Partielle Lobuläres Hepatektomie: Chirurgische Modell für morphologische Leberregeneration

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs ist die Induktion der morphologischen Leberregeneration durch partielle lobuläre Hepatektomie. Diese Methode kann zentrale Fragen in den Bereichen Stammzellbiologie und regenerative Medizin zur morphologischen Leberregeneration und leberspezifischen Stammzellen beantworten. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie minimalinvasiv ist und keine chemischen Beleidigungen oder Kauterisation erfordert.

Bevor Sie die Tiere berühren, reiben Sie die Einstreu aus dem Käfig der Mutter auf die Handschuhe. Setze dann alle Welpen und etwas Einstreu aus dem Käfig der Mutter in einen leeren Käfig auf einem Heizkissen um. Legen Sie als Nächstes einen Welpen unter ein Präpariermikroskop.

Nachdem Sie das geeignete Maß an Sedierung durch mangelndes Ansprechen auf das Einklemmen der Zehen bestätigt haben, verwenden Sie ein kleines Mullkissen, um die hintere Bauchdecke des Tieres mit Betadin zu desinfizieren. Verwenden Sie eine Mikropräparierschere und eine Pinzette, um einen linken Mittelklavikularschnitt von einem halben Zentimeter direkt unter dem Brustkorb zu machen. Verwenden Sie die Pinzette, um die Haut sanft zu trennen.

Machen Sie dann einen zweiten tieferen Schnitt in die Bauchhöhle und üben Sie mit der hinteren stumpfen Kante der Mikropräparierschere und -zange einen sanften seitlichen Druck auf beide Seiten des Bauches aus, wodurch die Spitze des linken Lappens aus der Bauchhöhle gedrückt wird. Wenn die linke Spitze des linken Lappens sichtbar ist, amputieren Sie die entsprechende experimentelle Menge an Gewebe aus dem Lappen und geben Sie das Gewebe in ein 1,5-Milliliter-Röhrchen PBS auf Eis. Mit einem gerollten Stück Gaze den linken Lappen vorsichtig in die Bauchhöhle zurückführen.

Entfernen Sie die Gaze, wenn die Blutung aufhört, und befeuchten Sie die Operationsstelle und die Umgebung mit mit PBS getränkter Gaze. Verschließen Sie die Operationsstelle mit Nähten und einem Laufstich. Rollen Sie dann vorsichtig, aber gründlich eine PBS-getränkte Gaze über den Welpen und die Wundstelle, um sicherzustellen, dass kein Blut oder Betadin zurückbleibt.

Lassen Sie den Welpen sich in der Nähe von Mullballen erholen, die dem Kot und Urin der Mutter ausgesetzt sind. Wenn alle Welpen hepatektomiert wurden, bringen Sie alle Tiere und die Einstreu in den Käfig der Mutter zurück. Nach dem Wiegen der Lappen werden die Gewebeproben eine Stunde lang bei Raumtemperatur in 2%Paraformaldehyd fixiert.

Am Ende der Fixierung werden die Gewebe in einzelne Gefrierformen mit optimaler Schnitttemperatur für das Einfrieren über Trockeneis umgefüllt. Und erfassen Sie 7-10 Mikrometer große Abschnitte jedes Keulens mit einem beliebigen Standard-Kryostaten. Untersuchen Sie die Welpen mindestens 56 Tage lang täglich, um sicherzustellen, dass ihre Wunden geschlossen bleiben, und injizieren Sie 24 und 48 Stunden nach der Operation eine Analgesie.

Zu einem geeigneten experimentellen Endpunkt entnehmen und wiegen Sie die Leber von jedem Welpen auf dem Block. Trennen Sie dann vorsichtig jeden einzelnen Lappen an seinem proximalen Ansatz und vergleichen Sie die Masse des amputierten linken Lappens mit der Masse der gesamten Leber, um das Ausmaß der Regeneration in jedem Lappen zu bestimmen. Eine subtile Regeneration des linken Lappens kann 7-14 Tage nach der Operation beobachtet werden und eine vollständige Regeneration wird oft nach 56 Tagen beobachtet.

Es gab keinen signifikanten Unterschied in den Hepatozytenbereichen in der regenerierten Leber, der durch histologische Analyse festgestellt wurde. Darüber hinaus deuten neonatale Mausinjektionen mit EdU auf einen signifikanten Anstieg der Anzahl proliferierender Zellen im verletzten regenerierenden linken Lappen im Vergleich zu unverletzten Kontrollen hin, was darauf hindeutet, dass die Zellproliferation zur Regeneration des linken Lappens bei Neugeborenen beiträgt. Die Hepatektomie bei juvenilen Mäusen nach der Geburt am 14. Tag führt jedoch zu einer verminderten Regeneration im linken Lappen mit einer erhöhten Kompensation durch die unverletzten Lappen.

Dies deutet darauf hin, dass die Verletzungsreaktion auf eine akute Resektion nach 14 Tagen von der lappenspezifischen Regeneration zur globalen Kompensation übergeht. Einmal gemeistert, kann diese Technik innerhalb von 15 Minuten abgeschlossen werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, so vorsichtig wie möglich zu sein, um weder der Mutter noch den Welpen zusätzlichen Stress zu bereiten.

Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Methoden wie serielle Hepatekomien oder chronische Leberschäden durchgeführt werden, um das regenerative Potenzial der Leber weiter zu beurteilen. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Stammzellbiologie, um die Leberregeneration bei Neugeborenen zu erforschen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie eine lappenspezifische kontrollierte Amputation der neonatalen Mausleber durchführen können.

Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Isofluran äußerst gefährlich ist und bei der Durchführung dieses Verfahrens immer Vorsichtsmaßnahmen wie eine Gesichtsmaske und Handschuhe getroffen werden sollten.