Name: Quantitative Analyse der neuronalen dendritischen Arborization Komplexität in Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Lernen Sie die quantitative Analyse der dendritischen Arborisierungskomplexität in Drosophila zur Untersuchung des SOX5-Gens. Diese Methode ermöglicht die Erforschung neuronaler Entwicklung und neurodegenerativer Erkrankungen.

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Wir möchten William A. Eimer für bildgebende technische Unterstützung zu danken. Diese Arbeit wurde unterstützt durch die Heilung der Alzheimer Krankheit Fonds [R.E.T], das National Institute of Health [R01AG014713 und R01MH60009, R.E.T; R03AR063271 und R15EB019704, A.L.], und die National Science Foundation [NSF1455613, A.L.].

(1) experimentelle Vorbereitung
<ol><li>Die folgenden Reagenzien vorzubereiten: Dulbeccos Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS); Triton x-100; 0,2 % PBST (PBS + 0,2 % Triton x-100); 32 % Paraformaldehyd (PFA), in 4 % vor Gebrauch verdünnt; Silikon-Elastomer-Basis und Härtemittel; Antifade Montage Medium (z. B.verlängern Gold); und Nagellack.</li>
	<li>Bereiten Sie die folgende Ausrüstung: Dissektion Mikroskop, zwei scharfe Pinzette und eine Schere für Mikrodissektion, eine Anzahl von Pins für Mikrodissektion, einer Petrischale zur Herstellung der Dissektion Gericht, Objektträger und Deckgläsern, ein confocal Mikroskop und eine Computer mit Fidschi ImageJ-Software installiert.</li>
</ol>2. Larven Sammlung
<ol><li>Paaren Sie FH-Sox102F-RNAi fliegen mit UAS-GFP, Ppk-GAL4 oder W1118 Wildtyp fliegen, bzw.. Kultur-fliegen in Standardbedingungen bei 25 ° C.</li>
	<li>In ca. 5-6 Tagen sammeln die dritte Instar Larven der FH-Sox102F-RNAi / Ppk-GAL4, UAS-GFP oder UAS-GFP und Ppk-GAL4 / + Kontrolle sorgfältig mit der Pinzette für Dissektion.</li>
</ol>(3) Dissektion der Larven
Hinweis: Alle Verfahren in diesem Abschnitt werden unter dem Mikroskop Mikrodissektion betrieben. Die Vergrößerung ist bis zu den Ermittlern. Versuchen Sie, die optimale Sicht-Ansicht anpassen. ~ 4-6 X Vergrößerung wird empfohlen.
<ol><li>Legen Sie eine Larve auf eine Dissektion Gericht aus Silikon-Elastomer Basis und einer Gewebekultur Petrischale.</li>
	<li>PIN des Larve Mund Hakens damit die dorsale Seite stellen kann, und dann Heften Sie das Ende der Larve. Ort der dorsalen Seite in der Mitte so weit wie möglich an die Mittellinie, die die öffnen-Marker werden aussetzen.</li>
	<li>Die Larve Körperfeuchtigkeit halten fügen Sie 200 µL PBS hinzu.</li>
	<li>Machen Sie einen Schnitt mit der Schere entlang der dorsalen Mittellinie zwischen den zwei Tracheas von kaudalen, rostral. Machen Sie einen kleinen Schnitt in jeder der vier Ecken des Körpers Larve.</li>
	<li>Legen Sie eine Pin an jeder der vier Ecken des Körpers, damit der Körper flach liegt.</li>
	<li>Korrigieren Sie die Larve Körperwand in 4 % PFA für 25 min bei Raumtemperatur.</li>
	<li>Für 5 min. wiederholen zweimal mehr in PBST waschen.</li>
	<li>Die Pins aus dem Gewebe zu entfernen. Übertragen Sie dann das Gewebe auf einem Objektträger mit antifade Eindeckmittel bedecken und mit einem Deckglas montieren. An der Luft trocknen für 1 h und die Schnittflächen mit Nagellack versiegeln.</li>
</ol>4. Bildgebung Verarbeitung
Hinweis: Bilder wurden mit einem invertierten confocal Mikroskop-System. Der Benutzer kann die Probe mit einem 20 X Objektiv (empfohlen) fotografieren.
<ol><li>Z-Serie Bilder aufnehmen. Öffnen Sie das Dialogfeld "Capture Z-Serie" in der konfokalen Mikroskop-Software. Bestimmen Sie den Bereich für die Aufnahmen der Z-Serie.<ol>
<li>Klicken Sie auf die Schaltfläche "Oben und unten". Oben und unten positionieren und die Eingabewerte zu bestimmen "unten:" und "Top:" Boxen. Legen Sie die "Step" im Dialogfeld "Capture Z-Serie" als 0,5 µm. Klicken Sie auf die Schaltfläche "Jetzt ausführen", um die Z-Serie-Bilder zu erwerben.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Speichern Sie die erhaltenen Bilder als *.tiff oder *.nd2-Dateien.</li>
	<li>Speichern Sie die Folien in einer dunklen Halterung bei 4 ° C nach dem Imaging.</li>
</ol>(5) Dendrit Bewertung
