Name: Fetale kardiovaskuläre Bildgebung mit einem Hochfrequenz-Ultraschall (30 / 45MHZ) Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Erfahren Sie die Hochfrequenz-Ultraschallbildgebung fetaler Mäuse mit 30-45 MHz Transducer für kardiologische Entwicklungsstudien. Diese nicht-invasive Methode ermöglicht Echtzeit-Echokardiografie zur Analyse angeborener Herzfehler.

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Wir danken den Tierphysiologie Kern, Abteilung für Molekulare Medizin an der UCLA für die Bereitstellung von technischer Unterstützung und freien Zugang zu der Vevo 2100-Ultraschall-biomikroskopie (UBM)-System. Diese Studie wurde unterstützt durch das NIH/Child Health Research Center (5K12HD034610/K12), die UCLA-Kinder Discovery Institute und heute und Morgen Kinder Fonds und David Geffen School of Medicine Research Innovation Award, M. Touma.

Die University of California, Los Angeles, Animal Care und Use Committee genehmigt alle Verfahren, die in diesem Protokoll angezeigt. Die Experimente wurden im Rahmen einer laufenden Studie unter aktiven Tier Protokolle, genehmigt durch die institutionellen Animal Care und Nutzung Ausschuss der University of California, Los Angeles, Kalifornien, USA. Tierische Handhabung und Pflege folgten die Standards des Leitfadens für die Pflege und Verwendung von Labortieren.
1. Vorbereitung des Hochfrequenz-Ultraschalls-Imaging-System
<ol><li>Aktivieren Sie die Ultraschall-imaging-System und die Physiologie-Überwachungseinheit.</li>
	<li>Schließen Sie den 30/45 MHz-Schallkopf.</li>
	<li>Legen Sie die entsprechenden Scan-Kopf auf der Halterung in der Nähe der bildgebungsplattform.</li>
	<li>Die Kardiale Messprogramm Option.</li>
	<li>Ort der Ultraschall gel kopfüber in seinem vor-Erwärmung Container setzen auf 37 ° C.</li>
	<li>Bestätigen Sie entsprechenden Schlauchsystem für die Anästhesie zu und überprüfen Sie die Ebenen aus Sauerstoff und Isofluran.</li>
	<li>Desinfizieren Sie die imaging-Plattform und den Arbeitsbereich.</li>
	<li>Legen Sie die Wärme der imaging Plattform weiterhin eine Konstante Körpertemperatur und Herzfrequenz der Dämme.</li>
</ol>2. Schwangere Maus Vorbereitung
<ol><li>Legen Sie die schwangere Maus (C57/BL6)-Damm in der Anästhesie-Induktion-Kammer.</li>
	<li>Induzieren Sie Anästhesie mittels inhalativer Isofluran (Isofluran 2 % - 3 %), gemischt mit 100 % Sauerstoff (100 % O2) bei einer Durchflussrate von 200 mL/min in der Induktion Kammer kontinuierlich geliefert.</li>
	<li>Das sedierten Tier auf die imaging Plattform in Rückenlage zu übertragen.</li>
	<li>Bieten Sie stationäre Sedierung mit einer Gesichtsmaske, verbunden mit der Anästhesie Schlauch System liefert Isofluran (1,0-1,5 %) mit 100 % O2 bei 200 mL/min gemischt. Achtung: Steuern Sie das Austreten von betäubende Gas mithilfe einer Lüftungsanlage ausgestattet mit einen Kohlefilter, Kanister Satz enthält.</li>
	<li>Kleben Sie die Glieder sanft zu den eingebetteten elektrokardiographischen Elektroden nach Anwendung der Elektroden-Gel zu erreichen, ständige Überwachung der mütterlichen Herz- und Atemwegserkrankungen Raten.</li>
	<li>Der Pegel der Isofluran weiterhin eine durchschnittliche Herzfrequenz (450 + /-50 Schläge/min (Bpm)).</li>
	<li>Aufrechterhaltung der Körpertemperatur innerhalb eines Bereichs von 37,0 ° C +/-0,5 ° C. Überwachen Sie die Körpertemperatur und die Herzfrequenz auf die Physiologie-Controller-Einheit angezeigt wird.</li>
	<li>Dokumentieren Sie die Vitalfunktionen der sediert Maus alle 15 min in den bildgebenden Verfahren.</li>
	<li>Bewertung des Anästhesie durch die Auswertung der Maus Haltung, Herzfrequenz und Reaktion bis zu den Zehen drückt.</li>
	<li>Bewerben Sie ophthalmologische Balsam (1 Tropfen in jedes Auge), um Augentrockenheit und Hornhaut Schaden zu verhindern.</li>
	<li>Entfernen Sie das Fell aus der Mitte des Brusthöhe an den unteren Extremitäten mit einer Enthaarungscreme Ultraschall Dämpfung zu minimieren. Creme 1-1,5 min nach Anwendung durch den Wechsel von nassen und trockenen Gaze wischt, um Schäden an der Haut zu entfernen.</li>
