Name: Murine Speichel funktionale Bewertung über Pilocarpin Stimulation folgenden fraktioniert Bestrahlung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Lernen Sie die funktionelle Bewertung muriner Speicheldrüsen durch Pilocarpin-Stimulation. Diese Methode umfasst Tracheotomie, Speichelgewinnung und Drüsensektion zur Untersuchung von Mundtrockenheit und Speichelüberproduktion.

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Forschung berichtet in dieser Publikation wurde durch das nationale Institut des Dental und Craniofacial Forschung (NIDCR) und das National Cancer Institute (NCI) der National Institutes of Health Award Anzahl R56 DE025098, UG3 DE027695 und F30 CA206296 unterstützt. Der Inhalt ist ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und nicht unbedingt die offizielle Meinung der National Institutes of Health. Diese Arbeit wurde auch von der NSF-DMR-1206219 und der IADR-Innovation in Oral Care Award (2016) unterstützt.
Wir möchten Dr. Eri Maruyama und Andrew Hollomon danken für ihre Unterstützung mit Speichel-Kollektion. Wir möchten Pei-Lun Weng danken für Unterstützung mit Drüse Dissektion. Wir möchten danken Matthew Ingalls für seine Unterstützung bei der Vorbereitung der Figur. Wir möchten Dr. Elaine Smolock und Emily Wu für kritische Lektüre des Manuskripts danken.

