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Die Autoren möchte Buckwalter Labor (vor allem Dr. Todd Peterson) für die Bereitstellung der Maus-Modell und die dMCAO und Schein-Operationen durchführen. Darüber hinaus möchten wir danken Thomas Liguori aus Invicro für technische Unterstützung mit VivoQuant Bildanalyse-Software, Dr. Tim Doyle, Dr. Laura Pisani, Dr. Frezghi Habte aus das SCi3 Tier imaging-Anlage an der Stanford University für ihre Ratschläge und Unterstützung bei der Entwicklung dieses bildgebenden Protokoll und die Radiochemie-Anlage (vor allem Dr. Jun Park) für ihre Hilfe mit der Synthese von [11C] DPA-713.

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Die Autoren erklären keine Interessenkonflikte.

Die vorgestellte Protokoll beschreibt eine Methode zur Quantifizierung von Neuroinflammation in dMCAO und Sham Mäuse mit [11C] DPA-713-PET. Bestreiten-PET ist der am häufigsten untersuchten bildgebenden Biomarker zur Visualisierung und Neuroinflammation in Vivo bis heute messen. Bestreiten Ausdruck ist hochreguliert auf Gliazellen im Gehirn während einer Entzündung der nicht invasiven Erkennung und Quantifizierung von Neuroinflammation bei schönem. Darüber hinaus ist es eine höchst übersetzbar Technik, so dass es ein wertvolles Werkzeug in der klinischen und präklinischen Forschung. Dieses Protokoll und repräsentative Ergebnisse unterstreichen die Eignung mit [11C] DPA-713 PET zu erkennen und zu überwachen, schwere Veränderungen bei Schlaganfall und anderen neurologischen Störungen in Vivo.
In dieser Studie wurde die dMCAO Operation mit 3-Monate-alten C57BL/6 weiblichen Mäusen durchgeführt. Dieses Modell wurde gewählt, da es ein hoch reproduzierbare Infarkt beschränkt auf somatosensorischen Cortex, die Modellcharakter für die permanente fokale Ischämie mit geringer Variabilität im Vergleich zu anderen Modellen des Schlaganfalls (z. B. mittlere zerebrale arterielle hervorruft Okklusion (MCAO)-Filament-Methode)14. PET-Bildgebung der Schlaganfall-Modelle hat den Vorteil, die eine interne Referenz-Region im Gehirn für jedes Tier mit ROIs innerhalb der kontralateralen Hemisphäre enthalten. Da gibt es einige Entzündungen, dass Ergebnisse aus der Chirurgie allein, es wichtig ist, gehören Mäuse, die Farce in das Design der Studie, wobei operiert Kraniotomie und Manipulation der Hirnhaut ohne Arterie Okklusion durchgeführt wurde. Kraniotomie allein führt zu Störungen an der zugrunde liegenden neuronalen Gewebe und Krankheitserreger zu Immunreaktionen unabhängig vom Takt20. Einige Entzündungen nach Schein Chirurgie auszugehen ist und parallel zur dMCAO des Signals durch Operation allein auszuschließen bewertet werden sollen. Um zu vermeiden, einschließlich Entzündung infolge der Operation ohne Schlaganfall in dMCAO Kohortenanalyse, muss MR-Tomographie durchgeführt werden, um erfolgreiche Schlaganfall Chirurgie und Infarkt Entwicklung bestätigen. MRI bietet auch einen strukturellen Bezugsrahmen, der genaue zeichnen den Infarkt und kontralateralen ROIs unerlässlich ist. Darüber hinaus genaue Bildverarbeitung einschließlich Bild-Registrierung und ROI Definition sind erforderlich, um zuverlässige Quantifizierung zu gewährleisten.
Zusätzliche Einschränkungen müssen im Auge behalten werden bei der Arbeit mit c-11 mit der Bezeichnung Radiotracer für PET und Autoradiographie Studien. Es ist zwingend notwendig, um die kurze Halbwertszeit (20,33 min) von c-11, mit seiner Verwendung in der Regel beschränkt auf Forschungsinstitute mit vor-Ort-Zyklotron Zugang zu betrachten. Entsprechenden Radioaktivität Transportroute, Dosis Verwaltung und Akquisition Zeitpunkten müssen vorab mit einem vorbereiteten ausführlichen Plan des Workflows des Experiments ermittelt werden, so dass das Team schnell und effizient arbeiten kann. Die Gestaltung und Einrichtung dieser Studie worden angepasst Bildgebung 4 Mäuse gleichzeitig, die Datenausgabe erhältlich zu erhöhen, wenn ein c-11-Tracer mit umrissen. Wenn möglich, es empfiehlt sich, alle Mäuse kanülierte haben und in der Mitte ihrer CT-Scan mit der Zeit kommt die c-11-Tracer in der bildgebenden Einrichtung um minimale Radiotracer Verfall vor der Injektion zu gewährleisten. Dieses schrittweise Protokoll erfolgt auch am besten durch ein Team mit mindestens 3 Forscher, um schnelle Kanülierung, Dosis-Messung, Tracer Einspritzung, PET-Scanning und Gehirn-Schnitt vor erheblichen radioaktiven Zerfall zu ermöglichen. Es erfordert zwei Menschen, die Einleitung der PET-Scan und Injektion von alle 4 Mäuse gleichzeitig durchzuführen. Der Grund für den Beginn der PET-Übernahme kurz vor Injektion besteht darin, dass die Pharmakokinetik und die Dynamik der tracerverteilung im Blut und Regionen von Interesse genau und vollständig erfasst werden. Viele Schritte erfordern energische Ausbildung und Praxis zum reibungslosen Ablauf des Experiments zu gewährleisten. Dieses Protokoll ist insbesondere abhängig von erfolgreichen Schweif Vene Kanülierung der C57BL/6 Mäusen, die durch dunkle Haare auf ihren Schwänzen schwierig sein kann, und möglicherweise schwieriger geworden, nach Schlaganfall aufgetreten ist oder wenn die gleichen Mäuse zu mehreren Zeitpunkten imaging .
Ein weiterer Aspekt für PET-Bildgebung beinhaltet sorgfältige Erfassung der Radiotracer Dosis und Restmüll Aktivität Messungen, einschließlich den genauen Zeitpunkt der Messung. Dies ist wichtig für die genaue Verfall Korrektur der injizierten Dosis zum Zeitpunkt des Scans und wird verwendet, um eine genaue Messung der Tracer-Aufnahme (z. B. % ID/g) für jede ROI zu erzielen. Es ist zwingend notwendig, um die genaue Menge an Radioaktivität kennen, die zum Zeitpunkt des Scannens um genaue Bildanalyse zu gewährleisten in jeder Maus vorhanden war. Daher ist es ratsam, die Uhren auf dem Scanner Computer und dosiseichgerät um Fehler zu vermeiden, bei Verwendung von kurzlebigen Isotopen wie c-11 zu synchronisieren.
Genaue Quantifizierung der PET-Bild kann auch durch die Genauigkeit des Scanners und Set-up beschränkt werden. Daher um genaue Quantifizierung der PET/CT Bilder zu gewährleisten, ist es wichtig, die Durchführung von Qualitätskontrollen für die CT und PET-Komponenten des Scanners. CT Qualitätskontrollen gehören x-ray Source Klimaanlage, hell/dunkel und Center off Set Kalibrierungen. Diese Kalibrierungen Messen und für Systemgeräusche und muss korrekt durchgeführt vor dem Erwerb durch den Scannerhersteller empfohlen. Kalibrierungen sollte auch für die PET-Scanner durchgeführt werden. Dies umfasst in der Regel Scannen einen "standard / PET Phantom" Scan, mit einer bekannten Konzentration von Radioaktivität. Wenn Sie den Standard vorbereiten, empfiehlt es sich, verwenden die gleichen Radioisotopen verwendet in der Studie, eine vergleichbare, die Dosis an, die zu einem einzigen Mausklick in einem Volumen ähnlich wie der Körper eine Maus, und der gleichen Parameter als tierische Bildgebung verabreicht. Eine 20 mL Spritze mit Wasser verdünnt Radiotracer gefüllt ist mit die daraus resultierenden PET imaging Ergebnisse zur Berechnung eines Korrekturfaktors basierend auf die tatsächliche Dosis gemessen an der Kalibrierung-Detektor für den Standard in diesem Protokoll verwendet. Das Korrektur-Verhältnis kann auf die Bilddaten erwarb das Experiment dazu genaue Quantifizierung der Tracer-Aufnahme in Regionen von Interesse in PET-Bildern angewendet werden. Diese Konten für die Positronen-Palette des Radionuklids zusätzlich unter Berücksichtigung jeder Hintergrundaktivität auf den Tag des Scannens. Als die dosiseichgerät fester Bestandteil der Generation dieser Korrekturfaktor ist, ist es unerlässlich, dass dieses Gerät auch regelmäßig nach den Herstellerrichtlinien kalibriert ist.
Bei der Durchführung von ex-Vivo Autoradiographie ist es wichtig, wählen Sie einen optimalen Zeitpunkt für Euthanasie nach Injektion, hohe Signal-zu-Hintergrund in Region(en) von Interesse. Dreißig Minuten nach der Injektion gewählt [11C] DPA-713 Autoradiographie mit Daten, die während der dynamischen PET-Bildgebung -d. h. die in Vivo dynamische TAC als Leitfaden, auch unter Berücksichtigung der kurzen Halbwertszeit von c-11 und der Zeit beteiligt, Abschnitt und setzen das Hirngewebe nach der Extraktion. Vor diesem Hintergrund [11C] DPA-713 Autoradiographie muss durchgeführt werden, auf eine separate Kohorte von Mäusen erlauben für die Injektion von einer höheren [11C] DPA-713-Dosis und eine 30-minütige Zeit-Punkt für Durchblutung und Euthanasie in Narkose. Durchführung einer kleinen in Vivo wird PET Pilotstudie mit einer 3-4-Mäuse vor der Durchführung von ex-Vivo Autoradiographie zur Bestimmung des optimalen Zeitpunkt für Autoradiographie hilfreich sein. Eine weitere Überlegung für ex-Vivo Autoradiographie ist ob die Mäuse nach der Injektion zu erholen oder halten sie betäubt bis Euthanasie. Halten sie betäubt imitiert die Bedingungen des Scans und sorgt für die Radiotracer Verteilung oder Ausscheidung Kinetik sind durch Wiederherstellung nicht verändert. Darüber hinaus verhindert dies zusätzlichen Druck auf die Mäuse durch die Vermeidung von Erholung und nachfolgende Induktion. Schließlich wäre eine sinnvolle Ergänzung des ex-Vivo -Protokolls in den Gehirnscheiben für Autoradiographie über immunhistochemische Färbung (nach radioaktiven Zerfall) um ein hochauflösendes Bild der Infarkt Lage zu erzeugen verwendet regionale Schadensbewertung und Volumen.
Gibt es Einschränkungen bei der Verwendung eines Tracers c 11 basiert, kann dieses Protokoll leicht für die Verwendung mit einer f-18 (Halbwertszeit von 109,77 min) basierte bestreiten Tracer für Standorte ohne eine vor-Ort-Zyklotron möglicherweise geändert werden. Dieses Protokoll beschreibt darüber hinaus die Verwendung einer 4-Maus-imaging-Aufstellung. Obwohl diese Hochdurchsatz-Methode optimal ist, wenn eine c-11-Tracer verwenden, kann dieses Protokoll auch für diejenigen mit Mausklick imaging Betten geändert werden. Sorgfältige Planung und konsequente Erziehung in die in diesem Protokoll beschriebenen Techniken führt zu der Generation von einer Fülle von Daten mit [11C] DPA-713, die leicht angewendet werden können, die Rolle des Neuroinflammation in der Manifestation der Krankheit zu untersuchen und Progression in andere Nager-Modelle von neurologischen Erkrankungen. Darüber hinaus könnte diese Technik verwendet werden, die in Vivo -Reaktion auf immunmodulatorische Therapie richtet sich an Mikroglia/Makrophagen zu beurteilen.

