Name: Intraportal Transplantation der Bauchspeicheldrüse Inselchen im Mausmodell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Lernen Sie die intraportalen Transplantation von Bauchspeicheldrüseninseln im Mausmodell zur Behandlung von Diabetes Typ 1. Diese Methode ermöglicht die Wiederherstellung der Normoglykämie und liefert wertvolle Erkenntnisse für die klinische Anwendung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wir würden gerne Gundula Hertl für ihre Unterstützung zu erkennen.

Alle Verfahren in diesem Protokoll wurden von deutschen Tierschutzgesetz und Richtlinien genehmigt. Verwenden Sie 10 bis 12 Wochen alten NMRI nackte Mäuse und C57Bl/6 Mäusen (Spender: alte weiblich; Empfänger: männliche) während der Experimente. Verwenden Sie nackt NMRI Mäuse für Insel isoliert. Halten Sie die Mäuse unter definierten Bedingungen gemäß den Vorschriften der örtlichen Tierhaus.
1. Induktion von Diabetes durch die Streptozocin
<ol><li>Am Tag-4 Messen Sie das Körpergewicht von 10 bis 12 Wochen alten NMRI nackten Mäusen und C57Bl/6 Mäusen mit einer Waage.</li>
	<li>Bereiten Sie nach dem die gemessenen Körpergewicht eine 180 mg/kg-Dosis von Streptozocin in 0,1 mL Kochsalzlösung per Mausklick. Hinweis: Streptozocin sollten werden frisch zubereitet vor Gebrauch und abgedeckt mit Alufolie, da sie lichtempfindlich ist.</li>
	<li>Phänomen und allogene Mäuse zu injizieren, jeweils mit einer einzigen Dosis von 0,1 mL Streptozocin (180 mg/kg) intraperitoneal mit einer 26-G-Nadel.</li>
	<li>Am Tag-3 sammeln-2 und-1 2-4 µL Blut durch Punktion die Rute Venen von Mäusen nicht gefastet.</li>
	<li>Verwenden Sie 2-4 µL Blutprobe pro Teststreifen, um den Blutzucker bei NMRI nackte Mäuse und C57Bl/6 Mäusen Messen Hinweis: An diesem Punkt, 80 % der Mäuse sollte werden Diabetiker (20 Mmol/L).<ol>
<li>Verwenden Sie Mäuse für inselversetzung, wenn ihre Blutzuckerwerte 20 Mmol/L erreichen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Isolierung des Pankreas Inselchen von Mäusen
<ol><li>Die Mäuse mit Ketamin (100 mg/kg Körpergewicht) und Xylazin (20 mg/kg Körpergewicht) durch intraperitoneale Injektion mit einer 26-G-Nadel zu betäuben. Hinweis: Die Mengen an Ketamin und Xylazin wurden entsprechend dem Körpergewicht der Tiere (0,10 mL/10 g) ermittelt.</li>
	<li>Halten Sie die Mäuse in Rückenlage und desinfizieren mit Povidon-Jod-Lösung. Bestätigen Sie richtige Euthanasie durch Überprüfung des Pedalen Reflexes. Hinweis: Bei C57Bl/6 rasieren der Bauchregion.</li>
	<li>Halten Sie die Haut mit feinen Zangen und machen Sie einen Mittellinie Schnitt mit der Schere, die Bauchhöhle verfügbar zu machen. Legen Sie den Darm Situs auf der linken Seite und außerhalb der Bauchhöhle auf eine sterile Gaze-Kompresse.</li>
	<li>Passen Sie den Magen in eine andere Richtung Auffinden der Bauchspeicheldrüse und anderen verbundenen Geweben.</li>
	<li>Erreichen Sie die Aorta zu und machen Sie einen kleinen Schnitt das Blut abfließen. Verwenden Sie sterilen Gaze für Blut-Absorption.</li>
	<li>Entfernen Sie vorsichtig den Darm. Trennen Sie die Bauchspeicheldrüse aus dem Magen und Milz.</li>
	<li>Verbrauchsteuern Sie die Bauchspeicheldrüse und legen Sie sie in eine frische Petrischale. Entfernen Sie die unerwünschten Materialien, wie Fett, mit Pinzette.</li>
