Name: Partielle Lobuläres Hepatektomie: Chirurgische Modell für morphologische Leberregeneration (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Erfahren Sie die partielle Lobuläre Hepatektomie zur Untersuchung der Leberregeneration bei neonatalen Mäusen. Diese minimal-invasive Methode ermöglicht Studien zu Stammzellbiologie und regenerativer Medizin.

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Wir danken P. Chu zur Durchführung von H & E und Histologie; und C. Wang und A. McCarty für hilfreiche Diskussionen. Forschung wurde unterstützt durch Mittel aus dem Virginia und D. K. Ludwig Fund for Cancer Research; das National Heart, Lung and Blood Institute (R01HL058770 und U01HL099999); und California Institute for Regenerative Medicine (RC1 00354) Zuschüsse für IW Y.R wurde unterstützt durch die Human Frontier Science Programm Career Development Award (CDA00017), der Deutschen Forschungsgemeinschaft (RI 2787/1), Siebel Stem Cell Institute, und die Thomas und Stacey Siebel-Stiftung (1119368-104-GHBJI). J.M.T. wurde von der NIH (T32GM007365), der nationalen Forschung Service Award (1F30DK108561), und Paul und Daisy Soros Fellowship für neue Amerikaner unterstützt.

Alle Tierversuche wurden in strikter Übereinstimmung mit den Richtlinien, die von der Association for Assessment und Akkreditierung von Laboratory Animal Care International (AAALAC) und der Stanford University Verwaltungs-Panel am Versuchstier durchgeführt Pflege (APLAC), (Protokoll-Nummer #10266) und in den Vereinigten Staaten oder dem Europäischen Tierschutzgesetz Richtlinie 2010/63/EU. Das Protokoll wurde vom Ausschuss für die Ethik von Tierversuchen des bayerischen Regierung, Deutschland, genehmigt und erhielt die Genehmigung nicht: 55.2-1-54-2532-150-2015.
(1) tierische Vorbereitung
<ol><li>Bereiten Sie eine leere Käfig mit geeigneter Einstreu auf ein Heizkissen.</li>
	<li>Reiben Sie vor Tieren mit Handschuhen berühren die Mutter Bettzeug auf die Handschuhe.</li>
	<li>Entfernen Sie alle Welpen von ihrer Mutter und Ihrem Platz in den leeren Käfig. Entfernen Sie einige der mütterlichen Bettwäsche und legen Sie sie in den leeren Käfig mit den Welpen.</li>
	<li>Die Mutter in einem separaten, sauberen und trockenen Käfig entfernt das OP-Feld zu platzieren.</li>
	<li>Don neue, saubere sterile Handschuhe vor der Vorbereitung des Operationsfeldes.</li>
</ol>(2) op-Feld-Vorbereitung
<ol><li>Mit einer 10 mL-Pipette, 10 mL von Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) Hinzufügen einer 10 cm Petrischale.</li>
	<li>Pipette 2 mL Betadine o.ä. antiseptisch-Lösung in der Petrischale 10cm.</li>
	<li>Legen Sie einen sezierenden Anwendungsbereich auf das Operationsfeld. Sezieren Umfang Lampe schalten Sie und passen Sie die Stufe des Lichts, der Chirurg Komfort. Ein Welpe kann in das OP-Feld unterhalb der sezierenden Umfang Lampe platziert werden. Ausreichend Licht kann durch das Fehlen von Schatten auf der ventralen Oberfläche der Pup bestätigt werden.</li>
	<li>Vorbereiten die Isofluran-Narkose-Kammer (siehe Tabelle der Materialien) mit einem Prüfkopf. Die Kammer sollte ohne Nachweis von Urin oder Kot gereinigt werden. Legen Sie die bugnase und damit verbundenen Schläuche sezierenden Rahmen im Operationsfeld. Die Strömung von Sauerstoff und Isofluran ausschließlich auf die bugnase abzulenken.</li>
	<li>Bereiten Sie einen postoperative Recovery-Bereich mit einem Heizkissen gesetzt bei etwa 37 ° C. Die postoperative Erholung sollte bestehen aus 4 Stück Gaze über das Heizkissen platziert. Wenn möglich, reiben Sie Gaze-Pads in der Mutters-Einstreu, Kot und Urin, die Mutter Duft zu bewahren. Hinweis: Es ist schlecht beraten, eine Wärmelampe verwenden, da dies es schwierig macht, die Temperatur zu kontrollieren. Erhöhte Temperaturen führt zu den Tod des Neugeborenen Mäusen.</li>
	<li>Vorbereiten und alle chirurgischen Instrumente mit einem Autoklaven sterilisieren. Die Werkzeuge sind erforderlich: Mikro-sezieren Schere, Mikro-sezieren Zange, Gaze, Gefäßklemme und 6-0 Monofile nicht resorbierbaren Naht. Chirurgische Instrumente können Resterilzed mit jedem Glas Bead Sterilisator.</li>
</ol>(3) teilweise Lobuläres Hepatektomie
<ol><li>Der Welpe zu betäuben, indem man sie in die bugnase auf seinen zurück und sanft taping, seine Füße und Hände im Ort. Der Welpe sollte 5 % Isofluran in Sauerstoff erhalten.<ol>
<li>Lassen Sie den Welpen zum Sitzen für 5 min oder bis ausreichend betäubt, die von einer Zehe kneiftest nachgeprüft werden kann.</li>
		<li>5 mg/kg Carprofen subkutan vor dem Schnitt zu injizieren. Hinweis: Die gesamte Operation dauert nicht mehr als 30 min. schlechtere Ergebnisse beim Neugeborenen beobachtet werden können, die unter Vollnarkose für über 30 min stehen. Vorkehrungen Sie zur Minimierung der Länge der Chirurgie durch gründliche Bereich Vorbereitung und Benetzung der Haut vor der Schließung, Naht induzierte Haut Tränen zu minimieren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mit einem kleinen Tupfer nass mit Betadine der hinteren Bauchwand reinigen Sie sanft. Lassen Sie Betadine 1 min trocknen.</li>