Alle in-Vivo -Verfahren unten umrissen wurden vom Ausschuss für Tier-Ressourcen an der University of Rochester, Rochester University angenommen. NY.
1. Vorbereitung
<ol><li>Wiegen Sie mit Hilfe einer Analysenwaage, 20 mg Pilocarpin. In 2 mL steriler Kochsalzlösung in einem Microcentrifuge Schlauch auflösen. Hinweis: Da Pilocarpin lichtempfindlich ist und Aktivität im Laufe der Zeit verliert, diese Lösung sollte am Tag der Injektion vorbereitet, und lichtgeschützt bis verabreicht.</li>
	<li>Mit Hilfe einer Analysenwaage, wiegen und alle Röhrchen und Glaskapillaren identifizieren. Die Anzahl der Röhrchen und Glaskapillaren sollte die Anzahl der Mäuse übereinstimmen.</li>
</ol>(2) Tracheostoma
<ol><li>Wiegen Sie C57/BL6 Mäuse mit einer Analysenwaage.</li>
	<li>Mit einer 0,5 mL Spritze mit 29 x ½" Nadel, Betäuben Sie Mäuse mit einem intraperitoneal injizierten steriler Kochsalzlösung von 100 mg/kg Ketamin und 10 mg/kg Xylazin. Fahren Sie mit dem folgenden Schritt fort, wenn die Maus reagiert nicht mehr auf Reize (z. B. Fehlen der Reflex-Pedal Rückzug), die in der Regel innerhalb von 5 bis 10 min nach der Injektion auftritt.</li>
	<li>Nach der Entnahme Schmiermittel auf einem Baumwolle-gespitzten Applikator, sanft gelten für Augen und platzieren Sie den Mauszeiger in Rückenlage auf der Bühne. Das narkotisierten Tier muss auf warme Oberfläche gehalten werden. Hinweis: Alle Schritte sind bei Raumtemperatur durchgeführt.</li>
	<li>Die Nase, Gliedmaßen und Rute auf die Bühne mit chirurgischen Klebeband zu sichern.</li>
	<li>Reinigen und den Hals mit einem Alkohol abwischen naß. Hinweis: Dies wird helfen, Fell in nachfolgenden Einschnitte zu verhindern.</li>
	<li>Anhebung der ventralen Mittellinie Halshaut mit einer Pinzette, machen Sie einen kleinen, oberflächlichen Schnitt mit sezierenden Schere. Führen Sie die Schere in die Öffnung, und öffnen Sie langsam die klingen subkutan, um Gewebe Flugzeuge zu trennen.</li>
	<li>Halten Sie die Haut angehoben, schneiden Sie vorsichtig bis 1 cm unterhalb der Mündung.</li>
	<li>Stellen Sie zwei seitliche Einschnitte die minderwertigen und überlegenen Aspekte des ersten Schnittes. Mit Pinzette, sanft spiegeln Sie entfernt die Haut, um Zugriff auf Kopf und Nacken Strukturen ermöglichen.</li>
	<li>Das sezierenden Mikroskop bei 8 X Vergrößerung, visualisieren die submandibulären Drüsen (Mittellinie: Abbildung 1).</li>
	<li>Mit feinen Pinzette, heben Sie vorsichtig die Drüsen, die die vier Infrahyoid (Gurt) Muskeln über die Luftröhre aussetzen. Vermeiden Sie reißen oder Störung der umliegenden Gefäßsystem oder absondernde Luftschachte.</li>
	<li>Wenn Speichel aus mehrere Mäuse sammeln, wiederholen Sie Schritte 2.1-2.10 mit jeder Maus bevor Sie fortfahren. Hinweis: Dieses Verfahren kann sicher auf bis zu 5 Mäuse gleichzeitig durchgeführt werden.</li>
	<li>Mit kleinen sezierenden Schere Entfernen des medialen Teils der Gurt Muskeln während Ihres Aufenthalts möglichst nahe an der Mittellinie wie möglich. Schneiden Sie nur so viel wie nötig zu visualisieren Luftröhre Gurt Muskeln aus dem Weg während des Verfahrens. Vermeiden Sie nicking keine nahe gelegenen Schiffe, denn wenn es Volumenmangel sekundär zu erheblichen Blutungen gibt, Pilocarpin nicht effektiv bei der Induktion der Sekretion.</li>
	<li>Der Gurt Muskeln Weg von der Luftröhre zu reflektieren.</li>
	<li>Visualisieren Sie den Kehlkopf, Luftröhre und Schilddrüse. Sicherstellen Sie, dass die Luftröhre klar ist der darüberliegende Gewebe.</li>
	<li>Nehmen Sie einen horizontalen Schnitt in der Luftröhre minderwertig/Posterior an der Schilddrüse mit kleinen sezierenden Schere. Sicherstellen Sie, dass die Atemwege Patent- und klare Flüssigkeit.</li>
</ol>(3) Speichel Sammlung
<ol><li>Entfernen Sie das Klebeband in der Nähe von Mund und Winkel Dissektion Stufe nach unten (45° cranially), mit Speichelfluss zu unterstützen.</li>
	<li>Führen Sie mit einer 0,5 mL Spritze mit 29 x ½" Nadel, intraperitoneale Injektion von 10 µL/g Körper Gewicht Pilocarpin für eine Gesamtdosis von 100 mg/kg.</li>
