Name: CRISPR-vermittelten Verlust der Funktionsanalyse in zerebelläre Untermodul Zellen mit In Utero Elektroporation-basierte Gentransfer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Erfahren Sie eine CRISPR-basierte In-Utero-Elektroporation zur Analyse von Genfunktionen in zerebellären Körnerzellen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung neuronaler Entwicklung und Hirntumorbildung.

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Wir schätzen Laura Sieber, Anna Neuerburg, Yassin Harim und Petra Schroeter für technische Hilfe. Wir danken auch DRS. K. Reifenberg, K. Dell und P. Prückl für hilfreiche Unterstützung für Tierversuche am DKFZ; die Imaging Core Facilities des DKFZ und Carl Zeiss Imaging Center im DKFZ für die Bildgebung der konfokalen Mikroskopie. Diese Arbeit wurde von der Deutschen Forschungsgemeinschaft, KA 4472/1-1 (DK) unterstützt.

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Mit Exo Utero Elektroporation, haben wir bereits berichtet, dass SiRNA basierenden in Vivo Funktionsanalysen des Atoh1 in einem frühen Stadium der zerebelläre Granulat Zell-Differenzierung8. Durch SiRNA Verdünnung/Abbau und Exposition von Embryonen außerhalb der Gebärmutterwand beschränkte sich die phänotypische Analyse der elektroporiert Granulat Zellen auf embryonalen Phase. Jedoch aktiviert die aktuelle Methode Analyse des Phänotyps der postnatalen Tiere.
<p class="jove_co...

Erkrankungen des Gehirns sind eines der schrecklichsten tödlichen Krankheiten. Sie resultieren oft aus genetischen Mutationen und anschließende Dysregulation. Zum Verständnis der molekularer Mechanismen von Erkrankungen des Gehirns haben immer anhaltende Anstrengungen zu entschlüsseln, die Genome von menschlichen Patienten eine Reihe von möglichen begründenden Genen entdeckt. Bisher wurden Keimbahn gentechnisch Tiermodellen in Vivo Gain-of-Function (GOF) und Verlustfunktion (LOF) Analysen von solchen Kandidatengenen genutzt. Durch die beschleunigte Entwicklung von funktionalen Validierungsstudien ist eine praktikable und flexible in Vivo gen Testsystem für das Studium der Genfunktion wünschenswert.
Die Anwendung einer in Vivo -Elektroporation-basierte gen-Transfer-System, das sich entwickelnde mausgehirn ist für diesen Zweck geeignet. In der Tat haben mehrere Studien in Utero Elektroporation mit ihr Potenzial durchzuführen Funktionsanalysen in die entwickelnde Gehirn1,2,3gezeigt. Tatsächlich haben mehrere Regionen des Gehirns Maus, z. B. die Großhirnrinde4Retina5, Zwischenhirn6, Hinterhirn7, Kleinhirn8und Rückenmark9 durch somatische Gentherapie Lieferung ins Visier genommen Ansätze, so weit.
In der Tat hat transiente Genexpression von in Vivo Elektroporation auf embryonale mäusegehirnen lange für GOF-Analyse verwendet. Den letzten Transposon-basierte genomische Integrationstechnologien weiter aktiviert langfristige und/oder bedingte Expression von Genen Interesse10,11, was vorteilhaft in einer räumlichen und zeitlichen Weise während der Genfunktion sezieren ist Entwicklung. Im Gegensatz zu GOF Analyse wurde LOF Analyse schwieriger. Während die Transiente Transfektion von SiRNAs und ShRNA-tragenden Plasmide durchgeführt wurde, sind Langzeitwirkungen von LOF Gene nicht wegen eventuellen Abbau von exogen eingeführten Nukleinsäuren wie Plasmide und DsRNAs garantiert. Die CRISPR/Cas-Technologie bietet jedoch einen Durchbruch im LOF Analysen. Genen Codierung fluoreszierende Proteine (z. B.GFP) oder biolumineszenter Proteine (z.B.Firefly Luciferase) haben gemeinsam mit CRISPR-Cas9 und SgRNAs der Zellen, CRISPR-Cas9-vermittelte somatische Mutationen zu kennzeichnen transfiziert wurden. Trotzdem, dieser Ansatz hätte Einschränkungen in funktionelle Studien auf Proliferierende Zellen da exogene Markergene verdünnt und nach langfristigen Verbreitung abgebaut. Während die transfizierten Zellen und ihre Tochterzellen CRISPR-induzierte Mutationen in ihrem Genom unterziehen, können ihre Spuren im Laufe der Zeit verloren gehen. Genetische Kennzeichnung Ansätze wäre daher geeignet, um dieses Problem zu umgehen.
Vor kurzem haben wir eine LOF CRISPR-basierte Methode in zerebelläre Granulat-Zellen, die eine langfristige Verbreitung während ihrer Differenzierung12durchlaufen entwickelt. Um den transfizierten Zellen genetisch zu beschriften, wir ein Plasmid trägt eine SgRNA zusammen mit Cre gebaut und Cerebella Rosa26-CAG-LSL-Cas9-P2A-EGFP Mäuse13 in Utero Elektroporation mit das Plasmid eingeführt. Im Gegensatz zu normalen Plasmid-Vektoren Codierung EGFP, dieser Ansatz erfolgreich mit der Bezeichnung transfizierten Granulat Neuron Vorstufen (festzulegenden) und ihre Tochterzellen. Diese Methode bietet großen Unterstützung in Vivo -Funktion von Genen des Interesses an proliferierenden Zellen im normalen Gehirnentwicklung und einem Tumor neigende Hintergrund zu verstehen.