Der Schlaganfall ist die fünfthäufigste Todesursache und eine der Hauptursachen der Behinderung in die Vereinigten Staaten1. Ischämischen Schlaganfall stellt eine überwältigende Mehrheit dieser Fälle (~ 87 %), auftritt, wenn lokalisierte des Blutflusses zum Gehirn (z. B. durch ein Blutgerinnsel oder fetthaltige Ablagerung Störung). Versorgung mit Sauerstoff und Nährstoff in die betroffenen Gebiete sind gekürzt und eine komplexe Kaskade pathologische neuronale Todesfolge innerhalb des Kerns der Schlaganfall (Hirninfarkt) zusätzlich zu den umliegenden Gebieten eingeleitet. Neuroinflammation ist eine entscheidende Komponente in den Weg zu dieser führen, mit beiden resident Gehirn Immunzellen (Mikroglia) und peripheren Immunzellen (Neutrophile, T-Zellen, B-Zellen und Monozyten/Makrophagen) zu infiltrieren soll dazu beitragen zerstörerische Kaskade2,3. Aktivierte Mikroglia und Makrophagen stehen im Mittelpunkt dieses schwere Reaktion mit Berichte über schädliche und vorteilhafte Wirkungen nach ischämischen Schlaganfall2. Daher ist es unerlässlich, den in-Vivo -Beitrag dieser Zellen nach Schlaganfall zu bewerten.
PET ist eine leistungsstarke 3-dimensionale Molekulare bildgebende Verfahren, die ermöglicht die Visualisierung der biologischen Prozesse in Vivo durch den Einsatz von bestimmten Molekülen, beschriftet mit Positronen (β +) emittierende Radionuklide wie 11C, 13N, 15O und 18F. Diese nicht-invasive Methode hat viele Vorteile gegenüber Ex-Vivo -Methoden (z. B. Immunohistochemistry) wie es den Erwerb von molekularen Informationen in Echtzeit in lebendigen intakten Subjekten ermöglicht und longitudinalen Untersuchung ermöglicht. Haustier Bildgebung bestreiten, ein Marker für aktivierte Mikroglia und peripheren myeloid Abstammung Zellen stellt ein Mittel zur Quantifizierung und angeborene immun-Zell-Reaktionen innerhalb des Körpers zu verfolgen und kann genutzt werden, um Entzündungen nach Schlaganfall und Reaktion auf therapeutische bewerten Interventionen. Bestreiten, früher bekannt als die peripheren Typ Benzodiazepin-Rezeptor ist ein 18 kDa-Protein, die geglaubt wird, um eine Rolle in Cholesterin-Transport und die Synthese von neurosteroiden4. Darüber hinaus Anhaltspunkte dafür, dass Neuroinflammation und neuronale überleben5,6, mit Berichten über erhöhte Ausdruck in vielen neurologischen Erkrankungen mit Entzündungen einschließlich Schlaganfall7bestreiten beteiligt ist, Demenz-8, der Parkinson-Krankheit9 und Multiple Sklerose10. Bestreiten befindet sich im äußeren mitochondrialen Membranen und drückt sich besonders in der Peripherie, insbesondere Steroid zugehörigen Gewebe (z. B. Drüsen) und mit Zwischenebenen in Herz, Nieren und Lunge10gesehen. Aber im gesunden Gehirn, bestreiten Niveaus sind niedrig und beschränkt sich hauptsächlich auf Glia6,11. Bei der neuronalen Verletzung, wie im Takt bestreiten Ebenen in das zentrale Nervensystem (ZNS) deutlich erhöhen. Diese beobachteten Hochregulation der bestreiten kann Bild Neuroinflammation in vivo mit Ausdruck Ebenen bietet eine genaue Anzeige der Entzündung schwere genutzt werden. Daher ist das Ziel dieser Methode genau Quantifizierung derin Vivo -Beitrags von Neuroinflammation in einem Mausmodell des ischämischen Schlaganfalls mit bestreiten-PET.
Mehreren bestreiten Tracer wurden entwickelt für die PET-Bildgebung des Neuroinflammation. Hier bestreiten-PET-Bildgebung wird beschrieben mit [11C] DPA-71312, eine viel versprechende zweite Generation bestreiten Tracer, die gezeigt hat, dass verstärkte Signal gegenüber Rauschen und unspezifischen Bindung als die historisch verwendet [11C] zu senken PK11195 13 . Als Beispiel wurde die dMCAO-Maus-Modell der Schlaganfall für diese Methode14gewählt. Dieses Modell beinhaltet zeitliche Kraniotomie und dauerhafte Unterbindung der distale mittlere zerebrale Arterie, wodurch fokale Ischämie des somatosensorischen Kortex. Dies ist vorteilhaft in der präklinischen Schlaganfall-Forschung durch die hohe Reproduzierbarkeit der ischämischen Schäden und niedrige Sterblichkeitsraten verbunden mit diesem Modell. Bis heute haben bestreiten-PET bildgebende Studien noch im dMCAO Nagetier Modell gemeldet werden. Jedoch frühere PET bildgebenden Studien mit dem mittleren zerebralen Arterie Okklusion (MCAO)-Modell, eine schwerer und Variable Schlaganfall-Modell bei Mäusen und Ratten, berichtet bestreiten Ausdruck, von Tag 3 und Peak ca. 7. Tag nach Schlaganfall15zu erhöhen, 16,17,18. Daher führten wir PET imaging 6 Tage Post-dMCAO mit erhöhten bestreiten Ausdruck zusammenfallen. [11C] DPA-713-Aufnahme im Gehirn wurde in ipsilateral (infarzierte) bewertet und kontralateralen Hemisphäre. Bestreiten-PET wurde mit strukturellen MRT ermöglicht präzise Abgrenzung der Infarkt und kontralateralen Regionen von Interesse (ROIs) kombiniert. Hier beschreiben wir eine Atlas-basierte und ein MRT-gesteuerte ROI-Ansatz [11C] DPA-713 Aufnahme berechnen. Radiotracer Aufnahme in Milz wurde auch bewertet, um periphere Ebenen der Entzündung zwischen Gruppen zu untersuchen. Diese Methode hat das Potenzial, kritische Einblicke in die raumzeitliche Dynamik und die Rolle der spezifischen Neuroimmune Interaktionen in Schlaganfall und anderen neurologischen Erkrankungen.