Hinweis: GFP-Protein wurde in UAS-GFP co überexprimiert und Ppk-GAL4 fliegt da Nervenzellen für GFP Fluoreszenz imaging-Analyse. Länge, Verzweigung und Struktur von da Neuronen in die dritte Instar Larven wurden quantifiziert. Analyseparameter gehören Länge der Dendriten (µm), Fläche (µm-2), Anzahl der Filialen und verzweigte Struktur (%). Abbildung 1 zeigt die Analyseparameter im Detail.
<ol><li>
Länge der Dendriten Hinweis: Die Länge der Dendriten ist die Summe aller Dendriten in Tracer Plugin beschriftet.<ol>
<li>Setup und Fidschi ImageJ (https://fiji.sc/)20 Software ausführen. Dann Bilder in separate Kanäle aufgeteilt, wenn es mehrere Kanäle von Bildern. Hinweis: Das Bild in diesem Protokoll hat nur einen Kanal der GFP.</li>
		<li>Führen Sie "Bild | Stapel | Z-Projekt"zu einer Z-Projektion; erscheint ein neues Fenster mit dem Namen "Z-Projektion." Klicken Sie auf "Max. Intensität" für Projektionstyp und organisieren Zahlen zwischen Slice Start und Stop Stück je nach individuellen Vorlieben. Klicken Sie auf "OK". Ein Z-Projektionsbild erscheint präsentiert die Dendriten Projektion deutlich.</li>
		<li>Verfolgen Sie die Neuriten.<ol>
<li>Wählen Sie "Plugins | Segmentierung | Einfache Neuriten Tracer"im Fenster" ", die Dendriten zu verfolgen. Finden Sie die Neuron Soma zu, und klicken Sie auf einen Punkt an einem Dendriten, Zellkörper und ein weiterer Punkt an der Spitze dieser Dendrit ab. Hinweis: Das Programm verbindet die beiden Punkte mit einer blauen Linie.</li>
			<li>Drücken Sie "Y" in das Plugin-Fenster, wenn der Pfad klar ist; der Dendrit-Pfad wird bis die Endpunkte des ausgewählten Pfads in den sichtbaren Bildern nachgezeichnet. Klicken Sie auf "vollständige Pfad" auf dem gleichen Plugin-Fenster; das Segment ist abgeschlossen (Abbildung 2). Hinweis: Einige Dendriten endete weiter von den Ausgangspunkten, in denen der Weg in kleinere Segmente unterteilt war. Die Segmente wurden kombiniert, um einen vollständigen Pfad für die Tracer zur Verfügung zu stellen.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Nach ein Pfad abgeschlossen ist, gehen Sie zurück zu einem neuen Punkt, wo die Zweige sind. Der neue Pfad kann auf gebaut werden; "Alle Wege" Fenster-Box zeigt die Längenwerte aller Pfade (Abbildung 3). Speichern Sie die Ablaufverfolgung Datei, und fahren Sie mit unfertigen Spuren wie in Abbildung 2dargestellt.</li>
		<li>Die Dendrit Längendaten exportieren, indem Sie auf klicken, "Datei | Als *.cvs exportieren Sie"im Fenster"Plugin". Dann die Bahnlängen zusammenzufassen Sie, und exportieren Sie die Daten auf eine Daten-Analyse/Tabellenkalkulations-Software. (Abbildung 3).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Fläche der da Neuronen
	<ol>
<li>Wählen Sie das Hilfsmittel "Freihand zeichnen" im Fenster "Fidschi ImageJ". Die Strecke, und schließen Sie die Endpunkte. Klicken Sie im Menü "Analyze" "Set Messungen | Area." Klicken Sie auf "Messen" aus dem Menü "Analyze". Das Ergebnis wird in einem neuen Feld mit dem Wert für den ausgewählten Bereich (Abbildung 4). Kopieren sie die Daten-Analyse-Software.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Total Anzahl der Äste und Verzweigungen Struktur der Neuronen da
	<ol>
<li>Berechnen Sie die Gesamtzahl der Filialen mit der Eröffnung von "Analyse" und dann "Rendern | Analysieren Sie skelettiert Pfade"in das Plugin-Fenster (Abbildung 5) zu verfolgen. Hinweis: Die Struktur der Laube ist die Summe der Ebenen der Zweige. Der Pfad zwischen den Zellkörper und Dendriten Tipps definiert wurde, und ein Pfad kann mehrere Verzweigungen enthalten, wie die primäre Dorne sind die Dendriten aus dem Neuron Zelle Körper. Die sekundäre Dorne sind Zweige von der primären und so weiter mit dem Tertiär, Quartär und quinary Lauben. Die Struktur der Dendrit Verzweigung ist abhängig von den Ebenen der Zweige getrennt. Beispielsweise ist die primäre % die Zahl der Filialen geteilt durch Anzahl der Verzweigungen, und so weiter.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Dendriten, die die Epidermis innervieren sind die Eingabe Regionen von Neuronen und ihre Morphologien bestimmen, wie Informationen empfangen und verarbeitet von einzelnen Neuronen. Entwicklung Dendrit Morphologie spiegelt gen Modulation der Dendrit-Organisation. Die Drosophila Larven da Neuron des peripheren Nervensystems ist ein wichtiges Modell für das Studium Dendrit Entwicklung: 1) die funktionale Ähnlichkeit mit Säugetieren11,12; (2) vier Klassenunt...

