Name: Eine In-Vivo -Bewertung der Störung der Blut - Hirn-Schranke in einem Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 19 s
Description: Lernen Sie eine reproduzierbare Methode zur Bewertung der Blut-Hirn-Schranke im Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls mittels Evans Blue. Diese Technik ermöglicht die Untersuchung pathophysiologischer Mechanismen und therapeutischer Ansätze.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Die Autoren sind dankbar für den Vizekanzler für Forschung der Ardabil Universität der medizinischen Wissenschaften (Ardabil, Iran) für die finanzielle Unterstützung (No zu gewähren: 9607).

Alle Verfahren wurden nach den Richtlinien der Ardabil University of Medical Sciences Research Council für die Durchführung von Untersuchungen an Tieren durchgeführt (ethische ID-Nummer: IR. ARACEAE. REC.1394.08). In dieser visualisierte Studie verwendeten wir Erwachsene männlichen Sprague-Dawley Ratten (300-350 g) aus Weide Institut (Teheran, Iran) gewonnen.
1. Anästhesie und Flowmetry
<ol><li>Induzieren Sie Anästhesie mit 4 % Isofluran und pflegen Sie es mit Isofluran (1-1,5 %) in einer Mischung von Lachgas (70 % V/V) und Sauerstoff (30 % V/V) für die Dauer der Operation.</li>
	<li>Ein narkotisierter Tier in die anfällig Haltung auf ein Feed-Back kontrollierter Wärme-Unterbett und halten Sie die Körpertemperatur bei 37±0.5 ° C durch eine rektale Sonde an dieser Heizung angeschlossen.</li>
	<li>Wenden Sie eine kleine Menge des ophthalmologischen Salbe auf beiden Augen, Trockenheit zu verhindern.</li>
	<li>Rasieren Sie die chirurgische Region auf der linken Seite des Schädels mit elektrischen Haarschneider. Verwenden Sie Betadine Lösung mit einem Tupfer, um die Haut zu desinfizieren. Spülen Sie dieser Region mit einem sterilen Pad mit 70 % igem Ethanol und wiederholen Sie die beiden Schritte für drei Zyklen17.</li>
	<li>Injizieren Sie für Analgesie 0,2 mL 0,5 % Bupivacain subkutan in die Chirurgie Region17.</li>
	<li>Machen Sie einen 1 cm langen Hautschnitt am Schädel (Verlängerung von den seitlichen Augenwinkel des linken Auges auf der Basis des linken Ohr) und sezieren des linken Temporalis Muskels um den Schädel zu entlarven. Erstellen Sie nach der Bregma18 einfache Platzierung der Doppler Durchflussmesser Bleistift Sondenspitze dann einen kleinen Grat Loch 5 mm seitlich, und 1 mm.</li>
	<li>Drehen Sie die Ratte aus der Rückenlage anfällig, und dann die Lasersonde Bleistift in die zuvor gebohrten Schädel Blind-Bohrung, die regionalen zerebralen Blutflusses (rCBF) zu überwachen.</li>
	<li>Zeichnen Sie jedes Tier Grundlinie rCBF auf und betrachten Sie dies als 100 %. Insbesondere ist mittlere zerebrale Arterie Okklusion (MCAO) gestartet, wenn eine Abnahme der rCBF von mehr als 80 % erkannten19,20ist.</li>
</ol>(2) Induktion von fokalen Cerebra Ischämie
<ol><li>Rasieren Sie Halsbereiches zu und desinfizieren Sie die Haut mit Betadine Lösung und 70 % Ethanol. 0,2 mL 0,5 % Bupivacain subkutan in Chirurgie Website für Analgesie17zu injizieren.</li>
	<li>Machen Sie eine 2 cm langen chirurgischen Inzision in der ventralen Oberfläche des Halses auf die linke gemeinsame Halsschlagader (LCCA) zugreifen. Isolieren Sie die LCCA aus der benachbarten Faszie und den Nervus Vagus zur Bifurkation der äußeren Halsschlagader (ECA) und der inneren Halsschlagader (ICA) zugreifen.</li>
	<li>Dauerhaft verbinden Sie, entweder die LCCA oder ECA mit einer 5-0 Seide Naht und sezieren Sie ICA frei auf das Niveau der Pterygopalatine Arterie zu.</li>
	<li>Lose stellen eine Krawatte Seide Naht 5-0 rund um LCCA, und dann vorübergehend ICA Klemmen mit einem vaskulären Mikro-Clip.</li>
	<li>Machen Sie einen kleinen Schnitt auf der LCCA vor der zuvor platzierte lose Krawatte und dann legen Sie eine 4-0-Silikon beschichteten Nylon-Naht in der luminalen Raum von ICA und ziehen Sie den Faden um die LCCA, die Nylon-Naht zu sichern und zu verhindern, dass Blut austritt.</li>
	<li>Entfernen Sie den vaskulären Mikro-Clip von der ICA. Dann vorab ein Silikon beschichteten Intraluminal Filament bis beobachten einen deutlichen Rückgang der rCBF, die Okklusion der MCA Herkunft angibt. Am Ende der ischämischen Periode (90 min) starten Sie Reperfusion durch den Rückzug der Intraluminal Naht21.</li>