<table><tbody><tr><td>Alexa 488 Ziege Anti-Huhn</td><td>ThermoFisher</td><td>A11039</td><td>1:400 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alexa 568 Esel Anti-Maus</td><td>Life Technologies</td><td>A-10037</td><td>1:400 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alexa 594 Esel Anti-Kaninchen</td><td>ThermoFisher</td><td>A21207</td><td>1:400 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alexa 647 Esel Anti-Kaninchen</td><td>Life Technologies</td><td>A31573</td><td>1:400 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alkalisch Phosphatase (FastAP)</td><td>ThermoFisher</td><td>EF0654</td><td></td></tr><tr><td>Autoklavband</td><td>Kisker Biotech</td><td>150262</td><td></td></tr><tr><td>BamHI (HF)</td><td>NEB</td><td>R3136S</td><td></td></tr><tr><td>BbsI (FastDigest)</td><td>ThermoFisher</td><td>FD1014</td><td></td></tr><tr><td>Zellulose-Filterpapier (Whatman)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA10347525</td><td></td></tr><tr><td>Tuch</td><td>Tork</td><td>530378</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Laser-Scanning-Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>LSM800</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>biovision</td><td>7903-1</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>1:1000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Einweg-Kunststoffformen (Tissue-Tek Cyromold)</td><td>VWR</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Glutamax</td><td>ThermoFisher</td><td>31966047</td><td></td></tr><tr><td>Eselsserum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>EcoRI (HF)</td><td>NEB</td><td>R3101S</td><td></td></tr><tr><td>Elektro Square Porator</td><td>BTX</td><td>ECM830</td><td></td></tr><tr><td>Endofree Maxi Kit</td><td>Qiagen</td><td>12362</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>107017</td><td></td></tr><tr><td>Augensalbe (Bepanthen)</td><td>Bayer</td><td>81552983</td><td></td></tr><tr><td>Fast Green</td><td>Merck</td><td>104022</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10270-016</td><td></td></tr><tr><td>Filter (0,22 & Mikro; m)</td><td>Merck</td><td>F8148</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszierender Zellbildgeber (ZOE)</td><td>Biorad</td><td>1450031</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette gerade</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Gaze (X100 ES-Pads 8f 10 x 10 cm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15387311</td><td></td></tr><tr><td>GFP Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab13970</td><td>1:1000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Gibson Assembly Master Mix</td><td>NEB</td><td>E2611S</td><td></td></tr><tr><td>Glaskapillare mit Filament</td><td>Narishige</td><td>GD1-2</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen</td><td>ThermoLux</td><td>463265 / -67</td><td></td></tr><tr><td>Bildverarbeitungssoftware (ImageJ und Fidschi)</td><td>NIH-Insulinspritze</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>(B. Braun OMNICAN U-100)</td><td>Carl Roth</td><td>AKP0.1</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Zoetis</td><td>TU061219</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina LT Series III Caliper</td><td>Perkin