Dendriten, die die verzweigten Projektionen eines Neurons sind, umfassen das Gebiet, das das Neuron sensorischen und synaptischen Eingänge von anderen Neuronen1,2umfasst. Dendriten sind ein wichtiger Bestandteil der Synapse Bildung und spielen eine kritische Rolle bei der Integration der synaptischen Eingänge, sowie die Vermehrung der elektrochemischen Stimulation in einem Neuron. Dendritische Arborization (da) ist ein Prozess, der durch den Neuronen neue dendritischen Bäume und Äste zum Erstellen neuer Synapsen bilden. Die Entwicklung und Morphologie der da, wie dichte Verzweigung und Gruppierung Muster ergeben sich aus mehrstufigen biologischen Prozessen und sind stark korreliert zu neuronalen Funktion. Ziel dieses Protokolls ist es, ein Verfahren zur quantitativen Analyse der neuronalen Dendritric Arborization Komplexität in Drosophila.
Die Komplexität der Dendriten bestimmt die synaptischen Typen, Konnektivität und Eingänge von Partner-Neuronen. Verzweigung Muster und die Dichte der Dendriten engagieren sich bei der Verarbeitung der Signale, die auf die dendritischen Feld3,4konvergieren. Dendriten haben die Flexibilität zur Anpassung in der Entwicklung. Zum Beispiel wirkt sich synaptische Signalisierung auf Dendrit Organisation im somatosensorischen Neuronen in der Entwicklungsphase und in den Reifen Nervensystem-5. Die Einrichtung der neuronalen Vernetzung stützt sich auf die Morphogenese und Reifung von Dendriten. Fehlbildung der Dendriten ist Beeinträchtigung der neuronalen Funktion zugeordnet. Studien haben gezeigt, dass die Anomalie der da Neuron Morphogenese der Ätiologie von mehreren Neurodegenerative Erkrankungen, einschließlich der Alzheimer-Krankheit (AD), Parkinson-Krankheit (PD), Chorea Huntington (HD) und Gehrig Krankheit beitragen kann / Amyotrophe Lateralsklerose (ALS)6,7,8. Synaptische Veränderungen erscheinen in der frühen Phase der AD, im Konzert mit den Niedergang und die Beeinträchtigung der Neuron Funktion7,8. Die Besonderheiten wie Dendrit Pathologie, Pathogenese in diese neurodegenerativen Erkrankungen beiträgt bleibt jedoch schwer.
Die Entwicklung der Dendriten wird durch Gene reguliert, die ein komplexes Netzwerk von Regulierungsbehörden wie der Wnt-Familie von Proteinen9,10, Transkriptionsfaktoren und Liganden auf Zelle Oberfläche Rezeptoren11,12 kodieren . Drosophila da Neuronen bestehen aus vier Klassen (Klasse I, II, III, IV), von welcher, die Klasse IV da Neuronen haben die komplexesten Verzweigung Muster und als ein leistungsfähiges experimentelle System für besseres Verständnis Morphogenese13eingesetzt, 14. Während der frühen Morphogenese führen Überexpression und/oder RNAi-Stummschaltung von Genen in Klasse IV da Neuronen Änderungen in verzweigten Mustern und Dendrit Rebschnitt13. Es ist wichtig, eine praktische Methode zur quantitativen Analyse der neuronalen dendritischen Arborization zu entwickeln.
Wir haben bereits gezeigt, dass Schweigen der Drosophila Ortholog des SOX5, Sox102F, zu kürzeren Dendriten da Neuronen und reduzierte Komplexität in der Klasse IV da Neuronen15geführt. Hier präsentieren wir Ihnen das Verfahren der quantitativen Analyse für die neuronale dendritischen Arborization Komplexität (NDAC) in Drosophila. Dieses Protokoll, adaptiert von der vorherigen beschriebenen Methodik bietet eine kurze Methode, um die Entwicklung der sensorischen Neuronen da assay. Die robuste Bild beschriften und da Neurons in Dritte Instar Larven Körperwand16,17,18,19veranschaulicht. Es ist eine wertvolle Protokoll für Forscher, die die NDAC und Entwicklungs Unterschiede in Vivozu untersuchen wollen.