</ol>(3) Embryo Identifikation
<ol><li>Ertasten der Bauchwand sanft zum Suchen der Föten und verteile sie.</li>
	<li>Kommentieren Sie jeder Embryo auf dem Damm Bauch und mit einem Marker definieren Sie ihre anterior-posterioren und dorsal-Ventral Orientierungen.</li>
	<li>Verwenden Sie den Muttermund sediert dam als Wahrzeichen. Beschriften Sie die Föten auf die Links und rechts uterine Hörner als L1, L2, L 3, etc. (linke Seite) und R1, R2, R3, usw. (rechts), bzw. (Abbildung 1A). Achtung: Vermeiden Sie die Verbreitung der Feten mit Nachdruck. 1-2 Föten in jedem Wurf überschneiden sich mit den anderen, um ihre Positionierung und bildgebenden unzuverlässig. Diese Föten von der Analyse auszuschließen.</li>
</ol>(4) fetalen Herzens Visualisierung und Annotation
<ol><li>Tragen Sie vorgewärmten Ultraschallgel auf den Bauch auf und verteilen Sie es sorgfältig durch, um Blasenbildung zu vermeiden. Fügen Sie zusätzliche Menge des Gels auf dem Gebiet der Bildgebung Scan.</li>
	<li>Die Ultraschallsonde auf der mechanischen Halterung und mobilisieren Sie allmählich in Richtung der Haut die dicken Gelschicht Kontakt während der Suche nach das schlagende Herz Scan B-Modus (Abbildung 1) zu.</li>
	<li>Klicken Sie auf die Scan B Modus um 2-D-Bilder zu erhalten. Verwenden Sie die Blase als Wahrzeichen zu identifizieren den ersten Fötus positioniert in der rechten oder der linken Uterus Horn und markieren Sie ihn als R1 oder L1, beziehungsweise.</li>
	<li>Bestätigen Sie die Rechte und linke Ausrichtung des einzelnen Fötus in Echtzeit durch Verschieben der bildgebungsplattform in der Horizontalebene. Scannen von Kopf Schwanz um die Schnauze, die Gliedmaßen und der Wirbelsäule als Landmarken (Abbildung 1 b, 1 Video) zu beschriften.</li>
	<li>Visualisieren Sie das schlagende Herz zu und mit Anmerkungen versehen Sie, der linke Ventrikel (LV) und den rechten Ventrikel (RV). Verwendung Doppler Farbmodus zur Optimierung der Herz-Visualisierung (Abbildung 1 C-G, Videos 1 - 2).</li>
	<li>Klicken Sie auf Scan B Modus um ein Parasternal kurze Achse-Ansicht zu erhalten haben die LV und RV in ihrer maximalen Durchmesser in der Mitte des Datenrahmens Erwerb angezeigt. Starten Sie live Imaging (Abbildung 1 b-C).</li>
	<li>Ändern Sie die Ausrichtung der Maus im Hinblick auf die Scan-Flugzeuge, um einen längs vierkammer-Blick (Abbildung 1) zu erhalten. Ermitteln Sie zuerst die restlichen Strukturen des Herzens wie Atrien, interventricular Septum und Links und rechts Abfluss Traktate. Als nächstes müssen Sie die ventrikulären und Vorhofflimmern Kammern in ihrer maximalen Durchmesser angezeigt. Starten Sie Bildaufnahme.</li>
	<li>Letzten Endes die suboptimale, schiefe Bilder ausschließen. Klicken Sie auf Cini Daueraufzeichnung "Cineloops" erhalten für ein Minimum von 10 s, dann speichern Sie die aufgezeichneten Bilder.</li>
</ol>5. Bewertung der fetalen Herzfrequenz und linksventrikulären Funktion
<ol><li>Klicken Sie der Scan M-Modus um kardiale Bilder aus vier-Kammer-Flugzeuge (Video 3) zu erhalten.</li>
	<li>Zeigen Sie die Liste der Aufnahmen für die Analyse, sobald die Bilder aller Embryonen abgeschlossen sind.</li>
	<li>Letzten Endes die suboptimale, schiefe Bilder ausschließen.</li>
	<li>Klicken Sie auf Analyse , Wandstärke Messen und die Links/rechts-ventrikuläre Innendurchmesser bei Diastole (LVID, d; RVID, d) und Systole (LVID, s; RVID, s), wie in Abbildung 2dargestellt.</li>
	<li>Bestimmen Sie die durchschnittliche fetale Herzfrequenz durch das Spielen jedes M-Modus aufgezeichnet Ermittlung und Berechnung der Messung einen Flow-Zyklus, der folgende Ablauf Zyklus (den Abstand zwischen benachbarten Gipfeln).</li>
	<li>Führen Sie mehrere Messungen (mindestens 5 pro Ablaufverfolgung) um die durchschnittliche Herzfrequenz (Abbildung 2) zu erhalten.</li>
