Name: Probenahmestrategien und Verarbeitung der Biobank Gewebeproben von porcinen biomedizinische Modelle (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: Lernen Sie die Submersions- und Orientator-Techniken zur Probennahme und Volumetrie von Schweinegeweben für biomedizinische Biobanken. Diese Methoden ermöglichen zuverlässige morphologische Analysen.

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Die Autoren danken Lisa Pichl für ausgezeichnete technische Unterstützung.

<ol><li>Aigner, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+pigs+as+models+for+translational+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Transgenic pigs as models for translational biomedical research.</a> J Mol. Med. 88, 653-664 (2010).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Generation der Biobank Musterkollektionen von porcinen Tiermodellen erfordert robuste Techniken und Protokolle zur Bestimmung von Organgewebe/Volumen, die reproduzierbare Generation des Vertreters, redundante Gewebeproben geeignet für ein breites Spektrum von verschiedenen Analysemethoden und Randomisierung der Ausrichtung der Probe Abschnitte für quantitative stereologischen Analysen. In diesem Artikel beschriebenen Methoden sind die Größen von porcinen Organen und Geweben angepasst und wurden entwickelt, um effektiv er...

In der translationalen Medizin, Schweine sind immer häufiger für den Einsatz als großes Tier1,2,3,4,5, wegen mehrere vorteilhafte Ähnlichkeiten zwischen den Schweinen Modelle und menschliche Anatomie und Physiologie und die Verfügbarkeit von etablierten molekularbiologischen Methoden ermöglichen Generation zugeschnitten, gentechnisch veränderte Schweine-Modelle für ein breites Spektrum von Krankheiten Bedingungen1,4.
Jedoch beschränkt sich im Vergleich zu Nager-Modelle, die Zahl der Tiere eines jeweiligen Schwein-Modells, das für Experimente jederzeit zur Verfügung gestellt werden können. Dies liegt an den Schweinen Generierungsintervall von ca. einem Jahr und den finanziellen und zeitintensiven Aufwand für die Erzeugung von porcinen Modelle und Tierhaltung. Daher sind einzelne Tiere von porcinen Modell sowie die Proben, die von diesen Schweinen generiert werden können sehr wertvoll, vor allem, wenn gentechnisch veränderte Schweine Modelle und/oder langfristige experimentelle Probleme (z.B., Spätfolgen der chronische Krankheiten) sind Personen im Alter von2,6,7untersucht.
Im Rahmen einer Studie Leistung weitere Analysen, die nicht in der ersten experimentellen Design der Studie geplant hatte vielleicht später erweisen sich als relevant, z.B.Adresse, verschiedene Fragen, die bisher entdeckt, unerwartete Ergebnisse. Wenn geeignete Beispiele für solche zusätzliche Experimente nicht verfügbar sind, möglicherweise unverhältnismäßig hohe Kosten und zeitintensive Ausgaben erzeugen zusätzliche Schweine und Gewebeproben erforderlich. Um für solche Eventualitäten vorbereitet zu sein, gilt Generation der Biobank Sammlungen von konservierten Back-up Proben von verschiedenen Organen, Geweben oder Bio-Flüssigkeiten, quantitativ und qualitativ geeignet für ein breites Spektrum der nachfolgenden Analysen, eine wichtige Ansatz2,6,7. Porcines Tiermodell optimale Vorteile ableiten, die Verfügbarkeit von angemessenen Biobank Proben auch bietet die einmalige Möglichkeit zum Ausführen eines breiten Spektrums an verschiedenen Analysemethoden für identische Probematerialien auf einer Multi-Organ-Ebene in der gleichen einzelne Tiere, z. B.durch Verteilung der Proben an Wissenschaftler der verschiedenen Arbeitsgruppen organisiert in einem Forschung Netzwerk2,6,7. Darüber hinaus trägt die '' vorausschauende '' Probenahmestrategie in Biobanking auch zu einer Verringerung der Anzahl der Tiere in einer Studie erforderlich. Die Vorteile von porcinen Modell Biobanking wurden vor kurzem in einem Multi-Organ, Multiomics Studie, Orgel nachgewiesen Übersprechen in einem genetisch veränderten porcinen Modell des langfristigen Diabetes Mellitus, mit Proben aus München MIDY Schwein Biobank 2.