<table><tbody><tr><td>Inveon PET/CT-Scanner</td><td>Siemens</td><td>Version 4.2</td><td></td></tr><tr><td>MRT-Scanner</td><td>Varian</td><td></td><td>7 Telsa</td></tr><tr><td>ParaVision Software</td><td>Bruker</td><td>Version 6.0.1</td><td>MRT-Bediensoftware</td></tr><tr><td>VivoQuant Software</td><td>InVicro</td><td>Version 2.5</td><td>Bildanalyse-Software</td></tr><tr><td>Inveon Research Workspace Software</td><td>Siemens</td><td>Version 4.2</td><td>Scanner-Betriebssoftware. Enthält microQView, die Software für die Nachbearbeitung</td></tr><tr><td>Dosiskalibrator</td><td>Capintech</td><td></td><td>CRC-15 PET</td></tr><tr><td>Typhoon Phosphor Imager 9410</td><td>GE Healthcare</td><td>8149-30-9410</td><td></td></tr><tr><td>Schmetterlingskatheter</td><td>SAI Infusion Technologies</td><td>BFL-24</td><td>27,5 G Nadel</td></tr><tr><td>1 ml Spritzen</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insulinspritzen</td><td>BD</td><td>329461</td><td>0,5 mL Insulinspritzen mit Nadel</td></tr><tr><td>20 mL Spritze&nbsp;</td><td>VWR</td><td>BD302831</td><td>BD Spritze Slip Tip Graduierter</td></tr><tr><td>Gewebekleber</td><td>Santa Cruz Animal Health</td><td>sc-361931</td><td>3 mL</td></tr><tr><td>Wärmelampe</td><td>Fluker</td><td>27002</td><td>5,5" Reptilien-Wärmelampe mit Klemme und Schalter</td></tr><tr><td>0,9% sterile Kochsalzlösung</td><td>Pfizer</td><td>00409-4888-10</td><td>0,9% Natriumchlorid zur Injektion, 10 mL</td></tr><tr><td>Augenschmiermittel</td><td>Watson Rugby</td><td>PV926977</td><td>Künstliche Tränen Gleitmittel Augensalbe, 1/8 oz</td></tr><tr><td>Chux saugfähige Blätter</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1420662</td><td>Einweg-Saugpolster</td></tr><tr><td>Iris Schere</td><td>World Precision Instruments</td><td>503708-12</td><td>11,5 cm, gerade, 12er-Pack</td></tr><tr><td>Chirurgisches Klebeband</td><td>3M Durapore</td><td>1538-0</td><td>1/2" x 10 Yard Rolle, Seide, hypoallergene</td></tr><tr><td>Maus PET-Bett</td><td>Im Haus</td><td></td><td>4 Maus PET Bett</td></tr><tr><td>Feuerzeug</td><td>Bic</td><td>UDP2WMDC</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Henry Schein</td><td>NDC 11695-6776-2</td><td>Isothesie, Inhalationsanästhetikum, 250 mL</td></tr><tr><td>Sauerstoff</td><td>Praxiar</td><td>UN1072</td><td>Druckgas</td></tr><tr><td>Autoradiographie-Kassette</td><td>Cole Palmer</td><td>EW-21700-34</td><td>Aluminium, 8" x 10"</td></tr> <tr><td>Autoradiographie-Film</td><td>GE Life Sciences</td><td>28-9564-78</td><td>Lagerung Phosphor Sieb BAS-IP SR 2025 E Super Resolution, 20 & x 25 cm, nur Bildschirm</td></tr><tr><td>Mikrotomklingen</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>30-508-35</td><td>MB35 Premier Einweg, 34 Grad Schnittwinkel</td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Microm</td><td></td><td>HM 550</td></tr><tr><td>Objektträger</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td>Superfrost & Handel Plus Objektträger</td></tr><tr><td>OCT flüssig</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Formulierung von wasserlöslichen Glykolen und Harzen für Kryostatenschnitte bei Temperaturen von -10°; C (14°; F) und darunter</td></tr><tr><td>Gefrierformen</td><td>Poly sciences</td><td>18646A-1</td><td>Einweg-Paraffinformen</td></tr><tr><td>Saran wrap</td><td>Saran</td><td>25700001300</td><td></td></tr><tr><td>Desinfektionsmittel</td><td>Virkon S</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

