Name: Invasive hämodynamische Charakterisierung des Portal-hypertensiven Syndroms in zirrhotischen Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Lernen Sie die invasive hämodynamische Charakterisierung des portal-hypertensiven Syndroms bei zirrhotischen Ratten. Diese Methode ermöglicht die direkte Messung des Portaldrucks und zusätzlicher Parameter für die Leberforschung.

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Wir danken den Tierärzten, Krankenschwestern und Tierpfleger am Zentrum für biomedizinische Forschung für ihre kontinuierliche Unterstützung während unserer Forschungsprojekte. Die Autoren erkennen die wichtigen Input von allen Bearbeitern dieses Protokolls. Einige der Forschung wurde finanziert durch die "Young Science Award" von der österreichischen Gesellschaft für Gastroenterologie und Hepatologie (ÖGGH), PS und dem "Skoda Award" der österreichischen Gesellschaft für Innere Medizin, TR.

<ol><li>Ripoll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+venous+pressure+gradient+predicts+clinical+decompensation+in+patients+with+compensated+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hepatic venous pressure gradient predicts clinical decompensation in patients with compensated cirrhosis.</a> Gastroenterology. 133 (2), 481-488 (2007).</li>
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<li>Zardi, E. M., Di Matteo, F. M., Pacella, C. M., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+and+non-invasive+techniques+for+detecting+portal+hypertension+and+predicting+variceral+bleeding+in+cirrhosis%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Invasive and non-invasive techniques for detecting portal hypertension and predicting variceral bleeding in cirrhosis: a review.</a> Annals of medicine. 46 (1), 8-17 (2014).</li>
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<li>Reiberger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorafenib+attenuates+the+portal+hypertensive+syndrome+in+partial+portal+vein+ligated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Sorafenib attenuates the portal hypertensive syndrome in partial portal vein ligated rats.</a> Journal of Hepatology. 51 (5), 865-873 (2009).</li>
<li>Schwabl, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pioglitazone+decreases+portosystemic+shunting+by+modulating+inflammation+and+angiogenesis+in+cirrhotic+and+non-cirrhotic+portal+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Pioglitazone decreases portosystemic shunting by modulating inflammation and angiogenesis in cirrhotic and non-cirrhotic portal hypertensive rats.</a> Journal of Hepatology. 60 (6), 1135-1142 (2014).</li>
<li>Reiberger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nebivolol+treatment+increases+splanchnic+blood+flow+and+portal+pressure+in+cirrhotic+rats+via+modulation+of+nitric+oxide+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Nebivolol treatment increases splanchnic blood flow and portal pressure in cirrhotic rats via modulation of nitric oxide signalling.</a> Liver International. 33 (4), 561-568 (2013).</li>
<li>Schwabl, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FXR+agonist+PX20606+ameliorates+portal+hypertension+by+targeting+vascular+remodelling+and+sinusoidal+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">The FXR agonist PX20606 ameliorates portal hypertension by targeting vascular remodelling and sinusoidal dysfunction.</a> Journal of Hepatology. 66 (4), 724-733 (2017).</li>
<li>Mandorfer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+virologic+response+to+interferon-free+therapies+ameliorates+HCV-induced+portal+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Sustained virologic response to interferon-free therapies ameliorates HCV-induced portal hypertension.</a> J Hepatol. 65 (4), 692-699 (2016).</li>
<li>Schwabl, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-free+regimens+improve+portal+hypertension+and+histological+necroinflammation+in+HIV%2FHCV+patients+with+advanced+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Aliment+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Interferon-free regimens improve portal hypertension and histological necroinflammation in HIV/HCV patients with advanced liver disease.</a> Aliment Pharmacol Ther. 45 (1), 139-149 (2017).</li>
<li>Reiberger, T., Mandorfer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta+adrenergic+blockade+and+decompensated+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Beta adrenergic blockade and decompensated cirrhosis.</a> Journal of Hepatology. 66 (4), 849-859 (2017).</li>
<li>Reiberger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carvedilol+for+primary+prophylaxis+of+variceal+bleeding+in+cirrhotic+patients+with+haemodynamic+non-response+to+propranolol%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Carvedilol for primary prophylaxis of variceal bleeding in cirrhotic patients with haemodynamic non-response to propranolol.</a> Gut. 62 (11), 1634-1641 (2013).</li>
<li>Reiberger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Austrian+consensus+guidelines+on+the+management+and+treatment+of+portal+hypertension+%28Billroth+III%29%5BTitle%5D)+AND+%22Wiener+klinische+Wochenschrift%22%5BJournal%5D)">Austrian consensus guidelines on the management and treatment of portal hypertension (Billroth III).</a> Wiener klinische Wochenschrift. 129 (3), 135-158 (2017).</li>
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<li>Pinter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+sorafenib+on+the+portal+hypertensive+syndrome+in+patients+with+liver+cirrhosis+and+hepatocellular+carcinoma+-+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Alimentary+Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The effects of sorafenib on the portal hypertensive syndrome in patients with liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma - a pilot study.</a> Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 35 (1), 83-91 (2012).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