Es gibt einige Anforderungen, die Biobank Proben in der Regel einhalten müssen, um die Zuverlässigkeit und die Interpretierbarkeit der Ergebnisse der anschließend durchgeführten Analysen zu etablieren. Die Proben reproduzierbar erzeugt werden müssen, und sie müssen repräsentativ, d.h.angemessen reflektiert interessierte morphologischen und molekularen Eigenschaften des Gewebes/Organs die Proben7 entnommen wurden. Geeignet für eine Vielzahl von nachgelagerten Analysetypen werden muss die Proben in ausreichenden Mengen genommen und entsprechend den Anforderungen (einschließlich Zeit und Temperatur) der verschiedenen analytischen Methoden, einschließlich beschreibende verarbeitet werden histopathologische Untersuchungen, wie Cryohistology, Paraffin und Kunststoff Histologie, Immunhistochemie, in Situ Hybridisierung, Ultrastrukturforschung Elektron mikroskopische Analysen und klinische diagnostische Laboranalysen, sowie molekulare Analyse von DNA, RNA, Proteinen und Metaboliten.
Um die Bewertung einer Vielzahl deutliche quantitative morphologische Parameter wie Zahlen, Mengen, Längen oder Flächen unterschiedliche Gewebestrukturen durch quantitative stereologischen Analysen ermöglichen, randomisierte Abschnitt Flugzeuge von der histologische Proben der jeweiligen Organe/Gewebe7,8,9,10,11vorbereitet werden müssen. In quantitativen morphologische Studien, die präzise Bestimmung des Gesamtvolumens der Gewebe, Organ oder Fach Orgel, die Proben entnommen wurden (d. h., die Referenz-Raum) ist von entscheidender Bedeutung7,9 , 12 die absoluten Mengen der interessierten Parameter innerhalb der jeweiligen Organ, Gewebe oder Organismus zu berechnen. Schließlich wirkt Einbettung bezogene Gewebe schrumpfen während der Vorbereitung der histologischen Abschnitte bestimmt und Konto13berücksichtigt werden. Daher sind quantitative stereologischen Analysen, vor allem der archivierten Proben (feste Gewebeproben, eingebettete Gewebe Blöcke, histologische Abschnitte, etc.) aus früheren Studien manchmal stark eingeschränkt oder sogar unmöglich12, besonders wenn Volumetrie der jeweiligen Organe/Gewebe nicht durchgeführt wurde, wenn keine angemessene Stichproben Designs angewendet wurden, um repräsentative Proben zu rechtfertigen, wenn die Zahlen und Mengen zur Verfügung einzelner Samples nicht ausreichen, oder wenn die Verarbeitung der Proben ist unvereinbar mit der Schätzung des quantitativen morphologische Parameter von Interesse. Aufgrund der vielfältigen möglichen Einflussfaktoren die Eignung der Archiv-Mustermaterialien für Analysen deutliche quantitative morphologische Parameter kann nicht eindeutig beantwortet werden, aber die sorgfältige Beurteilung des Einzelfalls abhängig.
So wie die Lage, Größe, Anzahl, Verarbeitung, trimmen Richtung und Ausrichtung der Proben die Ergebnisse der nachfolgenden Analysen betreffen werden, diese Faktoren sind von großer Bedeutung und müssen in den Versuchsplan Studie betrachtet werden. Im Hinblick auf diese Aspekte und Besonderheiten der porcinen Anatomie, umfassende, detaillierte und umfangreiche Sampling-Richtlinien angepasst porcinen Tiermodelle vor kurzem eingerichtet wurden, bieten einen robuste Verweis auf standardisierte, reproduzierbare , und effiziente Erzeugung von redundanten, adäquat verarbeitet, hochwertige Proben aus mehr als 50 verschiedene porcinen Organen und Geweben6,7.
Die methodischen Beschreibungen und das video-Tutorial gezeigt in diesem Artikel bieten detaillierte, anschauliche, verständliche, Schritt-für-Schritt-Anleitungen für praktische Leistung eine Vielzahl von Techniken für die Volumetrie, Beprobung von porcinen Gewebe und Organe und Verarbeitung von Gewebeproben nach verschiedenen nachgeschalteten Analysemethoden. Die vorgestellten Techniken gehören Methoden zur Bestimmung von Organgewebe/Volumen und Dichte basierend auf den Prinzipien von Archimedes und Cavalieri9, einschließlich der Bestimmung der Abmessungen der dreidimensionalen Schrumpfung des Gewebes im Zusammenhang mit der Einbettung in verschiedenen Einbetten von Medien14 während der Verarbeitung für histologische Untersuchung, Anwendung von praktikablen volumengewichteten systematische Stichproben nähert, Verarbeitung von gesampelten Gewebemustern für verschiedene spätere Analysen7,8,9,15und Generation entsprechend orientiert und Beispiele für mögliche quantitative stereologischen Analysen7,8verarbeitet, 9,10,11. Neben ihrer Anwendung in porcinen Biobank Projekte eignen sich die Methoden in der Regel für alle Studien, die quantitative Histo-morphologische Eigenschaften der Organe/Gewebe. Darüber hinaus sind systematische Stichproben Entwürfe besonders vorteilhaft für die Erzeugung von repräsentativen Proben bei Experimenten mit molekulare Analysemethoden Fülle Änderungen, z. B., RNAs, Proteine oder Metaboliten in erkennen verschiedenen Organen und Geweben.