<table><tbody><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Gibco Life Sciences</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>Sciences 15714-S</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikonelastomerbasis und Härter</td><td>Dow Corning Corporation</td><td>3097366-0516; 3097358-1004</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifading-Eindeckmittel</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36931</td><td></td></tr><tr><td>Fingernagellack&nbsp;</td><td>CVS</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td>SMZ800</td><td></td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti-E</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>Falcon</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>Dumont</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>Schere&nbsp;</td><td>Roboz Chirurgisches Instrument Co</td><td>RS-5611</td><td></td></tr><tr><td>Insektenstifte&nbsp;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co</td><td>RS-6082-25</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger und Deckgläser</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-188-52</td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative analyse der neuronalen dendritischen arborization komplexität in drosophila

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Dendriten sind die verzweigten Projektionen eines Neurons und dendritischen Morphologie spiegelt synaptischen Organisation während der Entwicklung des Nervensystems. Drosophila Larven neuronalen dendritischen Arborization (da) ist ein ideales Modell für das Studium Morphogenese der neuronalen Dendriten und Genfunktion in der Entwicklung des Nervensystems. Es gibt vier Klassen von da Neuronen. Klasse IV ist das komplexeste mit einem verzweigten Muster, die fast den gesamten Bereich der Larven Körperwand abdeckt. Wir haben bisher die Wirkung der Stummschaltung der Drosophila Ortholog der SOX5 Klasse IV neuronalen dendritischen Arborization Komplexität (NDAC) mit vier Parametern charakterisiert: die Länge der Dendriten, die Fläche der Dendrit-Abdeckung, die Gesamtzahl der Filialen und der Verzweigungsstruktur. Dieses Protokoll stellt den Workflow der NDAC Quantitative Analyse, bestehend aus Larven Dissektion, konfokale Mikroskopie und Bild Analyseverfahren mit ImageJ-Software. Weitere Einblicke in da neuronale Entwicklung und ihre zugrunde liegenden Mechanismen verbessert das Verständnis der neuronalen Funktion und Aufschluss über die grundlegenden Ursachen der neurologischen und Entwicklungsstörungen des.

