Probenahmestrategien und Verarbeitung der Biobank Gewebeproben von porcinen biomedizinische Modelle

Dieses Video zeigt zwei Schlüsseltechniken für die Probenahme und Verarbeitung von Gewebeproben von Biobank-Schweinen. Die Submersionstechnik schätzt zuverlässig das gesamte Organ- und Gewebevolumen und die Orientatortechnik erzeugt zufällige isotrope Gewebeschnitte für eine unverzerrte Schätzung quantitativer morphologischer Parameter. Der Hauptvorteil der Tauchtechnik zur Bestimmung der Gewebedichte besteht darin, dass sie auf jede Art von Gewebe angewendet werden kann und sowohl bei kleinen als auch bei großen Proben zuverlässige Ergebnisse liefert.

Die Vorteile der Orientatortechnik liegen darin, dass sie hocheffizient ist und auch mit großen Gewebeproben funktioniert. Um mit der Volumetrie für ein großes Organ zu beginnen, entfernen Sie ein entsprechend großes Stück Gewebe aus dem Organ. Tupfen Sie die Probe vorsichtig mit einem Papiertuch ab, um überschüssiges Blut und Gewebeflüssigkeit zu entfernen.

Wiegen Sie dann die Probe auf einer Präzisionswaage und notieren Sie das Gewicht der Probe. 0,9 % Kochsalzlösung in ein Becherglas geeigneter Größe geben. Füllen Sie das Becherglas nicht vollständig, um ein Überlaufen während des Eintauchens des Gewebes zu verhindern.

Stellen Sie das Becherglas auf die Waage und tauchen Sie dann eine Pinzette oder einen selbst konstruierten Probenhalter in die Kochsalzlösung, bis die Markierung auf der Pinzette oder dem Probenhalter die Flüssigkeit erreicht. Setzen Sie anschließend die Anzeige der Skala auf Null zurück. Befestigen Sie die Gewebeprobe vorsichtig an der Pinzette oder dem Probenhalter und tauchen Sie die Probe vollständig in die Kochsalzlösung, bis die markierte Position erreicht ist.

Um zuverlässige Dichtemessungen zu erfassen, ist es wichtig, sicherzustellen, dass die Probe vollständig eingetaucht ist und jeglichen Kontakt der eingetauchten Probe mit den Innenwänden oder dem Boden des Becherglases zu vermeiden. Während Sie die Probe in Position halten, notieren Sie das auf der Waage angezeigte Gewicht. Verwenden Sie diese Messung und die Dichte der Kochsalzlösung bei Raumtemperatur, um das Volumen der Probe zu berechnen.

Berechnen Sie dann die Dichte der Gewebeprobe aus dem Gewicht der Probe und ihrem Volumen. Führen Sie bei großen Organen und Geweben, wie z. B. dieser Niere, wiederholte Messungen mit mehreren Proben durch und berechnen Sie die durchschnittliche Dichte aus den einzelnen Messungen. Bei kleinen Proben und kleinen Organen, die insgesamt gemessen werden, wie z. B. der Hypophyse, wiederholen Sie die Messung dreimal, bevor Sie die durchschnittliche Organdichte aus den einzelnen Messwerten berechnen.

Berechnen Sie abschließend das Gesamtvolumen des Organs, Gewebes oder Organkompartiments aus seinem Gewicht und seiner Dichte. Platzieren Sie eine fixierte Gewebeprobe auf einem Abdruck eines gleichwinkligen Kreises mit einer Kante parallel zur Null- bis 180-Grad-Richtung. Verwenden Sie dann eine Zufallszahlentabelle, um einen Zufallswinkel zu bestimmen.

Finde die entsprechenden Markierungen auf der Skala des gleichwinkligen Kreises. Mit diesen Markierungen wird ein Schnitt durch die Probe geschnitten, wobei die Schnittebene parallel zur Richtung des zufälligen Winkels ausgerichtet ist, der auf der Skala des gleichwinkligen Kreises angegeben ist, und senkrecht zur Auflagefläche der Probe. Platzieren Sie den Gewebeblock mit der Schnittfläche nach unten auf einem mit Kosinus gewichteten Kreis.

Der Rand der Auflagefläche wird parallel zur Eins-zu-Eins-Richtung platziert. Schneiden Sie nun einen neuen Schnitt in einem zufälligen Winkel durch die Probe, der anhand der Zufallszahlentabelle bestimmt wird. Die resultierende Schnittebene ist ein isotroper gleichmäßiger Zufallsschnitt.

Diese Tabelle zeigt die repräsentativen Dichten mehrerer Schweinegewebe und -organe, die mit der Submersionstechnik bestimmt wurden. Die meisten Schweinegewebe weisen Dichtewerte auf, die etwas höher sind als einer, der sich auf die Dichte des Wassers bezieht. Während Gewebe, die in Kochsalzlösung schwimmen, wie z. B. Fettgewebe, eine Dichte von weniger als eins aufweisen.

Diese Abbildung zeigt vier repräsentative IUR-Schnitte des linksventrikulären Myokards des Schweins, die mit der Orientator-Technik präpariert wurden. Beachten Sie die geänderten Schnittwinkel in den verschiedenen IUR-Abschnitten. Einmal gemeistert, kann die Tauchtechnik zur Bestimmung der Gewebedichte in wenigen Minuten durchgeführt werden.

Wenn es richtig ausgeführt wird. Isotrope, gleichmäßige Zufallsgewebsschnitte, die mit der Orientator-Technik erzeugt werden, eignen sich zur Abschätzung beliebiger quantitativer morphologischer Parameter unter Verwendung geeigneter stereologischer Analysemethoden. Digitale Musik.