Name: Lipid-Index Bestimmung von flüssigen Fluoreszenz Erholung der pilzliche Erreger Ustilago Maydis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 22 s
Description: Erfahren Sie die Bestimmung des Lipid-Index in Ustilago maydis mittels flüssiger Fluoreszenz-Erholung. Diese Hochdurchsatzmethode mit BODIPY 493/503 ermöglicht die Analyse von Lipidakkumulation unter verschiedenen Nährstoffbedingungen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde unterstützt durch Zuschüsse des Instituto Politécnico Nacional-Secretaria de Investigación y Posgrado (IPN-SIP-20170864), Programa de Apoyo ein Proyectos de Investigación e Innovación Tecnológica (PAPIIT IN222117)-Universidad Nacional Autónoma de México () UNAM) und Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT 254904-JPP und 256520-GGS). Fundação de Amparo eine Pesquisa Rio De Janeiro (FAPERJ-Cientistas Nosso Estado: E 26/103.353/2011). Wir dank QFB. Oscar Iván Luqueño Bocardo für die schematische Übersicht. Wir danken Dr. Miguel Tapia Rodríguez für die wertvolle Hilfe in der konfokalen Mikroskopie von LDs. Wir möchten danken Dr. Bruno Bozaquel Morais für seine Pionierarbeit bei der Entwicklung der Technik in S. Cerevisiae , die wir für U. Maydisangepasst.

