Name: Kandidaten-Gen Tests in klinischen Kohortenstudien mit gemultiplexten Genotypisierung und Massenspektrometrie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-21T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 53 s
Description: Lernen Sie eine kostengünstige Multiplex-Genotypisierungsmethode für Kandidatengene in klinischen Kohortenstudien. Diese Technik ermöglicht die effiziente Detektion genetischer Marker bei komplexen Erkrankungen.

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Die Autoren haben keine Bestätigungen.

<ol><li>Aronson, S. J., Rehm, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+the+foundation+for+genomics+in+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Building the foundation for genomics in precision medicine.</a> Nature. 526 (7573), 336-342 (2015).</li>
<li>Ball, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+a+GWAS%3A+power%2C+sample+size%2C+and+data+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Genome-Wide+Association+Studies+and+Genomic+Prediction%22%5BJournal%5D)">Designing a GWAS: power, sample size, and data structure.</a> Genome-Wide Association Studies and Genomic Prediction. , 37-98 (2013).</li>
<li>Kwon, J. M., Goate, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+candidate+gene+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+research+and+health%22%5BJournal%5D)">The candidate gene approach.</a> Alcohol research and health. 24 (3), 164-168 (2000).</li>
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<li>Pusch, W., Kostrzewa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+MALDI-TOF+mass+spectrometry+in+screening+and+diagnostic+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+pharmaceutical+design%22%5BJournal%5D)">Application of MALDI-TOF mass spectrometry in screening and diagnostic research.</a> Current pharmaceutical design. 11 (20), 2577-2591 (2005).</li>
<li>Su, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+epidermal+growth+factor+receptor+%28EGFR%29+T790M+mutation+predicts+shorter+EGFR+tyrosine+kinase+inhibitor+response+duration+in+patients+with+non-small-cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+oncology%22%5BJournal%5D)">Pretreatment epidermal growth factor receptor (EGFR) T790M mutation predicts shorter EGFR tyrosine kinase inhibitor response duration in patients with non-small-cell lung cancer.</a> Journal of clinical oncology. 30 (4), 433-440 (2012).</li>
<li>Singhal, N., Kumar, M., Kanaujia, P. K., Virdi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-TOF+mass+spectrometry%3A+an+emerging+technology+for+microbial+identification+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+microbiology%22%5BJournal%5D)">MALDI-TOF mass spectrometry: an emerging technology for microbial identification and diagnosis.</a> Frontiers in microbiology. 6, 791(2015).</li>
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<li>Ashley, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Variation+at+the+Th2+Immune+Gene+IL13+is+Associated+with+IgE-mediated+Paediatric+Food+Allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">Genetic Variation at the Th2 Immune Gene IL13 is Associated with IgE-mediated Paediatric Food Allergy.</a> Clinical & Experimental Allergy. 47 (8), 1032-1037 (2017).</li>
<li>Bousman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+NRG1+and+DAOA+genetic+variation+on+transition+to+psychosis+in+individuals+at+ultra-high+risk+for+psychosis%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+psychiatry%22%5BJournal%5D)">Effects of NRG1 and DAOA genetic variation on transition to psychosis in individuals at ultra-high risk for psychosis.</a> Translational psychiatry. 3 (4), e251(2013).</li>
<li>Moffatt, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large-scale%2C+consortium-based+genomewide+association+study+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">A large-scale, consortium-based genomewide association study of asthma.</a> New England Journal of Medicine. 363 (13), 1211-1221 (2010).</li>
<li>Granada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+association+study+of+plasma+total+IgE+concentrations+in+the+Framingham+Heart+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">A genome-wide association study of plasma total IgE concentrations in the Framingham Heart Study.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 129 (3), 840-845 (2012).</li>
<li>Oeth, P., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/290120569_iPLEX_Assay_Increased_Plexing_Efficiency_and_Flexibility_for_MassARRAY_System_Through_Single_Base_Primer_Extension_with_Mass-Modified_Terminators">iPLEX assay: Increased plexing efficiency and flexibility for MassARRAY system through single base primer extension with mass-modified terminators.</a> Sequenom application note. 27, (2005).</li>
<li>Ellis, J. A., Ong, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+MassARRAY+System+for+Targeted+SNP+Genotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Genotyping%3A+Methods+and+Protocols%22%5BJournal%5D)">The MassARRAY System for Targeted SNP Genotyping.</a> Genotyping: Methods and Protocols. , 77-94 (2017).</li>
<li>Johnson, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNAP%3A+A+web-based+tool+for+identification+and+annotation+of+proxy+SNPs+using+HapMap%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">SNAP: A web-based tool for identification and annotation of proxy SNPs using HapMap.</a> Bioinformatics. 24 (24), 2938-2939 (2008).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Hier zeigen wir die Methode der gemultiplexten Genotypisierung mittels Massenspektrometrie. Die repräsentativen Ergebnisse wurden mittels PCR gepaart mit MALDI-TOF-Massenspektrometrie4 mit Assay Chemie entnehmen Sie bitte der Tabelle der Materialien13generiert. Mit dieser Plattform haben wir insgesamt 11.295 Genotypen auf 1.255 Einzelpersonen für 9 SNPs innerhalb von 40 Stunden im Labor erzeugt.
Wir verdeutlichen den Nutzen der T...