	<li>Machen Sie einen linken Mitte clavicular 0,5 cm Schnitt direkt unterhalb des Brustkorbs mit dem Mikro-sezieren Scheren und Pinzetten. Sanft die Haut mit einer Pinzette zu trennen und einen zweite tieferen Einschnitt in die Bauchhöhle (siehe Abbildung 1, Links und Mitte) machen</li>
	<li>Sanft seitlichen Druck von beiden Seiten des Bauches mit der Rückseite, die stumpfen Enden der Mikro-sezieren Scheren und Pinzetten, um die Spitze des linken Lappens aus der Bauchhöhle zu zwingen. Die linke Spitze des linken Lappens sollte leicht visualisiert (Abbildung 1, rechts).</li>
	<li>
Von der Spitze zu amputieren Sie und wiegen Sie die Menge des Gewebes entfernt werden.
	<ol>
<li>Mit der Mikro-Dissektion Schere, sanft amputieren Sie die gewünschte Menge des Gewebes von der Spitze des linken Lappens.</li>
		<li>Ort der amputierten Gewebe in ein 1,5-mL-Röhrchen gefüllt mit PBS. Die Amputierte Gewebe mit einer Analysenwaage wiegen (siehe Tabelle der Materialien). Hinweis: Legen Sie ein Stück Gaze oder Papier auf die Waage und Tarieren sie. Dann platzieren Sie die Amputierte Gewebe Gaze oder Papier und Messen Sie seine Masse zu.</li>
		<li>Befestigen der amputierten Bereich in 2 % Paraformaldehyd bei Raumtemperatur für 1 h und Ort optimale Arbeitstemperatur (OCT) zusammengesetzte über Trockeneis für Gefrierschnitte Analyse. Gefrierschnitte abschnittsweise schneiden 7-10 µm mit jedem standard Kryostat zu analysieren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Den linken Lappen mit einem gerollten Stück Gaze, sanft in die Bauchhöhle ersetzt werden. Verlassen Sie die Gaze in den Hohlraum, bis die Blutung aufhört.</li>
	<li>Entfernen Sie die Gaze und nass der Operationsstelle und Umgebung mit Gaze getränkt mit PBS.</li>
	<li>Schließen Sie die Operationsstelle mit 6-0 Monofile, nicht resorbierbare Nähte mit einem Running-Stich. Das Peritoneum und die Haut sollte separat geschlossen werden. Hinweis: Sanft Benetzung der Haut mit Gaze getränkt mit PBS kann Naht induzierte Tränen minimieren.</li>
	<li>Sanft aber gründlich reinigen Sie der Welpe mit Gaze getränkt mit PBS und gewährleisten Sie bleibt weder Blut noch Betadine zu. Roll das getränkte Gaze-Pad und sanft über die Wunde Zeichen sauber aus Blut oder Betadine scrub. Hinweis: Dies ist besonders wichtig, da die Mutter die Welpen Ausschlachten kann, wenn sie nur unzureichend gereinigt werden.</li>
	<li>Entfernen Sie den Welpen aus die bugnase und legen Sie es auf die Recovery-Bereich, die enthält die Gaze-Pads, Kot und Urin der Mutters ausgesetzt. Sobald der Welpe erholt, ersetzen Sie der Welpe in den leeren Käfig durch die Mutter Bettzeug. Hinweis: Verwenden Sie keiner Wärmelampe. Die Verwendung einer Wärmelampe kann das Neugeborene zu einer Überhitzung führen.</li>
	<li>Wiederholen Sie den Vorgang für die gewünschte Anzahl der Welpen. Obwohl alle Welpen verwendet werden können, ist es im Allgemeinen ratsam, ein paar Welpen nicht operiert, zusammen mit den operierten Welpen ersetzt werden zu lassen.</li>
	<li>Ersetzen Sie alle Welpen gleichzeitig mit ihrer Mutter Einstreu in der Mutter-Käfig.</li>
</ol>4. Erholung und Analyse
<ol><li>
Follow-up auf den Mäusen täglich.
	<ol>
<li>Überprüfen Sie, dass die Wunde geschlossen ist und entfernen Sie Toten Welpen zu, falls vorhanden.</li>
		<li>Wenn die Wunde wieder öffnet, bereiten Sie die op Website und Erholung-Bereich als zuvor beschrieben, und wiederholen Sie Schritte 3,8 bis 3.12.</li>
		<li>5 mg/kg Carpofen subkutan 24 und 48 h nach dem Eingriff zu injizieren.</li>
		<li>Welpen für 56 Tage oder länger zu folgen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Die Tiere nach der gewünschten Menge an postoperativen Tagen durch Kohlendioxid (CO2) Belichtung und zervikale Dislokation einschläfern.<ol>
<li>Platzieren Sie Mäuse in der Induktion / Euthanasie Kammer und schalten Sie die CO2 bis Mäuse aufhören zu atmen.</li>
		<li>Euthanasie durch zervikale Dislokation zu gewährleisten. Auf der dorsalen Hals der Maus mit der Vordergrund-Finger und Daumen nach unten drücken Sie und mit der anderen Hand ziehen Sie am Heck.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Entfernen Sie die gesamte Leber en bloc und wiegen Sie es.
	<ol>
<li>Sorgfältig trennen Sie jeder Lappen und wiegen Sie getrennt. Hinweis: Entfernen Sie die Leber durch sorgfältige Präparation der Zwerchfell und Leber und Portal Schiffe. Die Lappen voneinander zu trennen, jeder Lappen an den proximalen Anhang sorgfältig seziert.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Legen Sie den Umfang der Regeneration durch den Vergleich der Mass der amputierten linken Lappen, die Masse der gesamten Leber. Eine unverletzte linke Lappen ist etwa 30 % der gesamten Leber.</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben keine Angaben.