pet-bildgebung des neuroinflammation mit [11c] dpa-713 in einem mausmodell des ischämischen schlaganfalls

PET Imaging of Neuroinflammation Using [11C]DPA-713 in a Mouse Model of Ischemic Stroke

Neuroinflammation ist zentral für die pathologischen Kaskade nach ischämischen Schlaganfall. Nicht-invasive molekularen bildgebende Verfahren haben das Potenzial, kritische Einblicke in die zeitliche Dynamik und die Rolle von bestimmten Neuroimmune Interaktionen im Takt. Insbesondere stellt die Positronen-Emissions-Tomographie (PET) Bildgebung der Nyrianer Protein 18 kDa (bestreiten), ein Marker für aktivierte Mikroglia und peripheren myeloid Abstammung Zellen Mittel zum erkennen und verfolgen Neuroinflammation in Vivo. Hier präsentieren wir eine Methode, um genau quantifizieren Neuroinflammation mit [11C]N,N-Diethyl-2-[2-(4-methoxyphenyl)-5,7-dimethylpyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl]acetamide ([11C] DPA-713), eine viel versprechende zweite Generation bestreiten-PET Radiotracer distale mittlere zerebrale Arterie Okklusion (dMCAO) im Vergleich zum Schein betrieben Mäuse. MRI wurde durchgeführt 2 Tage Post-dMCAO Chirurgie bestätigen Schlaganfall und Infarkt Lage und Volumen zu definieren. PET/Computertomographie Computertomographie (CT) Bildgebung erfolgte 6 Tage Post-dMCAO, die Spitze Anstieg bestreiten nach Schlaganfall zu erfassen. Quantifizierung der PET-Bildern wurde durchgeführt, um die Aufnahme von [11C] bewerten DPA-713 in Gehirn und Milz von Mäusen, dMCAO und Sham, zentrale und periphere Ebenen der Entzündung zu beurteilen. In vivo [11C] DPA-713 Gehirn Aufnahme wurde mit ex-Vivo Autoradiographie bestätigt.