PP ist das Hauptergebnis Parameter zur Bewertung des Portals hypertensiven Syndroms und spiegelt die Schwere der zugrunde liegenden Leberzirrhose. Matrix Deposition (d.h. Fibrose) und sinusförmigen Vasokonstriktion (aufgrund der erhöhten hepatischen Expression von vasokonstriktoren und verringerte Reaktionsfähigkeit auf Vasodilatatoren) verursachen erhöhte IHVR. Die Bedeutung von PP und ihre Auswirkungen auf die chronische Lebererkrankung nachweislich in mehreren präklinischen11,</su...

PHT ist definiert als krankhaft erhöhtem Blutdruck im Portal Venensystem, die schwere Komplikationen bei Patienten mit Zirrhose wie variceal Blutungen und Aszites1verursachen können. Während Pre-Leber (z.B. Portal Venenthrombose) und Post-Leber (z.B.Budd-Chiari-Syndrom) PHT sind selten, intrahepatischen PHT aufgrund einer Leberzirrhose stellt die häufigste Ursache von PHT2.
In einer Leberzirrhose wird PP in erster Linie als Folge der erhöhten IHVR3erhöht. In fortgeschrittenen Stadien, PHT wird verschärft durch die erhöhte PVBF durch erhöhte Herzleistung und splanchnic und systemischen Gefäßwiderstand sank – das Portal Hypertensive Syndrom4definieren. Ohmsche Gesetz (ΔP = Q * R) impliziert, dass die IHVR und Blut fließen sind proportional zur PP5. Bei Patienten ist die direkte Messung der PP riskant und nicht routinemäßig durchgeführt; Stattdessen wird die hepatische venösen Druckgradienten (HVPG) als indirekte Messung der PP6,7verwendet. Der HVPG errechnet sich durch Subtraktion kostenlose hepatische venendrucks (FHVP) aus dem verkeilten hepatische venösen Druck (WHVP), die mit einem Ballonkatheter platziert in einer Lebervene8gemessen werden. Der physiologische HVPG liegt zwischen 1 – 5 MmHg, während ein HVPG ≥10 MmHg definiert klinisch signifikanten Portale Hypertension (CSPH) und zeigt erhöhtes Risiko für PHT-Komplikationen wie Blutungen variceal, Aszites und Hepatische Enzephalopathie9 . Obwohl PP (d.h., HVPG) der wichtigsten Parameter für Informationen zu anderen Komponenten des PHT, PHT Schweregrad sind einschließlich der Schweregrad der hyperdyname Zirkulation (HR, Karte), splanchnic/mesenterialen arterielle Durchblutung und IHVR, entscheidend für die erhalten Sie ein umfassendes Verständnis für die unterschiedlichen zugrunde liegenden Mechanismus der PHT.
So, im Gegensatz zur indirekten Messungen von PP in Menschen, die eingeführte Methodik für Ratten bietet den Vorteil einer direkten Messung der PP und ermöglicht die Aufnahme von zusätzlichen hämodynamischen Parameter charakterisieren das Portal Hypertensive Syndrom. Darüber hinaus die direkte Messung der PP ist eine hervorragende integrative Auslesen der Höhe der Leberfibrose (ein wichtiger Faktor des IHVR) und gewisse Einschränkungen der Fibrose Quantifizierung im Zusammenhang mit Lebergewebe entnahmefehler überwindet.
Die am häufigsten verwendeten Nager-Modelle der Zirrhotischen PHT gehören chirurgische Gallengang Ligatur (BDL), Toxin-induzierten Leberschädigung (d. h.durch Carbon Titantetrachlorid, Thioacetamide oder Dimethylnitrosamine-Verwaltung) und Diät-induzierten metabolischen Leber Krankheitsmodelle. Prehepatic (nicht zirrhotischen) PHT kann durch partielle Pfortader Ligatur (PPVL)10induziert werden.
Kleine Nagetiere eignen sich gut für die vorgestellte Methode, einschließlich Mäuse, Hamster, Ratten oder Kaninchen, und sind mit relativ geringen Wartungskosten verbunden. Trotzdem sind alle sind die hämodynamischen Bewertungen möglich, führen Sie in Mäuse, bessere Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der Ergebnisse mit Ratten oder größere Nagetiere durch den offensichtlichen Vorteil der Tiergröße gesehen. Darüber hinaus werden spezielle Mikro-Instrumente und Geräte benötigt, ähnlichen hämodynamischen Parameter bei Mäusen zu erhalten. Zu guter Letzt Ratten sind robuster mit niedrigeren assoziierten Morbidität und Mortalität und somit die Drop-out Rate dürften niedriger bei Ratten als bei Mäusen.
Die vorgestellte Methodik eignet sich gut für die Bewertung der spezifischen Behandlungen von Erkrankungen der Leber (z.B. Anti-fibrotischen oder Anti-inflammatory Drogen) oder Roman pharmakologischen nähert sich diesem Einfluss Gefäßtonus und/oder endothelialen Biologie; und so wahrscheinlichen Auswirkungen hämodynamischen Parameter in PHT.