</ol>(3) Halsschlagader Kanülierung und Evans blau (EB) Injektion
<ol><li>Machen Sie einen 1 cm längs-Schnitt in den Hals auf der linken Seite der Mittellinie und dann unverblümt sezieren Sie entfernt oberflächliche Faszie um externe Ortsverbandes der linken Halsschlagader (LGV) zuzugreifen. Dann dauerhaft verbinden Sie kraniale Ende der LGV mit 5: 0 Seide Naht. Legen Sie locker zwei Verbindungen rund um die Vene, und dann vorübergehend Klemmen Sie kardiale Ende der LGV mit einer vaskulären Mikro-Klemme.</li>
	<li>Machen Sie einen kleinen Schnitt auf der LGV zwischen zwei Nähte, und legen Sie heparinisierten Serum gefüllt Katheter in den luminalen Raum von der LGV und Kanüle ca. 10 mm. danach, ziehen Sie die Ligaturen um die Vene zur Sicherung des Katheters und Vorbeugung von Blutungen. Kleine Mengen von Serum zu vermeiden, reduzieren die Vene zu injizieren.</li>
	<li>Zu Beginn der Reperfusion Periode injizieren Sie langsam EB Farbstoff (1 mL/kg 2 % EB Lösung in Kochsalzlösung) über einen Zeitraum von 5 Minuten. Anschließend waschen Sie die Kanüle durch Injektion von 0,5 mL normale Kochsalzlösung und entziehen Sie die Vene12,22der Injektionskanüle.</li>
	<li>Schließlich Naht der Hals und Kopf Einschnitte und 0,05 mg/kg Buprenorphin intraperitoneale Injektion (IP) und wiederholen Sie der Injektion alle 6-8 Std. Reperfusion Zeitraum für postoperative Analgesie17.</li>
	<li>5 mL vorgewärmten saline(IP) Flüssigkeitszufuhr in der Wiederherstellung Käfig17zu injizieren.</li>
	<li>Ort das Tier in einem Käfig spezielle Recovery ausgestattet mit Temperatur und Klimaregelung und die Erholung des Tieres aus der Narkose zu überwachen.</li>
</ol>4. Bewertung der Blut Hirn-Schranke Durchlässigkeit
<ol><li>Nach 24 Stunden der Reperfusion tief betäuben des Tieres mit Natrium Thiopental. Öffnen Sie dann die Brusthöhle durch ein kleines Loch unter dem Brustbein.</li>
	<li>Machen Sie eine kleine Öffnung in den rechten Vorhof und injizieren Sie 250 mL vorgewärmten 0,9 % Kochsalzlösung (37 ° c) bei einem Druck von 110 MmHg durch die linke Herzkammer für 15 min, EB von der Zirkulation zu waschen, bis die normale Kochsalzlösung Exits vom Atrium wird farblos23zu.</li>
	<li>Sofort entfernen Sie das Gehirn aus dem Schädel zu und legen Sie es in der Gehirn-Matrix. Die Riechkolben und Kleinhirn zu sezieren, und dann mit einer sauberen Rasierklinge trennen die rechte Hemisphäre des Gehirns von der linken Seite (Lesioned) entlang der Mittellinie.</li>
	<li>Wiegen Sie jede Hemisphäre separat in 2,5 mL Phosphat gepufferte Kochsalzlösung zu homogenisieren Sie und mischen Sie diese mit 2,5 mL Trichloressigsäure Säure (60 %) für 2 min mit einem Vortex-Maschine.</li>
	<li>Zentrifugieren Sie Gehirn Proben für 30 min bei 1.322 x g und lassen Sie die Proben im Kühlschrank 4 ° C für 10 min. abkühlen lassen.</li>
	<li>Verwenden Sie die Überstände die EB-Extinktion von einem Spektrophotometer 610 nm23schätzen.</li>
	<li>Berechnen Sie EB Konzentrationen gegen eine Standardkurve und ausdrückliche Ergebnisse als µg/g des Hirngewebes.</li>
</ol>5. Herstellung von der EB-Standardkurve
<ol><li>Bereiten Sie 10 Beispiellösungen von EB mit Konzentrationen von 1 bis 10 µg von EB in 5 mL Phosphat gepufferte Kochsalzlösung.</li>
	<li>Messen Sie die Absorption Werte jeder einzelnen Probe bei 610 nm mit einem Spektralphotometer.</li>
	<li>Machen Sie ein Punktdiagramm mit einer Tabellenkalkulation und vorliegenden EB-Konzentrationen auf der x-Achse und die Extinktion Werte auf der y-Achse (Abbildung 1).</li>
	<li>Definieren Sie eine lineare Trendlinie für die Kurve mit der Gleichung. Dann können sie um die EB-Konzentration der Proben zu erhalten.</li>
	<li>Melden Sie die endgültigen Ergebnisse der EB Extravasation als µg/g Gehirn Gewebe Gewicht.</li>
</ol>6. Sham-Betrieb
<ol><li>Durchführen Sie der gleichen chirurgischen Verfahren mit Ratten in Sham betriebene Gruppe (einschließlich macht einen Einschnitt in der Halsregion und EB-Injektion), aber schließen Sie die MCAO aus.</li>
</ol>