1. Vorbereitung der Puffer und Lösungen
<ol><li>Zur Vorbereitung von 1 L Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS, pH 7), 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na2HPO4, 0,24 g KH2PO4 in 800 mL distillated Wasser auflösen. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,0 mit HCl, und fügen Sie Wasser für ein Endvolumen von 1 L. PBS als ein 10 x-Stammlösung und bei Raumtemperatur gelagert werden kann.</li>
	<li>Fügen Sie 1 mL 37 % Formaldehyd um 10 mL der Lösung Befestigung vorzubereiten hinzu, 9 mL PBS, eine Endkonzentration von 3,7 % zu erreichen. Diese Lösung kurz vor dem Einsatz vorzubereiten. Achtung: Benutzen Sie Handschuhe, um die Formaldehyd-Lösung zu behandeln.</li>
	<li>Zur Vorbereitung der abschrecken-Lösung (500 mM) lösen Sie 8,3 g Ki in 100 mL destilliertem Wasser. Diese Lösung vor Gebrauch zubereiten und bei Zimmertemperatur aufbewahren.</li>
	<li>BODIPY 10 mM Stammlösung vorbereiten, lösen Sie 10 mg von BODIPY 493/503 in 3,8 mL Dimethyl Sulfoxid (DMSO). Halten Sie 100 µL-Aliquots in der Dunkelheit bei-70 ° C.</li>
	<li>Fügen Sie zur Vorbereitung BODIPY 5 µM-abschrecken-Lösung 1 µL 10 mM BODIPY 493/503 bis 2 mL 500 mM abschrecken Lösung. Für die LFR-Assay ist eine Endkonzentration von 5 µM BODIPY erforderlich.</li>
	<li>Zur Vorbereitung der Mineralien-Lösung hinzufügen 0,06 g H3BO3, 0,14 g MnCl2-4 H2O, 0,4 g ZnCl2, 0,04 g Na2MoO4-2 H2O, 0,1 g FeCl3-6 H2O und 0,4 g CuSO 4-5 H2O, 1 L destilliertes Wasser.</li>
	<li>Zur Vorbereitung der Salzlösung zugeben Sie 16 g KH2PO4, 4 g Na2SO4, 8 g KCl 2 g MgSO4, 1 g CaCl2und 8 mL Mineral-Lösung zu 1 L Wasser destilliertem.</li>
	<li>Zur Vorbereitung der minimalen Medium ohne Stickstoffquelle für U. Maydis FB2 (a2b2), 1 L destilliertes Wasser, 10 g Glukose und 62,5 mL Kochsalzlösung hinzufügen, nach Holliday, Et Al. 31. sterilisieren sie den pH-Wert auf 7,0 einstellen und dann 100 mL der Medien in 250 mL Flaschen zu verzichten. Autoklaven für 20 min bei 15 Psi (1,05 kg/cm2) auf flüssigen Zyklus oder Filter zu sterilisieren.</li>
	<li>Um die Hefe Pepton Traubenzucker Medium (YPD) vorzubereiten, fügen Sie 5 g Hefe-Extrakt, 2,5 g Pepton, und 5 g Glukose zu 1 L destilliertes Wasser hinzu. 100 mL der Lösung in 250 mL Flaschen zu verzichten und sie zu sterilisieren. Autoklaven für 20 min bei 15 Psi (1,05 kg/cm2) auf flüssigen Zyklus oder Filter zu sterilisieren.</li>
</ol>(2) Kultur Zustand und Zelle Fixierung
Hinweis: Bewahren Sie die Struktur der lokalen Entwicklungsstrategie durch die Fixierung der Zellen so bald wie möglich. Die Fixierung erfolgt in Mikrozentrifugenröhrchen. Fixe Zellen können bis zu einen Monat lang bei 4 ° C gehalten werden, wenn Austrocknung vermieden wird, so dass eine dünne Schicht des Wassers.
<ol><li>Wachsen Sie U. Maydis Zellen unter Kulturbedingungen für das Studium relevant. Starten Sie die Kultur mit einer anfänglichen OD600 von 0,05 (1,15 × 106 Zellen / mL). Inkubation der Zellen bei 28 ° C, 180 u/min für 24 h. Ein OD600 von 1 entspricht 2,3 × 107 Zellen / mL.</li>
	<li>Bei den ausgewählten Zeiten zurückziehen ein Aliquot der Zellen. Zurückziehen Sie für U. Maydis 5 mL alle 2 h in den ersten 8 h. Nach 8 h des Wachstums Aliquote von 2 mL genügen.</li>
	<li>Messung die optische Dichte bei 600 nm jedes aliquoten.</li>
	<li>Zentrifugieren der Zellsuspension bei 14.000 x g für 1 min bei 4 ° C mit einer Tischplatte Zentrifuge. Verwerfen Sie den überstand.</li>
	<li>Das Pellet der Zellen in 1 mL PBS-Formaldehyd 3,7 % Puffer auszusetzen. Inkubieren Sie die Zellen für 15 min bei Raumtemperatur.</li>
	<li>Nach der Inkubation Zentrifugieren der Zellsuspension bei 14.000 x g für 1 min bei 4 ° C. Verwerfen Sie den überstand.</li>
	<li>Waschen Sie die Zellen Pellet zweimal mit einem ähnlichen Volumen von destilliertem Wasser (1 mL). Zentrifugieren der Zellsuspension bei 14.000 x g für 1 min bei 4 ° C. Entsorgen Sie den Überstand nach jedem Waschschritt.</li>
