Halsschlaufe vor. Als nächstes machen Sie einen Schnitt mit dem Skalpell distal zur Gebärmutterhalsschlinge, um die Gonion des Halbkiefers zu entfernen, so dass der Schneidezahn leicht zu entfernen ist, ohne die Gebärmutterhalsschlinge oder das sekretorische Stadium der Ameloblasten zu beschädigen. Machen Sie dann einen zweiten Schnitt unterhalb des zweiten Backenzahns und führen Sie das Skalpell zwischen dem Knochen und der medialen Oberfläche des Schneidezahns ein.Wenn der gesamte Basalknochen angehoben ist, drehen Sie den Schneidezahn nach außen und entfernen Sie ihn vorsichtig mit einer feinen Pinzette, um das Schmelzorgangewebe nicht zu beschädigen. Nun wird der gesamte Schneidezahn isoliert. Für die Dissektion bedecken Sie den Schneidezahn mit 200 Mikrolitern PBS in einer 60-Millimeter-Schale oder Platte.Zu Beginn schneiden Sie die Gebärmutterhalsschlaufe, die sich unmittelbar am apikalen Teil des Schneidezahns befindet, wie zuvor beschrieben. Fassen Sie dann den Schneidezahn mit einer feinen Pinzette mit der Labialfläche nach oben und machen Sie eine Skalpellmarkierung am Ende des farblosen Teils des Gewebes. Diese Markierung entspricht einem darunter liegenden weißen Fleck, der später zu beobachten sein wird.Verwenden Sie nun einen Bagger oder ein gleichwertiges Werkzeug, um die Zelloberfläche von der Markierung bis zum apikalen Ende abzukratzen, was farblosen Ameloblasten im Sekretionsstadium entspricht. Als nächstes machen Sie eine Skalpellmarkierung am Anfang des orangefarbenen Teils, die dem Reifestadium der Ameloblasten entspricht, und kratzen Sie von der Skalpellmarkierung bis zur Spitze des Schneidezahns. Entfernen Sie nun die zwei Millimeter Gewebe, die den Ameloblasten im Übergangsstadium entsprechen.Öffnen Sie den Schneidezahn nicht während der Dissektion des Schmelzorgans, da dies das präparierte Gewebe mit Mesenchym kontaminiert. Lagern Sie das Gewebe abschließend in 10%igem Formalin oder Lyselösung für weitere Untersuchungen. Für eine Extraktion von Schmelzmatrix-Proteinen nehmen Sie den Schneidezahn kurz aus der Lösung, bis ein weißer Fleck um den mittleren Teil der Labialoberfläche sichtbar wird.Dieser Fleck stellt die Initialisierung der Schmelzmineralisierung dar und entspricht dem Übergang zu Ameloblasten im Frühstadium. Schneiden Sie diese Geweberegion ab und behandeln Sie sie nach Bedarf. Wenn das entnommene Gewebe für zelluläre RNA- und Proteinextraktionen bestimmt ist, verwenden Sie ein kommerzielles Kit, um die Extraktion durchzuführen.Übertragen Sie das entnommene Gewebe in die Lyselösung und mahlen Sie es zu einer homogenen Mischung. Für histologische Analysen, Immunhistochemie und NC2-Hybridisierung wurde das gesammelte Gewebe zwei Stunden lang bei Raumtemperatur in 10%iges Formalin gelegt. Übertragen Sie dann das Gewebe auf PBS und lagern Sie es bei vier Grad Celsius.Später kann das Gewebe entweder in Wachsparaffin oder Gewebe-OCT eingebettet werden. Es wurden vier Gruppen männlicher Weißschwanzratten gebildet, abhängig von ihrer Exposition gegenüber Fluorid in Kombination mit BPA oder nicht. Alle Tiere wurden wie beschrieben am Tag 65 beobachtet und seziert.Die Qualität des mikropräparierten Schmelzgewebes wurde mittels Trichrom-Masson-Färbung überprüft. Mikroskopische Beobachtungen zeigen typische Schmelzepithelzellen und Ameloblastenpalokid. Das Fehlen einer mesenchymalen Kontamination wurde durch das Fehlen einer kollagengrünen Färbung bestätigt.Ameloblasten im Sekretionsstadium exprimieren Enamelin. Ameloblasten im Reifestadium exprimieren Kalikin-4 und enthalten auch einen hohen Gehalt an Perratin, was ihnen die Fähigkeit verleiht, große Mengen an Eisen zu speichern, die für die orange Farbe des Zahnschmelzes verantwortlich sind. Diese RNAs werden bevorzugt von Ameloblasten und nicht von Mesenchymelzellen exprimiert.Kollagen eins hingegen wird von Mesenchymelzellen und nicht von Ameloblasten exprimiert. Die Immunhistochemie wurde dann verwendet, um vier spezifische Proteine in der Sekretions- oder Reifungsphase, Ameloblasten, zu bewerten. Zum Beispiel ist ein Androgenrezeptor, der in Grün zu sehen ist, spezifisch für die Ameloblasten im Reifungsstadium lokalisiert.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man das Schmelzorgan von Nagetieren für eine erfolgreiche Trennung zwischen Sekretions- und Reifestadien Ameloblasten mikrodisseziert. Dieser Ansatz ist sehr nützlich für das Verständnis von in vivo Schlüsselfaktormechanismen, die für pathologische und physiologische Schmelzerkrankungen verantwortlich sind.