<table><tbody><tr><td>Instruments</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7 Pro Software</td><td>ADInstruments, Colorado Springs, CO, USA</td><td>&nbsp;-</td><td>Software</td></tr><tr><td>ML870 PowerLab 8/30</td><td>ADInstruments, Colorado Springs, CO, USA</td><td>&nbsp;-</td><td>Elektronischer Mehrkanal-Recorder</td></tr><tr><td>MLT0380/D</td><td>ADInstruments, Colorado Federn, CO, USA</td><td>&nbsp;-</td><td>Druckmessumformer (x2: für Portaldruck und arteriellen Druck)</td></tr><tr><td>ML112 Quad-Brückenverstärker</td><td>ADInstruments, Colorado Springs, CO, USA</td><td>&nbsp;-</td><td>Brückenverstärker</td></tr><tr><td>TS420</td><td>Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA</td><td>&nbsp;-</td><td>Durchflussmessermodul</td></tr><tr><td>Biologische Forschung Gerät 7025</td><td>UGO BASILE S.R.L., Comerio, Italien</td><td>&nbsp;-</td><td>Ventilator</td></tr><tr><td>Vapor 2000</td><td>Dr&auml; ger Medical AG & Co. KG, L&uuml; beck, Deutschland</td><td>&nbsp;-</td><td>Isofluran-Verdampfer</td></tr><tr><td>Perivaskuläre Sonden (Ratte) für transsonische Systeme (Superior Mesenteric Artery)</td><td>Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA</td><td></td>#MA1PRB<td>Ultraschall-Durchflusssonde (1mm)</td></tr><tr><td>Perivaskuläre Sonden (Ratte) für transsonische Systeme (Pfortader)</td><td>Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA</td><td></td><td>#MA2PSBUltraschall-Durchflusssonde ( 2mm)</td></tr><tr><td>1. für Intubation & 2. für saubere Hautschnitte</td><td>&nbsp;</td><td>-&nbsp;-</td><td>Mayo-Schere [x2]</td></tr><tr><td>Metzenbaum Schere</td>&<td>nbsp;-</td><td>&nbsp</td><td>;-</td></tr><tr><td>Nagelhautschere</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-&nbsp;-&nbsp</td><td>;-</td></tr><tr><td>z.B. Adson Brown Gewebezange</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td><td>Gewebezange</td></tr><tr><td>Hochpräzise 45° Winkel Breitpunktzange [x2]</td><td>&nbsp;</td><td>-&nbsp;-</td><td></td></tr><tr><td>Hämostat [x4]</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-&nbsp;-</td><td></td></tr><tr><td>z.B. Mikulicz Peritonealklemme</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td><td>Gebogene Klemme</td></tr><tr><td>z.B. Dieffenbach-Klemme</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td><td>Micro clamp</td></tr><tr><td>z.B. Mikrospatel mit flachen Enden, Breite 4 mm,</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-<</td><td>>Micro Metallspatel</td></tr><tr><td>für transbukkale Naht bei der Intubation</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-<</td><td>em>Nadelhalter</td></tr><tr><td>Skalpellgriff</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp</td><td>;-&nbsp;-</td></tr><tr><td>selfmade</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td><td>Intubationstisch</td></tr><tr><td>blut, flexibel und mit passendem Durchmesser für arterielle Kanülen und Venenflüsse</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td><td>stumpfer Stahldraht</></td></tr><tr><td>emmodifizierter arterieller Draht 20G mit Flowstich</td><td>Becton Dickinson, Farady Road, Swindon, UK</td><td>#682245</td><td>Arterielle Leitung</td></tr><tr><td>Heizkissen</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp</td>;<td>-</td></tr><tr><td>Rektale Temperatursonde</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp</td><td>;-</td></tr><tr><td>Kochsalzheizung</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp</td>;<td>-</td></tr><tr><td>Laryngoskop (spezifisch für Tiergrößen, z.B. Ratte)</td><td>&nbsp;</td><td>-&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td></tr><tr><td>Induktionsbox für Inhalationsanästhesie</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td><td></td></tr><tr><td>Skala (kann mg