	<li>Füllen Sie eine 5 mL Spritze mit 4 mL der Kollagenbildung und injizieren in die Bauchspeicheldrüse mit einer 26-G-Nadel (Lösung auf Lager: 30 mg Kollagenase in 12 mL Hank Lösung).</li>
	<li>Blatt vor den Mund die Bauchspeicheldrüse mit einer Schere, die Fläche für eine verbesserte Verdauung und Übertragung auf eine rote Kappe Tube 12 mL erhöhen. Hinweis: Hank es ausgewogen Salzlösung: HBSS 10 x (100 mL), Penicillin-Streptomycin (10 mL), Gentamycin (1 mL), Ciprofloxacin (10 mL), HEPES (35 mL), destilliert H2O (900 mL)</li>
	<li>Führen Sie eine Verdauung für 10 min bei 37 ° C im Wasserbad schütteln. Wirbel der Probe dreimal in regelmäßigen Abständen für 15 s.</li>
	<li>Mischen Sie die verdaute Bauchspeicheldrüse kräftig von Hand für 3 min und legen Sie es auf dem Eis für 10 s.</li>
	<li>Fügen Sie 6 mL kalte Hank-Lösung, die Verdauung Reaktion und Zentrifuge bei 560 X g für 3 min bei Raumtemperatur zu stoppen.</li>
	<li>Den überstand zu entfernen und das Pellet in 10 mL Parker/fetale Kalb Serum (P/FCS) Medium bei Raumtemperatur auflösen. Hinweis: P/FCS-Medium: TCM-199 10 x (100 mL), FCS (50 mL), Penicillin-Streptomycin (10 mL), HEPES (20 mL), destilliert H2O (900 mL)</li>
	<li>Identifizieren Sie die Inseln anhand ihrer Morphologie (Sphäroid, goldbraune Farbe) unter einem Lichtmikroskop. Vermeiden Sie Inselchen mit dunklen Zentren. Prüfung auf Reinheit und Lebensfähigkeit durch Ausführen Dithizone Färbung unter einem Lichtmikroskop. Hinweis: Dithizone bindet an Zink-Ionen und Rote Fleck zu den kleinen Inseln bietet.</li>
	<li>Verwenden Sie eine 1-mL-Pipette zu zählen und Inseln unter einem Lichtmikroskop aussuchen und dazu eine frische Petrischale (60 mm x 15 mm) mit 4 mL P/FCS-Medium zu übertragen. Hinweis: Die Lautstärke des P /FCS-Medium in der Petrischale sollte nicht mehr als 4 mL um sauerstoffverfügbarkeit zu gewährleisten.</li>
	<li>Halten Sie die isolierte Inseln in 4 mL P/FCS-Medium über Nacht bei 37 ° C im Brutschrank.</li>
</ol>3. Vorbereitung der Tiere auf Inselversetzung
<ol><li>Entfernen der isolierten Inseln aus dem Inkubator 37 ° C und unter der Sitzbank an einem Fluss. Zentrieren Sie die Inseln mit einer schwingenden Kreisbewegung der Petrischale.</li>
	<li>Füllen Sie eine 1-mL-Spritze (blaue 23-G-Nadel) mit 0,1 mL P/FCS-Medium. Fügen Sie 350 Inseln in 0,3 mL Hank es Lösung. Halten Sie die Spritze in eine vertikale Position erlauben die Inselchen zu begleichen.</li>
	<li>Verringern Sie die Lautstärke bis 0,05 mL und ersetzen Sie die blauen 23-G-Nadel mit einer braunen 26 G-Nadel. Die gleiche Spritze fügen Sie 0,15 mL Ficoll (Dichte Gradienten Medium hinzu) an die Spitze zu einem Endvolumen von 0,2 mL in der Spritze zu erreichen. Vermeiden Sie Luftblasen.</li>
	<li>Halten Sie die Spritze in einer vertikalen Position und drehen Sie ihn leicht, um zu vermeiden, die Verklumpung von Inselchen. Die kleinen Inseln werden auf der Konus der Spritze innerhalb von 2 – 3 min. zu begleichen.</li>
	<li>Messen Sie den Körper Gewicht und Blut Blutzuckerspiegel der Empfänger Mäuse; der Blutzuckerspiegel sollte rund 20 Mmol/L.</li>
	<li>Die Mäuse mit Ketamin (100 mg/kg Körpergewicht) und Xylazin (20 mg/kg Körpergewicht) durch intraperitoneale Injektion mit 26 G-Nadel zu betäuben.</li>