	<li>Einen Timer gestartet wird. Wenn mehrere Mäuse Dosierung, reduzieren Sie Vorbereitungs-und Anlaufzeit sich schnell zu bewegen und gleichzeitig die verbleibenden Mäuse zu injizieren Assistent.</li>
	<li>Öffnen Sie standard Pinzetten verwenden, den Mund für Kapillarrohr Zugang.</li>
	<li>Sobald eine Perle von Speichel im Mund beobachtet wird, legen Sie das proximale Ende der Kapillare in die Flüssigkeit mit dem distalen Ende in ein Sammelrohr unterhalb der sezierenden Bühne (beide Rohre vorher gewogen) gelegt. Hinweis: Bei weiblichen Mäusen C57/BL6 6-10 Wochen alt, tritt grobe Speichelfluss innerhalb von 2 min. von Pilocarpin-Injektion.</li>
	<li>Wenn Speichel im Mund bauen, aber nicht durch das Rohr fließt, Korrekturen Sie vorherigen Schritt. Stellen Sie sicher, dass das Rohr nicht direkt gegen eine Schleimhautoberfläche gesetzt, die den Einlass behindern können.</li>
	<li>Sammeln Sie Speichel für insgesamt 12 min nach Pilocarpin Stimulation. Stellen Sie sicher, dass das Stoma klar bleibt. Hinweis: Erhöhte Tidalvolumen und Sekret (Speichel, Urin, fäkale) sind während dieser Zeit normal.</li>
	<li>Wenn Mäuse Speichel Funktion gedrückt haben (zB., aufgrund einer Verletzung oder Intervention), die restliche Flüssigkeit aus dem Mund auf dem Sammelrohr mit einer Mikropipette P200 übertragen. Wenn mehrere Mäuse sammeln, sicherzustellen Sie, dass Tipps geändert werden.</li>
	<li>Nehmen Sie das Gewicht der gesammelten Speichel plus Rohre 12 min nach Pilocarpin Injektion.</li>
</ol>(4) Drüse Dissektion
<ol><li>Einschläfern Mäuse durch CO2 Euthanasie (wie beschrieben in den AVMA Richtlinien für Euthanasie von Tieren: die Ausgabe 2013) gefolgt von Thorakotomie, kümmert sich um die Strukturen des Kopfes und des Halses zu bewahren. Vermeiden Sie aus diesem Grund zervikale Dislokation als Methode der Euthanasie.</li>
	<li>Platzieren Sie den Mauszeiger in Rückenlage auf der Bühne. Positionieren Sie Drüsen am ursprünglichen Standort in der Luftröhre (Abbildung 1).</li>
	<li>Mit einem sezierenden Mikroskop unter 8 X Vergrößerung, visualisieren die großen Drüsen: die PG, SMG und SLG. Um die Drüsen während der Präparation zu unterscheiden, erkennen Sie, dass das PG diffuse, liegt lateral der SMG und SLG. Hinweis: Wenn die PG sezieren, sollte dies zuerst erfolgen, da ist der zuletzt definierte und höchstwahrscheinlich abgerissen werden.</li>
	<li>Das Heck des PG mit der Pinzette, ziehen es weg von zugrunde liegenden Strukturen zu erfassen und Spannung vor dem Schnitt den Kopf des PG mit präparierscheren sanft auftragen.</li>
	<li>Verletzung der Kapsel umgibt die SMGs mit Pinzette. Vorsichtig Trennen der linken und rechten SMG.</li>
	<li>Kostenlos des dorsalen Aspekt des SMG aus eingehalten nonglandular Gewebe mit Pinzette.</li>
	<li>Entfernen Sie die SMG vom Hals, indem Wharton Kanal straff mit der Pinzette zeichnen und schneiden das Rohr mit präparierscheren.</li>
	<li>Trennen Sie vorsichtig die SLG von der SMG mit Pinzette. Hinweis: Die SLG ist in der Superolateral Aspekt der SMG.</li>
	<li>Verwendung eines analytischen Waage, SMG Gewichte aufnehmen.</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Wir präsentieren Ihnen eine mehrstufige Methode zur Speicheldrüse Funktion bewerten die Drüse Verletzungen und Therapeutika studieren angewendet werden können. Unsere Verfahren beinhaltet Tracheostoma, Speichel Sammlung und Drüse Dissektion, von denen jede experimentelle Anwendungen hat, die ein integriertes Studium der Speicheldrüse Biologie unterstützen kann. Beispielsweise hat murinen Tracheostoma für allgemeine Atemwegsmanagement bei Eingriffen, die Behinderung der Mundhöhle verwendet worden.
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Speicheldrüse Störungen gehören Syndrome Dysregulated oder beeinträchtigt Sekretion führt zu Überproduktion (Sialorrhea) oder Unterproduktion (Xerostomie und endodontischen) Speichel1. In beiden Fällen gibt es Interesse an der Verbesserung unser Verständnis der Biologie der Speicheldrüse auf das Endziel der therapeutischen Entwicklung2.
