Tiefe Venenthrombose, induziert durch Stauung in den Mäusen durch Hochfrequenz-Sonographie überwacht

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist die Induktion tiefer Venenthrombosen bei Mäusen mit dem Modell der unteren Hohlvenenstauung und die Überwachung der Thromben mit Hilfe von Hochfrequenzultraschall. Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Fragen auf dem Gebiet der Venenthrombose zu beantworten, wie ein pharmakologischer Wirkstoff, ein Gen oder ein Zelltyp von Interesse die Thrombusbildung oder -auflösung beeinflussen kann. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sowohl die Thrombusbildung als auch die Auflösung bei Mäusen nicht-invasiv quantifiziert werden können.

Die Idee zu dieser Methode hatten wir erstmals, als wir untersuchten, wie man die Thrombusbildung in der unteren Hohlvene von Mäusen denamikatieren und nicht-invasiv überwachen kann. Heben Sie zunächst mit einer Pinzette die untere Bauchhaut einer acht bis 10 Wochen alten C57 Black Six-Maus an. Und verwenden Sie eine chirurgische Schere, um einen vertikalen Schnitt parallel zu beiden Seiten der Linea alba von der Mittellinie aus zu machen.

Mache einen horizontalen Schnitt am oberen Ende des Bauches. Gefolgt von wiederholten Schnitten durch die Bauchmuskelschicht. Falten Sie die Haut und die Muskeln vom Schnitt weg, um die Bauchhöhle freizulegen.

Und geben Sie angefeuchtete Gaze auf beide Seiten der Wunde. Üben Sie sanften Druck auf beide Seiten des Bauches aus, um den Darm auf die Gaze zu externalisieren. Und legen Sie eine zweite Schicht angefeuchtete Gaze über das externalisierte Gewebe.

Schieben Sie unter einem Präpariermikroskop jegliches Peritonealfett beiseite, um die innere Hohlvene (IVC) zwischen der Nieren- und der Beckenvene freizulegen. Und suchen Sie die IVC-Seitenzweige. Stumpfen Sie mit einer Pinzette vorsichtig um jeden Seitenast herum, um die Faszie zu durchbrechen, ohne die umgebenden Gefäße zu beschädigen.

Fassen Sie als Nächstes vorsichtig das Fett um einen Ast, um die Vene anzuheben. Und führen Sie ein Stück Seidennaht mit sechs Strichen Null unter das Gefäß. Verwenden Sie dann eine Nahtzange und eine übliche chirurgische Knotenbindetechnik, um eine chirurgische Ligatur mit mindestens drei Würfen um den Seitenast herum durchzuführen und das Gefäß vollständig zu verschließen.

Alternativ können Sie Hemoclips verwenden. Um die Aorta von der IVC zu trennen, wird eine stumpfe Präparation um und zwischen beiden Gefäßen unmittelbar distal von der linken Nierenvene durchgeführt, ohne eines der beiden Gefäße zu beschädigen. Wenn ein klares Fenster zwischen den Gefäßen geschaffen wurde, führen Sie einen Abschnitt aus sechs Strichen Null-Seidennaht unter der IVC und der Bauchaorta hindurch.

Und ziehen Sie die Naht mit einer Pinzette durch das Fenster. Ligatieren Sie die IVC mit einer Nahtzange mit drei Würfen unmittelbar distal zur linken Nierenvene, um einen vollständigen Verschluss des Gefäßes zu erzielen. Vergewissern Sie sich, dass die Bauchschlagader ununterbrochen geblieben ist.

Und dass alle Seitenäste ligiert wurden. Die IVC erscheint distal von der Ligaturstelle dilatiert. Und es wird kein Blutfluss sichtbar sein.

Führe das Bauchfellfett und den Darm in die Bauchhöhle zurück. Und verwenden Sie eine Nahtzange und sechs Striche Null-Seidennähte, um die Muskel- und Hautschichten separat mit Laufstichen zu verschließen. Legen Sie das Tier dann für mindestens 30 Minuten in einen 34 Grad Celsius heißen Inkubator mit Überwachung, bis es sich vollständig erholt hat.

Platzieren Sie die Ultraschall-Gelflasche durch die Spiralen eines Wasserheizungssystems, um das Gel auf 37 Grad Celsius zu erhitzen. 24 Stunden nach der Ligatur legen Sie das Tier auf die Analyseplattform. Tragen Sie Elektrodengel auf die vier Elektroden der Plattform auf.

Befestigen Sie mit dem Tier in Rückenlage die Pfoten an den Elektroden. Und führen Sie ein geschmiertes Thermometer in das Rektum ein. Legen Sie Gaze an die Seite des Tieres, um überschüssiges Ultraschallgel aufzufangen.

Tragen Sie dann das Gel auf die exponierte Haut auf. Und bilden Sie die IVC gemäß den Standard-Ultraschallprotokollen ab. Mit Hilfe eines Hochfrequenz-Mikrobildgebungssystems kann die IVC in der Längsschnittansicht vor der Ligatur identifiziert werden.

Und die Strömungsgeschwindigkeit kann durch gepulste Wellendoppler-Bildgebung bestimmt werden. Unmittelbar nach der Ligatur ist eine Abnahme des Blutflusses erkennbar. 24 Stunden nach der Ligatur können dichte Thromben im IVC mittels Ultraschall sichtbar gemacht werden.

Die Sonographie ermöglicht auch die Quantifizierung der Geschwindigkeit des Blutflusses in den Gefäßen. Verwendung von farbigem Doppler vor, unmittelbar nach und 24 Stunden nach der Ligatur. Einmal gemeistert, kann der Thrombus in 30 bis 45 Minuten induziert werden, abhängig von der Anwesenheit und Anzahl der Seitenäste, wenn die Technik richtig durchgeführt wird.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, sich Zeit zu nehmen und präzise und dennoch sanft in Ihren Bewegungen zu sein, da es relativ leicht ist, die Gefäße zu reißen. Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Methoden wie immunfluoreszierende, histologische oder durchflusszytometrische Analysen durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zum zellulären Gehalt von Thromben zu beantworten oder bestimmte Proteine von Interesse zu quantifizieren.