	<li>Messen Sie die zeitlichen Veränderungen zwischen linken ventricular diastolische Innendurchmesser (d LVID) und linken ventricular Innendurchmesser am Ende Systole (LVID, s) in dem Herzzyklus. Berechnen Sie gebrochene Verkürzung Prozentsatz (FS %) wie folgt: FS % = [(LVID,d-LVID,s)/LVID, d] X100.</li>
	<li>Führen Sie mehrere Messungen (mindestens 5 pro Ablaufverfolgung) um die FS % Durchschnittswerte zu erhalten.</li>
</ol>6. Bewertung der kardiopulmonalen Strömungsparameter
<ol><li>Passen Sie dem Sektor in einem Winkel des Erwerbs weniger als 60o. Klicken Sie Doppler gepulsten Doppler Messungen aus dem 2-D vier-Kammer-Bildgebung Flugzeug mit einer 45-MHz-Schallkopf durchführen.<ol>
<li>Zunächst visualisieren Sie die Verzweigung der Lungenarterie, die richtige Ausflusstrakt zu identifizieren. Als nächstes klicken Sie auf gepulsten Doppler um den Strömungsverlauf durch die Lungen- und Aortenklappen (Abb. 3A, Video 4) zu erhalten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Erhalten Sie pulmonale Durchflussmessungen von gepulsten Doppler Ablaufverfolgung, einschließlich Gipfel systolischen Geschwindigkeit (PkV), Beschleunigung der Zeit (AT) und Auswurf Zeit (ET).</li>
	<li>Führen Sie mehrere Messungen (mindestens 5 pro Ablaufverfolgung) um durchschnittlichen Messwerte zu erhalten, wie in Abbildung 3A (rechts) dargestellt.</li>
	<li>Berechnen die AT / ET Ratio für jeden Abfluss Ventil als Indikator für den Abfluss Traktate Durchgängigkeit und Durchblutung.</li>
	<li>Fahren Sie mit der Mitral- und Aortenklappe Strömungsmuster von apikalen vier Kammer 2-D-Ansichten mit gepulsten Doppler zu erhalten. Ermitteln Sie zuerst die linken Vorhofflimmern und linke ventrikulären Kammern. Als nächstes legen Sie die gepulsten Doppler Probenmenge für die Aufnahme der Mitral-Zufluss Doppler Muster und Mess Frühe Diastolische Geschwindigkeit (E) und atrial Kontraktion Geschwindigkeit (A) (Abb. 3 b)24,25.</li>
	<li>Doppler-Beispiel Lautstärke um die Aorta Doppler Jet Muster zu erhalten. Verwenden Sie die Aorten-Doppler Jet tracing um Beschleunigung (AT) und Auswurf Zeit (ET) zu messen, wie in Abbildung 3 b (rechts) gezeigt (Video 5)</li>
</ol>7. Bewertung der Feto-plazentaren Achse
<ol><li>Verwenden Sie den Doppler Farbscan uterine Arterie und Feto-plazentaren Kreislauf Baum visualisieren, indem mit den 45 MHz-Schallkopf (Abb. 4A).</li>
	<li>Identifizieren Sie die Nabelschnur Schiffe (zwei Arterien und eine Vene) im Segment der Nabelschnur, Intra-Fruchtwasser kurz nachdem die Schnur aus dem fetalen Bauch verlässt.</li>
	<li>Ort gepulsten Doppler Probenvolumen Nabelarterie Strömungsmuster (Abb. 4A) zu erhalten.</li>
	<li>Vaskuläre Peak Strömungsparameter einschließlich der Beschleunigung der Zeit (Zeitpunkt), Auswurf (ET) zu messen, und peak Strömungsgeschwindigkeit am Ende Systole (PkV, s) mit gepulsten Doppler scanning Datensatz (Abbildung 4 b).</li>
	<li>Erhalten Sie 5 aufeinander folgenden Wellenformen in jedem Gefäß, in das Fehlen von Kindsbewegungen und mütterliche Atembewegungen, zur Messung der durchschnittlichen Geschwindigkeit für jedes Schiff.</li>
	<li>Fahren Sie mit der nächsten Embryo.</li>
</ol>8. Post-Bildgebung Tier Überwachung
<ol><li>Schalten Sie den Isofluran-Container nach Abschluss den imaging-Prozess.</li>
	<li>Überwachung der Körpertemperatur, Atemfrequenz und Herzfrequenz während der Erholungsphase weiter.</li>
	<li>Die Gesichtsmaske und die angeschlossenen Leitungssystem zu entfernen, sobald der Damm spontane Bewegungen beginnt.</li>
	<li>Der dam mit dem entsprechenden Gehäuse und Fortfahren Sie Beobachtung nach institutionellen postoperativ Standardprotokolle.</li>
	<li>Die Zeit, um volle Wiederaufnahme der normalen Aktivität zu dokumentieren.</li>
</ol>9. die Leistungsanforderungen und technische Überlegungen
<ol><li>Begrenzen Sie die Bearbeitungszeit für ~ 8 Feten bis ca. 1 h, die negativen Auswirkungen der verlängerten Anästhesie auf Vitalparameter und physiologische Parameter zu vermeiden.</li>
	<li>Komplette Ausbildung mit 8-10 schwangeren Mäusen, Techniken für Bildmuster Erwerb und Flow Ablaufverfolgung in einem kurzen Zeitrahmen zu optimieren.</li>
</ol>