Die Speicheldrüsen sind sehr strahlenempfindlichen Organe und sind oft im Kopf und Nacken Krebs Strahlentherapie, führt zu dauerhaften Mundtrockenheit (Xerostomie)3,4beschädigt. Im Gegensatz zu anderen strahlenempfindlichen Geweben Speicheldrüse Fluktuationsrate ist relativ gering, und der Mechanismus der sekretorischen Verlust ist schlecht verstandene5,6. In dieser Umgebung einzigartig Verletzung erfordern Gewebe-Regeneration und Strahlenschutz-Strategien Speichel funktionale Bewertung. Experimentell, ist murine Speichel Sammlung ein besonders wertvolles Instrument bei der Bewertung der Drüse auf Strahlung und Therapeutika.
Hier präsentieren wir Ihnen eine Methode für die Durchführung und Quantifizierung der stimulierten Speichels Sekretion mit Pilocarpin, eine potente muskarin Agonist-7. Pilocarpin stimuliert das vegetative Nervensystem Drüse Sekret8,9induzieren. Um diesen Test entsprechend abzuschließen, ist ein Tracheostoma erforderlich, um sicherzustellen, dass die Maus hält ein patent Atemwege während des Verfahrens und zur Reduzierung des Risikos von Würgen und Aspiration von gepoolten Sekret in der Mundhöhle10.
Dies ist ein terminal Verfahren, die ihren Höhepunkt bei der Entfernung von den drei großen Speicheldrüsen: die Parotis (PG), der mandibulären (SMG) und der Sublingual (SLG). Für funktionelle Studien Drüse Gewichte werden aufgezeichnet und werden oft verwendet, um Speichel Messung11,12,13zu normalisieren. Diese Daten sind besonders wichtig in Strahlung Studien, wobei Drüse Atrophie ein erwartetes Ergebnis14,15 ist
Gibt es Variabilität in der Literatur in Bezug auf wie stimuliert Sekretion von Speichel erfolgt und16berichtet. Z. B. Pilocarpin Dosen innerhalb der Literatur Span mindestens drei Größenordnungen17,18,19,20,21,22,23. Hier präsentieren wir Ihnen eine optimierte hochdosierte Pilocarpin-Protokoll mit der Absicht der verbesserte Reproduzierbarkeit Methodenausführung sowie eine modulare Plattform von Techniken (Tracheostoma, Speichel Sammlung und Drüse Dissektion), die als angepasst werden kann benötigt.
Wir gehören neben Protokoll Demo 2 Wochen nach fraktionierte Bestrahlung (4 Dosen von 6,85 Gy) für die SMG-Region repräsentative Funktionsdaten des Speichelflusses.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpin Hydrochlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpin</td></tr><tr><td>Student Vannas Federschere</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-9</td><td>Federschere für Tracheostomie</td></tr><tr><td>Sterile Kochsalzlösung</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Dumont #7 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Gebogene Pinzette</td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Gerade Pinzette</td></tr><tr><td>mit Standardmuster</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>Stumpfe Pinzette</td></tr><tr><td>Feine Schere - Wolframkarbid</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Sezierschere</td></tr><tr><td>Mikrohämatokrit Heparinisierte Kapillarrohre</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Kapillarrohre</td></tr><tr><td>Gleitmittel Augensalbe</td><td>Aktualisieren</td><td>N/A</td><td>Aktualisieren Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Ziege polyklonales Anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antikörper</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindole, Dihydrochlorid)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism GraphPad</td><td></td><td>ver6.0</td><td>Statistische Software</td></tr><tr><td>Applikator mit Wattespitze</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Applikator für Augensalbe</td></tr><tr><td>0,5cc Insulinspritze, 29G x 1/2"</td><td>BD</td><td>7629</td><td>Spritze für die intraperitoneale Injektion</td></tr></tbody></table>