Akute Leberschädigung ist traditionell mit chemischen (Paracetamol, Ethanol, Carbon Titantetrachlorid) oder chirurgische Modelle (70 % partielle Hepatektomie) untersucht worden. Die regenerative Antwort nach 70 % teilweise Hepatektomie charakterisiert worden ist, um globale Hepatozyten Hypertrophie und mehrfache Umläufe der Zellteilung4,5einzubinden. Um Blutungen zu stoppen, ist dieses Modell jedoch begrenzt, da die großen Schiffe verlassen eine abnorme Umgebung ...

Die Fähigkeit zur Regeneration eines Organs oder zur Wiederherstellung von Form und Funktion, ist gedacht worden, vor allem über die evolutionäre Zeit verloren. Das regenerative Potential der Erwachsenen Säugetier-Leber nach chemischen oder physikalischen akutverletzung wurde gefunden, um die Mobilisierung der alle verbleibenden Hepatozyten in Wellen von Hypertrophie und einige Runden der Zellteilung, wodurch eine funktionale aber was beinhalten architektonisch verschiedenen Orgel1,2,3,4,5. Vor kurzem, haben Studien begonnen, die regenerative Reaktion des Neugeborenen Säugetieren Organe auf eine Verletzung innerhalb der ersten Woche des Lebens6,7,8charakterisieren. Diese Studien haben gezeigt, dass wenn bei Neugeborenen Entwicklung verletzt, bestimmte Säugetiere Organe mit morphologischen Regeneration statt kompensatorische Wachstum oder Fibrose7,8 reagieren.
Jüngste Studien haben gezeigt, dass die Regeneration der globalen Struktur und Funktion während der frühen neonatalen Periode6,7,8auftritt. Etablierten Leberschädigung Protokolle beinhalten chemische Verletzungen oder Verwaltung von Ethanol9,10,11, Paracetamol12,13,14,15 , Carbon Titantetrachlorid16,17,18,19, 70 % teilweise Hepatektomie4,20,21oder Entfernung der linken und mittlere Lappen. Chemische Verwaltung führt zum Zelltod Hepatozyten, aber oft Mikro und Makro-Strukturen intakt. Morphologische Regeneration kann nicht ohne weiteres in diesem Zusammenhang untersucht werden, wie die insgesamt hepatische Architektur nicht ausgelöscht wurde. Die 70 % teilweise Hepatektomie beinhaltet Naht Ligatur der großen Gefäße, die Blutung zu stoppen notwendig ist, sondern lässt eine nicht-physiologischen Umgebung mit ständigen Unterbrechungen des Gefäßsystems. Darüber hinaus ist nur mit dieser Methode auf Erwachsene Nagetiere, und ihre Anwendung auf das Neugeborene ist technisch äußerst schwierig. In diesem Sinne haben wir eine Methode, die in dem 20-30 % von der Spitze des linken Lappens, in einer Neugeborenen Maus P0 entfernt wird entwickelt (Abbildung 1A-1 b). Diese Methode ist chirurgisch konservative, minimal-invasive, nicht technisch anspruchsvoll und führt zum Verlust der Morphologie ohne die Unterbindung des Gefäßsystems, lässt Raum für Regeneration auftreten Brutto. Das resultierende Schritt für Schritt-Protokoll, wie unten beschrieben, ermöglicht für jeden Forscher eine partielle Lobuläres Hepatektomie an Neugeborenen Mäusen durchführen, um Säugetiere neonatale Regeneration in den frühen Stadien des postnatalen Lebens zu studieren. Diese Methode hat auch klare Anwendungen zu vergleichende Studien in der regenerativen Medizin und Stammzellbiologie, wie es in späteren Phasen des Lebens in der Leber verwendet werden kann.