Die nächsten Absätze geben eine kurze Einführung in diese Methoden während ihrer praktischen Leistung im Abschnitt Protokoll beschrieben wird.
Bestimmung der Organgewebe/Volumen Bestimmung der Orgel Gewichte und Volumina ist wichtig in mehrere experimentelle Einstellungen, wie diese Faktoren könnte darauf hindeuten Änderungen, die möglicherweise im Zusammenhang mit experimentell untersucht Faktoren von Interesse. Das Gesamtvolumen der ein Organ/Gewebe ist häufig auch erforderlich, um absolute quantitative Parameter (z.B., die gesamte Zellzahl), von stereologically geschätzten numerische Volumen Dichte (d. h., die Anzahl der Zellen pro Volumeneinheit zu berechnen des Gewebes)7,12. Neben Techniken mit komplexen technischen Ausstattung, wie die Computertomographie gibt es grundsätzlich drei praktische Methoden häufig verwendet, um das absolute Volumen eines Organs oder Gewebes bestimmen. Das Volumen eines Organs kann durch "direkte volumetrische Messung", nach dem Prinzip des Archimedes, d. h., Messung des Volumens von Wasser oder Kochsalzlösung verdrängt durch die Struktur als völlig untergetaucht ermittelt werden. Sind jedoch vergleichsweise große Schweine Organe, diese Ansätze unpraktisch und fehleranfällig Ungenauigkeit, da sie sehr große volumetrische/Messung Flaschen erfordern. Bequemer, kann die Lautstärke von einem Organ/Gewebe aus Gewicht und Dichte7,12,16, berechnet die effizient ermittelt werden können, mit dem "eintauchen-Methode"7,12 ,16 (Protokoll Schritt 1.1.). Organgewebe/Mengen können auch mit Volumetrie Konzepte basieren auf dem "Prinzip von Cavalieri" (1598 – 1647) geschätzt werden. In einfachen Worten das Prinzip von Cavalieri heißt es, wenn zwei Objekte in Ebenen parallel zu einer Grundebene geschnitten sind, und die Profile der Abschnitte durch die beiden Objekte an entsprechenden geschnitten Entfernungen von der Bodenebene haben die gleichen Bereiche, die zwei Objekte haben Sie das gleiche Volumen. So kann das Volumen der beliebig geformte Objekte als das Produkt der ihre Profilbereiche der Abschnitt in parallel, gleich weit entfernt Schnittebenen und der Abstand zwischen der Schnittebenen geschätzt werden. Dies ist verständlich mit die folgende Analogie: betrachten zwei Stapel, bestehend aus der gleichen Anzahl von identischen Münzen sind nebeneinander, einen Stapel mit den Münzen ordentlich übereinander nachgeben eine zylindrische Form des Stapels Münze, und die andere Stapel von Münzen mit außermittig positioniert Münzen (Abb. 3A). Die Formen der beiden Münze-Stacks sind, zwar unterschiedlich deren Volumen sind die gleichen, da die Bereiche der Münzen auf entsprechenden Ebenen der beiden Stapel (d.h., die Bereiche von Profilen von parallelen Abschnitten durchschneiden beide Münze-Stacks in gleichen Abständen von der den Boden) sind identisch. Schätzung der Mengen an Schweinen Organen und Geweben mit Cavalieri Prinzip7,12,15 ist in Schritt 1.2 beschrieben.
Bestimmung des Ausmaßes der Gewebe Schrumpfung im Zusammenhang mit histologische Einbettung In den Analysen über mehrere quantitative morphologischen Parametern gemessen in histologische Gewebeschnitte wirkt Einbettung bezogene Gewebe Schrumpfung während der Verarbeitung für Histologie Gewebe ermittelt und berücksichtigt werden. Das Ausmaß der Einbettung im Zusammenhang mit Gewebe schrumpfen kann variabel sein und richtet sich sowohl auf das Gewebe, dessen Verarbeitung und Einbetten von mittleren8,13,17,18,19. Im Allgemeinen auftreten Einbettung im Zusammenhang mit Änderungen des Volumens der eine Gewebeprobe (d. h.vor allem Schrumpfung) in allen drei Dimensionen von Raum und daher, wirkt sich auf alle Maßparameter durch quantitative stereologischen Analysen8 geschätzt . Grundsätzlich kann das Ausmaß der Einbettung im Zusammenhang mit Gewebe schrumpfen, ausgedrückt als die lineare Gewebe Schrumpfungsfaktor (fS), geschätzt werden, wie in Schritt 1.3 gezeigt. und für die Korrektur (Schrumpf-Sensitive) quantitative morphologische Parameter14verwendet.