messen)</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp</td><td>;-</td></tr><tr><td>Haarschneider</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td><td>&nbsp;-</td></tr><tr><td>Name </td><td>Unternehmen </td><td>Katalognummer<</td><td>strong>Kommentare</td></tr><tr><td>Verbrauchsmaterialien </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>z.B. modifiziertes BD Venflon Pro Safety 14GA</td><td>Becton Dickinson Infusion Therapy, AB, SE251 06 Helsingborg, Schweden</td><td>#393230</td><td>Peripherer Venenkatheter (14G)</td></tr><tr><td>Feinbohrer Polyethylenschlauch, ID 0,58 mm, AD 0,96 mm, Portex,Smiths</td> <td>Medical International Ltd., Kent, UK</td><td>#800/100/200</td><td>Katheterschlauch (PE-50)</td></tr><tr><td>z.B. Omnifix-F Solo</td><td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Deutschland</td><td>#9161406V<</td><td>em>Spritze 1mL</td></tr><tr><td>z.B. Injekt Solo</td><td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Deutschland</td><td>#4606051V</td><td>Spritze 5mL</em</td></tr><tr><td>>z.B. Injekt Solo</td><td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Deutschland</td><td>#4606205V</td><td>Spritze 20mL</td></tr><tr><td>z.B. BD Microlance 3, 18G - 1 1/2"</td><td>Becton Dickinson S.A., Fraga, Spanien#</td><td>304622<</td><td>em>Kanüle (18G)</td></tr><tr><td>z.B. BD Microlance 3, 23G - 1"</td><td>Becton Dickinson S.A., Fraga, Spanien</td><td>#300800</td><td>Kanüle (23G)</td></tr><tr><td>z.B. BD Microlance 3, 30G - 1/2"</td><td>Becton Dickinson S.A., Fraga, Spanien#</td><td>304000<</td><td>em>Kanüle (30G) </td></tr><tr><td>z.B. Leukoplast S</td><td>BSN medical GmbH, Hamburg,&nbsp; Germany</td><td>#47619-00</td><td>Klebeband</td></tr><tr><td>z.B. Gazin RK Müllkompressen (18x8cm)</td><td>Lohmann & Rauscher, Wien, Österreich</td><td>#10972</td><td>Mullkompresse (klein)</td></tr><tr><td>z.B. Gazin RK Müllkompressen (5x5cm)</td><td>Lohmann & Rauscher, Vienna, Austria</td><td>#10961</td><td>Mullkompresse (groß)</td></tr><tr><td>Silk Braided black, USP 4/0, EP 1.5</td><td>SMI AG, St. Vith, Belgium</td><td>#2021-04</td><td>Suture (Silk 4/0, EP 1.5)</td></tr><tr><td>z.B. Mersilk, 2-0 (3 Ph. Eur.), PS-1 Prime</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Deutschland</td><td>#EH7552</td><td>Transbukkale Naht</td></tr><tr><td>z.B. Wattestäbchen (2.2mm, 15cm)</td><td>Paul Hartmann AG, Heidenheim, Deutschland</td><td>#967936</td><td>Wattestäbchen</td></tr><tr><td>z.B. Vue Ultrasoundgel</td><td>Optimum Medical Limited, UK</td><td>#1157</td><td>Ultraschallgel</td></tr><tr><td>z.B. Glubran 2</td><td>Gem srl, Viareggio, Italien</td><td>#G-NB2-50</td><td>Gewebekleber</td></tr><tr><td>z.B. Chirurgisches Skalpellmesser Nr. 10 - Kohlenstoffstahl</td><td>Swann-Morton, England, B.S.</td><td>#202</td><td>Skalpellmesser</td></tr><tr><td>Heparin, 5000 i.E./mL (Natriumheparin)</td><td>Medicamentum Pharma GmbH, Allerheiligen im M&uuml; rztal, Österreich</td><td>&nbsp;-</td><td>Heparin</td></tr><tr><td>Florane</td><td>Aesica Queenborough Ltd., Queenborough, UK</td><td>&nbsp;-</td><td>Isoflurane</td></tr><tr><td>OeloVital (5g)</td><td>Fresenius Kabi Austira Gmbh, Graz, Österreich</td><td>&nbsp;-</td><td>Augengel</td></tr><tr><td>Ketasol</td><td>aniMedica GmbH, Senden-B&ouml; sensell, Deutschland</td><td>&nbsp;-</td><td>Ketamin</em</td></tr><tr><td>>Rompun</td><td>Bayer Austria Ges.m.b.H., Wien, Österreich</td><td>&nbsp;-</td><td>Xylazine</td></tr><tr><td>Xylocain 10% Pumpspray</td><td>AstraZeneca & Ouml; sterreich GmbH, Wien, Österreich</td><td>&nbsp;-</td><td>Lidocain pump spray</td></tr><tr><td>Dipidolor</td><td>Jansen-Cilag Pharma GmbH, Wien, Österreich</td><td>&nbsp;-</td><td>Piritramid</td></tr><tr><td>NaCl 0,9% Fresenius, 1L</td><td>Fresenius Kabi Austira GmbH, Graz, Österreich</td><td>#13LIP132</td><td>Physiologische Kochsalzlösung</td></tr></tbody></table>