<ol><li>Jin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protecting+against+cerebrovascular+injury%3A+contributions+of+12%2F15-lipoxygenase+to+edema+formation+after+transient+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Protecting against cerebrovascular injury: contributions of 12/15-lipoxygenase to edema formation after transient focal ischemia.</a> Stroke. 39 (9), 2538-2543 (2008).</li>
<li>Lo, E. H., Dalkara, T., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms%2C+challenges+and+opportunities+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms, challenges and opportunities in stroke.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (5), 399-415 (2003).</li>
<li>Tam, S. J., Watts, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connecting+vascular+and+nervous+system+development%3A+angiogenesis+and+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Connecting vascular and nervous system development: angiogenesis and the blood-brain barrier.</a> Annu Rev Neurosci. 33, 379-408 (2010).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+use+of+H102+peptide-loaded+dual-functional+nanoparticles+in+the+treatment+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">The potential use of H102 peptide-loaded dual-functional nanoparticles in the treatment of Alzheimer's disease.</a> J Control Release. , (2014).</li>
<li>Obermeier, B., Daneman, R., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+maintenance+and+disruption+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Development, maintenance and disruption of the blood-brain barrier.</a> Nat Med. 19 (12), 1584-1596 (2013).</li>
<li>Fang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+Blood-Brain+Barrier+Dysfunction+by+XQ-1H+Following+Ischemic+Stroke+in+Hyperlipidemic+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Attenuated Blood-Brain Barrier Dysfunction by XQ-1H Following Ischemic Stroke in Hyperlipidemic Rats.</a> Mol Neurobiol. 52 (1), 162-175 (2015).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR4+antagonist+AMD3100+protects+blood-brain+barrier+integrity+and+reduces+inflammatory+response+after+focal+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">CXCR4 antagonist AMD3100 protects blood-brain barrier integrity and reduces inflammatory response after focal ischemia in mice.</a> Stroke. 44 (1), 190-197 (2013).</li>
<li>Omidi, Y., Barar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impacts+of+blood-brain+barrier+in+drug+delivery+and+targeting+of+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Bioimpacts%22%5BJournal%5D)">Impacts of blood-brain barrier in drug delivery and targeting of brain tumors.</a> Bioimpacts. 2 (1), 5-22 (2012).</li>
<li>Cho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+blood-brain+barrier+model+for+in+vitro+studies+of+neurovascular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional blood-brain barrier model for in vitro studies of neurovascular pathology.</a> Sci Rep. 5, (2015).</li>
<li>Barar, J., Rafi, M. A., Pourseif, M. M., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+transport+machineries+and+targeted+therapy+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioimpacts%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier transport machineries and targeted therapy of brain diseases.</a> Bioimpacts. 6 (4), 225-248 (2016).</li>
<li>Kaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnesium+sulfate+attenuates+increased+blood-brain+barrier+permeability+during+insulin-induced+hypoglycemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Magnesium sulfate attenuates increased blood-brain barrier permeability during insulin-induced hypoglycemia in rats.</a> Can J Physiol Pharmacol. 79 (9), 793-798 (2001).</li>
<li>Pasban, E., Panahpour, H., Vahdati, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+oxygen+therapy+does+not+protect+the+brain+from+vasogenic+edema+following+acute+ischemic+stroke+in+adult+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Early oxygen therapy does not protect the brain from vasogenic edema following acute ischemic stroke in adult male rats.</a> Sci Rep. 7 (1), 3221(2017).</li>
<li>Haghnejad Azar, A., Oryan, S., Bohlooli, S., Panahpour, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-Tocopherol+Reduces+Brain+Edema+and+Protects+Blood-Brain+Barrier+Integrity+following+Focal+Cerebral+Ischemia+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Princ+Pract%22%5BJournal%5D)">Alpha-Tocopherol Reduces Brain Edema and Protects Blood-Brain Barrier Integrity following Focal Cerebral Ischemia in Rats.</a> Med Princ Pract. 26 (1), 17-22 (2017).</li>
<li>Belayev, L., Busto, R., Zhao, W., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+blood-brain+barrier+permeability+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of blood-brain barrier permeability following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Brain Res. 739 (1-2), 88-96 (1996).</li>
<li>Bodsch, W., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((125I-antibody+autoradiography+and+peptide+fragments+of+albumin+in+cerebral+edema%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">125I-antibody autoradiography and peptide fragments of albumin in cerebral edema.</a> J Neurochem. 41 (1), 239-243 (1983).</li>
<li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+BBB+permeability+after+embolic+stroke+in+rat+using+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+FlowMetab%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of BBB permeability after embolic stroke in rat using MRI.</a> J Cereb Blood FlowMetab. 25 (5), 583-592 (2005).</li>
<li>Uluç, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Aktüre, E., Başkaya, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+cerebral+ischemia+model+by+endovascular+suture+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat.</a> J Vis Exp. (48), (2011).</li>
