Name: Die Pflanze-Infektion-Test: Spray und Wunde-vermittelten Inokulation mit Pflanzen Pathogen Magnaporthe Grisea (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Lernen Sie die Spray- und Wund-Inokulation mit dem Pflanzenpathogen Magnaporthe grisea. Diese Methode ermöglicht die schnelle, großflächige Screening von Pilz-Pathotypen zur Untersuchung von Pflanzenresistenzmechanismen.

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Diese Arbeit wurde durch das spezielle wissenschaftliche Forschungsprojekt Universität Peking Landwirtschaft (YQ201603) und das wissenschaftliche Projekt der Peking-Studienkommission (KM201610020005) unterstützt.

1. Spray Inokulation mit einer Suspension von M. Grisea Konidien
<ol><li>
Pilzartige Kultur für M.grisea
	<ol>
<li>Bereiten Sie die Haferflocken Tomate Agar (OTA) Kulturmedium für pilzstämmen.</li>
		<li>Gewicht von 30-50 g Haferflocken, fügen Sie diese auf 800 mL destilliertem/deionisiertes Wasser (DdH2O) und Kochen Sie die Mischung für 30 min in den elektrischen Topf.</li>
		<li>Filtern Sie die gekochten Haferflocken Saft in das Becherglas mit einem Stück Gaze.</li>
		<li>Das Filtrat in den Becher 150 mL Tomatensaft und 20 g Agar-Agar hinzufügen und fügen Sie DdH2O bis zu 1.000 mL.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vorbereitung der experimentellen Materialien
	<ol>
<li>Ca. 50 Samen der Sorte Reis (Oryza Sativa) Lijiangxintuan-Heigu (LTH) DdH2O für 3-d genießen oder Einweichen ca. 50 Samen der Gerste (Hordeum Vulgare cv Golden Promise) DdH2O für ca. 1 d.</li>
		<li>Wickeln Sie die Samen von Reis oder Gerste in feuchte Gaze und Keimen sie auf feuchtem Filterpapier in etwa 30 Petrischalen mit einem Durchmesser von 10 cm x 10 cm bei 28 ° C. Die Reis Samen keimen dauert ca. 2-3 d, Gerste Samen keimen ist etwa 2 d. Die Relative Luftfeuchtigkeit im Gewächshaus beträgt ca. 70 %.</li>
		<li>Pflanzen Sie der Setzlinge von Reis oder Gerste in Töpfen mit autoklaviert Blumenerde und Tränken und dann mit einer Schicht Vermiculite abdecken.</li>
		<li>Setzen Sie die Pflanzen in einem geeigneten Gewächshaus oder Wachstum Kabinett bei 25 ° C für ca. 1 ~ 2 Wochen.</li>
		<li>3 Lagen Filterpapier in Kreisen mit sterile Chirurgische Schere (jeder Kreis hätte einen Durchmesser von 8 cm) schneiden und legen Sie sie auf 100 mm steril Kunststoffplatten.</li>
		<li>Jedes Gericht, das Filterpapier Einweichen fügen Sie DdH2O hinzu.</li>
		<li>Sicherstellen Sie, dass das Filterpapier komplett nass ist aber fügen Sie kein zusätzliches Wasser hinzu.</li>
		<li>Entfernen Sie überschüssiges Wasser mit einer Vakuumpumpe.</li>
		<li>Platz 2 sterilen Zahnstocher in der Kulturschale Reis/Gerste unterstützen Blätter; Raum der Zahnstocher ~ 2-3 cm auseinander.</li>
		<li>Sammeln Sie die Blätter der Reis 2 Wochen nach der Aussaat der Samen zu oder nehmen Sie die Blätter der Gerste 7D nach der Aussaat der Samen.</li>
		<li>Mit 4 - 6 Blatt Sämlinge von Reis/Gerste, schneiden Sie den unteren Teil des Stammes an ~ 5 cm von der Spitze und sammeln Sie die Blätter zu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Spray-Impfung-Protokoll
	<ol>
<li>Kultur der Pilzen Belastung für OTA-Platten in einem thermostatischen Inkubator (25 ° C) für ~ 4 d.</li>
		<li>Hinzugeben Sie ~ 2 mL DdH2O mit einer 0,5 - 5 mL-Pipette auf jede 4 Tage alte Platte.</li>