Die häufigste akute Leberschädigung Studien sind chemisch induzierten Schäden, adult Leber Amputation oder 70 % teilweise Hepatektomie. Chemische Schäden oft intravenös, intraperitoneal oder orale Verabreichung von Paracetamol, Carbon Titantetrachlorid oder Ethanol beinhaltet, und ist eine relativ einfache und nicht-invasive Verletzung Modell. Wie bereits diskutiert, chemische Schäden Ergebnisse in Hepatozyten Zelltod, aber oft Blätter Stroma und Parenchym Strukturen intakt, macht es schwierig, Aussagen über morphologische Regeneration machen. Chemische Schäden oft konzentriert sich auf die hepatische Schiffe, so dass es eine nützliche Technik, Website und zellspezifische Verletzungen, studieren aber auch erschwert, kann weiter von Schiffen liegen und das mag, Ebene der gesamten Organs, anderen Populationen zu befragen, zur Regeneration beitragen. Trotz dieser Einschränkungen bleibt chemische Schäden noch eine nützliche und sehr physiologisch relevanten Verletzungen-Modell.
Erwachsene 70 % teilweise Hepatektomie beinhaltet die Entfernung der linken und mittleren Lappen nach Ligatur der hepatischen Gefäßsystem. Die Antwort auf Hepatektomie hat gut charakterisiert: die amputierten Leber 14 Tage Post 70 % teilweise Hepatektomie eine grob Architektur von derjenigen der ursprünglichen unbeschädigt Lappen als die Hepatozyten der verbleibenden rechten und caudatus Lappen entwickelt Hypertrophie und ein paar Runden der Zellteilung4,5zu unterziehen. Dies macht verloren und Funktion, aber schlägt fehl, die beiden amputierten Lappen zu regenerieren und ist daher kein Ersatz für grobe Morphologie. Dadurch eignet sich der Verletzung auf 70 % teilweise Hepatektomie, kompensatorischen Wachstum Mechanismen mit begrenzten Regeneration zu studieren.
Hier beschreiben wir voll und ganz ein Protokoll für eine neonatale teilweise Lobuläres Hepatektomie. Das Verfahren beinhaltet geeignete tierische Auswahl und Vorbereitung, Vorbereitung des Operationsfeldes, Chirurgie und Wiederherstellung. Optimierung und Anpassung der einzelnen Schritte können für verschiedene Anwendungen des Protokolls erforderlich.
Wir haben ausgiebig durchgeführt und optimiert dieses Protokoll auf Wildtyp C57BL/6J Welpen (JAX 000664), jedoch um unterschiedliche Zellpopulationen und Mechanismen der Regeneration zu untersuchen, wir auch verschiedene Transgene Tiere einschließlich Mäuse beherbergen verschiedene Cre verwendet und CreERT2 transgene und/oder Knock-ins (JAXAxin2CreERT2 018867, und Sox9CreERT2 JAX 018829) in Kombination mit fluoreszierenden Reporter, wie der Regenbogen und mTmG Systeme (R26VT2/GK3, R26 mT/mG) 22 , 23. fanden wir keine Notwendigkeit, diese Methode für verschiedene Mausstämme ändern, da keine Unterschiede im Überleben Ergebnisse oder regenerative Potenzial beobachtet wurden.
Neben der Verwendung von verschiedener tierischer Stämmen, führten wir auch teilweise lobulären Hepatectomies an Neugeborenen Mäusen mit kleinen Molekülen, wie 4-hydroxy-Tamoxifen und 5-Ethynyl-2 '-Deoxyuridine (EdU) behandelt. Dimethyl Sulfoxid (DMSO) und Ethanol dienten als Lösungsmittel, da festgestellt wurde, dass Mais-Öl war eine wesentliche Ursache für Morbidität. Ansonsten fanden wir, dass intraperitonealer Verabreichung von kleinen Molekülen nicht überleben oder regenerative Ergebnisse beeinflussen. Wir sagen voraus, dass dieses Protokoll für die Verwendung mit anderen kleinen Molekülen zu verschiedenen Aspekten der Regeneration zu verhören angepasst werden.
Neugeborenen Maus Operationen können technisch anspruchsvoll und erfordern spezielles Know-how im Umgang mit Tieren und mikroskopische Dissektion. Tierhaltung-Kompetenz gilt, mütterliche Kannibalismus zu vermeiden nach der Operation und während der sofortigen Wiederaufnahme Periode.