Mäuse wurden MRT um zu überprüfen, erfolgreiche Schlaganfall und [11C] DPA-713 PET erfolgte durch 4 Mäuse gleichzeitig scannen. PET, CT und MRT-Bilder waren Co registrierte vor manuell Zeichnung Gehirn ROIs und durchführen der halbautomatischen Split Gehirn Atlas Analyse untersuchen Tracer Aufnahme in ipsilateralen und kontralateralen Regionen (Abbildung 2).
PET/CT Bilder und Aktivität Zeitkurven (TAC-Radiotracer Tätigkeit als Funktion der Zeit) zeigen erhöhte [11C] DPA-713-Aufnahme in der ipsilateralen versus kontralateralen Hemisphäre(Abbildung 3). Quantifizierung der dynamischen PET Gehirn Bilder, mit summiert Daten von 50-60 min, zeigten eine signifikante Zunahme der Tracer Aufnahme (% ID/g) in der ipsilateralen (infarzierte) im Vergleich zu der kontralateralen Hemisphäre in dMCAO, aber nicht im Schein Mäuse mit dem manuell gezeichneten ROI-Ansatz (Abbildung 3B). Erhöhte Aufnahme wurde auch in der ipsilateralen Hemisphäre zwischen dMCAO und Sham Mäusen beobachtet. Keine signifikanten Unterschiede zwischen ipsilateral und kontralateralen Hemisphäre wurden beobachtet mit dem Atlas-Ansatz, wahrscheinlich aufgrund der Atlas ROIs ist größer als die Größe der Infarkt (in der Regel beschränkt auf somatosensorischen Cortex), daher Verdünnen der Signal. Jedoch wurde insgesamt erhöhte Aufnahme in dMCAO im Vergleich zum Schein für alle ROIs beobachtet, die deckt sich mit früheren Berichten mit MCAO modellmäusen zeigen erhöhte bestreiten Ausdruck in Regionen außerhalb der Infarkt-19. Ipsilateral/kontralateralen Verhältnisse wurden in der dMCAO versus Schein Mäuse mit beiden Ansätzen erhöht; Allerdings war dieser Unterschied nur signifikant in der Hirnrinde, die mit dem Gehirn-Atlas-Ansatz durch größere Varianz in der ROI-Ansatz. Dies kann durch Erhöhen der Anzahl von Mäusen in jeder Gruppe überwunden werden. Quantifizierung der [11C] DPA-713-Aufnahme in Milz zeigte keine signifikanten Unterschiede zwischen den Gruppen (Abbildung 4).
Gehirn dMCAO Maus PET imaging Ergebnisse wurden von ex-Vivo hochauflösende digitale Autoradiographie (Abbildung 5) bestätigt. Erhöhte [11C] DPA-713 Aufnahme verzeichneten infarzierte Gewebe mit vernachlässigbar Signal im umgebenden gesunden Hirngewebe. Quantifizierung von diesen Bildern offenbart ipsilateral kontralateralen Verhältnis von 1,4 bis hin zu 2,09 bei dMCAO Mäusen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig1.jpg"> Abbildung 1: PET-Scanner und Arbeitsbereich einrichten. Alle Arbeitsbereiche wurden in absorbierende Schutzpolster erstelle ich eine sterile Umgebung abgedeckt. (A) nach Kalibrierungen sicherte sich ein 3D-gedruckten Maus Bett, ausgestattet für imaging-4 Mäuse gleichzeitig in den Scanner und Nase Kegel für alle 4 Mäuse, die mit der Narkose verbunden. (B) notwendige Ausrüstung für PET-Bildgebung wurden im Voraus vorbereitet, einschließlich Kochsalzlösung gefüllten 27,5 G Katheter, Auge Schmiermittel, Ethanol Tupfer, Wärmelampen, chirurgische Band, Gewebekleber, 0,5 mL Dosis Spritzen, Schere und ein Feuerzeug. (C) Platz für Radiotracer Injektion, Saline Flush Spritzen und Scheren auf der Rückseite des Scanners. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig2.jpg"> Abbildung 2: Ipsilateral/kontralateralen ROI und rechts/links-Split Hemisphäre des Gehirns Atlas PET Bild Analyseprozess. Bildanalyse, dass Software verwendet wurde, um festzustellen, die Tracer-Aufnahme in Regionen von Interesse (ROIs) manuell mit ipsilateral und kontralateralen gezeichnet ROIs und eine halbautomatische 3D Brain Atlas-Ansatz. Automatische 3D PET/CT-Registrierung wurde durchgeführt, gefolgt von manuellen Registrierung des Gehirns MRI innerhalb der entsprechenden Maus-Schädel in der CT-Bild definiert. Die 3D ROI-Tool wurde verwendet, um manuell zeichnen ipsilateral (rot) und kontralateralen (grün) ROIs der Infarkt auf die MRT als Referenz verwenden. Für den Split-Brain-Ansatz war die 3D-Maus links/rechts-Split Brain Atlas geladen und innerhalb des Schädels ausgestattet, definiert durch das CT-Bild. Gehirn-ROIs zur Quantifizierung in diesem 3D Maus-Gehirn-Atlas enthalten Links Cortex (dunkelgrau), linken Hippocampus (Kornblume blau) Links Striatum (Deep Pink), rechts Cortex (Tomatenrot), rechten Hippocampus (grün) und rechts Striatium (Cyan). Die Aufnahme von [11C] DPA-713 in jeder Region wurde im nCi/cc erhalten und wurde anschließend durch die Normalisierung der Verfall korrigiert Dosis Zeitpunkt des Scannens für jede Maus zu %ID/g umgewandelt. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig3.jpg"> Abbildung 3 : Repräsentative In Vivo [11C] DPA-713 Gehirn Aufnahme in DMCAO und Sham Mäuse. (A) dynamische PET/CT Bilder und TAC zeigen erhöhte [11C] DPA-713-Aufnahme in der ipsilateralen Kortex von Mäusen, die DMCAO unterzogen (n = 3) und einen leichten Anstieg für Sham (n = 3) betrieben Mäuse mit DMCAO Mäuse zeigen deutlich größer Kontrast in Prozentsatz injizierte Dosis zwischen dem Infarkt und kontralateralen Seite des Gehirns (%ID/g). (B) PET Quantifizierung (50-60 min summiert) ergab signifikant erhöhte Aufnahme in der ipsilateralen ROI mit dem ROI-Ansatz und im Kortex (Ctx) mit dem Split-Brain Atlas-Ansatz. Im Hippocampus (HC) oder im Striatum (Str) wurden keine signifikanten Unterschiede gefunden. Erhöhte ipsilateral zur kontralateralen Verhältnisse galten sowohl Analyse nähert sich aber war nur statistisch signifikant in der Ctx mit dem Gehirn-Atlas-Ansatz. * (p &lt; 0,05), *** (p &lt; 0,001) <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig4v2.jpg"> Abbildung 4: Vertreter In Vivo [11C] DPA-713 Milz Aufnahme in dMCAO und Sham Mäuse. (A) [11C] DPA-713 dynamische PET/CT Bilder zeigt Milz ROIs in dMCAO (n = 3) und Sham (n = 3) Mäuse. (B) Quantitative Ergebnisse zeigen keine signifikanten Ergebnisse Milz Aufnahme zwischen dMCAO und Sham Mäusen. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig4v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig5v2.jpg"> Abbildung 5 : Vertreter Autoradiographie Ergebnisse. Digitale Autoradiographie Bilder zeigen erhöhte [11C] DPA-713-Aufnahme in der ipsilateralen im Vergleich zur kontralateralen Hemisphäre. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig5v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

Positronen-Emissions-Tomographie (PET) Bildgebung der Nyrianer Protein 18 kDa (bestreiten) bietet eine nicht-invasive Möglichkeit, die dynamische Rolle der Neuroinflammation in die Entwicklung und das Fortschreiten von Gehirnerkrankungen zu visualisieren. Dieses Protokoll beschreibt bestreiten-PET und ex-Vivo Autoradiographie um Neuroinflammation in einem Mausmodell der ischämischen Schlaganfall zu erkennen.