Die Dendriten der Nervenzellen da waren da neuronale Soma und dendritischer Dorne für GFP Fluoreszenz imaging Analyse von co-überexprimierenden GFP (FH-GFP; Ppk-GAL4) bezeichnet. Die Morphologie der da Neuron Dendriten wurde von einem inversen confocal Mikroskop (Abbildung 2) abgebildet.
Die Dendriten der Nervenzellen da wurden mit Fidschi ImageJ-Software verfolgt. Die Datei wurde zur Schätzung der ...

Dieses Protokoll konzentriert sich auf Quantitative Analyse der neuronalen dendritischen Arborization Komplexität (NDAC) in Drosophila, die für Studien der dendritischen Morphogenese verwendet werden können.

Quantitative Analyse der neuronalen dendritischen Arborization Komplexität in Drosophila

Dendrites are the branched projections of a neuron, and dendritic morphology reflects synaptic organization during the development of the nervous system. ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Auswirkungen des SOX5-Gens auf die Komplexität der dendritischen Arborisationsneuronen während der neuronalen Entwicklung in Drosophila zu beobachten. Diese Methode kann helfen, die Morphogenese von Neurodendriten und die Genfunktion bei der Entwicklung des Nervensystems zu untersuchen, um neurodegenerative Krankheitsgene besser zu verstehen. Letztlich bietet diese Technik eine quantitative Analyse der Dendriten-Komplexität, die in vielen verschiedenen Arten von Neurodendriten verwendet werden kann.Die Implikationen dieser Technik reichen auf den genetischen Mechanismus neurodegenerativer Erkrankungen, da Mutation den Schlüssel zum Verständnis der Genfunktion innehat. Set-up-Kreuze von UAS-GFP;ppk-GAL4 mit dem UAS-Sox102F-RNAi-Stamm fliegen oder W118-Steuerungen. Kultur die Fliegen unter Standardbedingungen bei 25 Grad Celsius.In etwa fünf bis sechs Tagen verwenden Sie Zangen, um die dritte Instar-Larven sorgfältig zur Zerlegung zu sammeln. Legen Sie eine Larve in eine Sezierschale aus Siliziumelastomerbasis und eine Gewebekultur Petrischale. Legen Sie dann die Schale unter das Seziermikroskop.Nun stecken Sie den Schwanz der Larve, um die Mittellinie freizulegen. Dann pin die Larven Mundhaken, so dass die Larve dorsale Seite ist oben. Nun fügen Sie 200 Mikroliter PBS in die Schale, um die Larve in Lösung einzutauchen.Als nächstes schneiden Sie den Schwanz und den Mund von Larven mit kleinen Schnitten. Dann schneiden Sie die Larve entlang der dorsalen Mittellinie und zwischen den beiden Luftröhren, von kaudal zu rostral. Legen Sie dann einen Stift an jeder der vier Ecken des Körpers, so dass der Körper flach liegt.Fixieren Sie nun die Larvenkörperwand in vier Prozent PFA für 25 Minuten bei Raumtemperatur. Dann waschen Sie die Larve mit PBS dreimal für fünf Minuten pro Wäsche. Nach dem Einheben entfernen Sie die Stifte und übertragen Sie das Gewebe auf eine Glasrutsche.Dann tauchen Sie das Gewebe in Antifade Montagemedium, und montieren Sie es mit einem Abdeckung supg. Lassen Sie das montierte Gewebe eine Stunde lang trocknen, bevor Sie den Deckel mit Fingernagellack versiegeln. Bewahren Sie diese Dias bei vier Grad Celsius im Dunkeln auf.Erfassen Sie Bilder der Z-Serie mit einem konfokalen Mikroskop mit einem 20-fachen Objektiv. Legen Sie zunächst den Bereich der Z-Schritte fest, um alle DA-Neuronen in die Larvenkörperwand einzubeziehen, und legen Sie die Schrittgröße auf ein halbes Mikrometer fest. Speichern Sie dann die Bilder als TIF- oder