Hochauflösende Vergleich der bakteriellen Konjugation Frequenzen

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Mikrobiologie zu beantworten, wie oft Plasmid-DNA auf verschiedene Bakterien verteilt werden kann. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass wir durch die Reduzierung des Hintergrunds kleine Unterschiede in der Konjugationsfrequenz mit einer hohen Auflösung erkennen können. Demonstriert wird das Verfahren kosuke Yanagiya, ein Student aus meinem Labor.

Um die Konjugationshäufigkeit nach wahrscheinlichster Zahl zu berechnen, filtern Sie einen Milliliter aus einer Übernacht-Spenderkultur mit einem Milliliter aus einer Übernacht-Empfängerkultur für 45 Minuten bei 30 Grad Celsius, wie gerade gezeigt. Während die Co-Kultur inkubiert, verdünnen Sie seriell die ursprünglichen Spender- und Empfängerkulturen für die Beschichtung in Dreifacharbeit auf Spender Luria Brühe, oder LB, plus Kanamycin, oder Empfänger LB plus Gentamycin-Platten für eine zweitägige Kultur bei 30 Grad Celsius. Am Ende der Inkubation, resuspendieren Sie die Kultur auf dem Filter in sterilem LB enthält Kanamycin und Gentamycin für serielle Verdünnung in einer 96-Well-Zellkulturplatte in Quadruplikat.