Elmer</td><td>CLS136331</td><td></td></tr><tr><td>Kalt Nahtnadeln</td><td>Fine Science Tools</td><td>12050-02</td><td></td></tr><tr><td>KAPA HIFI HOTSTART READY Mix</td><td>Kapa Biosystems</td><td>KK2601</td><td></td></tr><tr><td>Ki67 Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab15580</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Light Pointer</td><td>Photonic</td><td>PL3000</td><td></td></tr><tr><td>Liquid Blocker Pen</td><td>Kisker Biotech</td><td>MKP-1</td><td></td></tr><tr><td>Metamizol</td><td></td> <td>WDT-Mikroschleifer</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Narishige</td><td>EG-45</td><td></td></tr><tr><td>Mikroinjektor</td><td>Narishige</td><td>IM300</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipettenabzieher</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopsoftware ZEN</td><td>Zeiss-Unsteriler</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Seidennahtfaden (0,12 mm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. Compound (Tissue-Tek)</td><td>VWR</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>p27 Antikörper</td><td>BD bioscience</td><td>610241</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Roth</td><td>335,3</td><td></td></tr><tr><td>PBS ( 1x)</td><td>Life Technologies</td><td>14190169</td><td></td></tr><tr><td>pCAG-EGxxFP</td><td>Addgene</td><td>50716</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylenimin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408727</td><td></td></tr><tr><td>pX330 Plasmid</td><td>Addgene</td><td>42230</td><td></td></tr><tr><td>QIAprep Spin Miniprep Kit</td><td>Qiagen</td><td>27104</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick Gel Extraktionskit</td><td>Qiagen</td><td>28704</td><td></td></tr><tr><td>Quick Ligation Kit</td><td>NEB</td><td>M2200S</td><td></td></tr><tr><td>Ringzange</td><td>Fine Science Tools</td><td>11103-09</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger (SuperFrost)</td><td>ThermoFisher</td><td>10417002</td><td></td></tr><tr><td>Software für Biostatistik (Prism 7)</td><td>GraphPad Software,</td> <td>Inc-Spitacid</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>EcoLab</td><td>3003840</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td>C-PS</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5016</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Schere mit stumpfer Spitze</td><td>Fine Science Tools</td><td>14072-10</td><td></td></tr><tr><td>Naht (Supramid schwarz DS 16, 1.5 (4/0))</td><td>SMI</td><td>220340</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA Ligation Buffer</td><td>NEB</td><td>B0202S</td><td></td></tr><tr><td>T4 PNK</td><td>NEB</td><td>M0201S</td><td></td></tr><tr><td>Gewebeschere Blunt (11,5 cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14072-10</td><td></td></tr><tr><td>TOP2B Antikörper</td><td>Santa Cruz</td><td>sc13059</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Trypsin (2,5 %)</td><td>ThermoFisher</td><td>15090046</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette m/5mm & Oslash; Scheibenelektroden Platinum</td><td>Xceltis GmbH</td><td>CUY650P5</td><td></td></tr><tr><td>Vaporizer</td><td>Dr&auml; gerwerk AG</td><td>GS186</td><td></td></tr></tbody></table>