	<li>Legen Sie die Mäuse in Rückenlage auf eine warme Thermoplatte (37 ° C). Prüfen Sie die Tiefe der Narkose durch Kneifen der Zehs.</li>
	<li>Reinigen Sie die Bauchregion mit Povidon-Jod-Lösung (Haut-Desinfektionsmittel). Um die Augen vor dem Austrocknen zu verhindern, halten sie feucht mit Augensalbe. Hinweis: Bei C57Bl/6 rasieren der Bauchregion.</li>
</ol>4. Inselversetzung über die Intraportal Route
<ol><li>Am Tag 0, beginnen Sie mit einer Laparotomie hält die Haut mit einer Pinzette und eine 2-3 cm-langen Mittellinie Schnitt mit einer Schere. Statt ein steriler feuchter Gaze zu komprimieren, um die Wundränder um es feucht zu halten.</li>
	<li>Legen Sie den Darm Situs auf der linken Seite und außerhalb der Bauchhöhle auf die sterile Gaze-Kompresse. Hinweis: Halten Sie den Darm feucht während des Verfahrens mit vorgewärmten 0,9 % NaCl-Lösung oder steriler Gaze in normalen Kochsalzlösung getaucht.</li>
	<li>Bewegen Sie den Zwölffingerdarm und lokalisieren der Bauchspeicheldrüsenkrebs. Suchen Sie die Pfortader befindet sich auf der ventralen Seite Empordringen der Bauchspeicheldrüsenkrebs. Verwenden Sie einen Finger und Daumen, um die Pfortader verfügbar zu machen und einmal ausgesetzt, Punktion es in der Nähe der Leber.</li>
	<li>Innerhalb von 1 min injizieren Sie langsam und stetig die Inselchen (0,2 mL ab Schritt 3.4) in die Pfortader unter die Kontrolle der Lupe, um Undichtigkeiten Inselchen zu vermeiden. Hinweis: Nach der Injektion, überprüfen Sie immer für die restlichen Inseln in der Spritze. Nehmen Sie 1 mL P/FCS-Medien in einer Spritze, bündig in eine frische Petrischale und Graf unter dem Mikroskop.</li>
	<li>Legen Sie eine sterile Manometer an der Einstichstelle und Druck mit dem Zeigefinger (Eindringtiefe: 0,5-1 cm) für 6 min um die Blutung zu stoppen. Hinweis: Das Volumen injiziert sollte 0,2 mL nicht überschreiten. Übermäßiger Lautstärke und Druck können die Inseln durch Scherbeanspruchung beschädigen.</li>
	<li>Legen Sie vorsichtig den Darm Situs, Peritoneum, Abdominal-Muskelschicht und Faszien wieder in Position.</li>
	<li>Mit Pinzette, heben Sie die Haut, in der Nähe der Muskel-Schnitt mit resorbierbarem Nahtmaterial Seide und obere Hautschicht mit 2-3 Clips.</li>
	<li>Reinigen Sie die Oberfläche mit einem Haut-Desinfektionsmittel, wenden Sie einen Wunde Heiler an und platzieren Sie die Mäuse in einzelnen Käfigen zu. Wunde Heiler bietet eine wasserabweisende Acrylat-Schicht und schützen vor Mazeration und Sekundärinfektion. Hinweis: Beobachten Sie die Mäuse zu, bis sie ausreichend Bewusstsein wiedererlangt haben, bieten Sie Tramadol (0,2 mg / Maus) zusammen mit Flüssigkeiten. In diesem Protokoll Mäuse erholten sich schnell von Anästhesie und Tramadol Verwaltung reduziert den Schmerz. Nach 7 Tagen sollte die Wunde heilen.</li>
	<li>Die Mäuse mit regelmäßigen Nahrung und Wasser zu ernähren. Nahrung und Wasser Verbrauch und Urin-Ausscheidung erhöht sich nach der Streptozotocin-Injektion.</li>
	<li>Messung der Blutzuckerwerte jeden Tag für die erste Woche und dann einmal pro Woche in Phänomen Mäuse. Bei allogenen Mäusen Messen des Blutzuckerspiegels dreimal pro Woche für bis zu 15 Tage.</li>
</ol>