In komplexen Krankheiten genetische Varianten tragen zur Krankheitsanfälligkeit und Quantifizierung dieser Varianten kann nützlich sein für Verständnis Pathogenese, hohes Risiko Patientengruppen und Behandlung Responder zu identifizieren. In der Tat ist das Versprechen der präzisionsmedizin Nutzung genomischer Informationen zur Identifizierung von Patientengruppen1abhängig. Leider innerhalb der komplexen Krankheit Biologie Raum, wo Krankheit Phänotypen durch erhebliche genetische Heterogenität, geringe Penetranz und variabler Expressivität untermauert werden, Kohorte Größe Anforderungen für genomweite Ansätze zu identifizieren, Roman Kandidaten sind oft übermäßig groß2. Alternativ beginnt ein gezielte Kandidat gen Ansatz mit einer a priori Hypothese über bestimmte Gene/Wege in Krankheit Ätiologie3. Pfad-Analyse-Tools werden häufig verwendet, um die Pathophysiologie der eine identifizierte Ziel Loci, erzeugen zahlreiche Kandidaten Wege erforscht werden zu untersuchen. Wir zeigen hier einen gemultiplexten Genotypisierung Ansatz ermöglicht die Untersuchung von Dutzende bis Hunderte von SNPs mit einem Assay, geeignet für menschlichen Kohorten Studien4. Dieser Ansatz ist relativ hohen Durchsatz, Hunderte bis Tausende von DNA-Proben für neuartige Entdeckung Studien genotypisiert sein und Untersuchung der spezifischen Bahnen erlaubt. Die hier beschriebenen Methoden eignen sich für identifizierende Risiko-Allele und ihre Verbände mit klinischen Merkmale auf eine relativ schnelle und kostengünstige Weise. Diese Plattform ist sehr vorteilhaft für Screening und diagnostische Zwecke5,6, und seit kurzem auch für mikrobielle Infektion7 und humanes Papillomavirus8gewesen.
Dieses Protokoll beginnt mit der Auswahl aus einer Reihe von Genen für Untersuchung, d. h.., den Zielregionen, in der Regel bestimmt durch Literatur suchen oder a priori Hypothesen für die Beteiligung an den Krankheitsprozess; oder vielleicht für die Replikation als den führenden Vereinigungen einer Entdeckung genomweite (GWA) Studie ausgewählt. Aus dem Gen-Set wird der Forscher des Tags SNPs einen raffinierten auswählen. Das heißt, ist die Verknüpfung Ungleichgewicht (LD) oder die Korrelation unter den Varianten in der Region zum Vertreter 'Tag SNP' für eine Gruppe von SNPs in hohen LD, bekannt als ein Haplotyp identifizieren. Die hohen LD der Region bedeutet, dass die SNPs oft zusammen vererbt werden, so dass Genotypisierung ein SNP ausreichen, um die Variation an allen SNPs in den Haplotyp vertreten ist. Alternativ, wenn auf eine endgültige Liste der SNPs aus vielen Regionen, z.B.Follow-up., Replikation für eine GWA-Studie, dieser Prozess möglicherweise unnötig. Für Multiplex Genotypisierung ist ein Test dann um diese Ziele auszulegen, so, dass die Verstärkung Zündkapseln sind unterschiedlicher Masse derjenigen die Verlängerung Zündkapseln und Produkte herstellen interpretierbaren Spektren Masse. Diese Parameter werden leicht durch ein Multiplex Genotypisierung-Assay-Design-Tool implementiert. Die Forward- und reverse Primer von diesem Design werden verwendet werden, Zielen auf die Markierungen des Interesses und verstärken die Sequenz, die SNP enthält. Die Erweiterung Primer Anhängen direkt proximal zu den SNPs und eine einzelne, Masse verändert, 'Terminator'-Basis, die komplementär zu der SNP ist hinzugefügt. Die Terminator Basis verhindert eine weitere Verlängerung der DNA. Die Masse-Modifikation des Sockels kann Fragmente abweichend von einer einzelnen Base von Massenspektrometrie detektiert werden. Die Platte enthält die Genotypisierung Chemie wird dann auf einen Chip für die Messung auf einer Plattform Massenspektrometrie angewendet. Nach der Anwendung entsprechende Qualitätskontrollen, die rohen Genotypisierung Anrufe vom System erkannt, können die Daten exportiert und verwendet zur statistischen Auswertung, um Verbindung mit Krankheit Phänotypen zu testen.