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</ol>

Kein Interessenkonflikt erklärt.

Herz-Kreislauf-Fehlbildungen und Krankheiten werden von genetischen Faktoren und Umwelteinflüssen19wesentlich beeinflusst. Wir haben bisher einen signifikanten Einfluss der mütterlichen kalorische Restriktion, initiiert während des zweiten Trimesters auf Feto-plazentaren Kreislauf fließen und fetalen Herzfunktion9gezeigt.
Pränatale Hypoxie ist eine weitere gemeinsame Stressfaktor während der fetalen Entwicklung, die Ungeheuer der Feto-plazentaren...

Angeborene Fehlbildungen des Herzens sind heterogene strukturelle Mängel, die während der frühen kardiale Entwicklung auftreten. Aktuelle technische Fortschritte der betrieblichen Abläufe führten zu signifikanten Verbesserungen in den Überlebensraten von Säuglingen mit CHDs1,2. Lebensqualität ist jedoch oft gefährdeten sekundär zu längeren Krankenhausaufenthalt und Bedürfnisse für chirurgische Reparatur Verfahren1,2,3,4,5in Szene gesetzt. Vorgeburtliche Erkennung der zugrunde liegenden molekularen Mechanismen von CHDs ist entscheidend, um frühe Interventionen, neue Präventionsstrategien durchzuführen und die lebenslange Ergebnisse6,7zu verbessern planen.
Obwohl mehrere genetische und umweltbedingte Faktoren in der Pathogenese der CHDs verwickelt waren, bleibt zur Gründung der Kausalität ein ungedeckter Bedarf zur Verbesserung der diagnostischen, therapeutischen und präventiven Strategien1,8,9 ,10,11,12. Darüber hinaus öffnet untersuchen die Rolle der in Utero Stressfaktoren und epigenetische Modifikatoren neue Schauplätze für künftige Untersuchungen11,12. Das letzte Jahrzehnt erlebte in der Tat schnelle Fortschritte in der Sequenzierungstechnologie der nächsten Generation wie Einzel-Nukleotid Polymorphie (SNP) Microarray, ganze Exome Sequenzierung und genomweite Methylierung Studien, deren Nutzung bei der Untersuchung der genetischen Ursachen der komplexen menschlichen Krankheiten, einschließlich CHDs1,8,9,10,11 ebnet den Weg zu identifizieren, neue Mutationen und genetische Varianten, die bislang nicht für ihre Pathogenität in geeigneten Tiermodellen getestet.
Unter die andere Krankheit Modellsystemen ist Maus Tiermodell der Wahl, nicht nur für die Untersuchung von Mechanismen der CHDs während der frühen Cardiogenesis13,14,15,16, sondern auch zu erläutern deren Auswirkungen auf kardiale Kammer Reifung und Funktion am späten Schwangerschaft im pränatalen und perinatalen Stressfaktoren. Durchführung von in-Vivo phänotypischen Charakterisierung eines mutierte Maus fetalen Herzens während der frühen und späten Stadien der Entwicklung, ist daher wichtig zu verstehen, die Rolle dieser genetischen Variationen und Umweltfaktoren auf kardiale Entwicklung und die möglichen zukünftigen Auswirkungen auf Kammer spezifischen Reifung Prozesse bei Mäusen.
Früherkennung und Diagnose von Herzfehlern während der Entwicklung ist entscheidend für interventionelle Planung17,18. Als sichere, einfache, portable und wiederholbare, fetale Sonographie in der Tat die Standard imaging Technik für kardiale Beurteilung in der Klinik geworden. Fetalen Kreislauf Bewertung mittels Doppler-Ultraschall hat in der klinischen Praxis nicht nur für den Nachweis von Herzfehlern, sondern auch, vaskulären Anomalien, Plazenta-Insuffizienz und intrauterine Wachstumsretardierung zu erkennen und zu beurteilen, verbreitet Die fetalen Wohlbefinden als Reaktion auf in