ND2-Dateien zur Verarbeitung.Als Nächstes bewerten Sie die Anzahl und Morphologie der Dendriten auf den DA-Neuronen. Beginnen Sie mit der Bewertung ihrer Längen. Zuerst, in Fidschi ImageJ, teilen Sie die Bilder in separate Kanäle, wenn nötig.Nur der GFP-Kanal muss bewertet werden. Als nächstes machen Sie eine Z-Projektion. Wählen Sie im neuen Fenster die maximale Intensität für den Projektionstyp aus, und wählen Sie die Start- und Stopp-Slices aus.Klicken Sie dann auf OK, um ein Z-Projektionsbild mit klaren Dendritenprojektionen zu erzeugen. Verfolgen Sie nun die Neuriten mit dem Plug-In-Tool. Gehen Sie zunächst zum Soma des Neurons von Interesse und klicken Sie, wo ein Dendrit aus dem Zellkörper entsteht.Klicken Sie dann auf die Spitze dieses Dendriten. Wenn die blaue Linie, die die beiden Punkte verbindet, die Länge des Neuriten verläuft, drücken Sie Y für ja. Wenn diese Zeile dann zum vollständigen Pfad des Neuriten passt, klicken Sie auf Vollständiger Pfad.Wenn die Linie nicht in den Pfad passt, klicken Sie auf Punkte weiter entlang dieses Neuriten, um den Pfad in mehrere Liniensegmente zu biegen, die der Länge des Neurites entsprechen. Klicken Sie dann auf Pfad abschließen, und fahren Sie mit der Markierung des Pfads für das nächste Neuritit fort. Nachdem Sie alle Ablaufverfolgungspfade abgeschlossen haben, wählen Sie die Option Analyse, Pfade messen aus, um die Pfade in eine CSV-Datei zu exportieren.Verwenden Sie diese Daten, um den Wert der Pfadlängen für die Analyse zu berechnen und zu durchschnittlich. Als Nächstes berechnen Sie die Oberfläche des Neurons. Wählen Sie zunächst das Werkzeug zum kostenlosen Zeichnen aus dem Fidschi ImageJ-Fenster aus.Verbinden Sie dann die Endpunkte des Neurons von Interesse. Wählen Sie dann im Fenster Analysieren die Option Messen aus. Das Ergebnis wird in einem neuen Feld mit dem Wert für den ausgewählten Bereich angezeigt.Kopieren Sie diesen Wert in die Datenanalysesoftware. Berechnen Sie schließlich die Gesamtzahl der Verzweigungen mit dem Plugin Skelettierte Pfade analysieren. Die Dendriten von DA-Neuronen wurden durch Ko-Überexexzieren von GFP in ihrem Soma und Dendritenarboren für GFP-Blütenszenz-Bildgebungsanalyse gekennzeichnet.Die Morphologie der Dendriten wurde mit einem invertierten konfokalen Mikroskop abgebildet. Die Dendriten von DA-Neuronen wurden wie beschrieben zurückverfolgt. Die Datei wurde verwendet, um die Dendritenlänge zu schätzen.Die Silencierung von Sox102F in DA-Neuronen in der dritten Instar-Larve führte zu einer signifikanten Verringerung der Gesamtzahl der Dendriten mit etwa der Hälfte der Astlänge und mit einer einfacheren Struktur, die nur die Hälfte der Zweige anzeigte. Logischerweise führte dies zu einer Verkleinerung der Laubenoberfläche. Dieses Protokoll bietet eine schnelle Methode, um die Entwicklung von DA-Sensorneuronen zu bewerten.Während Sie dieses Verfahren versuchen, achten Sie darauf, eine große Anzahl von Bildern von jeder Gruppe von DA-Neuronen zu nehmen, um eine gute Abdeckung zu erhalten. Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie dendritanalyse durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zur Dendritenentwicklung zu beantworten. Seit ihrer Entwicklung hat diese Technik Forschern auf dem Gebiet der Neurowissenschaften geholfen, Rückschlüsse auf neurodegenerative Erkrankungen wie Alzheimer mit Modellsystemen zu ziehen.