		<li>Mit einem Impfschlinge Kratzen der myzelien von M. Grisea Wildtyp Stamm und der Mutante in myzelien Schutt.</li>
		<li>Die myzelien Trümmer zu sammeln und auf eine neue OTA-Platte übertragen. Nehmen Sie die myzelien Schutt und fönen in der sauberen Werkbank.</li>
		<li>Abdeckplatte mit 3 Schichten von Gaze um die Luftfeuchtigkeit benötigt für das Wachstum der Konidien in einem Gewächshaus bei 25 ° C am Tag (14 h) und 23 ° C in der Nacht (10 h) für 24-48 h zu gewährleisten.</li>
		<li>Jedes Gericht 2 mL DdH2O hinzu und kratzen Sie die Konidien sanft mit sterilen Wattestäbchen, gefolgt von einer Filtration durch 2 Papierlagen Objektiv. Achten Sie darauf, dass Sie nicht an der Oberfläche des Kulturmediums.</li>
		<li>Übertragen Sie die Konidien Suspension in eine neue 50 mL-Tube mit einer 100-1.000 µL Pipette.</li>
		<li>Zentrifuge für 5 min auf ein Minimum von 5.000 x g bei 25 ° C.</li>
		<li>Entfernen des Überstands und Aufschwemmen der Pellet um 2 x 104 Konidien pro mL in einem 0,025 % (V/V) Tween-20 Lösung zu geben. Die Tween-20-Lösung ist in der Regel ca. 10-20 mL.</li>
		<li>Gießen Sie die Spore-Suspension in einer Hand Sprayer.</li>
		<li>Spay ca. 10 mL der conidial Suspension auf die Reis-Blätter der Sämlinge 2 Wochen alten Reis oder Gerste Blätter der Gerste 7-Tag-alte Sämlinge und inkubieren sie bei 25 ° C in einer dunklen, feuchten Kammer für ~ 24 h Spray die kontrollpflanzen mit 0,025 % (V/V) Lösung Tween-20.</li>
		<li>Übertragen Sie die Blätter in einem anderen feuchten Kammer unter Leuchtstofflampenlicht bei 25 ° C für eine Photoperiode von 12 h.</li>
		<li>Notieren Sie die Krankheitssymptome bei 5D nach der Inokulation. Untersuchen Sie die erkrankten Reis/Gerste Schaufeln von ~ 6 cm in der Länge. Die Evaluation standard entspricht dem scoring-System für Blast Widerstand des International Rice Research Institute (IRRI). Die Details der scoring-System für Blast Widerstand sind in Tabelle 1dargestellt.</li>
		<li>Fotografieren Sie die Blätter, die Infektion der getesteten Stämme zu bewerten. Die Infektion wurde durch die Anzahl der Läsionen pro 3,6 cm2bewertet.</li>
	</ol>
</li>
</ol>(2) Verwundung Inokulation mit Myzel Würfel oder Tröpfchen Conidial Aussetzung des M. grisea
<ol><li>Kratzen Sie mit Hilfe einer anatomischen Nadel drei ca. 2-3 cm lange Wunden in den wichtigsten Venen der freistehende Reis/gerstenblättern; Achten Sie darauf, nicht um die Blätter zu durchdringen.</li>
	<li>Die Geschabte Blätter auf Zahnstocher und sprühen Sie eine 0,02 % (V/V) Lösung Tween-20 auf den Blättern, eine Schicht von Tröpfchen zu bilden.</li>
	<li>Geschnitten Sie 0,5 cm x 0,5 cm Myzel Stecker für jede M. Grisea Belastung (Wildtyp, mutierten, Ergänzung Stämme oder andere Test-Stämme) aus einer OTA-Platte.</li>
	<li>Setzen Sie das Myzel Stecker oder 25 µL Tröpfchen von conidial Suspension auf die Verwundeten verlässt und inkubieren Sie die Blätter bei 25 ° C in einer feuchten Kammer für 3-8 d.</li>
	<li>Untersuchen Sie die Läsionen bei 5-7 d nach Impfung. Die Methode der Untersuchung ist das gleiche wie für die Beimpfung Sprühverfahren (siehe Schritt 1.3.13.).</li>
	<li>Prüfen Sie die erkrankten Reis/Gerste Schaufeln von ~ 6 cm in der Länge zu und zu fotografieren Sie, um die Infektion der getesteten Stämme zu bewerten. Die Infektion wurde durch die Anzahl der Läsionen pro 3,6 cm2bewertet.</li>
</ol>