	<li>Passen Sie die Zelle Pellet bis 5 OD600 (1,15 x 108 Zellen / mL) mit destilliertem Wasser (Gleichung 1). <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57279/57279eq1.jpg">    Gleichung 1.
</li>
	<li>Halten Sie die Probe bei 4 ° C, bis seine Verwendung.</li>
</ol>3. flüssige Fluoreszenz-Recovery-Assay (LFR)
<ol><li>Schalten Sie das Spektrophotometer und öffnen Sie die Skanlt-Software. Klicken Sie auf NEW SESSION, und wählen Sie START und dann Varioskan Lux. Wählen Sie Protokoll aus der Sitzung Struktur, geben Sie die Einstellungen für die Fluoreszenz-Wellenlängen (Erregung 485 nm/Emission 510 nm; optische Dichte 600 nm) und automatische Photomultiplier Gain. Bei der Anregung Bandbreite wählen Sie 12 nm. Wählen Sie in der Optik, oben (Anregung der Stichprobe ist von der Spitze des Brunnens).</li>
	<li>Geben Sie eine sanfte und ständige Unruhe (300 u/min). Wählen Sie Platte laufen herausund PAUSE bis die BENUTZERAKTION (Zeit für die Zugabe der Probe in die Vertiefungen). Wiederholen Sie das Protokoll fünf Mal. Klicken Sie auf Speichern , und geben Sie einen Namen für die Sitzung auf dem Feld "NAME" SESSION. Das Protokoll ist jetzt bereit für die Proben-Analysen.</li>
	<li>Fügen Sie 200 µL BODIPY 5 µM - Lösung in jede Vertiefung eine 96 gut schwarz-Clear Bodenplatte abgeschreckt.</li>
	<li>Die Platte im Inneren der Kammer Spektralphotometer und inkubieren Sie 5 min bei 30 ° C. Schützen Sie ab diesem Zeitpunkt die Platte aus Licht so weit wie möglich.</li>
	<li>Klicken Sie auf die Schaltfläche " START " und lesen Sie die Fluoreszenz (Erregung 485/Emission 510) und die OD600 entspricht die Rohlinge.</li>
	<li>Fügen Sie 5 µL Zellsuspension Formaldehyd fixiert in den Vertiefungen während der Pausenzeit. Vermengen Sie die Proben mit der Pipette vorsichtig. Setzen Sie die Platte im Inneren das Spektrophotometer und klicken Sie auf weiter. Dann werden die Proben nach dem Protokoll entwickelt, über verarbeitet.</li>
	<li>Wiederholen Sie drei aufeinander folgende Ergänzungen von 5 µL Zellsuspension. Stellen Sie sicher, dass die Zellen nicht überstürzen zu tun. (Abbildung 1).</li>
</ol>4. Berechnung des Indexes LD
<ol><li>Für jede Probe in die Mikrotestplatte Grundstück ein Diagramm der Fluoreszenz und Extinktion gegen die Lautstärke jeder aufeinanderfolgenden Zugabe (5 Punkte einschließlich der Leerzeichen). Verwenden Sie in dieser Studie Microsoft Excel Software für die Berechnungen. Plot-Daten, geben Volumen, Fluoreszenz und Extinktion Daten in der ersten, zweiten und dritten Spalte des Datenblatts, beziehungsweise. Wählen Sie dann die ganzen Daten mit dem Cursor, klicken Sie auf einfügen und wählen Sie (XY) streuen.</li>
	<li>Wählen Sie die Punkte für jede Linie im Diagramm, und fügen Sie die jeweiligen TRENDLINIE mit Feld Zeigen Gleichung ausgewählt. Notieren Sie die Werte von den Hängen des die zwei geraden Linien nach Gleichung 2: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57279/57279eq2.jpg">    Gleichung 2 Wo y = Fluoreszenz oder optische Dichte, X = Volumen der Probe (0, 5, 10, 15, 20 µL), m = Steigung der Fluoreszenz oder optische Dichte Linie und b = y-Achsenabschnitt.</li>
	<li>Teilen Sie die Steigung der Fluoreszenz-Linie durch die Steigung der Linie optische Dichte den LD-Index, Gleichung 3 abgerufen. <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/57279/57279eq3.jpg">    Gleichung 3 Der LD-Index entspricht dem Quotienten der Fluoreszenz und optische Dichte Pisten.</li>
</ol>5. Qualität der Datenanalyse
<ol><li>Der Korrelationskoeffizient jeder geraden zu berechnen: Klicken Sie auf den Funktions-Assistenten (fx) und wählen Sie CORREL. Wenn r &lt; 0.9, die Daten zu verwerfen und wiederholen Sie die Messwerte. Wenn r ≥ 0,9, Lesungen zuverlässig sind.</li>
</ol>