murine speichel funktionale bewertung über pilocarpin stimulation folgenden fraktioniert bestrahlung

Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

Hyposalivation wird allgemein in der Autoimmun-Reaktion von Sjögren Syndrom oder die folgenden Strahlung Verletzung der großen Speicheldrüsen beobachtet. In diesen Fällen bleiben Fragen hinsichtlich der Pathogenese der Krankheit und wirksame Interventionen. Eine optimierte Technik, die funktionale Bewertung der Speicheldrüsen können, ist von unschätzbarem Wert für die Untersuchung von therapeutisches Drüse Biologie, Dysfunktion und Therapeutika. Hier präsentieren wir einen Schritt-für-Schritt-Ansatz zur Durchführung von Pilocarpin stimuliert die Sekretion von Speichel, einschließlich Tracheostoma und die Zerlegung der drei großen murinen Speicheldrüsen. Wir ausführlich auch die entsprechenden murine Kopf und Hals Anatomie während dieser Techniken zugegriffen. Dieser Ansatz ist skalierbar, so dass für mehrere Mäuse gleichzeitig verarbeitet werden somit die Effizienz der Arbeitsabläufe. Unser Ziel ist es, die Reproduzierbarkeit dieser Methoden zu verbessern, von die jede weitere Anwendungen auf dem Gebiet hat. Neben Speichel Sammlung diskutieren wir Metriken für die Quantifizierung und Normalisierung der Funktionsfähigkeit dieser Gewebe. Repräsentative Daten sind 2 Wochen nach der fraktionierte Bestrahlung (4 Dosen von 6,85 Gy) von mandibulären Drüsen mit depressiven Speicheldrüse Funktion enthalten.