Volumengewichteten systematische Stichproben der Organe/Gewebe Für die Einrichtung einer Biobank-Sammlung von porcinen Orgel/Gewebeproben erwiesen volumengewichteten systematische Stichproben Ansätze wie in Schritt 2 beschriebenen sich praktische, zeitsparende und effiziente Techniken für Generation des Vertreters, Mehrzweck-Gewebe Proben7,8,9,15.
Generation von isotropen einheitliche zufälligen Abschnitten und vertikale einheitliche zufällige für quantitative stereologischen Analysen Biobank Gewebeproben müssen für eine Vielzahl von verschiedenen stereologischen quantitative Analysemethoden für die Schätzung von maximal Parameter geeignet, die nicht ohne einen entsprechend vorbereiteten Probe ermittelt werden konnte. Fast alle quantitativen stereologischen Parameter können bestimmt werden, mit "isotrop (parteilos) einheitliche zufällige (IUR) Abschnitte"8,9. In IUR Abschnitten ist die dreidimensionale Ausrichtung der Schnittebene von der Gewebeprobe randomisiert. Kann dies durch Randomisierung der Position der Gewebeprobe relativ zur Position der Schnittebene, wie in der "Isector" Methode11 (Protokoll Schritt 3.1) oder durch Randomisierung der Ausrichtung der Schnittebene bezogen auf die Gewebeprobe, wie in der "Orientator" Methode10 (Protokoll Schritt 3.2). In Gewebeproben, wie Haut oder Schleimhaut Exemplar zeigt eine natürlicherweise, oder definierte und einwandfrei identifizierbare vertikale Achse, Vorbereitung der "einheitlichen zufällige (VUR) Vertikalschnitten" (Protokoll Schritt 3.3.) streng geschnittene innerhalb der Ebene von ihren vertikale Achse ist vorteilhaft8,20. Für eine vollständige Diskurs der die theoretischen Grundlagen der IUR/VUR Probenahme und eine umfassende Diskussion über nachgeschaltete quantitative stereologischen Potenzialanalysen wird der interessierte Leser zu den Lehrbüchern der quantitativen Stereologie im Leben bezeichnet. Wissenschaften8,9.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Carl Roth GmbH, Deutschland</td><td>Agar (Pulver), Kat.: 5210.3</td><td>Agar ca. 1 g Agar in 10 ml kaltem Wasser in einem Glas- oder Plastikbecherglas auflösen, in der Mikrowelle bei 700 W erhitzen, Lösung unter kräftigem Rühren zweimal aufkochen. Noch warm in die Form gießen und erstarren lassen. 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Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) and in Gundersen et al. Stereological Principles and Sampling Procedures for Toxicologic Pathologists. In: Haschek und Rousseaux&acute; s Handbuch der toxikologischen Pathologie. 3. Auflage, 215-286, ISBN: 9780124157590 (2013).</td></tr><tr><td>Foldback-Klemmen (YIHAI Binder-Clips, 15 mm und 19 mm)</td><td>Ningbo Tianhong Stationery Co ltd., China</td><td>Y10006 und Y10005</td><td>Jede andere Art von Standard-Büro-Foldback-Klemmen ist ebenfalls geeignet.</td></tr><tr><td>Pinzette (anatomisch)</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Deutschland</td><td>neoLab Standard -Pinzette 130 mm, anatomisch, rund, Kat.: 1-1811</td><td>Jede Art von anatomischer Pinzette ist geeignet.</td></tr><tr><td>Formaldehyd-Lösung 4%</td><td>SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, Deutschland</td><td>Formaldehyd 37/40 %, Kat.: 1000411525005</td><td>Auf 4% aus konzentrierter Lösung verdünnen. Puffer auf neutralen pH-Wert. Tragen Sie einen geeigneten Augen-, Hand- und Atemschutz. Verarbeiten Sie in Formaldehydlösung fixierte Gewebeproben unter einer Ablufthaube und tragen Sie eine Schutzbrille und Laborhandschuhe.</td></tr><tr><td>Millimeterpapier (zur Kalibrierung)</td><td>B&uuml; romarkt B&ouml; ttcher AG, Jena, Deutschland. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Penig Millimeterpapier A4, Kat.: 2514</td><td>Jede Art von Millimeterpapier (in Millimeter skaliert) ist geeignet.</td></tr><tr><td>Laborbecher (5ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml)</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Deutschland</td><td>Becherglas SIMAX&reg; , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Kat.: E-1031, E-1032, E-1035, E-1036</td><td>Jede Art von Glas- oder Kunststoffbechern mit einem Volumen von 5 & 100 ml ist geeignet.