<table><tbody><tr><td>Tiere</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mutter mit Wurf von neugeborenen Welpen am Tag 0 (beliebiger Stamm)</td>Leihmutter und Leihmutter (optional)<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Unternehmen</td><td>Katalognummer</strong</td><td>>Kommentare</td></tr><tr><td>Standard Reagenzien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphat gepuffertes Serum (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Providin-Jod oder gleichwertige antiseptische Lösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Unternehmen</strong</td><td>><>Katalognummer</td><td>Kommentare</td></tr><tr><td>Chirurgische Geräte</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Präpariermikroskop</td><td>Zeiss</td><td>ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000</td><td></td></tr><tr><td>3mm gerade Feder Mikroschere</td><td>Vannas</td><td>72932-01</td><td></td></tr><tr><td>5SF Pinzette</td><td>Dumont</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Gerade Kelly Pinzette</td><td>Grainger</td><td>17-050G</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen</td><td>Sunbeam</td><td>000771-810-000</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Abbott Labs</td><td>0044-5260-05</td><td></td></tr><tr><td>Nagetier-Anästhesiesystem</td><td>Kent Scientific</td><td>1205S</td><td></td></tr><tr><td>Gaze, 10,16 x 10,16 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-761-52</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Unternehmen</td><td>Katalognummer</ strong</td><td>>Kommentare</strong</td></tr><tr><td>>Standardausrüstung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5ml Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>6-0 monocryl Nähte</td><td>Ethicon</td><td>MCP489G</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>Fisher Scientific</td><td>S35839</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Aid, glatt, 110V</td><td>Drummond</td><td>4-000-110</td><td></td></tr><tr><td>Mettler Toledo NewClassic ME Analysenwaagen</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-912-402</td><td></td></tr><tr><td>Kostengünstige Induktionskammer</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0730</td><td></td></tr></tbody></table>