Wenn Speichel Sammlung durchführen hochdosierte Pilocarpin stimuliert werden, ist es wichtig, die Atemwege um Aspiration zu vermeiden oder würgen von Sekret in der Mundhöhle. Eine schematische Darstellung des das Tracheostoma ist (Abbildung 1) zur Verfügung gestellt. Nach trachealen Schnitt muss das Stoma Gewebe und Flüssigkeiten frei bleiben.
Zur Verbesserung der Kapillarwirkung im Speichel Sammlun...

Wir präsentieren Ihnen einen detaillierten Ansatz zur Durchführung von Speichel Sammlung, einschließlich murinen Tracheostoma und die Isolation der drei großen Speicheldrüsen.

Murine Speichel funktionale Bewertung über Pilocarpin Stimulation folgenden fraktioniert Bestrahlung

Hyposalivation is commonly observed in the autoimmune reaction of Sj&#246;gren's syndrome or following radiation injury to the major salivary glands. In ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Speichelfunktion der Maus durch Pilocarpin-Stimulation zu bewerten. Diese Methode kann sowohl angewendet werden, um den natürlichen Verlauf der Speicheldrüsenfunktionsstörung zu verstehen, als auch um die Wirksamkeit möglicher Interventionen zu testen. Unser Protokoll bietet eine modulare Plattform von Techniken, einschließlich muriner Tracheotomie, Speichelentnahme und Drüsendissektion.Klinisch hat diese Technik Auswirkungen auf Studien, in denen entweder Mundtrockenheit oder übermäßige Speichelproduktion untersucht werden. Und es kann auch auf andere intraorale Verfahren angewendet werden, die ein Atemwegsmanagement erfordern. Diejenigen, die dieses Protokoll zum ersten Mal erlernen, können die Tracheostomie und die Drüsendissektion als Herausforderung empfinden.Wir hoffen, dass dieses Video Ihnen hilft, die richtige Drüsenisolationstechnik sowie die relevante Anatomie zu erlernen. Wiegen Sie mit einer Analysenwaage 20 Milligramm Pilocarpin ab und lösen Sie es dann in 2 Millilitern steriler Kochsalzlösung auf. Pilocarpin-Lösungen müssen am Tag ihrer Anwendung frisch hergestellt werden.Wiegen Sie als Nächstes alle Sammelgefäße für den Eingriff und wiegen Sie die Maus, um sie genau zu dosieren. Verwenden Sie den Stamm C57 Black 6. Nachdem Sie die Maus betäubt und die Anästhesie mit dem Zehenkneifen bestätigt haben, tragen Sie eine Augensalbe mit einem Applikator mit Wattespitze auf und positionieren Sie die Maus in Rückenlage.Sichern Sie dann die Gliedmaßen, die Nase und den Schwanz mit chirurgischem Klebeband. Reinigen und befeuchten Sie anschließend den Hals mit einem Alkoholtupfer. Kneifen Sie nun mit einer Pinzette in den ventralen Mittellinienhals und machen Sie mit einer Schere einen kleinen, oberflächlichen Schnitt.Führen Sie dann die Schere in die Öffnung und öffnen Sie die Klingen langsam subkutan, um die Gewebeebenen zu trennen. Halten Sie die Haut angehoben und machen Sie vorsichtig einen weiteren Schnitt einen Zentimeter unterhalb des Mundes. Machen Sie dann zwei seitliche Schnitte, die dem ersten Schnitt unterlegen und überlegen sind.Ziehen Sie nun mit einer Pinzette die Haut vorsichtig auseinander, um an die Anatomie von Kopf und Hals zu gelangen. Gehen Sie mit einem Präpariermikroskop bei achtfacher Vergrößerung vor. Heben Sie mit einer feinen Pinzette die Unterkieferdrüse vorsichtig an, um die vier infrahyoidalen Muskeln über der Luftröhre freizulegen.Vermeiden Sie es, das umliegende Gefäßsystem oder die Ausscheidungsgänge zu zerreißen oder zu stören. Wenn Sie Speichel von mehr als einer Maus sammeln, bereiten Sie alle Mäuse bis zu diesem Punkt vor, bevor Sie fortfahren. Eine Person kann mit bis zu fünf Mäusen gleichzeitig umgehen.Um die Operation fortzusetzen, verwenden Sie nun eine kleine Präparierschere, um den medialen Teil der Gurtmuskulatur zu entfernen, während Sie nahe der Mittellinie bleiben. Entfernen Sie gerade genug Muskeln, um die Luftröhre sichtbar zu machen und zu verhindern, dass die Muskeln den Eingriff beeinträchtigen. Bei der Präparierung der Gurtmuskulatur ist es besonders wichtig, ein Einkerben in nahe gelegene Gefäße zu vermeiden.Eine Kerbe kann zu einer Volumenverarmung infolge einer Blutung führen und somit Pilocarpin für die Induktion der Speichelsekretion unwirksam machen. Um fortzufahren, reflektieren Sie die Gurtmuskulatur von der Luftröhre weg, um den Kehlkopf, die Luftröhre und die Schilddrüse sichtbar zu machen. Stellen Sie sicher, dass die Luftröhre frei von darüber liegendem Gewebe ist.Zum Schluss machen Sie einen horizontalen Schnitt in der Luftröhre, die der Schilddrüse untergeordnet ist, mit einer kleinen Präparierschere, nicht mit einem Skalpell. Stellen Sie sicher, dass dieser Atemweg offen und frei von Flüssigkeit ist. Für die Speichelsammlung entfernen Sie zuerst das Klebeband in der Nähe des Mundes und neigen dann den