<li>Hungerhuber, E., Zausinger, S., Westermaier, T., Plesnila, N., Schmid-Elsaesser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+bilateral+laser+Doppler+fluxmetry+and+electrophysiological+recording+during+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Simultaneous bilateral laser Doppler fluxmetry and electrophysiological recording during middle cerebral artery occlusion in rats.</a> J Neurosci Methods. 154 (1-2), 109-115 (2006).</li>
<li>Panahpour, H., Nouri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-Ischemic+Treatment+with+candesartan+protect+from+cerebral+ischemic%2Freperfusioninjury+in+normotensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Post-Ischemic Treatment with candesartan protect from cerebral ischemic/reperfusioninjury in normotensive rats.</a> Int J Pharm Pharm Sci. 4 (4), 286-289 (2012).</li>
<li>Panahpour, H., Dehghani, G. A., Bohlooli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enalapril+attenuates+ischaemic+brain+oedema+and+protects+the+blood-brain+barrier+in+rats+via+an+anti-oxidant+action%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enalapril attenuates ischaemic brain oedema and protects the blood-brain barrier in rats via an anti-oxidant action.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 41 (3), 220-226 (2014).</li>
<li>Panahpour, H., Nekooeian, A. A., Dehghani, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+Central+Angiotensin+II+AT1+Receptor+Protects+the+Brain+from+Ischemia%2FReperfusion+Injury+in+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Iran+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Blockade of Central Angiotensin II AT1 Receptor Protects the Brain from Ischemia/Reperfusion Injury in Normotensive Rats.</a> Iran J Med Sci. 39 (6), 536-542 (2014).</li>
<li>Panahpour, H., Nekooeian, A. A., Dehghani, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+attenuates+ischemic+brain+edema+and+protects+the+blood-brain+barrier+integrity+from+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Iran+Biomed+J%22%5BJournal%5D)">Candesartan attenuates ischemic brain edema and protects the blood-brain barrier integrity from ischemia/reperfusion injury in rats.</a> Iran Biomed J. 18 (4), 232-238 (2014).</li>
<li>Kaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+magnesium+sulfate+on+blood-brain+barrier+disruption+caused+by+intracarotid+injection+of+hyperosmolar+mannitol+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+sci%22%5BJournal%5D)">The effects of magnesium sulfate on blood-brain barrier disruption caused by intracarotid injection of hyperosmolar mannitol in rats.</a> Life sci. 76 (2), 201-212 (2004).</li>
<li>Schöller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+microvascular+basal+lamina+damage+and+blood-brain+barrier+dysfunction+following+subarachnoid+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of microvascular basal lamina damage and blood-brain barrier dysfunction following subarachnoid hemorrhage in rats.</a> Brain Res. 1142, 237-246 (2007).</li>
<li>Bodsch, W., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((125I-Antibody+Autoradiography+and+Peptide+Fragments+of+Albumin+in+Cerebral+Edema%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">125I-Antibody Autoradiography and Peptide Fragments of Albumin in Cerebral Edema.</a> J Neurochem. 41 (1), 239-243 (1983).</li>
<li>Sandoval, K. E., Witt, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+tight+junction+permeability+and+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier tight junction permeability and ischemic stroke.</a> Neurobiol Dis. 32 (2), 200-219 (2008).</li>
<li>Zhu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Baicalin+reduces+the+permeability+of+the+blood-brain+barrier+during+hypoxia+in+vitro+by+increasing+the+expression+of+tight+junction+proteins+in+brain+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Baicalin reduces the permeability of the blood-brain barrier during hypoxia in vitro by increasing the expression of tight junction proteins in brain microvascular endothelial cells.</a> J Ethnopharmacol. 141 (2), 714-720 (2012).</li>
<li>Kucuk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+losartan+on+the+blood-brain+barrier+permeability+in+long-term+nitric+oxide+blockade-induced+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of losartan on the blood-brain barrier permeability in long-term nitric oxide blockade-induced hypertensive rats.</a> Life Sci. 71 (8), 937-946 (2002).</li>
<li>Uyama, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+vascular+permeability+in+the+gerbil+brain+after+transient+ischemia+using+Evans+blue+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of vascular permeability in the gerbil brain after transient ischemia using Evans blue fluorescence.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 8 (2), 282-284 (1988).</li>
<li>Kleinig, T. J., Vink, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+inflammation+in+ischemic+and+hemorrhagic+stroke%3A+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Suppression of inflammation in ischemic and hemorrhagic stroke: therapeutic options.</a> Curr Opin Neurol. 22 (3), 294-301 (2009).</li>
<li>Del Zoppo, G. J., Mabuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microvessel+responses+to+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral microvessel responses to focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 23 (8), 879-894 (2003).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Shin, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Bottiger, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cerebral+ischemia+due+to+cardiocirculatory+arrest+in+mice+causes+neuronal+degeneration+and+early+induction+of+transcription+factor+genes+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Mol+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Global cerebral ischemia due to cardiocirculatory arrest in mice causes neuronal degeneration and early induction of transcription factor genes in the hippocampus.</a> Brain Res Mol Brain Res. 65 (2), 135-142 (1999).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