Utero Beleidigungen einschließlich Hypoxämie, mütterliche Erkrankung und Drogen Toxizität17,18. Parallel zu seinen Wert bei der Bewertung von menschlichen Fehlern und Krankheiten hat Ultraschall Beurteilung der fetalen Mäuse zunehmende Dienstprogramm in experimentelle Einstellungen19,20,21,22gewonnen, 23. Insbesondere kann fetale Herz-Ultraschall (Echokardiographie) sequentielle in Vivo Visualisierung des Herzens entwickeln. Viele experimentelle Studien haben Ultraschall-Imaging-Technologie verwendet, um fetale Herz-Kreislauf-Entwicklung in fetalen Transgene Mäuse zu beobachten. Doppler-Ultraschall ist besonders nützlich, um die pathophysiologische Parameter, wie die Strömungsmuster im fetalen Kreislauf unter physiologischen Herausforderungen oder Krankheit Bedingungen10,19aufzuklären gewesen. Bei Mensch und Tier kann abnormale Flow oder Sauerstoff Blutversorgung für den Fötus aus verschiedenen Bedingungen führen, die fetalen Umwelt in der Gebärmutter stören und beeinflussen die Fetoplacental Achse, einschließlich der plazentare Auffälligkeiten, mütterliche Hypoxie, Schwangerschafts-Diabetes und pharmazeutisch induzierten vaskulären Zusammenziehung15,22. Daher wird Etablierung standardisiertere Methoden zum Ausführen von Doppler Ultraschall auf fetale Mäuse enorm Zukunftsstudien CHDs stärken durch die Erleichterung der Überwachung fließstrukturen und wichtige hämodynamische Indizes der Herz-Kreislauf-Schaltungen während verschiedenen Entwicklungsstadien kardiale in genetischer Mausmodelle.
Hochfrequenz-Ultraschall ist ein leistungsstarkes Tool zum Messen der Entwicklungs- und physiologische Parameter des Herz-Kreislauf-Systems in Mausmodellen und menschliche Krankheiten18entstanden. Diese Technologie hat in den letzten Jahren weiterentwickelt worden. Wir und andere Forscher haben die Machbarkeit dieses Systems zur Durchführung von Ultrahochfrequenz Ultraschall Studien über die fetalen Maus Herz15,19,20,21,22 gezeigt. ,23. Das System ist ausgestattet mit Doppler Fluss Farbzuordnung und linear-Array-Sensoren, die zweidimensionale, dynamische Bilder bei hoher Frequenz (30 bis 50 MHz) Frameraten zu generieren. Diese Vorteile, im Vergleich zu niederfrequenten Ultraschall-Systeme und die vorherige Generation der Hochfrequenz Ultraschall21,22, bieten die notwendige Empfindlichkeit und Auflösung für eingehende Beurteilung der fetalen Kreislauf System, inklusive umfassende Charakterisierung von Herzen Strukturen, Kammer-Funktion und Fluss-Indizes der fetalen Mäuse in experimentelle Einstellungen. Hier erläutern wir Methoden, um schnelle Beurteilung der Herz-Lungen-Kreislauf und Feto-plazentaren Zirkulation an embryonalen Tag E18.5 in Vivo mit einem Hochfrequenz-System durchführen. Wir entschieden uns für einen 30/45 MHz Wandler, der einer axialen Auflösung von etwa 60 µm und einer lateralen Auflösung von 150 µm bietet. Jedoch kann ein höhere Frequenz-Wandler (40/50 MHz), früher Entwicklungsstadien zu analysieren, indem Sie folgen einen ähnlichen methodischen Ansatz gewählt werden. Die ausgewählten M-Modus ermöglicht die Visualisierung von Gewebe mit hoher zeitlicher Auflösung Ebenen (1.000 Bilder/s) in Bewegung. Zu guter Letzt zeigen wir die Machbarkeit der hohen Ultraschall für detaillierte umfassende phänotypischen Charakterisierung der fetalen Herz-Kreislauf-hämodynamischen Status und Funktion bei Mäusen zu Studienbeginn und in Reaktion auf Stress pränatale Hypoxie.