partielle lobuläres hepatektomie: chirurgische modell für morphologische leberregeneration

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Morphologische Organregeneration nach akuten Gewebeverlust ist häufig bei niedrigeren Wirbeltiere, aber wird selten in Säugetieren postnatale Leben beobachtet. Erwachsenen Leberregeneration nach 70 % teilweise Hepatektomie führt in Hepatozyten Hypertrophie mit einigen Replikation im verbleibenden Lappen mit Wiederherstellung der Stoffwechselaktivität, aber mit dauerhaften Verlust des verletzten Lappens Morphologie und Architektur. Hier zeigen wir eine neue Operationsmethode in der Neugeborenen, die eine physiologische Umgebung förderlich für die Regeneration lässt. Dieses Modell beinhaltet Amputation der linke Lappen Spitze und eine anschließende konservative Verwaltung Regime, und fehlt die Notwendigkeit einer Ligatur der großen Leber Gefäße oder chemischen Verletzungen, so dass eine physiologische Umgebung wo Regeneration stattfinden kann. Wir erweitern dieses Protokoll zu Amputationen an juvenilen (P7-14) Mäusen, bei denen die Geschädigte Leber von Organregeneration in kompensatorischen Wachstum durch Hypertrophie wechselt. Das präsentiert, kurz 30 min-Protokoll sieht einen Rahmen um die Mechanismen der Regeneration, der altersassoziierten Rückgang bei Säugetieren und die Charakterisierung der vermeintlichen hepatische Stiel oder Vorfahren zu studieren.