<table><tbody><tr><td>Genomische DNA&nbsp;</td><td>-</td><td>-</td><td>1 &mu; L in einer Konzentration von 5-10 ng/&mu; L</td></tr><tr><td>Primer: Vorwärts- und Rückwärtsamplifikation und -verlängerung</td><td>IDT</td> <td>-</td> <td>siehe Manuskript Abschnitt 1.2.1 über die Gestaltung von Primern</td></tr><tr><td>Deionisiertes Wasser&nbsp;</td><td>Z.B. Milli-Q Wasser&nbsp;</td><td>-</td><td>deionisiert mit 18,2 M&Omega;. cm Widerstand</td></tr><tr><td>Reagenzien-Kit für die Genotypisierung. iPLEX Gold Reagenzien-Set&nbsp;</td><td>Agena Bioscience</td><td>#10148-2</td><td>enthält alle Reagenzien für Reaktionen in 2.2.1, 2.3.1 und 2.4.2 , Chip- und</td></tr><tr><td>Harz-PCR-Platten (384-Well)</td><td>Abgene</td><td>#ABGAB-1384</td><td>Für das MassARRAY-System sind die Platten von Abgene kompatibel</td></tr><tr><td>Mikropipetten</td><td></td><td></td><td>Ein- und 8-Kanal-Zentrifuge</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td>kompatibel mit 384-Well-Platten</td></tr><tr><td>Thermocycler</td><td></td><td></td><td>kompatibel mit PCR-Programmen, wie in 2.2.4, 2.3.2 und 2.4.3 beschrieben</td></tr><tr><td>Dimple-Harzplatte&nbsp;</td><td>Agena Bioscience</td><td></td><td>6 mg, 384-Well-Plattenrotator</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MassARRAY Analyzer 4 System</td><td>Agena Biosciences</td><td></td><td>MALDI-TOF (matrix-assisted laser desorption/ionization &ndash; time of flight) Massenspektrometer.</td></tr><tr><td>RS1000 Nanodispenser</td><td>Agena Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Assay Design Suite</td><td>Agena Biosciences</td><td></td><td>Tool zur Entwicklung der Multiplex-Genotypisierungsassays</td></tr> Hot <tr><td>Start Taq</td><td></td><td></td><td>DNA-Polymerase-Enzym</td></tr><tr><td>Harz&nbsp;</td><td>Agena Biosciences</td><td></td><td>Lieferung mit iPLEX-Kit</td></tr></tbody></table>

kandidaten-gen tests in klinischen kohortenstudien mit gemultiplexten genotypisierung und massenspektrometrie

Candidate Gene Testing in Clinical Cohort Studies with Multiplexed Genotyping and Mass Spectrometry

Komplexe Krankheiten werden oft durch mehrere gemeinsame genetische Varianten untermauert, die Krankheitsanfälligkeit beitragen. Hier beschreiben wir eine kostengünstige Tag Einzel-Nukleotid Polymorphie (SNP) Ansatz mit einem gemultiplexten Genotypisierung Assay mit Massenspektrometrie, gen Weg Verbände in klinischer Kohorten zu untersuchen. Wir untersuchen Lebensmittel Allergie Kandidat Locus Interleukin13 (IL13) als Beispiel. Diese Methode maximiert effizient die Berichterstattung unter Ausnutzung der gemeinsamen Gestänge Ungleichgewicht (LD) innerhalb einer Region. Ausgewählten LD SNPs sind dann in einen Multiplex-Assay konzipiert ermöglichen bis zu 40 verschiedene SNPs gleichzeitig analysiert werden, Steigerung der Wirtschaftlichkeit. Polymerase-Kettenreaktion (PCR) wird verwendet, um den Ziel-Loci, gefolgt von Einzel-Nukleotid-Erweiterung zu verstärken und die Amplifikate sind dann mit Matrix-unterstützte Laser Desorption/Ionisierung-Zeit der flight(MALDI-TOF) Massenspektrometrie gemessen. Die raw-Ausgabe wird mit dem Genotyp ruft Software, mit strengen Qualitätskontrolle Definitionen und Cut-Offs, analysiert und mit hoher Wahrscheinlichkeit Genotypen sind bestimmt und Ausgang für die Datenanalyse.