<table><tbody><tr><td>Vevo 2100</td><td>VisualSonics, Toronto, Ontario, Kanada</td><td>N/A</td><td>Ultraschall-Biomikroskopie mit hoher Automatenz. Die Einrichtung ist in der Core Facility für Tierphysiologie, Abteilung für Molekulare Medizin, UCLA, verfügbar. </td></tr><tr><td>Inzuchtmäuse aus den USA (c57/BL6)</td><td>Charles River Laboratories</td><td>N/A</td><td>Inbread-Wildtyp-Mausstamm</td></tr></tbody></table>

fetale kardiovaskuläre bildgebung mit einem hochfrequenz-ultraschall (30 / 45mhz) maus

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound (30/45MHZ) System

Angeborene Herzfehler (CHDs) sind die häufigste Ursache von Morbidität Kindheit und frühe Sterblichkeit. Vorgeburtliche Erkennung der zugrunde liegenden molekularen Mechanismen von CHDs ist entscheidend für neue präventive und therapeutische Strategien zu erfinden. Mutierte Maus-Modellen sind mächtige Werkzeuge zu entdecken, neue Mechanismen und Umweltstress Modifikatoren, die kardiale Entwicklung und deren mögliche Veränderung im CHDs fahren. Bemühungen um die Kausalität von diesen vermeintlichen Mitwirkende gewesen ist jedoch beschränkt auf histologische und molekularbiologische Untersuchungen in Tierversuchen nicht überleben, in denen die Überwachung die wichtigsten physiologischen und hämodynamischen Parameter oft abwesend. Live-imaging-Technologie ist ein wesentliches Instrument herstellen die Ätiologie der CHDs geworden. Vor allem Ultraschall-Bildgebung kann ohne chirurgisch die Föten pränatal eingesetzt werden so dass Aufrechterhaltung ihrer Grundlinie Physiologie während der Überwachung der Auswirkungen von Umweltbelastungen auf die hämodynamische und strukturellen Aspekte der kardialen Kammer Entwicklung. Hier benutzen wir das Hochfrequenz-Ultraschall (30/45)-System, um das Herz-Kreislauf-System im fetalen Mäuse beim E18.5 in Utero an der Grundlinie und als Reaktion auf pränatale Hypoxie Exposition zu untersuchen. Wir zeigen die Machbarkeit des Systems, kardiale kammergröße, Morphologie, linksventrikulären Funktion, fetale Herzfrequenz und Nabelarterie Fluss Indizes und deren Veränderungen im fetalen Mäuse ausgesetzt systemischen chronischen Hypoxie in Utero in Echtzeit zu messen Zeit.