PET-Bildgebung des Neuroinflammation mit [11C] DPA-713 in einem Mausmodell des ischämischen Schlaganfalls

Neuroinflammation is central to the pathological cascade following ischemic stroke. Non-invasive molecular imaging methods have the potential to provide ...

Das übergeordnete Ziel dieses Experiments ist es, die räumliche Verteilung und das Ausmaß der Neuroinflammation in einem Mausmodell des ischämischen Schlaganfalls mittels TSPO-PET- und MR-Bildgebung genau zu quantifizieren und diese in vivo Befunde mittels ex vivo Autoradiographie zu validieren. Ich freue mich sehr, Ihnen diese Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Verwendung der PET-Bildgebung zur Visualisierung von Neuroinflammation bei einem lebenden Probanden vorstellen zu können. Hier verwenden wir ein Mausmodell eines Strichs als Beispiel.Nun, warum sollten Sie diese Technik verwenden? Dafür gibt es mehrere Gründe. Die erste ist, dass Neuroinflammation, bei der es sich nur um eine Entzündung handelt, die im zentralen Nervensystem auftritt, als eng verbunden angesehen wird und wirklich vielen, vielen Gehirnerkrankungen zugrunde liegt, einschließlich Schlaganfall, aber auch Alzheimer-Krankheit, Multipler Sklerose, Parkinson und die Liste geht weiter.Es ist also unglaublich wichtig, dass wir diese Techniken haben, die es uns wirklich ermöglichen, diese biologischen Phänomene zu untersuchen. Zweitens bietet die PET-Bildgebung eine Reihe von Vorteilen gegenüber einigen der traditionelleren Techniken. Zum Beispiel beruhen die meisten dieser traditionellen Techniken stark auf der Verwendung von postmortalem Hirngewebe von Menschen und Mäusen, und obwohl sie eine Reihe wichtiger Erkenntnisse geliefert haben, sind diese Techniken von Natur aus statisch, was bedeutet, dass sie uns nur über einen Moment wirklich Informationen geben können.Da wir wissen, dass sowohl das Gehirn als auch das Immunsystem hochdynamisch sind, macht es Sinn, dass wir eine Technik haben wollen, die es uns ermöglicht, diese molekularen Prozesse in lebenden, intakten Systemen, also in ihrer natürlichen Umgebung, in Echtzeit wirklich zu erfassen, und genau das macht die PET-Bildgebung. Hier zeigen wir Ihnen, wie wir einen bestimmten PET-Radiotracer, DPA-713, verwenden, von dem bekannt ist, dass er an das TSPO- oder Translokatorprotein bindet. Wir zeigen Ihnen konkret, wie wir ein Bild nicht nur in eine Maus, sondern in vier Mäuse gleichzeitig dynamisch injizieren, und warum das eine so große Sache ist, ist, dass es wirklich hilft, die Anzahl der Mäuse zu erhöhen, die Sie an einem bestimmten Tag mit der gleichen Charge Tracer abbilden können, wodurch Ihre Experimente wirklich rationalisiert werden.Dies ist zwar eine technische Herausforderung, aber ich hoffe wirklich, dass dieses Video Ihnen helfen kann, dies in Ihrem eigenen Labor durchzuführen. Beginnen Sie damit, die anästhesierten Mäuse in Bauchlage auf dem PET/CT-Scannerbett zu positionieren und sicherzustellen, dass sie gerade und sicher in den Nasenkegeln sitzen. Kleben Sie den Kopf und den Körper jeder Maus mit weichem chirurgischem Klebeband an das Bett und stellen Sie sicher, dass die Atmung nicht durch die Platzierung des Klebebandes eingeschränkt wird.Sobald die Tiere sicher im Bett sind und die Atmung stabil ist, schalten Sie das Laser-Fadenkreuz ein und bewegen Sie das Scanbett so, dass es mit dem Gehirn aller vier Mäuse ausgerichtet ist. Bringen Sie das Scannerbett mit den Gehirnen der Mäuse so nah wie möglich an die Mitte des Sichtfeldes in die Aufnahmeposition. Erfassen Sie ein Scout-Ansichtsbild der Mäuse, um ihre Position zu überprüfen, und passen Sie die Position an, indem Sie bei Bedarf das Sichtfeldfeld auf der Benutzeroberfläche ziehen.Klicken Sie abschließend in der Scannersoftware auf Workflow starten, um den CT-Scan zu starten, und stellen Sie sicher, dass Sie die Option Interaktive Benutzeraufforderungen anzeigen auswählen, damit der PET-Scan vor der Tracerinjektion manuell gestartet werden kann. Sobald die Mäuse automatisch von CT zu PET übergehen, richten Sie die Rückseite des Scanners für die Radiotracer-Injektion ein. Legen Sie eine schützende, saugfähige Polsterung auf eine Leiste und stellen Sie sicher, dass Schere und Feuerzeug griffbereit sind.Schneiden Sie den versiegelten Katheterschlauch mit einer Schere ab. Überprüfen Sie, ob die Katheterleitungen frei von Blasen sind, und bestätigen Sie, dass sich die Kanüle noch in der Vene befindet, indem Sie eine Kochsalzspülung von 10 bis 20 Mikrolitern durchführen, und laden Sie dann zuvor gemessene Dosisspritzen in jeden der vier Katheter, wobei Sie verfolgen, welche Dosis jeder Maus verabreicht wurde. Klicken Sie auf OK, wenn der PET-Scan startbereit ist, während gleichzeitig ein 10-Sekunden-Timer gestartet wird.Lassen Sie zwei Forscher mit den Dosisspritzen in der Hand an der Rückseite des Scanners sitzen, um alle vier Mäuse gleichzeitig zu injizieren, wenn der Timer Null erreicht. Spülen Sie jeden Katheter mit 50 bis 100 Mikrolitern Kochsalzlösung, um sicherzustellen, dass die volle Dosis in die Schwanzvene gelangt, und verschließen Sie den Schlauch erneut mit einem Feuerzeug. Messen Sie anschließend die Dosisspritzen mit einem Dosiskalibrator, um einen Restradioaktivitätswert zu erhalten.Notieren Sie sich die Werte und den Zeitpunkt, zu dem sie aufgezeichnet werden. Sobald der Scanvorgang abgeschlossen ist, bringen Sie das PET-Bett mit der horizontalen Home-Taste im Motion Control-Bedienfeld wieder in die ursprüngliche Position. Nehmen Sie die Mäuse aus dem Scanner und entfernen Sie vorsichtig den Katheter.Üben Sie vorsichtig Druck auf die Kanülenstelle aus, um übermäßige Blutungen zu vermeiden. Messen Sie dann die Restaktivität im Katheter mit einem Dosiskalibrator. Rekonstruieren Sie abschließend die Daten, indem Sie die Nachbearbeitungssoftware öffnen, die jeden Scan automatisch anhand der Histogrammdaten rekonstruiert, die aus der ersten Datei generiert wurden.