Präpariertisch um 45 Grad, um den Speichelfluss nach kranial zu lenken.Verwenden Sie anschließend eine 0,5-Milliliter-Spritze mit einer 29-Gauge-Half-Inch-Nadel, um eine intraperitoneale Pilocarpin-Injektion zu verabreichen. Starten Sie dann einen Timer. Wenn mehrere Mäuse injiziert werden, arbeiten Sie schnell mit Hilfe eines Assistenten.Verwenden Sie als Nächstes eine Standardzange, um den Mund zu öffnen und ein Kapillarrohr in Position zu bringen. Innerhalb weniger Minuten sollte sich eine Speichelperle bilden. Führen Sie ein Ende des Kapillarröhrchens in den Speichel ein und stecken Sie das andere Ende in ein Auffangröhrchen, das sich unterhalb des Präpariertisches befindet.Positionieren Sie das Röhrchen bei Bedarf neu, um den Speichel aufzusaugen. Vermeiden Sie den Kontakt mit Schleimhautgewebe, da Schleim den Einlass verstopfen könnte. Sammeln Sie 12 Minuten lang Speichel ab dem Zeitpunkt der Injektion.Das Stoma sollte durchgehend frei bleiben. Wenn die Speichelfunktion der Maus eingeschränkt ist, übertragen Sie Flüssigkeit mit einer P200-Mikropipette aus dem Mund in das Entnahmeröhrchen. Verwenden Sie für jede Maus immer eine andere Tube oder Spitze.Nachdem Sie alle Entnahmen abgeschlossen haben, wiegen Sie die Auffanggefäße erneut. Nachdem Sie die Maus durch Kohlendioxid-Erstickung eingeschläfert haben, führen Sie eine vorsichtige Thorakotomie durch und legen Sie die Maus in Rückenlage auf den Dissektionsmikroskoptisch. Positionieren Sie dann die Drüsen an der ursprünglichen Operationsstelle neu.Visualisieren Sie bei achtfacher Vergrößerung die Hauptverschraubungen, PG, SMG und SLG. Das PG ist diffus und befindet sich lateral zur MP und zur SLG. Zerlege zuerst das PG.Fassen Sie den Schwanz des PG mit einer Pinzette und ziehen Sie ihn von den darunter liegenden Strukturen weg. Bauen Sie es auf eine sanfte Spannung auf und schneiden Sie dann den Kopf des PG mit einer Präparierschere ab. Durchbreche als Nächstes die Kapsel, die die SMGs umgibt, mit einer Pinzette.Trennen Sie dann vorsichtig die linke und die rechte SMG. Befreien Sie als Nächstes den dorsalen Aspekt des SMG vom umgebenden nicht-drüsenförmigen Gewebe. Um das SMG zu entfernen, ziehen Sie den Wharton-Kanal mit einer Pinzette fest und schneiden Sie den Kanal mit einer Präparierschere durch.Die SLG befindet sich im superolateralen Aspekt der MP. Um die beiden Drüsen zu trennen, fassen Sie jede mit einer separaten Pinzette an und positionieren Sie einen Zinken in der Gewebeebene zwischen den Drüsen. Baue dann langsam Spannung auf, und die beiden Drüsen lösen sich allmählich.Nach der Isolierung des Drüsengewebes die Sammelgefäße sofort erneut wiegen. Als Positivkontrolle für die Analyse wurden Maus-SMGs bestrahlt und mit Kontrollen verglichen. Zwei Wochen nach vier Fraktionen Bestrahlung bei 6,85 Gray nahm die Speichelfunktion signifikant ab.Sowohl die Gesamtspeichelsekretion als auch die auf das Drüsenfeuchtgewicht normalisierte Sekretion zeigten, dass die Funktionsfähigkeit des Speichels reduziert war, was die Sensitivität des Assays zeigt. Als nächstes wurden SMGs seziert. Sie konnten fixiert, geschnitten und gebeizt werden.Hämatoxylin- und Eosin-Färbung wurde verwendet, um die grobe Architektur mit oder ohne Pilocarpin-Stimulation zu vergleichen. Zusätzlich wurden die Gewebe gegen einen Membran-Natrium-Kaliumchlorid-Transporter, NKCC1, immungefärbt. In beiden Fällen zeigten die Gewebe eine ähnliche Zellmorphologie, unabhängig von der Pilocarpin-Stimulation.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Speichelfunktion von Mäusen durch Pilocarpin-Stimulation bewerten können. Einmal gemeistert, kann diese vollständige Technik in weniger als einer Stunde durchgeführt werden. Diese Methode ermöglicht es Speichelforschern, ganzen Speichel zu sammeln, um die Drüsenfunktion zu quantifizieren und die drei großen Speicheldrüsen sauber und reproduzierbar zu isolieren.Bei diesem Verfahren, insbesondere mit mehr als einer Maus, ist es wichtig, schnell zu handeln und die Speichelentnahme zum richtigen Zeitpunkt zu beenden. Nach diesem Verfahren können die Zusammensetzung und die Enzymaktivität aus dem ganzen Speichel bestimmt werden, während Drüsengewebe für die Histologie oder Immunfärbung aufbereitet werden kann.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Ein Protokoll für die Kanülierung der Maus Glandula Speicheldrüse über die Wharton-Gang beschrieben. Für dieses Experiment ist die Trypanblau-Lösung als Färber verwendet werden, um zu demonstrieren, wie diese Technik effektiv liefert Infusionen in die gezielte Drüse, und die Zuverlässigkeit dieses neuen Ansatzes als potenzielle klinische Arzneimittelentwicklung / Zelltherapie für die Regeneration der Speicheldrüsen vorschlagen.