<ol><li>McCall, M., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22762022">Update on islet transplantation.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), a007823(2012).</li>
<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li>
<li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+as+an+alternative+site+for+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Bone marrow as an alternative site for islet transplantation.</a> Blood. 114 (20), 4566-4574 (2009).</li>
<li>Echeverri, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+gastric+submucosal+transplantation+of+islets+%28ENDO-STI%29%3A+technique+and+initial+results+in+diabetic+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Endoscopic gastric submucosal transplantation of islets (ENDO-STI): technique and initial results in diabetic pigs.</a> American Journal of Transplantation. 9 (11), 2485-2496 (2009).</li>
<li>Korsgren, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+islet+engraftment+is+critical+for+successful+clinical+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Optimising islet engraftment is critical for successful clinical islet transplantation.</a> Diabetologia. 51 (2), 227-232 (2008).</li>
<li>Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+implantation+site+for+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation.</a> British Journal of Surgery. 95 (12), 1449-1461 (2008).</li>
<li>Lingwal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+gelatinase+B+%28matrix+metalloprotease-9%29+activity+reduces+cellular+inflammation+and+restores+function+of+transplanted+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Inhibition of gelatinase B (matrix metalloprotease-9) activity reduces cellular inflammation and restores function of transplanted pancreatic islets.</a> Diabetes. 61 (8), 2045-2053 (2012).</li>
<li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+intraportal+islet+transplantation+outcome+by+systemic+IKK-beta+inhibition%3A+NF-kappaB+activity+in+pancreatic+islets+depends+on+oxygen+availability%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Improved intraportal islet transplantation outcome by systemic IKK-beta inhibition: NF-kappaB activity in pancreatic islets depends on oxygen availability.</a> American Journal of Transplantation. 11 (2), 215-224 (2011).</li>
<li>Wang, Y., Wang, T., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+aspects+are+critical+for+carrying+out+intraportal+islet+transplants+successfully+in+a+diabetes+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Three aspects are critical for carrying out intraportal islet transplants successfully in a diabetes mouse model.</a> Experimental and Clinical Transplantation. 10 (3), 302-304 (2012).</li>
<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e50374(2014).</li>
<li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).</li>
<li>Rother, K. I., Harlan, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+facing+islet+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Challenges facing islet transplantation for the treatment of type 1 diabetes mellitus.</a> Journal of Clinical Investigation. 114 (7), 877-883 (2004).</li>
<li>Su, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+islets+are+essential+for+successful+intraportal+transplantation+in+a+diabetes+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Small islets are essential for successful intraportal transplantation in a diabetes mouse model.</a> Scandinavian Journal of Immunology. 72 (6), 504-510 (2010).</li>
<li>Rekittke, N. E., Ang, M., Rawat, D., Khatri, R., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+Therapy+of+Type+1+Diabetes+Mellitus%3A+From+Pancreatic+Islet+Transplantation+to+Mesenchymal+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Regenerative Therapy of Type 1 Diabetes Mellitus: From Pancreatic Islet Transplantation to Mesenchymal Stem Cells.</a> Stem Cells International. 2016, 22(2016).</li>
</ol>