crispr-vermittelten verlust der funktionsanalyse in zerebelläre untermodul zellen mit in utero elektroporation-basierte gentransfer

CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

Fehlbildung des Gehirns wird oft durch genetische Mutationen verursacht. Entschlüsselung der Mutationen bei Patienten gewonnenem Gewebe hat mögliche ursächliche Faktoren der Krankheiten identifiziert. Um den Beitrag der eine Dysfunktion der mutierten Gene zur Krankheitsentwicklung zu validieren, ist die Generation von Tiermodellen, die Mutationen tragen ein offensichtlicher Ansatz. Während Keimbahn gentechnisch Mausmodellen (GEMMs) sind beliebte biologische Hilfsmittel und reproduzierbare Ergebnisse aufweisen, ist beschränkt durch die Zeit und Kosten. Unterdessen können nicht Keimbahn GEMMs oft erkunden Genfunktion in praktikabler Weise. Da einige Gehirn Krankheiten (z.B. Hirntumoren) scheinen aus somatischen ergeben aber nicht Keimbahn-Mutationen, nicht Keimbahn chimärer Maus-Modellen, in der normale und abnormale Zellen nebeneinander bestehen, für die krankheitsrelevanten Analyse hilfreich sein könnte. In dieser Studie berichten wir über eine Methode zur Einarbeitung von CRISPR-vermittelte somatische Mutationen im Kleinhirn. Speziell, wir nutzten bedingte Knock-in Mäusen, in denen Cas9 und GFP chronisch durch die CAG (CMV Enhancer/Huhn ß-Actin) Projektträger nach Cre aktiviert sind-vermittelten Rekombination des Genoms. Selbst entworfene Single-Guide RNAs (SgRNAs) und die Cre-Rekombinase-Sequenz, beide in einer einzigen Plasmid-Konstruktion, kodiert wurden in zerebelläre Stamm/Vorläuferzellen im Anfangsstadium mit in Utero Elektroporation geliefert. Infolgedessen wurden transfizierten Zellen und ihre Tochterzellen mit grün fluoreszierenden Proteins (GFP), und erleichtert so die phänotypische Analysen beschriftet. Daher ist diese Methode nicht nur Elektroporation-basierte gen Lieferung in zerebelläre Embryonalzellen zeigen aber auch vorschlagen einen neuartigen quantitativen Ansatz um CRISPR-vermittelten Verlustfunktion-Phänotypen zu beurteilen.

Für in Vivo Funktionsanalyse ist es entscheidend, die Zellen zu identifizieren, in denen exogene-Gens eingeführt wurden. Während der Ausdruck eines Markers wie GFP in nicht wuchernden Zellen für einen langen Zeitraum hinweg, weiterverfolgt kann sein das Signal nacheinander in proliferierenden Zellen verirrt. Ein Beispiel für diesen Effekt ist in Abbildung 1gezeigt. Zur Umgehung den Fußabdruck von transfizierten Zellen in LOF Analysen zu verlieren, ha...

Konventionelle Verlustfunktion-Studien von Genen mit Knockout-Tiere wurden oft kostspielig und zeitaufwendig. Elektroporation-basierte CRISPR-vermittelte somatische Mutagenese ist ein leistungsfähiges Werkzeug, gen in VivoFunktionen zu verstehen. Hier berichten wir über eine Methode, um Ko-Phänotypen in proliferierenden Zellen des Kleinhirns zu analysieren.

CRISPR-vermittelten Verlust der Funktionsanalyse in zerebelläre Untermodul Zellen mit In Utero Elektroporation-basierte Gentransfer

Brain malformation is often caused by genetic mutations. Deciphering the mutations in patient-derived tissues has identified potential causative factors ...