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Das kontinuierlich wachsende Maus Schneidezahn stellt ein Modell für die Untersuchung Erneuerung der Zahngewebe aus Zahn epithelialen Stammzellen (DESC). Ein robustes System für konsistent und zuverlässig diese Zellen von den Schneide erhalten und in vitro expandiert sie hier berichtet wird.

Isolation und Kultur der Dental epithelialen Stammzellen aus dem erwachsenen Maus Schneidezahn

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um apische Parodontitis bei Mäusen lokal zu induzieren. Wir zeigen, wie man ein Loch in den Zahn der Maus bohrt und seinen Zellstoff freilegt, um lokale Entzündungen zu verursachen. Es werden auch Analysemethoden zur Untersuchung der Art dieser Entzündung wie Mikro-CT und Histologie gezeigt.

Induzieren apische Parodontitis bei Mäusen

Die Trowell-Typ-Organkulturmethode wurde verwendet, um komplexe Signalnetzwerke zu entschlüsseln, die die Zahnentwicklung steuern, und in jüngerer Zeit zur Untersuchung der Regulation von Stammzellen des kontinuierlich wachsenden Mausschneidezahns. Fluoreszenzreporter-Tiermodelle und Live-Imaging-Verfahren ermöglichen eingehende Analysen von dentalen Stammzellen und ihrer spezifischen Nischenmikroumgebung.

Verwendung von Organkulturen vom Trowell-Typ zur Untersuchung der Regulation von dentalen Stammzellen

Das aktuelle Protokoll stellt eine schnelle, effiziente und schonende Methode zur Isolierung einzelner Zellen dar, die für die Einzelzell-RNA-seq-Analyse aus einem kontinuierlich wachsenden Mausschneidezahn, Mausmollaren und menschlichen Zähnen geeignet sind.

Schnelle Isolierung einzelner Zellen aus Maus- und menschlichen Zähnen

Der Schneidezahn der Maus enthält in seiner Stammzellnische wertvolle markierungshaltende Zellen. Wir haben eine neuartige Methode, um die markierungserhaltenden Zellen unvoreingenommen zu erkennen und zu quantifizieren. Unsere Studie verwendete eine EdU-Markierung und einen 3D-Rekonstruktionsansatz nach der PEGASOS-Gewebereinigung des Unterkiefers.

Detektion und Quantifizierung von markierungshaltenden Zellen in Schneidezähnen von Mäusen mittels eines 3D-Rekonstruktionsansatzes nach Gewebereinigung

Die Ex-vivo-Live-Bildgebung ist eine leistungsfähige Technik zur Untersuchung der dynamischen Prozesse zellulärer Bewegungen und Interaktionen in lebendem Gewebe. Hier stellen wir ein Protokoll vor, das die Zwei-Photonen-Mikroskopie implementiert, um dentale Epithelzellen in kultivierten ganzen erwachsenen Mausschneidezähnen live zu verfolgen.

Verwendung von Ex-vivo-Live-Bildgebung zur Untersuchung von Zellteilungen und -bewegungen während der Zahnerneuerung von Mäusen

Die Mikrohärte ist eine mechanische Eigenschaft und ein informativer Parameter zur Beurteilung der Pathophysiologie des Hartgewebes. Hier demonstrieren wir ein standardisiertes Protokoll (Probenvorbereitung, Polieren, flache Oberfläche und Eindruckstellen) für die Mikrohärteanalyse von Zahn- und Alveolarknochen in Modellen für orale Erkrankungen von Nagetieren, nämlich Zahnfluorose und Ligatur-induzierte parodontale Knochenresorption.

Mikrohärtemessungen an Zahn- und Alveolarknochen in Modellen für orale Erkrankungen von Nagetieren

Ziel dieses Protokolls ist es, einen standardisierten Ansatz zur quantitativen Bewertung der Integrität der murinen gingivalen Epithelbarriere zu bieten, indem fluoreszenzmarkierte Dextrans unterschiedlicher Molekülgröße in vivo auf die Gingivaloberfläche topisch aufgetragen werden, gefolgt von einer ex-vivo-Bildgebung mit einem Einzelphotonenmikroskopiesystem.

Funktionelle Beurteilung der Maus-Gingival-Epithelbarriere mit fluoreszierenden Traceren

Experimentelle Tierversuche spielen eine zentrale Rolle bei der Entwicklung der klinischen Transplantationspraxis. Das porzine orthotope Lebertransplantationsmodell (OLTx) ähnelt stark den menschlichen Bedingungen und wird häufig in der klinisch orientierten Forschung eingesetzt. Das folgende Protokoll enthält alle Informationen für ein zuverlässiges porzines OLTx-Modell unter Verwendung eines aktiven Porto-Kaval-Jugular-Shunts.

Technik der Schweineleber Beschaffung und orthotopen Transplantation mit einem Active Porto-Kava-Shunt

Dieser Artikel beschreibt die Messung der linksventrikulären Funktion von Mäusen mittels Druck-/Volumenanalyse bei verschiedenen Herzfrequenzen.

Herzkatheter in Mäuse, um den Druck Volumen Relationship Maßnahme: Untersuchung der Bowditch Effect

Lernen Sie die Mikrodissektion des Schmelzorgans von Ratten zur Untersuchung von Ameloblastenaktivität und Schmelzpathologien. Diese Methode ermöglicht quantitative Analysen ohne Vorbehandlung.

Mikro-Dissektion der Emaille-Orgel von Unterkiefer Schneidezahn von Ratten, Umweltgifte ausgesetzt

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