<ol><li>Li, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+natural+allele+of+a+transcription+factor+in+rice+confers+broad-spectrum+blast+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A natural allele of a transcription factor in rice confers broad-spectrum blast resistance.</a> Cell. 170 (1), 114-126 (2017).</li>
<li>Chi, M. H., Park, S. Y., Kim, S., Lee, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+pathogenicity+gene+is+required+in+the+rice+blast+fungus+to+suppress+the+basal+defenses+of+the+host%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">A novel pathogenicity gene is required in the rice blast fungus to suppress the basal defenses of the host.</a> PLoS Pathogens. 5 (4), 1000401(2009).</li>
<li>Jia, Y., Valent, B., Lee, F. N. <a target="_blank" href="https://apsjournals.apsnet.org/doi/10.1094/PDIS.2003.87.2.129">Determination of host responses to Magnaporthe grisea.on detached rice leaves using a spot inoculation method.</a> Plant Disease. 87 (2), 129-133 (2003).</li>
<li>Ebbole, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnaporthe+as+a+model+for+understanding+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Magnaporthe as a model for understanding host-pathogen interactions.</a> Annual Review of Phytopathology. 45, 437-456 (2007).</li>
<li>Hamer, J. E., Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection-related+development+in+the+rice+blast+fungus+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Infection-related development in the rice blast fungus Magnaporthe grisea.</a> Current Opinion in Microbiology. 1 (6), 693-697 (1998).</li>
<li>Howard, R. J., Valent, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+and+entering%3A+host+penetration+by+the+fungal+rice+blast+pathogen+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Breaking and entering: host penetration by the fungal rice blast pathogen Magnaporthe grisea.</a> Annual Review of Microbiology. 50, 491-512 (1996).</li>
<li>Chen, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Glycosylation+of+Effector+Proteins+by+an+%CE%B1-1%2C3-+Mannosyltransferase+Is+Required+for+the+Rice+Blast+Fungus+to+Evade+Host+Innate+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">N-Glycosylation of Effector Proteins by an α-1,3- Mannosyltransferase Is Required for the Rice Blast Fungus to Evade Host Innate Immunity.</a> The Plant Cell. 26 (3), 1360-1376 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M.ARG1%2C+MoARG5%2C6+and+MoARG7+involved+in+arginine+biosynthesis+are+essential+for+growth%2C+conidiogenesis%2C+sexual+reproduction%2C+and+pathogenicity+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiological+Research%22%5BJournal%5D)">M.ARG1, MoARG5,6 and MoARG7 involved in arginine biosynthesis are essential for growth, conidiogenesis, sexual reproduction, and pathogenicity in Magnaporthe oryzae.</a> Microbiological Research. 180, 11-22 (2015).</li>
<li>Du, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+serine%2Fthreonine-protein+phosphatase+PP2A+catalytic+subunit+is+essential+for+asexual+development+and+plant+infection+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Genetics%22%5BJournal%5D)">A serine/threonine-protein phosphatase PP2A catalytic subunit is essential for asexual development and plant infection in Magnaporthe oryzae.</a> Current Genetics. 59 (1-2), 33-41 (2013).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+protein+com1+is+required+for+normal+conidium+morphology+and+full+virulence+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%22%5BJournal%5D)">A novel protein com1 is required for normal conidium morphology and full virulence in Magnaporthe oryzae.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 23 (1), 112-123 (2010).</li>
<li>Cao, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ash1-like+protein+MoKMT2H+null+mutant+is+delayed+for+conidium+germination+and+pathogenesis+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">An ash1-like protein MoKMT2H null mutant is delayed for conidium germination and pathogenesis in Magnaporthe oryzae.</a> BioMed Research International. 2016, 1575430(2016).</li>
<li>Bryan, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+amino+acid+difference+distinguishes+resistant+and+susceptible+alleles+of+the+rice+blast+resistance+gene+Pi-ta%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">A single amino acid difference distinguishes resistant and susceptible alleles of the rice blast resistance gene Pi-ta.</a> The Plant Cell. 12 (11), 2033-2045 (2000).</li>
<li>Zhou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+pathology%3A+a+life+and+death+struggle+in+rice+blast+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Plant pathology: a life and death struggle in rice blast disease.</a> Current Biology. 26 (18), 843-845 (2016).</li>
<li>Guo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MoGrr1%2C+a+novel+F-box+protein%2C+is+involved+in+conidiogenesis+and+cell+wall+integrity+and+is+critical+for+the+full+virulence+of+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">MoGrr1, a novel F-box protein, is involved in conidiogenesis and cell wall integrity and is critical for the full virulence of Magnaporthe oryzae.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 99 (19), 8075-8088 (2015).</li>
<li>Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+trail+of+a+cereal+killer%3A+Exploring+the+biology+of+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">On the trail of a cereal killer: Exploring the biology of Magnaporthe grisea.</a> Annual Review of Microbiology. 57, 177-202 (2009).</li>
<li>Wilson, R. A., Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Under+pressure%3A+investigating+the+biology+of+plant+infection+by+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Under pressure: investigating the biology of plant infection by Magnaporthe oryzae.</a> Nature Reviews Microbiology. 7, 185-195 (2009).</li>
<li>Jia, Y. L., Lee, F. N., McClung, A. <a target="_blank" href="https://apsjournals.apsnet.org/doi/10.1094/PDIS-93-6-0639">Determination of Resistance Spectra of the Pi-ta and Pi-k Genes to U.S. Races of Magnaporthe oryzae Causing Rice Blast in a Recombinant Inbred Line Population.</a> Plant Disease. 93, 639-644 (2009).</li>
<li>Peng, Y. L., Shishiyama, J. <a target="_blank" href="http://www.nrcresearchpress.com/doi/abs/10.1139/b88-107?journalCode=cjb1#.WvnHgogvzIU">Temporal sequence of cytological events in rice leaves infected with Pyricularia oryzae.</a> Canadian Journal of Botany. 66 (4), 730-735 (1988).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Pflanze-Krankheit-Resistenz-Gene spielen eine wesentliche Rolle bei der Verhinderung von Infektionen durch Krankheitserreger, einschließlich pilzerreger1,12. Reis-Explosion wurde als Modell zu verstehen, die Art des Erregers Bevölkerungsstrukturen und Werk Widerstand Gene4identifizieren eingesetzt. Daher ist es notwendig zu prüfen, die Krankheit Widerstand Genotyp und avirulenz Genotypen der wichtigsten Sorten der landwirtschaftlichen Pfla...