<ol><li>Guo, Y., Cordes, K. R., Farese, R. V., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplets+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Lipid droplets at a glance.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 749-752 (2009).</li>
<li>Welte, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+roles+for+lipid+droplets%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Expanding roles for lipid droplets.</a> Current Biology. 25 (11), R470-R481 (2015).</li>
<li>Sestric, R., Munch, G., Cicek, N., Sparling, R., Levin, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+neutral+lipid+synthesis+by+Yarrowia+lipolytica+on+various+carbon+substrates+under+nutrient-sufficient+and+nutrient-limited+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresource+Technology%22%5BJournal%5D)">Growth and neutral lipid synthesis by Yarrowia lipolytica on various carbon substrates under nutrient-sufficient and nutrient-limited conditions.</a> Bioresource Technology. 164, 41-46 (2014).</li>
<li>Raimondi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+lipids+from+glycerol%3A+new+perspectives+on+biotechnological+exploitation+of+Candida+freyschussii%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Cell+Factories%22%5BJournal%5D)">Getting lipids from glycerol: new perspectives on biotechnological exploitation of Candida freyschussii.</a> Microbial Cell Factories. 13, 83(2014).</li>
<li>Cescut, J., Fillaudeau, L., Molina-Jouve, C., Uribelarrea, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+accumulation+in+Rhodotorula+glutinis+induced+by+nitrogen+limitation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+for+Biofuels%22%5BJournal%5D)">Carbon accumulation in Rhodotorula glutinis induced by nitrogen limitation.</a> Biotechnology for Biofuels. 7, 164(2014).</li>
<li>Galafassi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+production+for+second+generation+biodiesel+by+the+oleaginous+yeast+Rhodotorula+graminis%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresource+Technology%22%5BJournal%5D)">Lipid production for second generation biodiesel by the oleaginous yeast Rhodotorula graminis.</a> Bioresource Technology. 111, 398-403 (2012).</li>
<li>Kot, A. M., Blazejak, S., Kurcz, A., Gientka, I., Kieliszek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhodotorula+glutinis-potential+source+of+lipids%2C+carotenoids%2C+and+enzymes+for+use+in+industries%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Rhodotorula glutinis-potential source of lipids, carotenoids, and enzymes for use in industries.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 100 (14), 6103-6117 (2016).</li>
<li>Rakicka, M., Lazar, Z., Dulermo, T., Fickers, P., Nicaud, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+production+by+the+oleaginous+yeast+Yarrowia+lipolytica+using+industrial+by-products+under+different+culture+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+for+Biofuels%22%5BJournal%5D)">Lipid production by the oleaginous yeast Yarrowia lipolytica using industrial by-products under different culture conditions.</a> Biotechnology for Biofuels. 8, (2015).</li>
<li>Zhu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+Lipid+Droplet+Proteome+of+the+Oleaginous+Yeast+Rhodosporidium+toruloides%5BTitle%5D)+AND+%22Eukaryotic+Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the Lipid Droplet Proteome of the Oleaginous Yeast Rhodosporidium toruloides.</a> Eukaryotic Cell. 14 (3), 252-264 (2015).</li>
<li>Kolouchova, I., Mat'atkova, O., Sigler, K., Masak, J., Rezanka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+Palmitoleic+and+Linoleic+Acid+in+Oleaginous+and+Nonoleaginous+Yeast+Biomass%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Production of Palmitoleic and Linoleic Acid in Oleaginous and Nonoleaginous Yeast Biomass.</a> International Journal of Analytical Chemistry. , (2016).</li>
<li>Radulovic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+lipid+droplets+in+yeast%3A+current+status+and+experimental+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Genetics%22%5BJournal%5D)">The emergence of lipid droplets in yeast: current status and experimental approaches.</a> Current Genetics. 59 (4), 231-242 (2013).</li>
<li>Takahashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perilipin-Mediated+Lipid+Droplet+Formation+in+Adipocytes+Promotes+Sterol+Regulatory+Element-Binding+Protein-1+Processing+and+Triacylglyceride+Accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Perilipin-Mediated Lipid Droplet Formation in Adipocytes Promotes Sterol Regulatory Element-Binding Protein-1 Processing and Triacylglyceride Accumulation.</a> Plos One. 8 (5), e64605(2013).</li>
<li>Thiam, A. R., Farese Jr, R. V., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biophysics+and+cell+biology+of+lipid+droplets%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The biophysics and cell biology of lipid droplets.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 14 (12), 775-786 (2013).</li>
<li>Penno, A., Hackenbroich, G., Thiele, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospholipids+and+lipid+droplets%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Phospholipids and lipid droplets.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1831 (3), 589-594 (2013).</li>
<li>Ageitos, J. M., Vallejo, J. A., Veiga-Crespo, P., Villa, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oily+yeasts+as+oleaginous+cell+factories%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Oily yeasts as oleaginous cell factories.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 90 (4), 1219-1227 (2011).</li>
<li>Athenstaedt, K., Daum, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+life+cycle+of+neutral+lipids%3A+synthesis%2C+storage+and+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">The life cycle of neutral lipids: synthesis, storage and degradation.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 63 (12), 1355-1369 (2006).</li>
<li>Marshall, L. L., Stimpson, S. E., Hyland, R., Coorssen, J. R., Myers, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+lipid+droplet+accumulation+associated+with+a+peripheral+sensory+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Increased lipid droplet accumulation associated with a peripheral sensory neuropathy.</a> Journal of Biological Chemistry. 7 (2), 67-76 (2014).</li>
<li>Filipe, A., McLauchlan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+C+virus+and+lipid+droplets%3A+finding+a+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hepatitis C virus and lipid droplets: finding a niche.</a> Trends in Molecular Medicine. 21 (1), 34-42 (2015).</li>
<li>Greenberg, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+lipid+droplets+in+metabolic+disease+in+rodents+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The role of lipid droplets in metabolic disease in rodents and humans.</a> Journal of Clinical Investigation. 121 (6), 2102-2110 (2011).</li>
<li>Aguilar, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplets+accumulation+and+other+biochemical+changes+induced+in+the+fungal+pathogen+Ustilago+maydis+under+nitrogen-starvation%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Lipid droplets accumulation and other biochemical changes induced in the fungal pathogen Ustilago maydis under nitrogen-starvation.</a> Archives of Microbiology. , (2017).</li>
<li>Bozaquel-Morais, B. L., Madeira, J. B., Maya-Monteiro, C. M., Masuda, C. A., Montero-Lomeli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+fluorescence-based+method+identifies+protein+phosphatases+regulating+lipid+droplet+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A new fluorescence-based method identifies protein phosphatases regulating lipid droplet metabolism.</a> PLoS One. 5 (10), e13692(2010).</li>
<li>Madeira, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TORC1+Inhibition+Induces+Lipid+Droplet+Replenishment+in+Yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">TORC1 Inhibition Induces Lipid Droplet Replenishment in Yeast.</a> Molecular and Cellular Biology. 35 (4), 737-746 (2015).</li>
<li>Maya-Monteiro, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptin+induces+macrophage+lipid+body+formation+by+a+phosphatidylinositol+3-kinase-+and+mammalian+target+of+rapamycin-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Leptin induces macrophage lipid body formation by a phosphatidylinositol 3-kinase- and mammalian target of rapamycin-dependent mechanism.</a> Journal of Biological Chemistry. 283 (4), 2203-2210 (2008).</li>
<li>Listenberger, L. L., Brown, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aListenberger%2C+LL+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22">Current Protocols in Cell Biology</a>. , John Wiley & Sons, Inc. (2001).</li>
<li>Jump, D. B., Torres-Gonzalez, M., Olson, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soraphen+A%2C+an+inhibitor+of+acetyl+CoA+carboxylase+activity%2C+interferes+with+fatty+acid+elongation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Soraphen A, an inhibitor of acetyl CoA carboxylase activity, interferes with fatty acid elongation.</a> Biochemical Pharmacology. 81 (5), 649-660 (2011).</li>
<li>Hobro, A. J., Smith, N. I. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0924203116302995">An evaluation of fixation methods: Spatial and compositional cellular changes observed by Raman imaging.</a> Vibrational Spectroscopy. 91, 31-45 (2017).</li>
<li>Chen, Y. T., Wan, L., Zhang, D. P., Bian, Y. Z., Jiang, J. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+spectroscopic+property+of+Bodipy+derivates+through+tuning+the+molecular+configuration%5BTitle%5D)+AND+%22Photochemical+%26+Photobiological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Modulation of the spectroscopic property of Bodipy derivates through tuning the molecular configuration.</a> Photochemical & Photobiological Sciences. 10 (6), 1030-1038 (2011).</li>
<li>Pagac, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SEIPIN+Regulates+Lipid+Droplet+Expansion+and+Adipocyte+Development+by+Modulating+the+Activity+of+Glycerol-3-phosphate+Acyltransferase%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">SEIPIN Regulates Lipid Droplet Expansion and Adipocyte Development by Modulating the Activity of Glycerol-3-phosphate Acyltransferase.</a> Cell Reports. 17 (6), 1546-1559 (2016).</li>
<li>Qiu, B., Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BODIPY+493%2F503+Staining+of+Neutral+Lipid+Droplets+for+Microscopy+and+Quantification+by+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">BODIPY 493/503 Staining of Neutral Lipid Droplets for Microscopy and Quantification by Flow Cytometry.</a> Bio-protocol. 6 (17), (2016).</li>
<li>Rumin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+fluorescent+Nile+red+and+BODIPY+for+lipid+measurement+in+microalgae%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+for+Biofuels%22%5BJournal%5D)">The use of fluorescent Nile red and BODIPY for lipid measurement in microalgae.</a> Biotechnology for Biofuels. 8, 42(2015).</li>
<li>Holliday, R. Ustilago maydis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHolliday%2C+R+%22Handbook+of+genetics%22">Handbook of genetics</a>. King, R. , Plenum. New York. 575-595 (1974).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zur Offenlegung