Alle Autoren erklären, dass sie keinen Interessenskonflikt.

In dieser Studie wird die intraportal Route der inselversetzung untersucht. Dieses Protokoll ist hocheffizient in diabetischen Stress abbauen und bietet eine ausführliche Gelegenheit Islet Transplantation Studien zu erkunden. Dieses Protokoll bestätigt, dass ca. 350 murine Inselchen hyperglykämischen Zustand umkehren können. Darüber hinaus keine der Mäuse starben während des Verfahrens und glykämische Kontrolle wurde in alle Empfänger erreicht. Körper-Gewicht und Blut-Glukosespiegel verzeichneten regelmäßig um die Kompet...

Inselversetzung ist ein vielversprechender Ansatz zur Behandlung von Typ 1 Diabetes Mellitus1. Der erste Versuch, ein Schaf Pankreas Fragment eines Diabetikers überweisen wurde 1893 von Watson Williams durchgeführt. Jedoch ein wichtiger Durchbruch in klinischen inselversetzung gelang mit dem Edmonton-Protokoll, und danach, waren eine Reihe von nationalen Programmen entwickelt2. In der Vergangenheit mehrere Standorte, wie Knochenmark, omentalis Beutel, intramuskuläre Region, Magen-Schleimhautoberfläche, Milz und Niere Kapsel wurden in präklinischen Modellen erforscht, aber das Portal Venensystem gilt als eines der angemessenen und wirksamen Website für klinische Programme3,4,5,6.
Exogene Verabreichung von Insulin kann durch kleine Insel Infusion in die Pfortader ersetzt werden. Dies gilt eine bevorzugte Seite, weil die Sauerstoffversorgung vergleichbar mit dem in der nativen Bauchspeicheldrüse aufgrund der Lage unterhalb des Zusammenflusses der Portal Arterie und Vene ist. Darüber hinaus könnte gibt es eine große Fläche, so dass die dreidimensionale Struktur der Inseln erhalten werden kann, und Vaskularisierung erleichterten5. In einer Empfänger Diabetische Maus, 2.000 Menschen oder Schweinen Inselchen Äquivalente oder 350 Maus genügen Inselchen hyperglykämischen Zustand7,8rückgängig zu machen. Euglycemic Ebenen wurden für 15 Tage in dem Empfänger Mausmodell xenogene Inseln und in der allogenen Maus-Maus-Modell und für mehr als 120 Tage in das Phänomen Maus-Maus-Transplantation gemeldet.
Für die Wirksamkeit der inselversetzung über Pfortader relevanten Faktoren sind geeignete Anästhesie, Methode der Punktion und Blutstillung9. Betäubung durch Inhalation (5 % Isofluran) oder Injektion (Ketamin, Xylazin oder Pentobarbital) induziert werden kann, und die Stoffe werden häufig kombiniert. Zur Steuerung der Tiefe und Zeit der Narkose sollte den Zustand der Maus, wie die Farbe der Schleimhaut, Auge Deckel, Hornhaut Reflex, Atemfrequenz und Temperatur des Körpers geachtet. Es ist darauf zu achten, dass das Tier nicht zu kämpfen hat und dass er die Operation überlebt. Die Temperatur kann durch verschiedene Heizgeräte wie Heizkissen, Rotlicht-Lampen erhalten, etc. A warm Thermoplatte verwendet wurde, um eine Temperatur von 25-30 ° C zwischen der Maus und dem OP-Tisch, der verhindert das Auftreten von Hypothermie. Die Dosierungen der Anästhetika sind wichtig, da alle von ihnen von der Leber metabolisiert werden und Leberfunktion vorübergehend werden, durch die Infusion der Insel Suspension. gestört kann Die ideale Einstichstelle für die Pfortader ist die Position zwischen der ersten und zweiten Nebenfluss Ader.
Die Anzahl der Inseln und der beabsichtigten Injektionsvolumen auch Einfluss auf den Ausgang des Transplantats, da übermäßiger Lautstärke die Scherspannung verstärken kann. 0,2 mL Volumen gilt für inselversetzung in die Pfortader geeignet. Die Punktion Wunde (26-Gauge-Nadel) induziert, Blutungen aus der Pfortader, die zeitnah und effektiv gestoppt werden muss. Steriler Gaze oder einem Finger einsetzbar mit minimalem Druck auf dem Gelände der Punktion für ca. 6 min., die Blutung zu stoppen. Genommen zusammen, Portal Inselchen Injektion ist effektiv und bietet Verordnung über den Blutzuckerspiegel bei chemisch induzierten Diabetische Mausmodellen.