So weit, verschiedene Methoden wie Autoradiographie und Erkennung der radioaktiven Tracern24,25, Immunfluoreszenz-Mikroskopie26,27und EB Extravasation Technik20, 23 wurden verwendet, um die Blut - Hirn-Schranke Schaden zu bewerten. EB-Farbstoff kann sich stark an der Serum-Albumin gebunden und dient als Tracer für vaskuläre Leckagen Erkennung und...

Vasogenic Hirnödem wegen Störung der Blut - Hirn-Schranke (BBB) bleibt eine wichtige Komplikation des ischämischen Schlaganfalls und eine wichtige Determinante für die Überlebensrate in der Schlaganfall-Patienten1,2. Die Blut - Hirn-Schranke (BBB), die durch Kapillare endothelial Zellen im Gehirn (BCECs) gebildet und besteht aus verschiedenen neurovaskuläre Komponenten (z. B. enge Kreuzungen unter Perizyten, BCECs, Astroglial und neuronalen Zellen3), bietet eine spezialisierte und dynamische Schnittstelle zwischen dem zentralen Nervensystem (ZNS) und peripheren Durchblutung4,5. Beleidigungen wie Ischämie-Reperfusion Verletzungen könnte stören die funktionelle Integrität der BBB und führen nachträgliche Eindringen von zirkulierenden Leukozyten in das Gehirn Parenchym, die letztlich zerebrale Entzündung und primäre Hirnverletzungen auslösen 6 , 7. Tiermodelle für die genaue Erfassung der Dysfunktion des BBB nach Auftreten eines Schlaganfalls erforderlich sind. Solche Modelle sind von großer Bedeutung für die Untersuchung zugrunde liegenden pathophysiologische Mechanismen und Einführung von neuen neuroprotektive Strategien. In-vitro- Kultur-basierte Zellmodelle der BBB hoch entwickelt und verwendet für molekulare Studie der BBB Physiopathologie8,9,10. In Vivo Tiermodellen, die ischämische Schaden der BBB analog zu menschlichen klinischen Bedingungen zu produzieren, sind jedoch auch in dieser Hinsicht sehr lohnenswert. Quantitativen Nachweis der Extravasation von Evans blau (EB) ist eine gut angenommen und empfindliche Technik, die für die Beurteilung der BBB Integrität und Funktion bei neurodegenerativen Erkrankungen, einschließlich der ischämischen Schlaganfall11, verwendet worden ist 12 , 13 , 14. diese Methode ist kostengünstig, machbar, reproduzierbare und völlig zutreffend in einem experimentellen Labor. Ihre Umsetzung erfordert keine vorgerückte Ausrüstung, wie radioaktive Tracer15 oder Magnetresonanz-Bildgebung (MRI)16, die Voraussetzung für andere Methoden sind. In diesem Artikel zeigen wir umfassend grundlegende technische Prozesse der BBB Bewertung mit EB Extravasation in Ratte-Modelle des ischämischen Schlaganfalls.