invasive hämodynamische charakterisierung des portal-hypertensiven syndroms in zirrhotischen ratten

Invasive Hemodynamic Characterization of the Portal-hypertensive Syndrome in Cirrhotic Rats

Dies ist ein detailliertes Protokoll invasivere hämodynamische Messungen in zirrhotischen Ratten für die Charakterisierung von Portal Hypertensive Syndrom zu beschreiben. Portale Hypertension durch Leberzirrhose (PHT) ist verantwortlich für die schwersten Komplikationen bei Patienten mit Lebererkrankungen. Überblick über das Portal Hypertensive Syndrom zeichnet sich durch erhöhten Portal Druck (PP) aufgrund der erhöhten intrahepatischen Gefäßwiderstand (IHVR), hyperdyname Zirkulation und splanchnic erhöht den Blutfluss. Progressive splanchnic arterielle Vasodilatation und erhöhte Herzleistung mit erhöhter Herzfrequenz (HF), aber niedrigen arteriellen Drucks charakterisiert das Portal Hypertensive Syndrom.
Neuartige Therapien werden derzeit entwickelt, dass Ziel, PP zu verringern durch entweder gezielt IHVR oder erhöhten splanchnic Blutfluss – aber Nebenwirkungen auf systemischen Hämodynamik können auftreten. Eine detaillierte Charakterisierung des Portals venösen, splanchnic und systemische hämodynamischen Parameter, einschließlich der Messung von PP, Portal venösen Blutfluss (PVBF), mesenterialen arterielle Durchblutung, arterielle Mitteldruck (MAP) und HR ist also erforderlich für präklinische Bewertung der Wirksamkeit von neuen Behandlungsmethoden für PHT. Unsere video-Artikel bietet dem Leser mit einem strukturierten Protokoll für die Durchführung von invasiver hämodynamischen Messungen in zirrhotischen Ratten. Vor allem beschreiben wir die Katheterisierung der Femoral Arterie und die Pfortader über eine Ileocolic Ader und die Messung der Portal-venösen und splanchnic Blutfluss über perivaskuläre Doppler-Ultraschall-Durchfluss-Sonden. Repräsentative Ergebnisse der verschiedenen Ratte Modelle der PHT werden angezeigt.