<table><tbody><tr><td>C57Bl/6 Mäuse&nbsp;</td><td>Charles River (Sulzfeld, Deutschland)</td><td></td><td>(10-12 Wochen)</td></tr><tr><td>BALB/c Mäuse</td><td>Charles River (Sulzfeld, Deutschland)</td><td></td><td>(10-12 Wochen)</td></tr><tr><td>NMRI Nacktmäuse</td><td>Charles River (Sulzfeld, Deutschland)</td><td></td><td>(10-12 Wochen)</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Bela-pharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spritze, 23G und 26G Nadel</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>Falke</td><td>303800</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Carl Roth</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>sterile Gaze</td><td>Fuhrmann</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Schüttelwasserbad</td><td>Kotterman</td><td>1501</td><td></td></tr><tr><td>Schere</td><td>Braun</td><td>1501</td><td></td></tr><tr><td>Glukosemessgerät&nbsp;</td><td>One Touch</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warm Thermal Plate</td><td>Thermo Fisher Braunol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>(Povidon-Iodid-Lösung)</td><td>B.Braun Melsungen AG</td><td>3864154</td><td></td></tr><tr><td>Liposic Edo - Sprinkled Salbe (Augensalbe)</td><td>Dr. G Mann Chem.-Pharm.&nbsp; GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Fa. Roth</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flow Bank</td><td>Herdus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10771</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Silk Fature Vicryl</td><td>Braun</td><td></td><td>(7.5 *1.75mm)</td></tr><tr><td>Michel Klemmen (Clips)</td><td>Aesculap&nbsp;</td><td>BN507R</td><td></td></tr><tr><td>P/FCS Lösung</td><td>Gibco</td><td>21180-021</td><td></td></tr><tr><td>TCM-199 (10x)</td><td>Gibco</td><td>21180-021</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Biowest</td><td>S1810-500</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Biochrom</td><td>L 1613</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycin</td><td>Ratiopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ciprofloxacin</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hank's Solution</td><td>Gibco</td><td>14060-040</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase</td><td>Roche</td><td>11213865001</td><td></td></tr><tr><td>Streptozotocin</td><td>Calbiochem</td><td>572204</td><td></td></tr><tr><td>OPSITE-Spray (Wundheiler)</td><td>Smith und Neffe</td><td>66004978</td><td></td></tr><tr><td>Reugular food</td><td>Altromin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scheinwerfer LED 16042 (Lupe)</td><td>Eschenbach</td><td>16042</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Anti-Maus PECAM-1(CD31) monoklonaler Primärantikörper</td><td>Millipore, Chemicon</td><td>CBL1337</td><td>Verdünnung (1:100)</td></tr><tr><td>Esel Anti-Ratte Sekundärantikörper</td><td>Dianova</td><td>712095153</td><td>Verdünnung (1:400)</td></tr><tr><td>Polyklonaler Meerschweinchen-Anti-Insulin-Antikörper</td><td>Dako</td><td>A0564</td><td>Verdünnung (1:500)</td></tr><tr><td>Esel Anti-Meerschweinchen Sekundärantikörper</td><td>Dianova</td><td>706-259-148</td><td>Verdünnung (1:400)</td></tr></tbody></table>

intraportal transplantation der bauchspeicheldrüse inselchen im mausmodell

Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model

Pankreatischen inselversetzung Hyperglykämie zu reduzieren ist sehr erfolgreich bei Nagetieren mit chemisch induzierte Diabetes. Die häufigste Lokalisation der Transplantation in experimentellen inselversetzung ist die Niere-Kapsel. Jedoch da weniger über das Zusammenspiel von pankreatischen kleinen Inseln mit Blut Bestandteile bekannt ist, ist es auch sinnvoll, die Pfortader Ansatz in experimentellen inselversetzung nutzen.
Dieses Protokoll zeigt eine intraportal Islet Transplantation Technik in NMRI nackte Mäuse. Streptozocin (180 mg/kg) ist intraperitoneal injiziert, um Hyperglykämie bei Empfänger Mäusen zu induzieren. Sie als Diabetiker auf ein nicht-Fasten Blutzuckerspiegel größer als 20 Mmol/l gelten als Einen Tag vor der Transplantation, sind Maus pankreatischen kleinen Inseln isoliert aus der Bauchspeicheldrüse Spender von Kollagenase Verdauung; mindestens 350 Inseln werden pro Diabetiker Empfänger eingesetzt. Abhängig von der kleinen Insel isoliert Ertrag, sind zwei oder mehrere Spender Mäuse pro Empfänger genutzt. Nach Übernachtung Kultur bei 37 ° C sind Inseln in den Empfänger Leber über die Pfortader verabreicht. Nach der Operation, die Mäuse in roter Makrolon Häuser geschützt und bis sind wach. Dieses Protokoll unterhält glykämische Kontrolle für 120 Tage in Phänomen Mäuse und 15 Tage bei allogenen Mäusen.