</td></tr><tr><td>Laborwaage(n)</td><td>Mettler Toledo GmbH, Gie&szlig; de, Deutschland</td><td>PM6000</td><td>Alle Standard-Laborwaagen mit Messbereichen zwischen 0,1 mg und ca. 20 g bzw. zwischen 100 mg und ca. 500 g werden von</td></tr><tr><td></td><td>der Sartorius AG, G&ouml; ttingen, Deutschland</td><td>BP61S</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom-Klingen</td><td>Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Ederm&uuml; nde, Deutschland</td><td>FEATHER Mikrotom blasdes S35, Kat.:14700</td><td>Jede Art von Einweg-Mikrotomklingen ist geeignet.</td></tr><tr><td>Morphometrie/Planimetrie-Software/-System</td><td>National Institute of Health (NIH)</td><td>ImageJ</td><td>Download vom https://www. imagej.nih.gov/ij/ (1997).</td></tr><tr><td>Zeiss-Kontron, Eching, Deutschland</td><td>VideoplanTM Bildanalysesystem</td><td>Nicht vorrätig</td><td></td></tr><tr><td>Fotokamera</td><td>Nikon</td><td>D40</td><td>Jede Art von digitaler Fotokamera, die auf ein Stativ montiert werden kann, ist geeignet.</td></tr><tr><td>Kunststofffolien</td><td>Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, Deutschland</td><td>Laser Overhead-Folie DINA4 Kat.:&nbsp; 3562</td><td>Jede (Laser)-bedruckbare Kunststofffolie ist geeignet.</td></tr><tr><td>Zufallszahlentabellen</td> <td>n.a.n.a.Zufallszahlentabellen</td> <td>können bequem (mit definierter Anzahl von Zufallszahlen und innerhalb definierter Intervalle) mit Hilfe von Zufallszahlengeneratoren erstellt werden, wie z.B.: https://www.random.org/</td><td></td></tr> <tr><td>Rasierklingen</td><td>Plano GmbH, Wetzlar, Deutschland</td><td>T5016</td><td>Jede Art von Rasierklingen ist geeignet.</td></tr><tr><td>Herrscher</td><td>B&uuml; romarkt B&ouml; ttcher AG, Jena, Deutschland. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Office-Point Lineal 30 cm, Kunststoff, transparent, Kat.: ln30</td><td>Jedes Lineal im cm-mm-Maßstab ist auch geeignet.</td></tr><tr><td>Kochsalzlösung (0,9 %)</td><td>Carl Roth GmbH, Deutschland</td><td>Natriumchlorid, >99 % Kat.: 0601.1</td><td>Zur Herstellung von 0,9 % Kochsalzlösung werden 9 g NaCl in 1000 ml destilliertem Wasser bei 20 °C gelöst.</td></tr><tr><td>Skalpellklingen</td><td>Aesculap AG & Co KG, Tuttlingen, Deutschland</td><td>BRAUN Chirurgische Klingen N&deg; 22</td><td>Jede Art von Skalpellklingen ist geeignet.</td></tr><tr><td>Scanner</td><td>Hewlett-Packard</td><td>hp scanjet 7400c</td><td>Jede Art von Standard-Büroscanner, der mit Auflösungen von 150-600 dpi scannen kann, ist geeignet.</td></tr><tr><td>Beispiele</td><td></td><td></td> <td>für selbst konstruierte Schneidevorrichtungen finden sich in Knust, et al. Anatomical record. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) und in der ergänzenden Datendatei von Albl et al.&nbsp; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016).</td></tr><tr><td>Kugelförmige Gießformen (z.B. in 25,5 mm Durchmesser)</td><td>Pralinen-Zutaten.de, Windach, Deutschland</td><td>Pralinen-Hohlkugeln Vollmilch, 25,5 mm</td><td>Kugelgießformen können auch selbst konstruiert oder von anderen Süßwarenlieferanten (für Pralinen) bezogen werden. Bei den hier angegebenen Gussformen handelt es sich eigentlich um die Verpackung/Umhüllung von hohlen Pralinenkörpern (zuerst die Pralinen essen und dann die Packung zur Erzeugung von i-Sektor-Abschnitten verwenden)</td></tr><tr><td>Dünner Draht</td><td>Basteln & Hobby Schobes, Stra&szlig; furth, Deutschland. www,bastel-welt.de</td><td>Messingdraht (0,3 mm) Kat.: 216464742</td><td>Jede andere Art von dünnem Draht ist auch geeignet.</td></tr><tr><td>Seidenpapier</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Deutschland</td><td>Declcate Task Wipes-White, Cat.: 1-5305</td><td>Jedes andere Labor-Seidenpapier ist ebenfalls geeignet.</td></tr><tr><td>Wasserfester Kugelschreiber</td><td>Staedler Mars GmbH & Co KG, N&uuml; rnberg, Grmany</td><td>Lumocolor permanent 313, 0.4 mm, S, schwarz, Kat.: 313-2</td><td>Jeder andere wasserfeste Stift ist auch geeignet.</td></tr></tbody></table>