Je nach Tiermodell und die Schwere der Lebererkrankung ist der Grad der PHT und Schweregrad des Syndroms Portal Hypertensive verschiedene (Abbildung 7).
Das Modell BDL verursacht biliäre Zirrhose durch Cholestase. Entsprechend, PP nimmt im Laufe der Zeit und eine hyperdyname Zirkulation entwickelt, wie durch eine Erhöhung des HR und Abnahme der Karte zu sehen. In zirrhotischen Tiere erhöhen SMABF, P...

Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll für invasive Messungen der hämodynamischen Parameter einschließlich Portal Druck, splanchnic Blutfluss und systemischen Hämodynamik um das Portal Hypertensive Syndrom bei Ratten zu charakterisieren.

Invasive hämodynamische Charakterisierung des Portal-hypertensiven Syndroms in zirrhotischen Ratten

This is a detailed protocol describing invasive hemodynamic measurements in cirrhotic rats for the characterization of portal hypertensive syndrome. ...

Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet der fortgeschrittenen Leberfibrose und der portalen Hypertonie zu beantworten. Es bietet eine einzigartige Gelegenheit, pharmakologische Ansätze zu evaluieren, die auf den Gefäßtonus, die Fibrogenese oder die endotheliale Dysfunktion bei Ratten mit portalhypertensiven Syndrom abzielen. Zu den Hauptvorteilen dieser Technik gehören die direkte Messung des portalen Drucks und die Möglichkeit, zusätzliche hämodynamische Parameter im Gegensatz zur indirekten Messung des portalen Drucks durch den hepatischen venösen Druckgradienten, HVPG, bei Patienten zu erhalten.Beginnen Sie mit der Sedierung der Ratte mit einer Kurzzeit-Isofluran-Anästhesie und optional zusätzlichen Anästhetika. Fahren Sie schnell mit der Intubation fort, mit einem geeigneten selbstgemachten Endotrachealtubus. Fassen Sie die Zunge mit zwei Fingern und ziehen Sie vorsichtig daran.Befeuchten Sie dann den Kehlkopfbereich vorsichtig mit einem Wattestäbchen, das mit Lidocainspray getränkt ist. Führen Sie anschließend den Endotrachealtubus vorsichtig zwischen den Stimmlippen und in die Luftröhre ein. Fixieren Sie die endotracheale Schlaufe durch eine transbukkale Naht durch die Wange und die Klebebandschlaufe des Schlauches.Tragen Sie nach der Verabreichung einer Analgesie und einer injizierbaren Anästhesie eine Augensalbe auf. Schneiden Sie dann die Körperbehaarung im Bauchbereich und an den Innenseiten der Oberschenkel ab und desinfizieren Sie die Haut. Beurteilen Sie die Narkosetiefe durch Lidschließreflex und Zehenkneiftest vor jedem Eingriff oder jeder Operation.Heben Sie die Haut an einem der rasierten Oberschenkel mit einer Gewebezange über die vermutete Stelle der Oberschenkelarterie an. Verwenden Sie eine Mayo-Schere, um eine zwei Zentimeter große Hautfläche zu entfernen. Verwenden Sie dann ein Hämostatum, um den Arterien-Venen-Nerven-Komplex aus dem Bindegewebe abzustumpfen.Für eine bessere Sichtbarkeit des Arterien-Venen-Nerven-Komplexes kann mit der Nagelhautschere Teile des Fettgewebes entfernt werden. Verwenden Sie als Nächstes zwei hochpräzise Pinzetten mit einem Winkel von 45 Grad, um die Oberschenkelarterie von der Oberschenkelvene und dem Nerv zu trennen. Die Vena femoralis ist die medialste Struktur, und die Arteria femoralis befindet sich eher lateral.Platzieren Sie eine Ligatur so distal wie möglich auf der Oberschenkelarterie und verwenden Sie eine gebogene Klemme an der Naht, um einen sanften Längszug auf die Oberschenkelarterie auszuüben. Legen