Das übergeordnete Ziel dieses auf Elektroporation basierenden in vivo Gentransfer-Ansatzes ist es, die Rolle von Genen von Interesse bei der Differenzierung von Kleinhirn-Körnerzellen mit Hilfe von CRISPR-vermittelten Funktionsverlustanalysen zu bewerten. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen in den Entwicklungsneurowissenschaften und den Neuroonkologien zu beantworten, z. B. zur Identifizierung der Moleküle, die für die normale Kleinhirnentwicklung und die Bildung von Hirntumoren wichtig sind. Das Verfahren der In-utero-Elektroporation wird von Dr. Lena Herbst, einer Postdoktorandin aus dem Labor von Professor Peter Lichter, demonstriert, und dann wird die folgende Immunhistochemie von Dr. Weijun Feng, einem Postdoktoranden aus dem Labor von Dr. Haikun Di, durchgeführt.Der Hauptvorteil dieser Methode besteht darin, dass man sich bemüht, Gene, die für sie in den Kleinhirnzellen interessant sind, mit Hilfe der CRISPR-cas9-Technologien auszuschalten, anstatt die Kombination von Knock-out-Tieren zu erzeugen. Obwohl diese Methode Einblicke in die Genfunktionen während der normalen Kleinhirnentwicklung geben kann, kann sie auch auf andere Systeme angewendet werden, wie z. B

crispr-mediated-loss-function-analysis-cerebellar-granule-cells-using

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

In utero Elektroporation ist eine wertvolle Methode zur Transfektion von neuronalen Vorläuferzellen in vivo. Abhängig von der Platzierung der Elektroden und der Entwicklungspsychologie Zeitpunkt der Elektroporation können bestimmte Teilmengen von kortikalen Zellen ausgerichtet werden. Gezielte Zellen können dann in vivo oder in vitro für die Auswirkungen der genetischen Veränderung untersucht werden.

In utero Elektroporation gefolgt von primären neuronalen Kultur für ein Studium Gene Function in Subset von kortikalen Neuronen

In utero Elektroporation ermöglicht eine schnelle Gentransfer in eine räumlich-und zeitlich kontrollierten Art und Weise in den Entwicklungsländern das zentrale Nervensystem (ZNS). Hier beschreiben wir eine sehr anpassungsfähig in utero Elektroporation Protokoll, mit dem Ausdruck Konstrukte in mehreren embryonalen ZNS-Domänen, einschließlich der Telencephalon, Diencephalon und der Netzhaut liefern können.

Effiziente Gene Lieferung in mehrere ZNS Territories mit In Utero Elektroporation

Dieses Video zeigt die Abgabe von Plasmid-DNA in zerebelläre neuronale Zellen von Mausembryonen mittels in utero-Elektroporation. Diese Methode ist nützlich, um die in vivo Funktion von Genen bei der normalen Gehirnentwicklung und die Veränderungen in der Genexpression von Neuronenzellen während der Tumorprogression zu verstehen.

In utero Elektroporation basierte Genabgabe: Eine Technik zur Injektion von Plasmid-DNA in embryonale Kleinhirnzellen von Mausembryonen

In diesem Video führen wir die Elektroporation von Kleinhirnschnitten von Kükenembryonen mit Reportergen-Plasmiden durch. Die Technik ermöglicht die Visualisierung der Entwicklung und Migration von Körnerzellvorläufern zur Bildung einer granularen Schicht.

Ex-vivo-Elektroporation von Kleinhirnschnitten von Kükenembryonen: Eine Methode zur Einführung von Plasmid-DNA, die für grün fluoreszierendes Protein kodiert, um die Entwicklung granularer Zellen zu visualisieren

Neuronale Morphogenese und Migration sind entscheidende Ereignisse zugrunde liegenden richtige Entwicklung des Gehirns. Hier beschreiben wir Verfahren zur genetischen Manipulation kultivierten zerebellären Körnerzellen und die Entwicklung von Kleinhirn für die Beurteilung der Morphologie und der Migrationseigenschaften von Neuronen.