Abbildung 1A beschreibt eine allgemeine Chronologie der Neugeborenen teilweise Lobuläres Hepatektomie (schematisch in Abbildung 1 b) und die voraussichtliche Zeitdauer zu warten, bis die Regeneration beobachtet wird. Subtile Regeneration der linke Lappen kann beobachteten 7-14 Tage Post op. Volle Regeneration wurde oft beobachtet, nach 56 Tagen-Chirurgie Post. Mäuse sollten keine Anzeichen von physiologischen Auffälligkeiten nach...

Hier präsentieren wir eine neue Methode zur teilweisen Resektion des linken hepatischen Lappens bei Neugeborenen (Tag 0) Mäusen. Dieses neue Protokoll eignet sich für akute Leberschädigung und Verletzungen Reaktion in der neonatalen Einstellung zu studieren.

Partielle Lobuläres Hepatektomie: Chirurgische Modell für morphologische Leberregeneration

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs ist die Induktion der morphologischen Leberregeneration durch partielle lobuläre Hepatektomie. Diese Methode kann zentrale Fragen in den Bereichen Stammzellbiologie und regenerative Medizin zur morphologischen Leberregeneration und leberspezifischen Stammzellen beantworten. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie minimalinvasiv ist und keine chemischen Beleidigungen oder Kauterisation erfordert.Bevor Sie die Tiere berühren, reiben Sie die Einstreu aus dem Käfig der Mutter auf die Handschuhe. Setze dann alle Welpen und etwas Einstreu aus dem Käfig der Mutter in einen leeren Käfig auf einem Heizkissen um. Legen Sie als Nächstes einen Welpen unter ein Präpariermikroskop.Nachdem Sie das geeignete Maß an Sedierung durch mangelndes Ansprechen auf das Einklemmen der Zehen bestätigt haben, verwenden Sie ein kleines Mullkissen, um die hintere Bauchdecke des Tieres mit Betadin zu desinfizieren. Verwenden Sie eine Mikropräparierschere und eine Pinzette, um einen linken Mittelklavikularschnitt von einem halben Zentimeter direkt unter dem Brustkorb zu machen. Verwenden Sie die Pinzette, um die Haut sanft zu trennen.Machen Sie dann ei

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Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Eine hohe Inzidenz von Tumorrezidiven nach Resektion von Lebermetastasen bleibt ein ungelöstes Problem. Das dargestellte Mausmodell kann nützlich sein, um die Gründe für solche Rezidive zu untersuchen. Es kombiniert erstmals ein Leberresektionsmodell mit der intrahepatischen Injektion von Tumorzellen.

Der Einfluss von Leberresektion auf Intrahepatische Tumorwachstum

Induktion schnelle Leber Hypertrophie mit Leber-Partition zuordnen und Pfortader Ligatur für eine Hepatektomie bereitgestellt wurde (ALPPS) für die Resektion von borderline entfernbaren Lebertumoren vorgeschlagen. Dieses Modell kann schnelle Hypertrophie Mechanismen aufzuklären und ermöglicht die Prüfung von Betäubungsmitteln, die fördern oder blockieren die Beschleunigung der Regeneration.

Rattenmodell der Leber Partition zuordnen und Pfortader Ligation inszenierten Hepatektomie (ALPPS) Verfahren

Wir haben ein Protokoll für die Durchführung von teilweise Hepatektomie (PHx) und Zelltransplantation über Milz in NOD beschrieben. SCID (NICKEN. CB17-Prkdcscidj) Mäuse. In diesem Protokoll wird ein Einschnitt gemacht, zu entlarven und den linken Leberlappen folgte ein weiterer Einschnitt für die intrasplenic Transplantation von Zellen zu resezieren.