Statistische Analysen der Herz- und hämodynamische Indizes wurden offline durchgeführt. Die Mittel von 5 aufeinander folgenden Messungen in 3 optimale Bilder wurden berechnet. Die Daten wurden geäußert, da ± SEM Student tbedeuten-Test diente der interfraktionellen Arbeitsgruppe Vergleiche zu schließen. Ein P -Wert des ≤0.05 galt als statistisch signifikant.
Im Anschluss an das oben genannte Protokoll gekennzeic...

Hochfrequenz-Ultraschall-Bildgebung der fetalen Maus bildgebenden Auflösung verbessert und bieten präzise nicht-invasive Charakterisierung der kardialen Entwicklung und strukturelle Mängel. Die hier beschriebenen Protokoll soll in Echtzeit fetalen Mäuse Echokardiographie in Vivodurchführen.

Fetale kardiovaskuläre Bildgebung mit einem Hochfrequenz-Ultraschall (30 / 45MHZ) Maus

Congenital heart defects (CHDs) are the most common cause of childhood morbidity and early mortality. Prenatal detection&#160;of the underlying molecular ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, die Struktur und die hämodynamischen Parameter des fetalen Kreislaufs mit Hilfe eines Hochfrequenz-Ultraschallsystems zu untersuchen. Diese Methode ermöglicht eine umfassende Phänotypisierung der kardialen Morphologie und der Flussindizes während der Entwicklung in Echtzeit und ermöglicht die Untersuchung von angeborenen Herzfehlern in experimentellen Umgebungen. Im Vergleich zu niederfrequenten Ultraschallsystemen bietet diese Technik eine höhere Empfindlichkeit und Auflösung, indem sie zweidimensionale dynamische Bilder mit hochfrequenten Bildraten erzeugt.Schalten Sie zunächst das Ultraschallbildgebungssystem und die Physiologieüberwachungseinheit ein. Schließen Sie dann den 30-45-Megahertz-Schallkopf an und platzieren Sie den entsprechenden Scankopf auf seiner Halterung in der Nähe der Bildgebungsplattform. Wählen Sie anschließend die Option des Herzmessprogramms aus.Legen Sie das Ultraschallgel kopfüber in den auf 37 Grad Celsius eingestellten Vorwärmbehälter. Bestätigen Sie dann das geeignete Schlauchsystem für die Anästhesie und überprüfen Sie den Sauerstoff- und Isoflurangehalt. Desinfizieren Sie die Bildgebungsplattf

fetal-mouse-cardiovascular-imaging-using-high-frequency-ultrasound

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Dieses Video zeigt die Verwendung eines schienengebundenen Hochfrequenz-Ultraschall-Sonde zur Echokardiographie auf einer narkotisierten Maus durchführen. Die Methoden beschreiben sowohl herkömmliche zweidimensionale und M-Modus Messungen der Herzfunktion neben neuere, leistungsfähigere Werkzeuge wie Farb-Doppler-, Dehnungs-Analyse, sowie allgemeine und gezielte Kontrast-Bildgebung.

Murine Echokardiographie und Ultraschall-Bildgebung

Fetalen und perinatalen Tod ist ein gemeinsames Merkmal bei der Untersuchung genetischer Veränderungen beeinflussen kardiale Entwicklung. Hochfrequenz-Ultraschall-Bildgebung hat 2-D-Auflösung verbessert und kann ausgezeichnete Informationen über frühe Herz-Entwicklung bieten und ist eine ideale Methode, um die Auswirkungen auf die kardiale Struktur und Funktion vor dem Tod zu erkennen.

Murine fetale Echokardiographie

Wir beschreiben Prüfung der fetalen Herzfunktion mit modernen funktionalen fetale Echokardiographie und Doppler-Ultraschall fetoplazentaren mit dem VisualSonics VEVO 2100 microultrasound in einer chirurgisch induzierten Modell der intrauterine fetale Wachstum Einschränkung in einem Kaninchen.