<table><tbody><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal</td><td>AWN 34041100</td><td>20 - 25 &deg; C</td></tr><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC)</td><td>Molekula</td><td>31216368</td><td>4 Jahren</td></tr><tr><td>Sprague&ndash; Dawley-Ratten&nbsp;</td><td>Pasture Institute (Teheran, Iran)</td><td></td><td>300-350g</td></tr><tr><td>Evans Blue&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>314-13-6</td><td></td></tr><tr><td>Trichloressigsäure&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>76-03-9</td><td>2 Jahre</td></tr><tr><td>Bupivacaine HCl (0.5%)</td><td>Delpharm Tours</td><td></td><td>unten&nbsp; 25 > C</td></tr><tr><td>Bupernorphin</td><td>Exir (Iran)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Natriumcarbonat</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>497-19-8</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Di- Natriumhydrogenphosphat</td><td>EMD Millipore&nbsp;</td><td>231-448-7</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>&nbsp; 7447-40-7</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Silikon (Xantopren)</td><td>Heraeus</td><td>EN ISO 4823</td><td></td></tr><tr><td>Aktivator universal plus</td><td>Heraeus</td><td>66037445</td><td></td></tr><tr><td>Mikropräparierzange</td><td>Stoelting</td><td>52100-41</td><td></td></tr><tr><td>Federschere</td><td>Stoelting</td><td>52130-00</td><td></td></tr><tr><td>Betrieb&nbsp; Schere</td><td>Roboz</td><td>52140-70</td><td></td></tr><tr><td>Gehirn-Matrix&nbsp;</td><td>Stoelting</td><td>51390</td><td></td></tr><tr><td>Anästhesiegerät für Kleintiere |</td><td>&nbsp; Kent Scientific</td><td>SS-01</td><td></td></tr><tr><td>Power Lab-System</td><td>AD Instruments</td><td>ML880</td><td></td></tr><tr><td>Laser-Doppler-Durchflussmesser</td><td>AD Instruments</td><td>ML191</td><td></td></tr><tr><td>Heizungs-Feedback-System</td><td>Harvard Appratus</td><td>72-7560</td><td></td></tr><tr><td>Gefäß-Mikroklemme</td><td>FineScience Tools</td><td>18055-03</td><td></td></tr><tr><td>Silk 5-0 Nahtfaden</td><td>Ethicon</td><td>682G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 4-0 Nahtfaden&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>EH6740G</td><td></td></tr></tbody></table>

eine in-vivo -bewertung der störung der blut - hirn-schranke in einem rattenmodell des ischämischen schlaganfalls

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

Ischämischen Schlaganfall führt zu Vasogenic zerebrales Ödem und anschließende primäre Hirnverletzung, die durch Zerstörung der Blut - Hirn-Schranke (BBB) vermittelt wird. Ratten mit induzierter ischämischen Schlaganfall wurden gegründet und als in Vivo Modellen verwendet, um die Funktionsfähigkeit der BBB zu untersuchen. Photometrische Erkennung von Evans blau (EB) in den Gehirn-Proben mit ischämischen Verletzungen konnte die Forschung und Entwicklung von neuartigen therapeutischen Modalitäten zuverlässig begründet. Diese Methode liefert reproduzierbare Ergebnisse und gilt in jedem Labor ohne spezielle Ausrüstung. Hier präsentieren wir Ihnen eine visualisierte und technische Leitlinie zur Detektion der Extravasation von EB nach Induktion der ischämische Schlaganfall bei Ratten.