Öffnen Sie für die PET-Analyse zunächst die Bildanalysesoftware, klicken Sie auf das Symbol "Daten öffnen", um das CT-Bild zu laden, und wählen Sie das Symbol "Daten anhängen" aus, um das dynamische PET zu laden. Führen Sie eine visuelle Qualitätskontrolle der Daten über den Zeitreihenoperator im Dropdown-Menü durch. Wählen Sie "Referenz" und "Global" aus, und wenden Sie ein entsprechendes Minimum und Maximum für die Farbskala an.Visualisieren Sie die dynamischen PET-Daten Bild für Bild, überprüfen Sie die Radioaktivitätsaufnahme und prüfen Sie auf Bewegungsstörungen innerhalb des Scans. Erstellen Sie dann mit der Funktion Arithmetik ein durchschnittliches PET-Bild. Wählen Sie "Ausgewählter Durchschnitt" aus, deaktivieren Sie "Referenz" und stellen Sie sicher, dass "Eingang 1", "Eingang 2" und "Eingang" ausgewählt sind, um einen Mittelwert aller PET-Rahmen zu erstellen.Gehen Sie zur Registerkarte Datenmanager und ziehen Sie das Durchschnittsbild an die Position Eingang 1, um die Visualisierung des PET-Signals anhand des durchschnittlichen PET-Bildes zu ermöglichen. Verteilen Sie dann die Farbskala neu, indem Sie auf die automatische Berechnung im Min/Max-Tool klicken. Registrieren Sie als Nächstes den CT in der durchschnittlichen PET-Datei mit der automatischen 3D-Funktion im Dropdown-Menü Reorientation Registration.Wählen Sie Ref und Input 1 aus, und wählen Sie Rigid, Fast, Input 1 to Ref registration. Überprüfen Sie die Registrierung visuell in allen drei Dimensionen und passen Sie sie bei Bedarf im Reiter Manuelles 3D mit den Funktionen Translation und Rotation manuell an. Wenn Sie mit der Registrierung zufrieden sind, wählen Sie Eingang 2 und Eingang und wenden Sie ihn auf alle PET-Rahmen an, indem Sie auf das Häkchen klicken.Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf die CT- und PET-Dateien in der DM und speichern Sie sie als RAW. Wählen Sie als Nächstes Zuschneiden aus dem Dropdown-Menü und ziehen Sie die Bildgrenzen, um den Kopf einer Maus jeweils unterhalb des Hirnstamms abzuschneiden. Richten Sie die PET- und CT-Bilder manuell neu aus, so dass der Schädel in allen Dimensionen gerade ist.Laden Sie das MRT-Bild für diese Maus mit der Schaltfläche Daten anhängen oben links auf der Benutzeroberfläche. Verschieben Sie das MR mit der manuellen 3D-Neuausrichtung und passen Sie es innerhalb des CT-Bildes an den Schädel an. Deaktivieren Sie als Nächstes die PET-Visualisierung, indem Sie sie auf der Registerkarte Visual Controller deaktivieren und nur den MR und den CT verwenden, um den Bereich of Interest oder ROI zu zeichnen.Klicken Sie im 3D-ROI-Tool auf die Schaltfläche ROI hinzufügen, um einen neuen ROI zu erstellen und ihn Infarct zu nennen. Wählen Sie das Spline-Werkzeug aus, klicken Sie mit der linken Maustaste, um den ROI-Rand zu zeichnen, und klicken Sie mit der rechten Maustaste, um ihn zu schließen. Erstellen Sie anschließend einen neuen ROI und kennzeichnen Sie ihn als kontralateral.Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf den Infarct ROI und wählen Sie Exportieren. Verschieben Sie dann den ROI an Position 2, Eingang 1, um die Visualisierung und manuelle Neuausrichtung des neuen ROI zu ermöglichen. Wenn nur Eingabe 1 ausgewählt ist, aktivieren Sie das Kontrollkästchen ROI und wählen Sie Nur anzeigen, um die Visualisierung des Infarkt-ROI zu ermöglichen, ohne ihn neu auszurichten.Wenden Sie im Menü "Neuausrichtungsregistrierung" mit der Operator-Funktion einen Links-Rechts-Flip an und verschieben Sie den neuen ROI manuell in den identischen Bereich auf der kontralateralen Seite. Wählen Sie dann den Operator Arithmetik aus und wenden Sie eine skalare Multiplikation von zwei auf den neuen ROI an, was eine unabhängige Quantifizierung der ROIs ermöglicht. Kehren Sie zum 3D-ROI-Tool zurück.Gehen Sie zur Registerkarte Experte und Experimentell und klicken Sie auf die Schaltfläche ROI importieren. Wählen Sie im Dialogfeld Eingabe 1 aus, um das neue Volume als kontralateralen ROI zu laden. Klicken Sie abschließend mit der rechten Maustaste auf das durchschnittliche PET-Bild, entladen Sie es und schalten Sie das PET wieder ein.Generieren Sie die quantitativen Aufnahmeergebnisse mithilfe des Symbols "Ergebnisse exportieren" im 3D-ROI-Tool. Die resultierenden PET/CT-Bilder und Zeitaktivitätskurven zeigen eine erhöhte Radiotraceraufnahme in der ipsilateralen im Vergleich zur kontralateralen Hemisphäre. Die Quantifizierung dynamischer PET-Hirnbilder unter Verwendung summierter Daten von 50 bis 60 Minuten zeigte einen signifikanten Anstieg der Traceraufnahme in der ipsilateralen Hemisphäre im Vergleich zur kontralateralen Hemisphäre in dMCAO, jedoch nicht bei Scheinmäusen unter Verwendung des manuell gezeichneten ROI-Ansatzes.Nachdem Sie sich diese Technik angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Neuroinflammation in einem Mausmodell des ischämischen Schlaganfalls mittels TSPO-PET genau und effizient quantifizieren können, wobei sowohl automatische als auch manuelle Bildanalysemethoden verwendet werden. Wichtig ist, dass Sie in der Lage sein sollten, diese In-vivo-Befunde auch mit der digitalen Ex-vivo-Autoradiographie zu bestätigen. Da die Halbwertszeit von Kohlenstoff-11 so kurz ist, ist es wichtig, vor dem Versuch dieses Verfahrens einen klaren Versuchsplan und Zeitplan zu erstellen, um die Quantität und Qualität Ihrer Daten zu maximieren.Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Methoden wie die Immunhistochemie durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen wie die Korrelation zwischen Gliaaktivierung und TSPO-Expression zu beantworten. Denken Sie daran, dass die Verwendung von Radioaktivität äußerst gefährlich sein kann. Um Ihre Exposition zu minimieren, verwenden Sie bei der Durchführung dieses Verfahrens Schutzkleidung, Bleischutzschilde und vergrößern Sie Ihren Abstand.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

&lt;p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;text-align:justify;' dir='ltr'&gt;Quelle: Chaney, A. M., et.al. PET-Bildgebung von Neuroinflammation mit [11&lt;span style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'&gt;C]DPA-713 in einem Mausmodell mit ischämischem Schlaganfall. J. Vis. Exp. (2018). Dieses Video...