Sie dann eine zweite, locker vorgeknotete Naht so proximal wie möglich auf die Oberschenkelarterie. Komprimieren Sie die Oberschenkelarterie am proximalen Ende des freiliegenden Abschnitts mit einer Mikroklemme, um den arteriellen Blutfluss vorübergehend zu stoppen.Legen Sie dann einen stützenden Mikrometallspatel unter die Oberschenkelarterie und perforieren Sie mit einer gebogenen 23-Gauge-Kanüle die vordere Arterienwand distal des verschlossenen Abschnitts. Katheterisieren Sie die Oberschenkelarterie vorsichtig durch die Perforation, wobei die schräge Spitze des Katheters nach oben zeigt. Schieben Sie den Katheter vor, bis er die Mikroklemme erreicht.Fixieren Sie den Katheter an seiner intraluminalen Stelle, indem Sie die vorbereitete proximale Ligatur um die Oberschenkelarterie und den eingeführten Katheter schließen. Öffnen Sie dann die Mikroklemme und prüfen Sie, ob pulsierendes arterielles Blut in den Katheter fließt. Fixieren Sie die Katheterposition entlang des Gefäßes mit den Enden der distalen Ligatur, um eine Luxation zu verhindern und eine Längsposition des Katheters zu gewährleisten.Verwenden Sie die digitale Schnittstelle, um die Aufzeichnung der Herzfrequenz und des mittleren Vorhofdrucks zu starten. Beginnen Sie mit einer medianen Laparotomie. Heben Sie zuerst die Hautschicht mit einer Gewebezange fünf bis sechs Zentimeter unter das Xiphoid an und entfernen Sie mit einer Mayo-Schere einen dünnen Hautstreifen, indem Sie ihn oberhalb der Linea alba verwenden, bis das Xiphoid erreicht ist.Heben Sie dann mit einer Gewebezange die Muskelschicht in der Mitte der Linea alba an, um Abstand zwischen der Bauchdecke und den Splanchnikusorganen zu schaffen. Öffnen Sie die Bauchhöhle, indem Sie die Bauchdecke mit einem Skalpell an der Linea alba einschneiden. Verlängern Sie den Schnitt entlang der Linea alba, über den gleichen Abstand wie die Hautschicht.Als nächstes graben Sie den Darm vorsichtig mit nassen Wattestäbchen aus. Beginnen Sie mit dem Blinddarm und legen Sie ihn auf eine große Mullkompresse, die in steriler physiologischer Kochsalzlösung getränkt ist und neben dem Schnitt platziert wird. Wickeln Sie den Darm mit der Mullkompresse ein und stellen Sie sicher, dass er mit steriler physiologischer Kochsalzlösung angefeuchtet ist.Die Leberzirrhose sollte nun sichtbar sein. Präparieren Sie dann die Arteria mesenterica superior mit zwei selbstgemachten stumpfen Schwabl-Haken, heben Sie die Arterie mit dem ersten Haken an und führen Sie den zweiten durch den Gewebetunnel. Legen Sie die Arteria mesenterica superior in einem Abstand von fünf Millimetern frei, um sicherzustellen, dass die Durchflusssonde um sie herum platziert werden kann.Tragen Sie anschließend Ultraschallgel auf den Ultraschall-Durchflusssondensensor auf. Befestigen Sie den Sensor so an der Arteria mesenterica splanchnicus, dass er auf den natürlichen Verlauf der Arteria mesenterica superior ausgerichtet ist. Messen Sie den Blutfluss der Arteria mesenterica superior und beurteilen Sie die Übereinstimmung des pulsierenden Flusssignals mit den systolischen Spitzen der Aufzeichnung der Arteria femoralis.Um den Blutfluss der Pfortader zu messen, lokalisieren und freilegen Sie zunächst die Pfortader an der dorsalen Fläche des Mesenteriums, die sich in der Nähe des Leberhilums befindet. Verwenden Sie dann eine hochpräzise Pinzette mit einem Winkel von 45 Grad und breiter Spitze, um die Pfortader