LFR ist eine neuartige Methode, die angewendet wurde, zum ersten Mal um den Fettstoffwechsel in S. Cerevisiae und später zu studieren, es erfolgreich war, umgesetzt U. Maydis20,21. Obwohl der LD-Index keinen absoluten Wert der Variablen in Zellen angesammelt geben, freuen Sie sich auf einen schnellen Überblick der Lipidgehalt der Zellen und die Interpretation der Daten ist einfach, wenn LD Index von zwei oder mehr experimentellen Bedingungen ver...

Lipid-Tröpfchen (LDs) sind allgegenwärtige intrazellulären Fett Körper, bestehend aus einem Kern von neutralen Lipiden, vor allem TAGs und Sterol Ester (SE). Der Kern ist umgeben von einer Monoschicht von Phospholipiden, die mit Proteinen wie Perilipin und Enzyme beteiligt an der Synthese von neutralen Lipiden, wie Diacylglycerol Acyl-Transferase, Acetyl-CoA Carboxylase und Acyl-CoA-Synthase-1interagiert. Durch sein dynamisches Verhalten enthält die Phospholipid-Monolayer auch Triacylglycerol Lipasen, die TAGs und SE2Hydrolyseneigung. Je nach Zelltyp und Organismus gespeicherten neutralere Lipiden können verwendet werden, um Energie zu erzeugen, oder synthetisieren Phospholipide und Signalmoleküle. In Hefen und anderen Pilzen ändert den Inhalt des LDs in Reaktion auf eine sich ändernde Stickstoff/Kohlenstoff-Verhältnis in Kulturmedien, darauf hinweist, dass verminderte Stickstoffverfügbarkeit möglicherweise der Schlüssel zu neutral Lipid Produktion3,4 zu erhöhen ,5. Die Produktion von hohen Mengen von TAGs in der Hefe hat eine mögliche Verwendung in der Biotechnologie als Quelle von Biokraftstoffen und in der Lebensmittelindustrie. Einige gespeicherte Lipide enthalten hohe Anteile an mehrfach ungesättigten Fettsäuren wie Omega-3 und Omega-6, mit Ernährungs- und diätetische Bedeutung 6,7,8,9,10 , 11. LDs von Säugerzellen, einschließlich der menschlichen Zellen enthalten auch TAGs und Cholesterin-Ester. Die Phospholipid-Monolayer interagiert mit den Säugetieren homologe Proteine, die in der Hefe LDs beschrieben und mit einem zusätzlichen Protein, Perilipin, der abwesend ist in S. Cerevisiae12. Eine vorgeschlagene Rolle für die Phospholipid-Monolage und seiner damit verbundenen Proteine, die LDs-Struktur zu stabilisieren und damit die Interaktion von LDs mit Organellen als endoplasmatische Retikulum, Mitochondrien, Peroxisomen und Vakuolen, vor allem für Lipid Austausch ist 13,14. Interessanterweise scheinen beim Menschen, LDs Krankheiten wie Typ-2-Diabetes, Arteriosklerose, Steatohepatitis und koronare Herzkrankheit, in dem gibt es eine Zunahme der Zahl 15,16,17 beteiligt sein . Einige Arten von Viren nutzen LDs als Plattformen zusammenzubauen Virionen 2,18,19.
Aufgrund der Auswirkungen der lokalen Entwicklungsstrategie in menschliche Pathologien und deren biotechnologische Einsatzmöglichkeit ist die genaue experimentelle Bestimmung der LDs-Bildung eine wichtige Aufgabe. Dieser Artikel beschreibt eine zuverlässige Assays basierend auf die Erholung der Fluoreszenz (LFR) von BODIPY 493/503 (4, 4-Difluoro-1, 3, 5, 7, 8-Pentamethyl-4-Bora-3a, 4a-Diaza-s-Indacene), um einen relativen Wert des Inhalts der neutrale Lipide in den Zellen zu bekommen. Mit diesem Test ist es möglich, die Dynamik der Anhäufung von neutralen Lipiden in Pilzen wie U. Maydis und S. Cerevisiae, und auch in Säugetierzellen, ohne die Notwendigkeit von Lipid-Extraktion 20. folgen Die Methode angewendet wurde, zum ersten Mal in S. Cerevisiae zu identifizieren, die Protein-Phosphatasen und Kinasen beteiligt die Regulierung des Fettstoffwechsels. Dies war möglich ohne Lipid-Extraktion oder Protein Reinigung21,22. LFR wurde auch verwendet, um die Dynamik der LDs-Formation im peritonealen Makrophagen23zu etablieren. Die Verwendung von BODIPY 493/503 hat einige Vorteile gegenüber anderen neutral Lipid-Farbstoffe als Nil rot. BODIPY 493/503 ist hochspezifisch für neutrale Lipide und hat einen schmalen Emissionsspektrum erleichtern die simultane Detektion der Signale von Farbstoffen wie rot fluoreszierende Protein oder Mito-Tracker, wenn die Proben durch konfokale Mikroskopie analysiert werden. Leider BODIPY 493/503 ist empfindlich gegenüber Immunofluoreszenz, aber dieser Prozess kann mithilfe einer antiquenching Reagenz während der Exposition gegenüber Licht24vermieden werden.
Zur Durchführung der LFR Assay in Hefezellen, sie sind unter den gewünschten Ernährungs-Bedingungen kultiviert und Aliquote sind zu unterschiedlichen Zeitpunkten zurückgezogen. Als nächstes werden Zellen mit Formaldehyd, fixiert, die die Integrität des LDs monatelang bewahrt wenn Zellen bei 4 ° c gelagert werden Ndere Fixierung sollte vermieden werden, vor allem diejenigen, die mit Methanol oder kaltem Aceton, da sie zum Abbau der LDs innerhalb der Zellen24führen. Um den LD-Index zu messen, sind Formaldehyd-feste Zellen im Wasser zu einer definierten Konzentration ausgesetzt. Dann werden sie zu einer Lösung mit der Fluorophor BODIPY 493/503 abgeschreckt durch KI hinzugefügt, und wenn der Fluorophor die Zelle betritt und die LDs ordnet, gibt es eine Erholung der seine Fluoreszenz. Begleitende der Fluoreszenz-Messung (485 nm/510 nm), die Konzentration der Zellen wird quantifiziert durch die Messung der optischen Dichte bei 600 nm. Jede Probe wird viermal gelesen, indem nachfolgende 5 µL Aliquots Formaldehyd fixiert Zellsuspension zu gleich gut. Rohlinge von Fluoreszenz und Absorption sind vor der Zugabe von Zellen erworben. Die Qualität der Fluoreszenz und die Extinktion-Daten werden durch die Bestimmung der Linearität der Messungen ausgewertet: Wenn R < 0.9, Daten werden verworfen. Der R-Wert ist wichtig, weil im Grunde die Intensität der Fluoreszenz eine lineare Reaktion auf steigenden Zelle Konzentrationen produzieren sollte. Wenn die Zellkonzentration zu hoch ist, ist die Linearität verloren. Der LFR-Test bietet eine schnelle, einfache und wirtschaftliche Methode, um wählen die gewünschte LD-Phänotyp im Hochdurchsatz-Experimente. Nach der Auswahl der gewünschten Bedingungen, kann der LD-Inhalt der einzelnen Zellen durch konfokale Mikroskopie, Verwendung der gleichen Formaldehyd-feste Zellen befleckt mit BODIPY, bietet ein Bild von der Kirche Jesu Christi in der Zelle untersucht werden. Ihre TAGs und SE Inhalte können jetzt weiter durch Dünnschichtchromatographie analysiert werden.