TSPO-PET/CT-Bildgebung zum Nachweis der Infarktbildung in einem Mausmodell des ischämischen Schlaganfalls

Quelle: Ouyang, Y., et al. Simultane PET/MRT-Bildgebung bei zerebraler Hypoxie-Ischämie bei Maus. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt eine Technik zur Beurteilung von zerebralen Hypoxie-Verletzungen mittels gleichzeitiger Positronen-Emissions-Tomographie (PET) und Magnetresonanztomographie (MRT). Eine anästhesierte Maus wird einer Ligatur der Arteria carotis communis (CCA) unterzogen, die den Blutfluss zu einer Gehirnhälfte reduziert und sie für Hypoxie-induzierte Verletzungen prädisponiert.

Bildgebung von Hirnschäden, die durch zerebrale Hypoxie-Ischämie induziert werden, in einem Mausmodell

Hirnschäden infolge zerebraler Ischämie können nicht-invasiv abgebildet und an Ratten untersucht werden, wobei eine präklinische Positronen-Emissions-Tomographie in Verbindung mit der injizierbaren radioaktiven Sonde 18F-Fluordesoxyglucose verwendet wird. Darüber hinaus erhöht die Verwendung moderner Softwaretools, die VOI-Gehirnvorlagen (Volume of Interest) enthalten, die quantitativen Informationen, die aus diesen Studien gewonnen werden, drastisch.

Nicht-invasive Bildgebung und Analyse der zerebralen Ischämie in lebenden Ratten mit Hilfe der Positronen-Emissions-Tomographie mit<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Das hier vorgestellte Verfahren verwendet die gleichzeitige Positronenemissionstomographie und Magnetresonanztomographie. In der zerebrale Hypoxie-Ischämie-Modell, dynamischen Veränderungen in Verbreitung und Glukosestoffwechsel während und nach der Verletzungsgefahr. Die sich entwickelnde und reproduzierbaren Schäden in diesem Modell erfordert simultane Erfassung, wenn sinnvolle multimodaler Bildgebungsdaten erworben werden sollen.

Gleichzeitige PET / MRT-Bildgebung während Maus zerebrale Hypoxie-Ischämie

Hier stellen wir die Methodik zur Erzeugung eines fokalen Schlaganfalls in der weißen Substanz der Maus durch lokale Injektion eines irreversiblen endothelialen Stickstoffmonoxid-Synthase (eNOS)-Inhibitors (L-Nio) vor. Vorgestellt werden zwei stereotaktische Varianten, die retrograde neuronale Verfolgung und die Markierung und Dissektion von frischem Gewebe, die die Anwendungsmöglichkeiten dieser Technik erweitern.

Ein vielseitiges Mausmodell von Subcortical Weiß Matter Stroke für das Studium der axonalen Degeneration and White Matter Neurobiologie

Wir präsentieren ein Protokoll zur Messung der Aufnahme von [14C]-Iodantipyrin (IAP) und zur Bewertung der Aktivierung von neuronalen Substraten, die an zentralen Schmerzen nach Schlaganfall (CPSP) in einem Nagetiermodell beteiligt sind.

Autoradiographiebild Messungen von [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine in Rattengehirn Nach Central Post-Stroke Schmerz

Dieses Protokoll beschreibt die Anwendung von kombinierten nahen Infrarot fluoreszierende (NIRF) Bildgebung und Mikrocomputertomographie (microCT) für zerebrale Thromboemboli zu visualisieren. Diese Technik ermöglicht die Quantifizierung von Thrombus Belastung und Evolution. Die NIRF-Bildgebungstechnik zur Visualisierung von Thrombus innerhalb lebenden Tieren unter Verwendung von Gold-Nanopartikeln Thrombus in exzidierten Gehirn fluoreszenzmarkierte, während die microCT Technik visualisiert.

Kombinierte Near-Infrarot-Fluoreszenz-Bildgebung und Mikrocomputertomographie für Direkt Visualizing Cerebral Thromboembolie

Diese Arbeit demonstriert den Einsatz einer multimodalen ultraschallbasierten Bildgebungsplattform für die nicht-invasive Bildgebung des ischämischen Schlaganfalls. Dieses System ermöglicht die Quantifizierung der Sauerstoffsättigung des Blutes durch photoakustische Bildgebung und die Beeinträchtigung der Durchblutung im Gehirn durch akustische Angiographie.

Integrierte photoakustische, Ultraschall- und Angiographietomographie (PAUSAT) für die nicht-invasive Ganzhirnbildgebung des ischämischen Schlaganfalls

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Etablierung eines distalen Modells für einen Verschluss der mittleren Hirnarterie (dMCAO) durch transkranielle Elektrokoagulation bei C57BL/6J-Mäusen vor und bewerten das anschließende neurologische Verhalten und die histopathologischen Merkmale.

Induktion eines akuten ischämischen Schlaganfalls bei Mäusen mit der Technik des distalen Mittelarterienverschlusses

Unter Verwendung eines rein optischen Ansatzes wird ein ischämischer Schlaganfall induziert, während gleichzeitig die neuronaleCa2+ -Aktivität mit einem fluoreszierenden Biosensor im entstehenden Schlaganfallkern einer wachen, sich verhaltenden Maus aufgezeichnet wird.

Gleichzeitige Photothrombose und Faserphotometrie zur Induktion und Überwachung eines ischämischen Schlaganfalls bei Mäusen, die sich verhalten

Erfahren Sie die PET-Bildgebung von Neuroinflammation im Mausmodell des ischämischen Schlaganfalls mit [11C]DPA-713. Diese Methode ermöglicht die Echtzeit-Visualisierung dynamischer biologischer Prozesse im lebenden Organismus.

PET-Bildgebung des Neuroinflammation mit [¹¹C] DPA-713 in einem Mausmodell des ischämischen Schlaganfalls

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