sanft vom umgebenden Gewebe zu trennen. Vergrößern Sie den Gewebetunnel und legen Sie die Pfortader in einem Abstand von fünf bis sechs Millimetern frei, um die Platzierung der perivaskulären Flusssonde zu ermöglichen.Tragen Sie das Ultraschallgel auf den Ultraschall-Durchflusssondensensor auf und befestigen Sie es an der Pfortader, die auf ihrem natürlichen Weg ausgerichtet ist. Schließen Sie dann die Durchflusssonde und beginnen Sie mit der Aufzeichnung des Blutflusses in der Pfortader. Um den portalen Druck zu messen, befeuchten Sie die Handschuhe mit physiologischer Kochsalzlösung und verteilen Sie den Darm über die Finger.Optimieren Sie die Sicht auf das mesenteriale Gefäßbett in der Nähe des Dünndarms. Führen Sie den Katheter in das Mesenterialgewebe ein, indem Sie das viszerale Peritoneum des Mesenteriums in der Nähe des für die Katheterisierung gewählten Gefäßübergangs perforieren. Schieben Sie dann die schräge Spitze des Katheters vorsichtig näher an einen Übergang der ileokolischen Vene heran, bis ein leichter Abdruck des Gefäßübergangs zu sehen ist.Zum Schluss wird das Venensystem entsprechend dem Verbindungsgefäßweg katheterisiert, indem die Gefäßwand im Kreuzungswinkel der Gefäße perforiert wird. Zeichnen Sie alle hämodynamischen Parameter gleichzeitig unter stabilen Bedingungen für einige Minuten auf, bevor Sie das Tier einschläfern. Das Modell der Gallengangsligatur verursacht eine biliäre Zirrhose aufgrund von Cholestase.Dementsprechend steigt der portale Druck mit der Zeit an und es entwickelt sich eine hyperdynamische Durchblutung, die sich in einer erhöhten Herzfrequenz und einer Abnahme des mittleren arteriellen Drucks zeigt. Bei zirrhotischen Tieren nehmen der intrahepatische Gefäßwiderstand und der obere mesenteriale arterielle Blutfluss zu, während anschließend der portalvenöse Blasfluss in Abhängigkeit vom Ausmaß der portosystemischen Kollateralisation ansteigt. Im Gegensatz dazu verursacht die partielle Pfortaderligatur eine prähepatische, nicht-zirrhotische portale Hypertonie, die durch einen sofortigen Anstieg des Pfortaderdrucks gekennzeichnet ist.Im Laufe der Zeit entwickeln sich jedoch portosystemische Kollateralen, die den Portaldruck senken können. Darüber hinaus sehen wir entsprechende Veränderungen des mittleren arteriellen Drucks und der Herzfrequenz. Bei gesunden, scheinoperierten Tieren bleiben die hämodynamischen Werte auf physiologischem Niveau und verändern sich im Laufe der Zeit nicht wesentlich.Der Pfortaderdruck bei gesunden SO-Tieren liegt bei maximal fünf bis sechs Millimetern Quecksilbersäule. Einmal gemeistert, können diese Techniken innerhalb von 40 bis 50 Minuten durchgeführt werden, abhängig vom Tiermodell, dem Bedarf an Fehlerbehebung und der optimalen präoperativen Vorbereitung. Bei der Durchführung des chirurgischen Eingriffs ist es sehr wichtig, die Temperatur des Tieres sowie die Herzfrequenz und den arteriellen Druck zu überwachen, um den Grad der Anästhesie zu beurteilen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die Oberschenkelarterie und die Pfortader kanüliert und wie man Ultraschallsonden auf sichere Weise an splanchnischen Blutgefäßen anbringt, um genaue und reproduzierbare Ergebnisse zu gewährleisten.

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Invasive hämodynamische Charakterisierung des Portal-hypertensiven Syndroms in zirrhotischen Ratten

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