Intrasplenic Transplantation von Leberzellen nach teilweiser Hepatektomie in NOD. SCID-Mäuse

Wir etablieren eine neuartige Operationstechnik für ein Modell in Vivo einzelne Leber Lappen Perfusion in der Ratte als Voraussetzung für das weitere Studium in Vivo teilweise Leber engineering in der Zukunft.

Eine neuartige Operationstechnik als Grundlage für In Vivo teilweise Leber Engineering in der Ratte

Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren zur Entfernung des Bauchlappens der Leber bei erwachsenen Zebrafischen, um die Untersuchung der Leberregeneration zu ermöglichen.

Partielle Hepatektomie bei erwachsenen Zebrafischen

Lipidbeladene Hepatozyten sind der Leberregeneration inhärent, gehen aber normalerweise bei der Zentrifugation mit Dichtegradienten verloren. Hier stellen wir ein optimiertes Zellisolationsprotokoll vor, das steatotische Hepatozyten beibehält, was repräsentative Populationen von regenerierenden Hepatozyten nach partieller Hepatektomie bei Mäusen ergibt.

Isolierung regenerierender Hepatozyten nach partieller Hepatektomie bei Mäusen

Zahlreiche Studien belegen die Vorteile der anatomischen Resektion. Nichtsdestotrotz bleibt umstritten, ob die anatomische Resektion die R0-Resektionsraten erhöhen kann. Die vorliegende Arbeit beschreibt daher ein innovatives Verfahren mit dem en bloc-Konzept in Kombination mit einer anatomischen Resektion in der laparoskopischen Hepatektomie, mit dem postoperative Rezidive und Metastasen reduziert werden können.

Anwendung des En-Bloc-Konzepts in Kombination mit anatomischer Resektion in der laparoskopischen Hepatektomie

Es hat sich gezeigt, dass die Assoziierung der Leberpartition und der Pfortaderligatur bei der gestiebenen Hepatektomie (ALPPS) mehrere Wochen nach der Operation im ersten Stadium zu einer bemerkenswerten Leberregeneration führt. Tiermodelle, die einer ALPPS unterzogen wurden, wurden entwickelt, um die potenzielle Regenerationsfähigkeit der Leber zu untersuchen und günstige klinische Ergebnisse zu erzielen.

Ein Mausmodell der zugehörigen Leberpartition und der Pfortaderligatur für ein gestuftes Hepatektomieverfahren mit Hilfe der Mikroskopie

Organoide, die aus Patiententumoren erzeugt werden, werden orthotopisch in die Leber der Maus injiziert. Die Resektion von nicht-tumorösem Lebergewebe führt zu einer regenerativen Umgebung im Lebergewebe, in dem sich der Tumor befindet.

Ein von Patienten mit hepatozellulärem Krebs abgeleitetes Organoid-Xenotransplantat-Modell zur Untersuchung des Einflusses der Leberregeneration auf das Tumorwachstum

Das Mausmodell der partiellen 2/3 (66%) Hepatektomie ist in der Literatur gut beschrieben, aber ausgedehntere Hepatektomien, die das Small-for-Size-Syndrom nach Lebertransplantation nachahmen, wurden selten verwendet. Wir beschreiben eine erweiterte 78%ige Hepatektomie in einem Mausmodell, die bei gesunden Mäusen zu einer postoperativen Letalität von etwa 50% führt.

Erweiterte 78%-Hepatektomie in einem chirurgischen Mausmodell

Erfahren Sie die partielle Lobuläre Hepatektomie zur Untersuchung der Leberregeneration bei neonatalen Mäusen. Diese minimal-invasive Methode ermöglicht Studien zu Stammzellbiologie und regenerativer Medizin.

Partielle Lobuläres Hepatektomie: Chirurgische Modell für morphologische Leberregeneration

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