Genetische Manipulation von Kleinhirnkörnerzellen<em&gt; In-vitro-</em&gt; Und<em&gt; In Vivo</em&gt;, Um neuronale Morphologie und Migration Studieren

Die Migration von Neuronen wird durch zahlreiche zellautonome und nicht-zellautonome Faktoren reguliert.  Dieses Protokoll zeigt, wie die In-utero-Elektroporation verwendet werden kann, um festzustellen, ob ein Phänotyp in einer transgenen Maus auf eine Störung eines zellinternen Mechanismus oder eine Beeinträchtigung der Interaktion zwischen dem Neuron und seiner Umgebung zurückzuführen ist.

Induktion der Protein Deletion Durch In Utero Elektroporation, um Defizite in Neuronale Migration in Transgenic Models definieren

Die Kleinhirn externen Körnerschicht ist der Ort der größten Transit Verstärkung im sich entwickelnden Gehirn. Hier stellen wir ein Protokoll zur genetischen Veränderung, die diese Schicht an der Spitze der Proliferation unter Verwendung ex vivo Elektroporation und Kultur zerebelläre Scheiben aus embryonalen Tag 14 Hühnerembryonen zu zielen.

Ex-vivo-Kultur von Chick Kleinhirn-Slices und räumlich gezielte Elektroporation von Körnerzellvorstufen

Periventrikulären noduläre Heterotopie (PNH) ist die häufigste Form der Fehlbildung der kortikalen Entwicklung (MCD) im Erwachsenenalter, aber seine genetische Basis bleibt bei den sporadischen Fällen unbekannt. Vor kurzem haben wir eine Strategie, um neue Kandidatengene für MCDs zu identifizieren und direkt ihre ursächliche Rolle in Vivobestätigen.

Eine neuartige Strategie verbindet Array-CGH, ganze Exome Sequenzierung und In Utero Elektroporation bei Nagetieren verursachenden Gene für Hirnfehlbildungen identifizieren

Zelle-autonome Funktionen der Gene im Gehirn können durch Induktion Verlust studiert werden oder der Funktion in geringer Dichte Bevölkerungen der Zellen gewinnen. Hier beschreiben wir in Utero Elektroporation Cre-Rekombinase in spärlichen Bevölkerung kortikale Neuronen mit Floxed Genen zu entwickeln, Verlust der Funktion in Vivozu liefern.

Induktion Cre Lox Rekombination in Maus Großhirnrinde durch Elektroporation In Utero

Hier beschreiben wir eine Methode zur Visualisierung der Synaptogenese von Körnerneuronen im Kleinhirn der Maus über den zeitlichen Verlauf der postnatalen Gehirnentwicklung, wenn diese Zellen ihre synaptischen Strukturen verfeinern und Synapsen bilden, um sich in den gesamten Gehirnkreislauf zu integrieren.

Verwendung der postnatalen In-vivo-Elektroporation zur Untersuchung der Morphologie von Kleinhirngranula-Neuronen und der Synapsenentwicklung

Hier beschreiben wir eine einfache Technik zur effizienten Erzeugung von genetisch veränderten Mäusen namens CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). Diese Methode liefert Editierreagenzien durch Elektroporation in Embryonen mit einer Effizienz von nahezu 100%. Dieses Protokoll ist wirksam bei Punktmutationen, kleinen genomischen Insertionen und Deletionen in Säugetierembryonen.

Effiziente Genom-Editierung von Mäusen durch CRISPR-Elektroporation von Zygoten

Erfahren Sie eine CRISPR-basierte In-Utero-Elektroporation zur Analyse von Genfunktionen in zerebellären Körnerzellen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung neuronaler Entwicklung und Hirntumorbildung.

CRISPR-vermittelten Verlust der Funktionsanalyse in zerebelläre Untermodul Zellen mit In Utero Elektroporation-basierte Gentransfer (Video) | JoVE Journal

CRISPR-vermittelten Verlust der Funktionsanalyse in zerebelläre Untermodul Zellen mit In Utero Elektroporation-basierte Gentransfer

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