<table><tbody><tr><td>Spektralphotometer</td><td>Varioskan Lux Multimode-Mikroplatte mit Ablesung</td><td>D5879</td><td>Filter 493/503 oder Monochromator-Detektor</td></tr><tr><td>Plate costar</td><td>Corning Inc.</td><td>3615</td><td>96-Well-Zellkulturplatte mit schwarzer Wand/klarem Boden</td></tr><tr><td>Co-Star</td><td>Corning Inc</td><td>3598</td><td>96-Well-Zellkulturplatte Co-Star</td></tr><tr><td>BODIPY 493/503</td><td>Invitrogen/ Thermofisher</td><td>D3922</td><td>4,4-Difluor-1,3,5,7,8-pentamethyl-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacen</td></tr><tr><td>Formaldehydlösung</td><td>Sigma Aldrich</td><td>252549</td><td>ACS-Reagenz, 37 Gew.-% in H2O, enthält 10-15 % Methanol, um eine Polymerisation zu verhindern</td></tr><tr><td>Kaliumiodid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60399</td><td>BioUltra, &ge; 99,5% (AT)</td></tr><tr><td>FB2 Ustilago maydis</td><td>ATCC</td><td>201384</td><td>Basidiomyceten-Hefe</td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>746398</td><td>ACS-Reagenz, anorganisches Salz</td></tr><tr><td>Kaliumphosphat monobasisch</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P0662</td><td>ACS-Reagenz</td></tr><tr><td>Select Hefeextrakt</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Y100</td><td>Mischung aus Aminisäuren, Peptiden, wasserlöslichen Stoffen, Vitaminen und Kohlenhydraten für Nährmedien</td></tr><tr><td>N-Z Gehäuse plus</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N4642</td><td>Kasein enzymatisches Hydrolysat aus Rindermilch</td></tr><tr><td>Glukose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G-8270</td><td>D (+) Glukose</td></tr><tr><td>Skaker Kolben</td><td>Pirex</td><td>CLS4450250-6EA</td><td>Borosisikatglas</td></tr><tr><td>Schüttler</td><td>SEV M&eacute; xico</td><td>INO650V-7</td><td>Orbitalschüttler</td></tr><tr><td>Zentrifugentisch</td><td>Eppendorf</td><td>5415C</td><td>Zentrifuge</td></tr><tr><td>Mikroröhrchen</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z606340</td><td>Eppendorf</td></tr><tr><td>Pipettenspitzen</td><td>Axygen scientific</td><td>T-200-Y</td><td>Universal-Pipettenspitzen mit abgeschrägtem Ende, 200 Mikroliter, unsterile</td></tr><tr><td>mLine-Pipette</td><td>Biohit</td><td>725130</td><td>8 Kanäle, Volumenbereich 5-100 μl</td></tr></tbody></table>

lipid-index bestimmung von flüssigen fluoreszenz erholung der pilzliche erreger ustilago maydis

Lipid Index Determination by Liquid Fluorescence Recovery in the Fungal Pathogen Ustilago Maydis