Mit dem oben beschriebenen Protokoll kennzeichnen wir genotypisiert SNPs über das Th2 immun gen IL13 in einer Kohorte von Nahrungsmittel-Allergie Fälle und Kontrollen9. Wir angewendet logistische Regressionsanalyse, bereinigt um Abstammung und andere potentiellen Kovariablen zu testen, ob die genetische Varianten innerhalb der Region des Interesses Lebensmittel-Allergie-Risiko erhöht. Tabelle 10 9 zeigt, dass eine V...

Identifizierung von Genvarianten, die einen Beitrag zur komplexen menschlichen Krankheit ermöglicht neuartige Mechanismen zu identifizieren. Hier zeigen wir einen Multiplex-Genotypisierung Ansatz Kandidatengene oder Weg Genanalyse, die maximiert die Reichweite bei niedrigen Kosten und Kohorte-Studien zugänglich ist.

Kandidaten-Gen Tests in klinischen Kohortenstudien mit gemultiplexten Genotypisierung und Massenspektrometrie

Complex diseases are often underpinned by multiple common genetic variants that contribute to disease susceptibility. Here, we describe a cost-effective ...

Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen in den Bereichen klinische Diagnostik und Genetik zu beantworten, wie z. B. den Nachweis genetischer Marker, die mit Krankheitsverläufen verbunden sind, einschließlich des humanen Papillomavirus. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass es sich um eine kostengünstige, gezielte und zeitsparende Diagnosemethode handelt. Um dieses Verfahren zu beginnen, rekonstituieren Sie alle bestellten lyophilisierten Primer mit Wasser in Molekularqualität.Ziehen Sie die Vorwärts- und Rückwärtsprimer für jeden Multiplex-Assay in eine Stamm-Primer-Mischung, so dass sie jeden Primer in einer Konzentration von null Komma fünf Millimolar enthält. Bereiten Sie danach einen Mastermix für die PCR vor, wie im Textprotokoll beschrieben. Geben Sie vier Mikroliter dieser Mischung in jede Vertiefung einer 384-Well-PCR-Platte, zusammen mit einem Mikroliter genomischer DNA in einer Konzentration zwischen fünf und 10 Nanogramm pro Mikroliter.Decken Sie die Platte mit einer Plattenabdeckung ab und zentrifugieren Sie eine Minute lang bei Raumtemperatur für 200 mal G. Führen Sie dann die PCR wie im Textprotokoll beschrieben durch. Laden Sie einen Mikrolit

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Research

Forschung

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Genetics

Genetik

Genetische Assoziationen oft im Dunkeln bleiben auf funktionaler Ebene. Diese Methode zielt darauf ab, die Wirkung der Phänotyp-assoziierten genetischen Marker auf die Genexpression zu beurteilen durch die Analyse von Zellen heterozygot für transkribiert SNPs. Die Technologie ermöglicht eine präzise Messung durch MALDI-TOF-Massenspektrometrie zur Allel-spezifischen Primer Extension-Produkte zu quantifizieren.

Ein Allel-spezifische Gene Expression Assay zur Funktionsanalyse Grundlage genetischer Verbände testen

Ein Protokoll beschrieben, das Illumina Infinium Assays verwendet, um groß angelegte Genotypisierung. Diese Assays zuverlässig Millionen SNPs Genotyp über Hunderte von einzelnen DNA-Proben in drei Tagen. Einmal erzeugt, können diese Genotypen verwendet werden, um für Vereine mit einer Vielzahl von verschiedenen Erkrankungen oder Phänotypen zu überprüfen.

Infinium-Assay für Groß SNP Genotypisierung Anwendungen

Wir beschreiben die Herstellung von mit Strichcode-DNA-Bibliotheken und die anschließende Hybridisierung Basis Exon Erfassung zur Erkennung von Schlüssel Krebs-assoziierten Mutationen in der klinischen Tumorproben von massiv parallelen Sequenzierung der "nächsten Generation". Gezielte Exon-Sequenzierung bietet die Vorteile der hohen Durchsatz, geringe Kosten, und tiefe Sequenzabdeckung, woraus sich eine hohe Empfindlichkeit zum Nachweis von Niederfrequenz-Mutationen.