Fetale Echokardiographie und Pulsed-Wave-Doppler-Ultraschall in einem Kaninchen-Modell von Intrauterine Growth Restriction

Ultrahochfrequenz-Ultraschall ist ein leistungsstarkes Live-Imaging-Tool, um Herzrhythmusstörungen bei Kleintieren zu untersuchen. Seine Nichtinvasivität ermöglicht die Aufrechterhaltung der physiologischen Zustand der Embryonen. Hier zeigen wir die Verwendung von M-Mode-Ultraschall, um die Herzfrequenz von Embryonen bei E18.5 in utero zu messen.

In utero Messung der Herzfrequenz in Mouse von Nichtinvasive M-Mode-Echokardiographie

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Ultraschall Mikrobläschenkontrastmittel in Wohn-, isoliert späten Schwangerschaftsphase murine Embryonen zu injizieren. Dieses Verfahren ermöglicht die Untersuchung der Perfusion Parameter und vaskulärer molekularer Marker innerhalb des Embryos mit kontrastverstärkten hochfrequenten Ultraschall-Bildgebung.

Contrast Imaging in Maus Embryonen Verwendung von Hochfrequenz-Ultraschall

Mäuse sind weit verbreitet, Schwangerschafts Biologie zu studieren. Schwangerschaftsabbruch ist jedoch erforderlich für solche Studien, die longitudinale Untersuchungen entgegensteht und erfordert den Einsatz einer großen Anzahl von Tieren. Daher beschreiben wir eine nicht-invasive Technik der Hochfrequenz-Sonographie zur Früherkennung und Überwachung von Ereignissen nach der Implantation in die schwangere Maus.

Eine neue Verwendung des dreidimensionalen Hochfrequenz-Sonographie zur frühen Schwangerschaft Charakterisierung in der Maus

Hier beschreiben wir die Technik der Hochfrequenz-Ultraschall zur in Vivo Analyse der Feten bei Mäusen. Diese Methode ermöglicht das Follow-up von Föten und die Analyse der plazentaren Parameter sowie mütterlichen und fetalen Durchblutung während der gesamten Schwangerschaft.

Hochfrequenz-Ultraschall für die Analyse der fetalen und plazentaren Entwicklung In Vivo

Hochauflösender Ultraschall kann helfen, Experimente zu rationalisieren, die zeitgesteuerte trächtige Mäuse erfordern, indem er den Zustand der Schwangerschaft, das Gestationsalter und die Schwangerschaftsverluste bestimmt. Hier wird ein Protokoll vorgestellt, um Methoden zur Beurteilung von Mäuseschwangerschaften sowie potenziellen Fallstricken (Bildartefakte) zu veranschaulichen, die eine Schwangerschaft nachahmen können.

Ist meine Maus schwanger? Hochfrequenz-Ultraschalluntersuchung

Das vorliegende Protokoll beschreibt die echokardiographische Beurteilung der linksventrikulären Morphologie, Funktion und des koronaren Blutflusses bei 7 Tage alten neugeborenen Mäusen.

Echokardiographische Charakterisierung der linksventrikulären Struktur, Funktion und Koronarfluss bei neugeborenen Mäusen

Der ultraschnelle Dopplerultraschall (UFUS) mit hoher räumlicher Auflösung (100 μm) und Sensitivität stellt eine geeignete nichtinvasive Bildgebungsmodalität dar, um einen umfassenden qualitativen Überblick über das Lebergefäßsystem zu erhalten. UFUS erleichtert auch quantitative Messungen des Mikrovaskulatursystems und zielt darauf ab, unser Verständnis der Mechanismen von Gefäßerkrankungen zu verbessern.

Bildgebung und Quantifizierung des hepatischen Gefäßsystems von Mäusen mittels ultraschnellem Doppler-Ultraschall

Erfahren Sie die Hochfrequenz-Ultraschallbildgebung fetaler Mäuse mit 30-45 MHz Transducer für kardiologische Entwicklungsstudien. Diese nicht-invasive Methode ermöglicht Echtzeit-Echokardiografie zur Analyse angeborener Herzfehler.

Fetale kardiovaskuläre Bildgebung mit einem Hochfrequenz-Ultraschall (30 / 45MHZ) Maus

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