Reis-Explosion, verursacht durch M. Grisea, ist eine der schwersten Krankheiten für Reis Sorten weltweit,1,2. Der Prozess, durch den M. Grisea Wirtspflanzen infiziert, umfasst eine Konidien Produktion und Oberfläche Anlage, eine Konidien Keimung und Appressorium Bildung, eine Formation von penetrationspflocks und infektiöse Ascokarpen Differenzierung und Ausbreitung einer Krankheit 3. alle diese Stadien sind häufig in viele andere Pflanze pathogene Pilze, und in der Tat eine Blockade von jeder einzelnen Phase verhindert die Infektion von Wirtspflanzen. Aufgrund seiner wirtschaftlichen Bedeutung und genetische Lenkbarkeit entstanden M. Grisea als Modellorganismus zur Erforschung der Mechanismen der Pflanze-Pilz Pathogen Interaktionen1,4. Daher wird studieren die Molekulare Grundlagen der diese Entwicklungsstadien in M. Grisea zur Aufklärung der molekularen Mechanismen Pilz Pathogenität und die Identifizierung von Kandidaten Zielgene für Screening und Gestaltung Roman Fungizide-5.
Jüngste Berichte über M. Grisea Infektion konzentrierten sich auf die molekularen Mechanismen der Pre Eindringen Stufen, vor allem die Conidiation, die Appressorium Bildung Eindringen Stöpsel und ansteckende Wachstum3, 6. Daher ist es wichtig, ein detailliertes Protokoll um zu testen, M. Grisea Infektion zu entwickeln. Hier präsentieren wir Ihnen eine detaillierte Methode für eine Infektion-Test, der Spray-vermittelte Infektion Assays mit einer conidial Federung und die Impfung von Wunden mit Myzel Stecker M. Griseanutzt. In diesem Bericht konzentriert sich das Protokoll auf die Kultur der Stämme, die Vorbereitung der Conidiation Lösung zum aufsprühen und das Myzel Stecker-vermittelten Inokulation von Pflanzen mit M. Grisea. Diese Schritte werden im folgenden ausführlich und eine schematische Darstellung zeigt den gesamten Workflow von der Methode beschrieben und eine typische Läsion sind in den Abbildungen 1 und 2, bzw. gezeigt.