Die Kompetenz der verpflanzten kleinen Inseln wurde in chemisch induzierten diabetischen Mäusen untersucht. Die Inseln wurden über das Portal Venensystem in diabetischen Mäusen Modell transplantiert. Der Geber-nehmer-Anteil betrug 2:1. In dem Phänomen Mausmodell wurden zwei Spender Mäuse eingesetzt, um 350 Inseln zu erhalten. Die Inseln wurden dann in diabetischen Mäusen verpflanzt. Ein Rückgang der Blutzuckerspiegel war am 1. Tag nach der Transplantation, was eine Rolle des transplantier...

Pankreatischen inselversetzung ist eine Möglichkeit, Normoglycemia bei Diabetes Typ 1 zu erreichen. Dieser Artikel konzentriert sich auf die Transplantation-Technik durch die intraportal Route weiterhin normale Blutzuckerwerte bei diabetischen Mäusen.

Intraportal Transplantation der Bauchspeicheldrüse Inselchen im Mausmodell

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation ...

Ich bin Thomas Linn, Leiter der Forschungsgruppe Diabetes an der Justus-Liebig-Universität Gießen. Die Inseltransplantation der Bauchspeicheldrüse ist eine Behandlung von Typ-1-Diabetes mellitus. Die experimentelle Inseltransplantation wird in die Nierenkapsel durchgeführt, während klinische Programme den intraportalen Weg bevorzugen.Daher glauben wir, dass mehr Forschung zur intraportalen Inseltransplantation in präklinischen Modellen erforderlich ist. Zum Beispiel Inselzellen, die Blut ausgesetzt sind, da die Transplantationsstelle intravaskulär ist. Darüber hinaus erfordert die mikrochirurgische Technik etwas Erfahrung.Zum Beispiel kann es nach der Injektion der Pfortader zu Blutungen kommen, oder es kann Probleme mit der Anästhesie oder mit der Aufrechterhaltung des Körpergewichts der Empfängermaus geben. Daher sind wir der Meinung, dass eine visuelle Erklärung des Verfahrens von entscheidender Bedeutung ist. Dieses Video konzentriert sich auf den intraportalen Weg der Inseltransplantation.Um eine normale Glykämie bei diabetischen Mäusen zu erreichen, kann es für die syngene und allogene Transplantation bei schwarzen Mäusen, aber auch in syngenen Modellen bei Nacktmäusempfänger

intraportal-transplantation-of-pancreatic-islets-in-mouse-model

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Unser Protokoll wurde entwickelt, um sauber und einfach liefern Inseln oder Zellen unter die Nierenkapsel von Mäusen. Die Zellen werden zu Pellets in den letzten Schlauch für die Transplantation der Zellen unter die Nierenkapsel verwendet konzentriert. Die Leichtigkeit dieser Technik reduziert den Stress auf die Zellen und der Maus.

Transplantation von Pankreas-Inseln in die Niere Capsule von diabetischen Mäusen

Die Transplantation von isolierten Inseln wurde vorgeschlagen, eine potenzielle Behandlungsoption für Typ-1-Diabetes sein. Hier beschreiben wir eine Methode, um kleine Inseln aus Maus Bauchspeicheldrüsen zu isolieren und verpflanzen sie in die subkapsulären Raum der Niere.

Eine Methode zur Murine Islet Isolation und subkapsulären Nierentransplantation

Dieses Video beschreibt das Protokoll für die Transplantation menschlicher Pankreasinseln in die vordere Kammer des Mausauges, um die Revaskularisation von menschlichen Inseltransplantaten in vivo zu überwachen. Es hilft auch, den Beitrag von Empfänger- und Spenderzellen zur Förderung der Verkapselung und Vaskularisierung des Transplantats zu verstehen.