Es gab keinen signifikanten Unterschied in EB Ebenen in der rechten Hemisphäre im Vergleich zu der linken Hemisphäre der Schein betrieben Ratten (1,06 ± 0,1 µg/g und 1,1 ± 0,09 µg/g, beziehungsweise). Siehe Figuren 2A-2 b, Induktion von transienten Ischämie (90 min Ischämie / Reperfusion 24 h) verursacht einen signifikanten Unterschied in EB Ebenen (10,41 ± 0,84 µg/g, p &lt; 0,001) in der linken Hemisphäre von ischämischen Ratten, im Vergleich zu den jeweiligen H...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine hoch reproduzierbare Technik für in Vivo Beurteilung der Blut - Hirn-Schranke Störung in Ratte-Modelle des ischämischen Schlaganfalls liefern.

Eine In-Vivo -Bewertung der Störung der Blut - Hirn-Schranke in einem Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine hochgradig reproduzierbare Methode zur in vivo Beurteilung der Störung der Blut-Hirn-Schranke in einem Reaktionsmodell des ischämischen Schlaganfalls vorzustellen. Dies wird durch Induktion eines ischämischen Schlaganfalls unter Verwendung eines intraluminalen Filaments für den Verschluss der mittleren Hirnarterie in der linken Seite des Gehirns erreicht. Der nächste Schritt des Verfahrens ist die Kanülierung des äußeren Astes der Jugularvene und die Injektion des Farbstoffs Evans Blue am Ende des Verschlusses der mittleren Hirnarterie und zu Beginn der Reperfusionsperiode.Vierundzwanzig Stunden später wird unter tiefer Narkose das Kreislaufsystem des Tieres aus Evans Blue ausgewaschen und das Gehirn entfernt. Dann werden zwei Gehirnhälften getrennt, homogenisiert und zentrifugiert, und schließlich werden Überstände von Geweben verwendet, um die Evans-Blue-Konzentration mit einem Spektralphotometer zu messen. Anästhesie und Durchflussmessung.Induzieren Sie eine Anästhesie mit 4 % Isofluran und halten Sie sie für die Dauer der Operation mit Isofluran 1-1,5 % in einer Mischung aus 70 % Distickstoffmonoxid und 13 % Sauerstoff aufre

an-vivo-assessment-blood-brain-barrier-disruption-rat-model-ischemic

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieses Video zeigt ein Verfahren zur Beurteilung der Störung der Blut-Hirn-Schranke in einem EAE-Mausmodell. Fluoreszierende Farbstoffe unterschiedlicher Größe werden retroorbital injiziert und zirkulieren durch die Blutgefäße des Gehirns. Der kleinere Farbstoff dringt durch Lücken in das Hirngewebe ein, während der größere Farbstoff nur dann eintritt, wenn die Störung schwerwiegend ist, was mit dem Ausmaß der Barriereschädigung korreliert.

Bestimmung der Störung der Blut-Hirn-Schranke mit Hilfe von Fluoreszenzfarbstoffen in einem EAE-Mausmodell

Dieses Video zeigt die Beurteilung der Infarktzone und des Hirnödems in Hirnschnitten von Ratten, die einem Verschluss der mittleren Hirnarterie ausgesetzt waren. Die Identifizierung von Infarktgebieten erfolgt mittels Redoxfärbung, während ein Blaufilter und eine Schwellenwertfunktion in der Bildanalysesoftware die Infarktzone und das Ödem in der betroffenen Hemisphäre quantifizieren.

Messung der Infarktzone und des Hirnödems in einem Rattengehirn nach einem Verschluss der mittleren Hirnarterie

Quelle: Kuts, R. et al. Laserinduzierte Hirnverletzung im motorischen Kortex von Ratten. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video zeigt die Beurteilung der Integrität der Blut-Hirn-Schranke (BHS) nach einer laserinduzierten Hirnverletzung bei Ratten. Ein Tracking-Farbstoff wird in die Schwanzvene injiziert, so dass er zum Gehirn zirkulieren und durch die geschädigte BHS in das Gewebe gelangen kann. Das Gehirn wird dann extrahiert und verarbeitet, um den Farbstoff freizusetzen. Die Fluoreszenzintensität...