probenahmestrategien und verarbeitung der biobank gewebeproben von porcinen biomedizinische modelle

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In der translationalen medizinischen Forschung haben Schweine Modelle stetig populärer geworden. In Anbetracht des hohen Wertes der einzelnen Tiere, besonders der gentechnisch veränderten Schwein, Modelle und oft zeitlich begrenzte Anzahl der verfügbaren Tiere dieser Modelle, Einrichtung (Biobank) Sammlungen von adäquat verarbeiteten Gewebeproben eignet sich für eine breites Spektrum an nachfolgende Analysemethoden, einschließlich nicht angegebene zum Zeitpunkt der Probenahme, Analysen stellen sinnvolle Ansätze für die translationale Wert des Modells voll nutzen. Im Hinblick auf die Besonderheiten des porcinen Anatomie wurden umfassende Richtlinien für standardisierte Generation Vertreter, qualitativ hochwertige Proben aus verschiedenen porcinen Organen und Geweben vor kurzem eingerichtet. Diese Richtlinien sind wesentliche Voraussetzungen für die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse und ihre Vergleichbarkeit zwischen verschiedenen Studien und Ermittler. Die Aufzeichnung der Grunddaten wie Orgel Gewichte und Volumina, die Bestimmung der Probenahme Standorte und der Anzahl der Gewebeproben erzeugt werden, sowie Ausrichtung, Größe, Verarbeitung und trimmen Richtungen sind relevante Faktoren Bestimmung der Generalizability und Nutzbarkeit der Probe zur molekularen, qualitative und quantitative morphologische Analysen. Hier ist eine anschauliche, praktische, schrittweise Demonstration der wichtigsten Techniken zur Erzeugung von Vertreter, Mehrzweck-Biobank Exemplar von porcinen Gewebe präsentiert. Die hier beschriebenen Methoden umfassen Bestimmung der Organgewebe/Volumen und Dichte, die Anwendung eines volumengewichteten systematische Stichproben für parenchymatösen Organen durch Punkt zählen, Bestimmung des Ausmaßes der Schrumpfung des Gewebes im Zusammenhang mit histologische Einbettung der Proben und Generierung von zufällig orientierte Proben für quantitative stereologischen Analysen, z. B. isotrop einheitliche zufällige (IUR) Abschnitte erzeugt durch die "Orientator" und "Isector" Methoden und vertikale uniform zufällige (VUR) Abschnitte.