Transplantation von Pankreasinseln: Eine Methode zur Implantation von Pankreasinseln in die vordere Kammer des Mausauges für die In-vivo-Bildgebung

Dieses Protokoll zeigt die Mäuseinselisolation und die Aussaat auf ein dezelluläres Gerüst. Gerüstunterstützte Inselchen wurden in das epididymale Fettpolster von Streptozotocin (STZ) -induzierten diabetischen Mäusen transplantiert. Islets überlebten an der Transplantationsstelle und umkehrten den hyperglykämischen Zustand.

Gerüstgestützte Transplantation von Inseln in der epididymalen Fettauflage von diabetischen Mäusen

Abdominal-solide Organtransplantationen gehören Pankreas-Transplantationen anfällig für schwere Ischämie Reperfusion Verletzungen-assoziierten Transplantat Schaden, führt schließlich zum frühen Transplantat Verlust zu entwickeln. Dieses Protokoll beschreibt ein Modell der murinen Pankreas-Transplantation mit einer Manschette-Naht-Technik, ideal geeignet für die Analyse dieser frühen, schädlichen Schäden.

Maus-Modell für die Bauchspeicheldrüse Transplantation mit einer modifizierten Manschette-Technik

Dieses Inselisolierungsprotokoll beschrieb einen neuartigen Weg der Kollagenase-Injektion zur Verdauung des Exokringewebes und ein vereinfachtes Gradientenverfahren, um die Inseln von Mäusen zu reinigen. Es beinhaltet enzymatische Verdauung, Gradiententrennung/Reinigung und Islet-Handpicking. Eine erfolgreiche Isolierung kann 250–350 hochwertige und voll funktionsfähige Inselchen pro Maus ergeben.

Ein einfaches Hocheffizienzprotokoll für die Isolierung von Pankreas-Isleten von Mäusen

Eine Methode für die omentalis Transplantation von Inseln in einer Maus wird eingeführt. Isolierte Inseln sind mit Hydrogel vermischt und das Gemisch wird in den omentalis Beutel einer diabetischen Maus gebracht. Dann, der Blutzucker wird überwacht, und Immuno-histochemische Analyse erfolgt.

Eine Methode zur Inselversetzung, Omentum in Maus

In diesem Protokoll wird eine Methode der murinen Islet-Isolierung und Transplantation in das inguinale subkutane weiße Fettgewebe beschrieben. Isolierte syngene murinische Inselchen werden mit einem Kellermembranhydrogel in einen murinen Empfänger transplantiert. Der Blutzuckerspiegel der Empfänger wird überwacht und die Histologieanalyse der Islettransplantate durchgeführt.

Leisten-Subkutanes weißes Adiposeengewebe (ISWAT) Transplantationsmodell von Murine-Inseln

Hier stellen wir verfeinerte chirurgische Verfahren zur erfolgreichen Durchführung der intraportalen Inseltransplantation, einem klinisch relevanten, aber technisch anspruchsvollen chirurgischen Eingriff, bei Mäusen vor.

Minimierung der Venenblutung nach der Infusion während der intrahepatischen Inseltransplantation bei Mäusen

In vivo wurde die hochauflösende Bildgebung der Bauchspeicheldrüse mit dem pankreasinen intravitalen Bildgebungsfenster erleichtert.

Stabilisierte longitudinale In Vivo Visualisierung der Bauchspeicheldrüse auf zellulärer Ebene in einem Murinenmodell mit einem Pankreas-Intravital-Bildgebungsfenster

Wir bieten ein minimalinvasives Protokoll für die intramuskuläre Transplantation von von humanen Stammzellen abgeleiteten Pankreas-Stammzellinseln in immundefiziente Mäuse für die In-vivo-Implantation und nachgelagerte Analyse.

Intramuskuläre Transplantation von humanen pluripotenten Stammzellen-abgeleiteten endokrinen Zellen der Pankreasbildung bei Mäusen

Lernen Sie die intraportalen Transplantation von Bauchspeicheldrüseninseln im Mausmodell zur Behandlung von Diabetes Typ 1. Diese Methode ermöglicht die Wiederherstellung der Normoglykämie und liefert wertvolle Erkenntnisse für die klinische Anwendung.

Intraportal Transplantation der Bauchspeicheldrüse Inselchen im Mausmodell

Weitere Videos entdecken