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Zahlreiche neuere Studien haben Mutationen in synaptischen Proteinen mit Hirnerkrankungen assoziiert identifiziert. Primär kultivierte kortikalen Neuronen bieten eine große Flexibilität bei der Prüfung der Auswirkungen dieser Krankheit assoziierte Proteine ​​auf dendritischen Dorn Morphologie und Motilität.

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Die dendritischen Verzweigung sensorischen Neuronen...

Morphologische Analyse Drosophila Larven peripheren sensorischen Neuron Dendriten und Axone mit Genetic Mosaike

Quelle: Ting, C., et al., Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt das Verfahren der Präparation eines Drosophila-Gehirns, der Erfassung horizontaler und frontaler Bildstapel von GFP-markierten Medulla-Dendriten unter einem konfokalen Mikroskop und der Erstellung einer 3D-Rekonstruktion, um ihre Morphologie über Schichten und Säulen hinweg zu analysieren.

Analyse der dendritischen Morphologie in Drosophila medulla-Schichten und -Säulen

Wir beschreiben zwei Methoden zur Visualisierung und Quantifizierung der dendritischen Arborisierung im Hippocampus von Mausmodellen: Echtzeit- und erweiterte Tiefenschärfebildgebung. Während die erste Methode eine ausgefeilte topographische Verfolgung und Quantifizierung des Ausmaßes der Verzweigung ermöglicht, ermöglicht die zweite eine schnelle Visualisierung des dendritischen Baumes.

Bewertung der dendritischen Verzweigung im Gyrus dentatus des Hippocampus-Region an der Maus

Studien der neuronalen Morphogenese unter Verwendung von Drosophila Larven dendritischen arborization (da) Neuronen profitieren von in - situ - Visualisierung von neuronalen und epidermalen Proteine durch Immun. Wir beschreiben ein Verfahren, das durch Entfernen von Muskelgewebe aus der Larvenkörperwand Immunfluoreszenzanalyse von da Neuronen und die umliegenden Hautzellen verbessert.

Entfernung von<em&gt; Drosophila</em&gt; Muskelgewebe aus Larval Filets für Immunfluoreszenzanalyse von sensorischen Neuronen und epidermalen Zellen

Hier zeigen wir , wie die Anzahl und die räumliche Verteilung der synaptischen aktiven Zonen in Drosophila melanogaster Photorezeptoren zu quantifizieren, markiert mit einem genetisch molekularen Marker codiert und deren Modulation nach längerer Einwirkung von Licht.

Analyse Synaptische Modulation von<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Photorezeptoren nach der Einwirkung von Längerer Licht

Zwei Bildanalysealgorithmen, „Drosophila NMJ Morphometrie“ und „Drosophila NMJ Bouton Morphometrie“ wurden geschaffen, um automatisch neun morphologischen Merkmale der neuromuskulären Synapse Drosophila zu quantifizieren (NMJ).

Zwei Algorithmen für den Hochdurchsatz und Multi-parametrischer Quantifizierung<em&gt; Drosophila</em&gt; Neuromuskuläre Junction Morphology

Hier zeigen wir , wie dendritische Routing von Drosophila Medulla Neuronen in Spalten und Schichten zu analysieren. Der Workflow enthält einen Dual-View-Imaging-Technik, um die Bildqualität und Computational Tools für das Aufspüren, Registrierung dendritischen Dorne auf die Referenzspaltenanordnung und für die Analyse der dendritischen Strukturen in 3D-Raum zu verbessern.

Analyse dendritischer Morphologie in Spalten und Schichten

Hier stellen wir ein Golgi-Cox-Protokoll ausführlich vor. Diese zuverlässige Gewebe-Fleck-Methode ermöglicht eine qualitativ hochwertige Beurteilung der Cytoarchitektur im Hippocampus und im gesamten Gehirn mit minimaler Fehlersuche.

Bewertung der Hippocampalen Dendritischen Komplexität bei gealterten Mäusen unter Verwendung der Golgi-Cox-Methode

Hier beschreiben wir die Methode, die wir angewendet haben, um hochmotile dendritische Filopodia in einer Live-Vorbereitung des Drosophila-Larvenhirns abzubilden, und das Protokoll, das wir entwickelt haben, um Zeitraffer-3D-Bildgebungsdatensätze für quantitative Bewertungen von Dendriten zu quantifizieren. Dynamik bei der Entwicklung von Neuronen.

Zeitraffer Live Imaging und Quantifizierung der schnellen dendritischen Zweigdynamik bei der Entwicklung von Drosophila Neuronen

Lernen Sie die quantitative Analyse der dendritischen Arborisierungskomplexität in Drosophila zur Untersuchung des SOX5-Gens. Diese Methode ermöglicht die Erforschung neuronaler Entwicklung und neurodegenerativer Erkrankungen.

Quantitative Analyse der neuronalen dendritischen Arborization Komplexität in Drosophila

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