Eintauchen-Technik zur Bestimmung der Dichte Gewebe/organ
Abbildung 12A -B zeigt die repräsentative Bestimmung der Dichte und Volumen einer porcinen Niere mit der Überflutung Technik im Schritt 1.1 (Abbildung 1, Abbildung 2) beschrieben. Repräsentative Ergebnisse der Dichtemessungen zusätzliche porcinen Organe und Gewebe sind ...

Die praktische Anwendung und Leistung der Methoden für die Generation von repräsentativen Gewebeproben von porcinen Tiermodellen für ein breites Spektrum an nachgeschalteten Analysen in Biobank Projekte gezeigt, darunter Volumetrie, systematische Stichproben und differenzierte Aufbereitung von Gewebeproben für qualitative und quantitative morphologische und molekulare Analysen Arten.

Probenahmestrategien und Verarbeitung der Biobank Gewebeproben von porcinen biomedizinische Modelle

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Dieses Video zeigt zwei Schlüsseltechniken für die Probenahme und Verarbeitung von Gewebeproben von Biobank-Schweinen. Die Submersionstechnik schätzt zuverlässig das gesamte Organ- und Gewebevolumen und die Orientatortechnik erzeugt zufällige isotrope Gewebeschnitte für eine unverzerrte Schätzung quantitativer morphologischer Parameter. Der Hauptvorteil der Tauchtechnik zur Bestimmung der Gewebedichte besteht darin, dass sie auf jede Art von Gewebe angewendet werden kann und sowohl bei kleinen als auch bei großen Proben zuverlässige Ergebnisse liefert.Die Vorteile der Orientatortechnik liegen darin, dass sie hocheffizient ist und auch mit großen Gewebeproben funktioniert. Um mit der Volumetrie für ein großes Organ zu beginnen, entfernen Sie ein entsprechend großes Stück Gewebe aus dem Organ. Tupfen Sie die Probe vorsichtig mit einem Papiertuch ab, um überschüssiges Blut und Gewebeflüssigkeit zu entfernen.Wiegen Sie dann die Probe auf einer Präzisionswaage und notieren Sie das Gewicht der Probe. 0,9 % Kochsalzlösung in ein Becherglas geeigneter Größe geben. Füllen Sie das Becherglas nicht vollständig, um ein Überlaufen während des Eintauchens des Gewebes zu verhindern.Stellen Sie da

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dies ist ein Protokoll für die optimale Gewebevorbereitung für genomische, transkriptomische und proteomische Analysen von Fledermäusen, die in freier Wildbahn gefangen sind. Es enthält Protokolle für Fledermaus-Capture und -Sektion, Gewebekonservierung, und Zellkultivierung von Fledermausgewebe.