Der Artikel zeigt, wie die LD-Index-Assay, implementieren, die eine sensible Mikrotestplatte Assay zu bestimmen, die Anhäufung von Triacylglyzerole (TAGs) in Lipid-Tröpfchen (LDs) ist. LD-Index wird ohne Lipid-Extraktion gewonnen. Es ermöglicht die Messung des LDs-Inhalts im Hochdurchsatz-Experimente unter verschiedenen Bedingungen wie Wachstum im Reich oder Stickstoff aufgebraucht Medien. Wenn auch die Methode zum ersten Mal den Fettstoffwechsel von Tröpfchen in Saccharomyces Cerevisiae, studieren beschrieben wurde war es erfolgreich auf Basidiomycete Ustilago Maydisangewendet. Interessant ist, und weil LDs Zellorganellen in eukaryotischen Zellen phylogenetisch konserviert sind, kann die Methode auf eine Vielzahl von Zellen, von Hefe für Säugerzellen angewendet werden. Der LD-Index basiert auf der flüssigen Fluoreszenz Erholung Assay (LFR) von BODIPY 493/503 abschrecken Bedingungen durch die Zugabe von Zellen mit Formaldehyd. fixiert Kalium-Jod dient als ein Fluoreszenz-Durstlöscher. Das Verhältnis zwischen der Fluoreszenz und die optische Dichte Hänge ist LD Index benannt. Neigungen werden berechnet von den geraden Linien erreicht, wenn BODIPY Fluoreszenz und Extinktion bei 600 nm (OD600) werden gegen Probe zusätzlich dargestellt. Optimale Datenqualität spiegelt sich durch Korrelationskoeffizienten gleich oder über 0,9 (R ≥ 0,9). Mehrere Proben können gleichzeitig gelesen werden, wie es in einer Mikrotestplatte umgesetzt werden kann. Da BODIPY 493/503 eine lipophile Leuchtstoff färben die Partitionen in der Lipid-Tröpfchen ist, kann es in vielen Arten von Zellen verwendet werden, die Kirche Jesu Christi zu sammeln.

LFR, mit BODIPY 493/503 als fluoreszierende Sonde ist eine zuverlässige und einfache Methode, der dynamische Ansammlung von LDs in U. Maydis, unabhängig davon die Wachstumsbedingungen zu studieren. Wenn Zellen in YPD-Medium kultiviert wurden, gab es eine Zunahme der LD-Index in der exponentiellen Phase, gefolgt von einem Rückgang in der stationären Phase (Abbildung 2A). Im Gegensatz dazu gab es in den Zellen unter Stickstoff Hunger gewachsen, eine st...

Hier beschreiben wir ein Protokoll, um der Lipid-Tröpfchen (LD Index) erreichen, um die Dynamik der Triacylglyzerole in Zellen im Hochdurchsatz-Experimente zu studieren. Die LD-Index-Assay ist eine einfache und zuverlässige Methode, die BODIPY 493/503 verwendet. Dieser Assay benötigt keine Dispendious Lipid-Extraktion oder Mikroskopie-Analyse.

Lipid-Index Bestimmung von flüssigen Fluoreszenz Erholung der pilzliche Erreger Ustilago Maydis

The article shows how to implement the LD index assay, which is a sensitive microplate assay to determine the accumulation of triacylglycerols (TAGs) in ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, den Lipidtröpfchenindex von Zellen zu bestimmen, die unter verschiedenen Ernährungsbedingungen kultiviert wurden. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Lipidtröpfchen und Lipide zu beantworten, wie z. B. die Dynamik der Akkumulation und die unterschiedlichen Ernährungsbedingungen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass mehrere Proben gleichzeitig gelesen werden können, da sie in die Mikroplatte implementiert werden kann.Mit dem Beginn dieser Methode, wenn wir die Brechung von Ustilago maydis-Zellen beobachten, die unter Stickstoffmangel kultiviert wurden, und dann erkennen, dass dies bedeuten könnte, dass diese Instruktoren Lipidtröpfchen sein könnten. Also kontaktierten wir Monica Montero von der Universidade Federale do Rio de Janeiro in Brasilien, die den Liquid Florescence Recovery Assay von Lipidtröpfchen in Saccharomyces cerevisiae implementierte, um eine Zusammenarbeit zur Anpassung des Verfahrens für Ustilago maydis zu starten. Der erste Schritt in diesem Protokoll ist die Vorbereitung der erforderlichen Puffer und Lösungen.Zur Herstellung einer 10 Millimolare BO-DP-Stammlösung werden 10 Milli

lipid-index-determination-liquid-fluorescence-recovery-fungal

Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Wir beschreiben eine neue quantitative Lipidomik Methode zur Identifizierung zahlreicher Lipidspezies in Hefe mit Umfrage-scan Elektrospray Massenspektrometrie (ESI / MS). Diese Methode überschreitet derzeit verfügbaren Methoden für die Lipid-Identifizierung und Quantifizierung in der Fähigkeit, verschiedene molekulare Formen von Lipiden, Empfindlichkeit und Geschwindigkeit zu lösen.

Eine quantitative Bewertung der Hefe Lipidome mit Elektrospray-Ionisation-Massenspektrometrie

Wir stellen Ihnen eine schnelle Fluoreszenz-basierter Assay, dass die Rate der Fluoreszenzlöschung als Maß für Gramicidin-Kanal-Aktivität überwacht. Die Gramicidin Kanäle sind als molekulare Kraftaufnehmer verwendet, um Änderungen in Lipiddoppelschicht Eigenschaften wie spürte durch Doppelschicht Spanning Proteine ​​zu überwachen.