<table><tbody><tr><td>Filterpapier</td><td>Marke GE Healthcare (Schweden) &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td>10311387</tr><tr><td>50-ml-Röhrchen</td><td>CORNING(Amercia)</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Eppendorf(Amercia)</td><td>5804R</td><td></td></tr><tr><td>Kulturschale</td><td>Thermofisher(Amercia)</td><td>150326</td><td></td></tr><tr><td>0,5-5 mL Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>&nbsp; </td><td></td>4920000105</tr><tr><td>100-1000uL Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>4920000083</td><td></td></tr><tr><td>Vakuumpumpe</td><td>Leybold</td><td>D25B</td><td></td></tr><tr><td>Präpariernadel</td><td>FST</td><td>26000-35</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>MEMMERT</td><td>PYX313</td><td></td></tr><tr><td>Impfring</td><td>Greiner Bio One</td><td>731175</td><td></td></tr></tbody></table>

die pflanze-infektion-test: spray und wunde-vermittelten inokulation mit pflanzen pathogen magnaporthe grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Pflanzen besitzen ein leistungsstarkes System zur Selbstverteidigung gegen potenzielle Bedrohungen durch pathogene Pilze. Für landwirtschaftlich wichtigen Pflanzen jedoch aktuelle Maßnahmen gegen solche Erreger zu konservativ erwiesen und somit nicht ausreichend wirksam, und sie können möglicherweise aufwerfen Umweltrisiken. Daher ist es äußerst notwendig, um Host-Resistenzfaktoren bei controlling Pflanzenkrankheiten natürlich durch die Identifizierung von resistenten Keimplasma, die Isolierung und Charakterisierung von Genen und der molekularen Züchtung identifizieren der resistenten Sorten. In dieser Hinsicht gibt es brauchen, um eine präzise, schnelle und großflächige Impfung Methode zum Züchten und entwickeln Pflanze-Resistenz-Gene zu etablieren. Der Reis pilzliche Erreger Magnaporthe Grisea Ursachen schwere Krankheitssymptome zu sprengen und Verluste ergeben. Vor kurzem, hat M. Grisea als Modellorganismus zur Erforschung der Mechanismen der Pflanze-Pilz Pathogen Interaktionen entstanden. Daher berichten wir über die Entwicklung einer Pflanze Virulenz Testmethode, die spezifisch für M. Grisea. Diese Methode bietet für Spray Inokulation mit conidial Federung und verletzte Inokulation mit Myzel Würfel oder Wassertropfen conidial Aufhängung. Der entscheidende Schritt der Verwundung Inokulation Methode für freistehende Reis Blätter soll Wunden auf Pflanzenblättern, die vermeidet Störungen verursacht durch Host eindringwiderstand. Dieses Spray/Verwundung Protokoll trägt zur schnellen, genauen und groß angelegte Vorführung des Pathotypen M. Grisea -Isolate. Diese integrierte und systematische Anlage Infektion Methode wird als ein ausgezeichneter Ausgangspunkt für die Gewinnung einer breiten Perspektive Fragen in Pflanzenpathologie dienen.