Kanülierung der Maus Submandibular Speicheldrüsen über die Wharton-Gang

Die Funktion der Erwachsenen-geboren Säugetierneuronen bleibt ein aktives Forschungsgebiet. Ionisierende Strahlung hemmt die Entstehung neuer Nervenzellen. Mit Hilfe von Computer-Tomographie-geführte Brenn Bestrahlung (CFIR) können dreidimensionale anatomische Ausrichtung auf bestimmte neuronale Vorläuferpopulationen nun verwendet, um die funktionelle Rolle der adulten Neurogenese zu beurteilen.

Funktionelle Abfrage der Erotik Hypothalamus Neurogenese mit Brennradiologische Hemmung

Unterfunktion der Speicheldrüsen, eine schwerwiegende Nebenwirkung der Kopf- und Hals-Strahlentherapie, verringert die Lebensqualität eines Patienten. Der Nachweis der Wirksamkeit neuer Therapien im Tiermodell ist eine Voraussetzung für den klinischen Übergang. Dieses Protokoll beschreibt die retroduktale Verabreichung und lokale Bestrahlung der submandibulären Drüsen der Ratte.

Retroductal Submandibulardrüse Einträufeln und Lokalisierte fraktionierten Bestrahlung in einem Rattenmodell von Speichel- Unterfunktion

Wir beschreiben ein Verfahren gezielt periphere Bestrahlung mit ermüdungs ​​Verhalten bei Mäusen zu induzieren. Die gewählte nicht-tödliche Strahlungsdosis führt zu einer einwöchigen Reduzierung der freiwilligen Rad laufenden Tätigkeit.

Ein Maus-Modell der Fatigue, induziert durch Peripheral Bestrahlung

Speicheldrüse Unterfunktion ist eine häufige Folge von Autoimmun-Krankheit und Strahlentherapie. Reproduzierbare Beurteilung der Speicheldrüse Funktion in Mausmodellen dieser Krankheiten ist eine technische Herausforderung. Hier ist eine einfache Methode für die genaue und reproduzierbare Messung der Speichelproduktion bei Mäusen beschrieben.

Eine Methode zur Messung der Speicheldrüse Funktion bei Mäusen

Lokalen Drug-Delivery, die submandibulären Drüsen ist Interesse an Verständnis Speicheldrüse Biologie und für die Entwicklung neuer Therapeutika. Wir präsentieren Ihnen eine aktualisierte und detaillierte Retroductal Injektion Protokoll, entworfen, um Lieferung Genauigkeit und experimentelle Reproduzierbarkeit zu verbessern. Die enthaltenen Anwendung ist die Lieferung von Polymeren Nanopartikel.

Retroductal Nanopartikel Injektion an der murinen mandibulären Drüse

Durch die Verwendung dreidimensionaler organotypischer Kulturen zur Visualisierung der Morphologie und funktionellen Marker von Speicheldrüsen können neue Einblicke in die Mechanismen von Gewebeschäden nach Strahlung gegeben werden. Hier wird ein Protokoll zu den Abschnitten, Kultur, Bestrahlung, Fleck und Bild 50 – 90 μm dicken Speicheldrüsenabschnitten vor und nach der Exposition gegenüber ionisierender Strahlung beschrieben.

Strahlenbehandlung von organischen Kulturen aus Submandibulären und Parotid-Salivarienmodels Schlüssel in Vivo-Leiten

Die immunfluoreszierende Bildgebung ist durch die Fähigkeit eingeschränkt, komplexe, zeitabhängige biologische Prozesse in nur einer einzigen Momentaufnahme zu beobachten. Diese Studie skizziert einen Live-Imaging-Ansatz, der an präzisionsgeschnittenen Unterkieferdrüsenschnitten von Mäusen durchgeführt wird. Dieser Ansatz ermöglicht die Echtzeitbeobachtung von Zell-Zell-Interaktionen während der Homöostase und der Regenerations- und Reparaturprozesse.

Untersuchung von Zell-Zell-Interaktionen in der Speicheldrüse mittels ex vivo Lebendzell-Bildgebung

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Anwendung von Feuernadel unter Ultraschallanleitung auf die Drüsen- oder Muskelschichten zur Behandlung von Siaororhöe bei Patienten nach einem Tracheotom.

Ultraschallgeführte Feuernadelakupunktur zur Behandlung von Sialorrhoe bei tracheotomisierten Patienten

Ein Mausmodell einer neuromuskulären Elektrostimulation (NME) eine sichere und kostengünstige klinische Modalität, um den vorderen Abteil Muskeln beschrieben. Dieses Modell hat den Vorteil, Modifizieren eines leicht verfügbaren klinischen Einrichtung zum Zweck hervorzurufen gezielten und spezifischen Muskelkontraktionen in Mäusen.

Einem Mausmodell der Muscle Training durch neuromuskuläre Elektrostimulation

Lernen Sie die funktionelle Bewertung muriner Speicheldrüsen durch Pilocarpin-Stimulation. Diese Methode umfasst Tracheotomie, Speichelgewinnung und Drüsensektion zur Untersuchung von Mundtrockenheit und Speichelüberproduktion.

Murine Speichel funktionale Bewertung über Pilocarpin Stimulation folgenden fraktioniert Bestrahlung

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