Beurteilung der Integrität der Blut-Hirn-Schranke in einem Rattenmodell mit laserinduzierter Hirnverletzung 

Blut-Hirn-Schranke Störungen hilft die Lieferung von bestimmten Medikamenten an das Gehirn. Mannitol geliefert intraarteriell schrumpft umgebenden Zellen die Blutgefäße, um physisch stören die Barriere.

Rat Modell der Blut-Hirn-Schranke Störung zu Neurovascular Therapeutics Gezielte zulassen

Dieses Protokoll beschreibt die wiederholte hypoxische Präkonditionierung oder kurze Exposition gegenüber systemischer Hypoxie, die das Infarktvolumen und die Störung der Blut-Hirn-Schranke nach einem vorübergehenden Verschluss der mittleren Hirnarterie bei Mäusen reduziert. Es wird auch die duale Quantifizierung des Infarktvolumens und der Störung der Blut-Hirn-Schranke nach einem Schlaganfall beschrieben, um die Wirksamkeit des neurovaskulären Schutzes zu bewerten.

Die Quantifizierung der neurovaskulären Schutz Nach Repetitive hypoxische Präkonditionierung und Transient mittleren Hirnarterie Occlusion in Mice

In dieser Studie stellen wir eine einfache und effiziente Verfahren zur Bewertung der Störung der Blut - Hirn-Schranke unter neurodegenerativen Erkrankungen. Um unser Ziel zu erreichen, wir infundiert hochmolekularen Fluorescein Herstellung gekennzeichnet (FITC)-Albumin in Maus Jugular Ader und die Leckage in der Anwesenheit von Fluoreszenz-Mikroskopie bewertet.

Beurteilung der Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke durch intravenöse Infusion von FITC-markierte Albumin in einem Mausmodell der Neurodegenerative Erkrankung

Hier präsentieren wir einen Maus Gehirn vaskulären Permeabilität Assay mit intraperitonealer Injektion von Fluoreszenz Tracer gefolgt von Perfusion, die auf Tiermodelle der Blut - Hirn-Schranke Dysfunktion anwendbar ist. Ein Hemi-Gehirn dient zur Durchlässigkeit quantitativ bewerten und die andere für die Tracer Visualisierung/Immunostaining. Der Eingriff dauert ca. 5-6 h für 10 Mäuse.

Eine In Vivo Blut - Hirn-Schranke Permeabilität Assay bei Mäusen mit Gewebekulturen beschriftet Tracer

Dieses Protokoll beschreibt eine neuartige Technik zur Messung der drei wichtigsten Parameter ischämischer Hirnverletzungen an demselben Satz von Nagetier-Gehirnproben. Die Verwendung von nur einer Hirnprobe ist in Bezug auf ethische und wirtschaftliche Kosten sehr vorteilhaft.

Messung des Abbaus von Hirnödem nach dem Schlaganfall, Infarktzone und Blut-Hirn-Barrierenabbau in einem einzigen Satz von Nagetier-Gehirnproben

Es wurde eine Methode entwickelt, um die Farbstoffextravasation aufgrund des Zusammenbruchs der Blut-Hirn-Schranke (BHS) sichtbar zu machen, indem Mäusen zu unterschiedlichen Zeitpunkten zwei Fluoreszenzfarbstoffe verabreicht wurden. Die Verwendung von Glycerin als Kryoprotektivum erleichterte die Immunhistochemie an derselben Probe.

Bewertung des Zusammenbruchs der Blut-Hirn-Schranke in einem Mausmodell für ein leichtes Schädel-Hirn-Trauma

Ratten-In-vivo-Modelle sind unverzichtbare Werkzeuge, um die pathologischen Mechanismen und therapeutischen Ziele des ischämischen Schlaganfalls zu untersuchen. In dieser Arbeit wird die Durchführung von Immunfluoreszenzfärbungen in infarktierten Hirnschnitten nach einem Verschluss der mittleren Hirnarterie (MCAO) bei Ratten beschrieben.

Bewertung der Zelltodsignalisierung durch Immunfluoreszenz in einem Rattenmodell für ischämische Schlaganfälle

Lernen Sie eine reproduzierbare Methode zur Bewertung der Blut-Hirn-Schranke im Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls mittels Evans Blue. Diese Technik ermöglicht die Untersuchung pathophysiologischer Mechanismen und therapeutischer Ansätze.

Eine In-Vivo -Bewertung der Störung der Blut - Hirn-Schranke in einem Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls

Weitere Videos entdecken