Der gesamte Workflow für die Technik ist in Abbildung 1dargestellt. Die Pflanze-Infektion-Assays wurden an 14 Tage alten anfällig Reis Sämlinge durchgeführt (O. Sativa cv CO-39) oder anfällig für 7 Tage alten Gerste verlässt (H. Vulgare cv Golden Promise)7,8,9. Um eine Infektion auf die Reis-Blätter zu testen, wurden eine conidial Suspension (1,0 x ...

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Pflanze Virulenz mit dem Werk Erreger testen Magnaporthe Grisea. Dieser Bericht wird dazu beitragen, das große Screening von Pathotypen von Pilzen Isolaten und dienen als ein ausgezeichneter Ausgangspunkt für das Verständnis der resistenten Mechanismen der Pflanzen während der molekularen Züchtung.

Die Pflanze-Infektion-Test: Spray und Wunde-vermittelten Inokulation mit Pflanzen Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Dieses Video kann helfen, wichtige Methoden auf dem Gebiet der Pflanzeninfektion zu erlernen, wie z. B. die freie und gesuchte vermittelte Inokulation mit dem Pflanzenpathogen Magnaporthe grisea. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass das Sprüh- und Verwundungsprotokoll zu einem schnellen, genauen und großflächigen Screening der Pathotypen von Pilzisolaten beiträgt. Die Implikationen dieser Technik beziehen sich auf das Studium der Physiologie zur Bekämpfung von Pflanzenpathogenen, da sie für die Vorbeugung und Kontrolle großflächiger Pflanzenkrankheiten sehr wichtig ist.Diese Methode kann Aufschluss über den konservierenden Pathogenitätsmechanismus bei Pilzen geben. Es kann auch auf die wichtigsten Sorten landwirtschaftlicher Pflanzen wie Reis oder Gerste angewendet werden. Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten haben, da es schwierig ist, Konidien mit den sterilen Wattestäbchen vorsichtig abzukratzen.Die Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da das Sammeln von Schürfwunden ohne Durchdringen der Blätter als Hauptmittel für abgelöste Reis- oder Gerstenblätter schwierig ist. Wiegen Sie zu

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Research

Forschung

JoVE Journal

Environment

Umwelt

Ein Zelltod-basierter Assay für PTI in Nicotiana benthamiana Pflanzen beschrieben.

Assay für Pathogen-Associated Molecular Pattern (PAMP)-Triggered Immunity (PTI) in Pflanzen

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

Dieses Video zeigt eine Technik, um den pathogenen Pilz Magnaporthe grisea-Infektion in Reispflanzenblättern zu etablieren. Die Pilzkonidiensuspension wird auf Abschnitte des Reisblattes gesprüht, und das Fortschreiten der Krankheit wird beurteilt, indem die Bildung nekrotischer Läsionen bewertet wird.

Eine Sprühimpftechnik zur Feststellung einer Pilzinfektion in Reisblättern

Dieses Video zeigt die Etablierung einer Reispflanzenblattinfektion durch Wundeninokulation mit Magnaporthe grisea Myzel. Der aus Pilzsporen gewonnene Keimschlauch dringt in die Epidermisschicht ein, was zu Gewebeinfektionen und Läsionen auf den Blättern führt. Diese Methode unterstützt das Pathotyp-Screening und verbessert das Verständnis der Pflanzenresistenz für die molekulare Züchtung.

Etablierung einer Reispflanzenblattinfektion durch Pilzinokulation durch Verwundung

Dieses Protokoll zeigt zwei Impfung Methoden, um den Pilz Entomoerreger...