Gramicidin-basierte Fluoreszenz-Assay; zur Bestimmung Small Molecules Potential für das Ändern von Lipid-Doppelschicht-Eigenschaften

Die Verwüstung von Getreide durch Samen-Pilzresistenz hat zahlreiche Forschungsarbeiten zum besseren Verständnis Pflanze-Pathogen-Interaktionen dazu aufgefordert werden. Um Saatgut-Pilz-Interaktionen in einem Labor untersuchen, entwickelten wir eine robuste Methode zur Quantifizierung von Pilz-Reproduktion, Biomasse und Mykotoxinkontamination mit Kernel Bioassays.

Die Quantifizierung der Pilzbesiedlung, Sporogenese und Produktion von Mykotoxinen Kernel-Bioassays

Ein einfaches Protokoll, um die neutrale Lipidgehalt der Algenzellen zu bestimmen, mit einer Nil-Rot-Färbung Verfahren beschrieben. Diese zeitsparende Technik bietet eine Alternative zu herkömmlichen gravimetrischen basierten Lipid Quantifizierung Protokolle. Es ist für die spezielle Anwendung der Überwachung Bioprozess Leistung ausgelegt.

Eine einfache und schnelle Protokoll zur Messung neutralen Lipiden in Algenzellen mit Fluoreszenz

Der Artikel beschreibt eine Methode, die den Durchsatz erhöht, während der Aufwand und die Genauigkeit für die Extraktion von Lipiden aus den Zellmembranen von Mikroorganismen zur Verwendung bei der Charakterisierung sowohl der Gesamtlipide als auch der relativen Häufigkeit von Indikatorlipiden zur Bestimmung der mikrobiellen Bodenstruktur in Studien mit vielen Proben ausgeglichen werden.

Eine Lipid-Extraktions- und Analysemethode zur Charakterisierung von Boden-Mikroben in Experimenten mit vielen Proben

Hier stellen wir eine MATLAB-Implementierung des automatisierten Nachweises und der quantitativen Beschreibung von Lipidtröpfchen in Fluoreszenzmikroskopiebildern von Spalt- und angehenden Hefezellen vor.

Analyse des Lipidtröpfchengehalts in Spalt- und Budding-Hefen mittels automatisierter Bildverarbeitung

Dieses Protokoll beschreibt die Herstellung von Liposomen und wie diese auf einer Oberfläche immobilisiert und mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie massiv parallel abgebildet werden können. Dies ermöglicht die Quantifizierung der Größe und der kompositorischen Inhomogenität zwischen einzelnen Liposomen der Population.

Ein quantitativer Fluoreszenzmikroskopie-basierter Single Liposome-Assay zum Nachweis der kompositorischen Inhomogenität zwischen einzelnen Liposomen

Vitale Fluoreszenzfarbstoffe sind wesentliche Werkzeuge für livezellbildende Analysen in der modernen Pilzzellbiologie. Dieses Papier beschreibt die Anwendung etablierter und weniger bekannter Fluoreszenzfarbstoffe zur Verfolgung der Plasmamembrandynamik, Endo-/Exozytose und Zellwandmorphogenese in fadenförmigen Pilzen.

Anwendung von Membran- und Zellwandselektiven Fluoreszenzfarbstoffen für die Live-Zell-Bildgebung von filamentösen Pilzen

Wir präsentieren ein Protokoll mit Flüssigchromatographie gekoppelt mit Tandem-Massenspektrometrie, um wichtige zelluläre Lipide in Saccharomyces cerevisiaezu identifizieren und zu quantifizieren. Die beschriebene Methode zur quantitativen Bewertung wichtiger Lipidklassen innerhalb einer Hefezelle ist vielseitig, robust und empfindlich.

Quantitative Analyse des Zelllipidoms von Saccharomyces Cerevisiae mit Flüssigchromatographie gekoppelt mit Tandem-Massenspektrometrie

Wir präsentieren ein markierungsfreies Live-Imaging-Protokoll mit Durchlichtmikroskopie-Techniken, um Bilder zu erfassen, die Wachstumskinetik des filamentösen Pilzes A. nidulans sowohl in Unterwasserkulturen als auch in festen Medien zu analysieren und zu quantifizieren. Dieses Protokoll kann in Verbindung mit der Fluoreszenzmikroskopie verwendet werden.

Quantitative Analyse der Wachstumsrate von Aspergillus nidulans mittels Live-Mikroskopie und Open-Source-Software

Dieses Protokoll beschreibt ein Lipofuszin-Akkumulationsmodell in hochdifferenzierten und polarisierten humanen retinalen Pigmentepithelkulturen (RPE) und einen verbesserten Phagozytose-Assay des äußeren Segments (OS), um die gesamte OS-Verbrauchs-/Abbaukapazität des RPE zu bestimmen. Diese Methoden überwinden die Einschränkungen bisheriger Lipofuszin-Modelle und klassischer Puls-Chase-Phagozytose-Assays im äußeren Segment.

Verbesserte Lipofuszin-Modelle und Quantifizierung der Phagozytosekapazität des äußeren Segments in hochpolarisierten humanen retinalen Pigmentepithelkulturen

Erfahren Sie die Bestimmung des Lipid-Index in Ustilago maydis mittels flüssiger Fluoreszenz-Erholung. Diese Hochdurchsatzmethode mit BODIPY 493/503 ermöglicht die Analyse von Lipidakkumulation unter verschiedenen Nährstoffbedingungen.

Lipid-Index Bestimmung von flüssigen Fluoreszenz Erholung der pilzliche Erreger Ustilago Maydis

Weitere Videos entdecken