Gewebesammlung von Fledermäusen für -Omics Analysen und primäre Zellkultur

In diesem Protokoll wurden schweinespezifische Primer entwickelt, Plasmiden enthaltende Porenspezifische DNA-Fragmente konstruiert und Standardkurven für die Quantifizierung festgelegt. Anhand artspezifischer Primer wurde cpsDNA durch qPCR in Schweine-zu-Maus-Zelltransplantationsmodellen und Schweine-zu-Affen-Arterien-Patch-Transplantationsmodellen quantifiziert.

Quantifizierung der zirkulierenden schweinespezifischen DNA im Blut eines Xenotransplantationsmodells

Dieses Protokoll beschreibt die Technik zur Entfernung des Schweinehirns in seiner Gesamtheit und Diesektion mehrerer Hirnregionen, die häufig in der Neurowissenschaft untersucht werden.

Extraktion und Zerlegung des domestizierenden Schweinehirns

In der folgenden Arbeit beschreiben wir die aufeinanderfolgenden Schritte, die für die Errichtung einer großen Biobank von Dickdarm- und Bauchspeicheldrüsenkrebs notwendig sind.

Schaffung und Pflege einer lebenden Biobank - Wie wir es tun

The endothelium is a dynamic integrated structure that plays an important role in many physiological functions such as angiogenesis, hemostasis, ...

Charakterisierung von Blood Outgrowth Endothelial Cells (BOEC) aus porcinem peripherem Blut

Biobanken sind wichtige Ressourcen für die biomedizinische Forschung und die Biobank for Translational and Digital Medicine Unit am European Institute of Oncology ist ein Modell auf diesem Gebiet. Hier bieten wir eine detaillierte Beschreibung der Standardarbeitsanweisungen von Biobanken für das Management verschiedener Arten von humanbiologischen Proben.

Biobank für translationale Medizin: Standardarbeitsanweisungen für optimales Probenmanagement

Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Erleichterung der Entnahme von Proben aus radikalen Prostatektomieproben. Ziel ist es, Gewebeproben aus den Proben nach anatomisch-pathologischen Kriterien zu kartieren, zu charakterisieren und zu mikro-präparieren, bevor sie in einer Biobank gelagert werden.

Verbesserung der Zuverlässigkeit von Prostatatumor-Biobanken durch verbesserte Probenahmetechnik und histologische Charakterisierung

Dieses Protokoll beschreibt die Durchführung einer Kraniektomie mit einem Hochgeschwindigkeits-Druckluftbohrer an einem 3 Monate alten dänischen Landrasseschwein. Der Zugang erfolgt über das Stirnbein und gibt den Blick auf die ventrale Dura mater und die darunter liegenden Gehirnhälften frei. Dieses Verfahren ermöglicht den Zugang zu einem großen Teil des Schweinegehirns.

Zugang zum Schweinehirn über eine pneumatische Hochgeschwindigkeitsbohrer-Kranektomie

Hier präsentieren wir eine Standardmethode zur effizienten Isolierung von fettabgeleiteten Stammzellen und Adipozyten, gekennzeichnet durch &gt;90 % Verkürzung der Verarbeitungszeit, hohe Zelllebensfähigkeit und breite Kompatibilität.

Effiziente Isolierung von fett-abgeleiteten Stammzellen und Adipozyten aus schweine-fetthaltigem Gewebe

In den folgenden Abschnitten beschreiben wir Verfahren zur Herstellung von Alginat-Mikrokugeln für den Einsatz in biomedizinischen Anwendungen. Wir illustrieren speziell eine Technik zur Erstellung mehrschichtiger Alginat-Mikrokugeln für den doppelten Zweck der Zell-und Protein-Kapselung als potenzielle Therapie für Typ 1 Diabetes.

Erzeugung von Alginat-Mikrokugeln für biomedizinische Anwendungen

Lernen Sie die Submersions- und Orientator-Techniken zur Probennahme und Volumetrie von Schweinegeweben für biomedizinische Biobanken. Diese Methoden ermöglichen zuverlässige morphologische Analysen.

Probenahmestrategien und Verarbeitung der Biobank Gewebeproben von porcinen biomedizinische Modelle

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