Gründung Fungal Entomopathogens als Endophyten: Gegen Endophytic Biological Control

Die Verwendung einer Nadelinjektionsmethode zur Inokulation von Mais- und Teosintenpflanzen mit dem biotrophen Erreger Ustilago maydis wird beschrieben.  Die Nadelinjektionsimpfung erleichtert die kontrollierte Abgabe des Pilzerregers zwischen den Pflanzenblättern, wo der Erreger durch die Bildung von Appresorie in die Pflanze gelangt. Diese Methode ist hocheffizient und ermöglicht reproduzierbare Impfungen mit U. maydis.

Eine schnelle und effiziente Methode zur Beurteilung der Pathogenität von Ustilago-Maydis auf Mais- und Teosintenlinien

Die Quantifizierung des Erregerwachstums ist ein leistungsfähiges Werkzeug zur Charakterisierung verschiedener Immunantworten von Arabidopsis thaliana (im Folgenden: Arabidopsis). Das hier beschriebene Verfahren stellt einen optimierten Spritzeninfiltrationsassay zur Quantifizierung der Pseudomonas syringae pv dar. Maculicola ES4326-Wachstum in adulten Arabidopsis-Blättern.

Bakterielle Blatt Infiltration Assay für Bildende Charakterisierung pflanzlicher Abwehrreaktionen mit Hilfe der<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystem

Wir präsentieren ein Protokoll zum Aufbau eines einfachen Sporenverteilungssystems, bestehend aus einer Impfbox mit einem ~50 μm Netz und einer transparenten Kunststoffkammer. Damit lassen sich Pflanzen gleichmäßig mit Mehltausporen impfen und so eine genaue und reproduzierbare Beurteilung der Krankheitsphänotypen der untersuchten Pflanzen ermöglichen.

Eine einfache und flexible Impfmethode zur genauen Beurteilung von Phänotypen von Arabidopsis und anderen Pflanzen bei Mehltauinfektionen

Hier stellen wir ein Protokoll vor, das auf dem Mehlwurm (Tenebrio molitor) -Ködersystem basiert, das zur Isolierung und Auswahl entomopathogener Pilze (EPF) aus Bodenproben verwendet wurde. Eine effektive Konidienzahlformel (ECN) wird verwendet, um einen hoch stresstoleranten EPF basierend auf physiologischen Eigenschaften für die mikrobielle Schädlingsbekämpfung im Feld auszuwählen.

Isolierung und Selektion entomopathogener Pilze aus Bodenproben und Bewertung der Pilzvirulenz gegen Schadinsekten

Das Nadelstechen des Basalkopfes der schwarzen Pfefferpflanze ist eine kurze und zeitsparende Methode, um sie zu beschädigen. Hier haben wir detaillierte Schritte mit einem Video zur Infektion von schwarzen Pfefferpflanzen bereitgestellt.

Eine wirksame Impfmethode für Phytophthora capsici auf schwarzen Pfefferpflanzen

Dieses Protokoll enthält eine detaillierte Zusammenfassung der Strategien zur Beimpfung von Pflanzenwurzeln mit bodenbürtigen Mikroben. Am Beispiel der Pilze Verticillium longisporum und Verticillium dahliae werden drei verschiedene Wurzelinfektionssysteme beschrieben. Mögliche Anwendungen und mögliche nachgelagerte Analysen werden aufgezeigt und Vor- oder Nachteile für jedes System diskutiert.

Impfungsstrategien zur Infektion von Pflanzenwurzeln mit bodenbürtigen Mikroorganismen

Lernen Sie die Spray- und Wund-Inokulation mit dem Pflanzenpathogen Magnaporthe grisea. Diese Methode ermöglicht die schnelle, großflächige Screening von Pilz-Pathotypen zur Untersuchung von Pflanzenresistenzmechanismen.

Die Pflanze-Infektion-Test: Spray und Wunde-vermittelten Inokulation mit Pflanzen Pathogen Magnaporthe Grisea

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