Erkennen Somatische Genetische Veränderungen in Tumorproben von Exon-Abscheidung und-Massively Parallel Sequencing

Ein integriertes System für die gezielte Next-Generation-Sequenzierung von onkologischen Proben wird beschrieben. Dieses plattformübergreifende System ist für Tumorbiopsien von geringer Qualität und geringen Mengen optimiert, ermöglicht geringe DNA-Eingaben, umfasst gut charakterisierte Mehrvariantenkontrollen und verfügt über einen neuartigen Variantenaufrufer, der auf quantitativen präanalytischen Qualitätskontrollmaßnahmen basiert.

Integration von Nass- und Trocken Bench Prozesse werden so optimiert Gezielte Next-Generation Sequenzierung von Low-Qualität und Low-Menge Tumorbiopsien

Wir präsentieren einen strategischen Plan und ein Protokoll zur Identifizierung nicht-kodierender genetischer Varianten, die die DNA-Bindung des Transkriptionsfaktors (TF) beeinflussen. Es wird ein detailliertes experimentelles Protokoll für die elektrophoretische Mobilitätsverschiebungs-Assay (EMSA) und den DNA-Affinitäts-Präzipitations-Assay (DAPA) der Genotyp-abhängigen TF-DNA-Bindung bereitgestellt.

Screening für Funktionelle nichtkodierenden genetischen Varianten Mit elektrophoretische Mobilitäts-Shift-Assay (EMSA) und DNA-Affinitätspräzipitation Assay (DAPA)

Aminosäure-Niveau Signal-Rausch-Analyse bestimmt die Prävalenz der genetischen Variation an einer bestimmten Aminosäure-Position auf Hintergrund genetische Variation einer bestimmten Population normalisiert. Dies ermöglicht eine Identifizierung der Variante "Hotspots" in eine Proteinsequenz (Signal), die über die Häufigkeit der seltenen Varianten gefunden in einer Population (Lärm) steigt.

Bestimmen die Wahrscheinlichkeit einer Variante Pathogenität mit Aminosäure-Niveau Signal-Rausch-Analyse genetischer Variation

Hier stellen wir ein Protokoll zum Nachweis von tumorsomatischen Mutationen in zirkulierender DNA in biologischen Flüssigkeiten (Biofluide) vor. Unsere Droplet-Methode zur digitalen Polymerase-Kettenreaktion (dPCR) ermöglicht die Quantifizierung der Tumormutations-Allelfrequenz (MAF) und ermöglicht eine minimalinvasive Ergänzung zur Diagnose und zeitlichen Überwachung der Tumorreaktion.

Nachweis und Überwachung von tumorassoziierter zirkulierender DNA in Biofluiden von Patienten

Dieser Artikel beschreibt die Verwendung eines verankerten Multiplex-Polymerase-Kettenreaktions-basierten Bibliotheksvorbereitungskits, gefolgt von einer Sequenzierung der nächsten Generation, um onkogene Genfusionen in klinischen soliden Tumorproben zu bewerten. Es werden sowohl Die Nassbank- als auch die Datenanalyseschritte beschrieben.

Onkogene Genfusionsdetektion mit verankerter Multiplex-Polymerase-Kettenreaktion gefolgt von Sequenzierung der nächsten Generation

Das Protokoll stellt die gesamten Laborverfahren dar, die für Präimplantations-Gentests auf Aneuploidie auf einer halbleiterbasierten Next-Generation-Sequenzierungsplattform erforderlich sind. Hier präsentieren wir die detaillierten Schritte der Amplifikation des gesamten Genoms, der DNA-Fragmentauswahl, des Bibliotheksaufbaus, der Template-Vorbereitung und des Sequenzierungs-Arbeitsablaufs mit repräsentativen Ergebnissen.

Präimplantations-Gentests für Aneuploidie auf einer halbleiterbasierten Next-Generation-Sequenzierungsplattform

Wir haben einen speziesübergreifenden vergleichenden Onkogenomik-Ansatz entwickelt, der genomische Analysen und funktionelle genomische Screenings verwendet, um therapeutische Ziele in Tumoren, die in gentechnisch veränderten Mausmodellen auftreten, und den entsprechenden menschlichen Tumortyp zu identifizieren und zu vergleichen.

Genetisches Profiling und Dropout-Screening im Genommaßstab zur Identifizierung therapeutischer Ziele in Mausmodellen für bösartige periphere Nervenscheidentumoren

Lernen Sie eine kostengünstige Multiplex-Genotypisierungsmethode für Kandidatengene in klinischen Kohortenstudien. Diese Technik ermöglicht die effiziente Detektion genetischer Marker bei komplexen Erkrankungen.

Kandidaten-Gen Tests in klinischen Kohortenstudien mit gemultiplexten Genotypisierung und Massenspektrometrie

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