Name: Generieren eines murinen orthotopen metastasierendem Brustkrebs Krebs Modells und Durchführung von murinen radikale Mastektomie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 5 s
Description: Erfahren Sie die Erstellung eines murinen orthotopen Brustkrebsmodells mit Biolumineszenz-Technologie zur Quantifizierung der Tumorlast. Dieses Modell ermöglicht die Untersuchung von Krebsprogression und Behandlungsansätzen.

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Diese Arbeit wurde von NIH Grant R01CA160688 und Susan G. Komen Foundation Investigator initiierten Research Grant (IIR12222224), k.t. Mäuse unterstützt, die Biolumineszenz Bilder von freigegebenen Ressource Translational Imaging freigegebene Ressource am Roswell Park erworben wurden Comprehensive Cancer Center, das von der Cancer Center Support Grant (P30CA01656) und Shared Instrumentierung Grant (S10OD016450) unterstützt wurde.

Die Genehmigung vom Roswell Park umfassende Cancer Center institutionelle Animal Care und Use Committee war für alle Experimente.
Hinweis: Neun bis zwölf Wochen alten weiblichen BALB/c Mäusen stammen. 4T1-luc2 Zellen, eine Maus Mamma Adenokarzinom Zelllinie von BALB/c Mäusen abgeleitet, die auf ausdrücklichen Luciferase entwickelt, hat dienen. Diese Zellen sind in Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium mit 10 % fetalen bovine Serum (FBS) kultiviert.
1. Vorbereitung der Instrumente
<ol><li>Tauen Sie eine gefrorene gallertartige Proteinmischung (z. B. Matrigel) auf dem Eis in einer Gewebekultur-Haube.</li>
	<li>Reinigen und Autoklav zwei Sätze von chirurgischen Instrumenten (Mikrodissektion Schere, Adson Pinzette und einem Nadelhalter) vor der Operation. Bereiten Sie sterilisiert 5-0 Seide Nähte und trocknen Sie Sterilisationsmittel (wenn serielle Operationen geplant sind).</li>
	<li>Schneiden Sie die Mitte der Brusthaare der Mäuse mit einer Haarschneidemaschine und markieren Sie die Mäuse für die Identifizierung durch Stanzen das Ohr vor dem Zeitpunkt der Operation.</li>
	<li>
Bereiten Sie die Prozedurentabelle, die für den Betrieb sofort verwendet werden kann.
	<ol>
<li>Verbreiten Sie eine saugfähige Unterlage zu und fixieren Sie die Ecken mit Klebeband, beheben Sie Narkose Nase Kegel mit Klebeband, Sterilisations- und Desinfektionsmittel (Chlorhexidin, Jod, und 75 % Ethanol) setzen neben Betätigungsraum zu, und die Mäuse in Betrieb Reihenfolge.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Vorbereitung der Zellen (für 10 Mäuse)
Hinweis: Die Zellen sollten innerhalb 1 h nach losgelöst aus der Schale zu vermeiden verminderte Zellviabilität geimpft werden. Insbesondere sollten die Zellsuspension in die gallertartige Proteinmischung innerhalb von 15 Minuten gemischt werden, nach Abnehmen der Zellen aus der Schale um ihre Lebensfähigkeit zu erhalten.
<ol><li>4T1-luc2 Kulturzellen, eine Maus Mamma Adenokarzinom Zell-Linie mit dem Ausdruck Luciferase in RPMI 1640 Medien mit 10 % FBS in einem befeuchteten Inkubator bei 37 ° C in 5 % CO2.</li>
	<li>Waschen Sie die anhaftenden 4T1-luc2 Zellen in einer 10 cm Petrischale mit Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS) mit einer serologischen 10 mL-Pipette. Fügen Sie 1 mL von 0,25 % Trypsin mit einer Pipette P1000 und dann inkubieren Sie die Probe bei 37 ° C für 5 min. Fügen Sie 4 mL Wachstumsmedien (RPMI-1640 mit 10 % FBS) mit einer serologischen 5 mL pipette und übertragen die Zellsuspension auf eine 15 mL konische Rohr in einer Gewebekultur-Haube. Zentrifugieren Sie die Zellsuspension bei 180 X g für 5 min.</li>
	<li>Den Überstand abgesaugt und Aufschwemmen der Zellen in 2 mL PBS; dann zählen Sie die Zellen unter Verwendung der Hemocytometer.</li>
	<li>2 x 106 4T1-luc2 Zellen in 40 μl von kaltem PBS (pH 7.4, 4 ° C) in der Gewebekultur Haube auszusetzen.</li>
	<li>Mischen Sie die 40 μl Zellsuspension mit 360 μL der gallertartigen Proteinmischung in einem 1,5 mL Microcentrifuge Schlauch auf Eis in der Gewebekultur-Haube. Hinweis: Die Endkonzentration wird 1 x 10520 μl (1:9 PBS: gallertartige Proteinmischung). Für das orthotopen Modell (keine Mastektomie) war 1 x 10420 μL der endgültige Konzentration verwendet, um zu vermeiden, Euthanasie Kriterien (Tumor Größe > 2 cm) innerhalb von zwei Wochen zu erreichen.</li>
</ol>3. Krebs Zelle Inokulation
<ol><li>Setzen die Mäuse in der Anästhesie-Induktion-Kammer mit 2-4 % Isofluran und 0,2 L/min Sauerstoff-Fluss, bis die Mäuse ruhig atmen (2 – 3 min.).</li>
	<li>Fassen Sie die Maus und injizieren Sie 0,05 mg/kg Buprenorphin in seiner Schulter subkutan zu.</li>
	<li>Bestätigen Sie ausreichende Anästhesie durch den Mangel an Reaktion auf eine Zehe Prise. Legen Sie die Maus Nase in das Loch der Maske Maus, wodurch inhalativer Anästhesie mit 2-4 % Isofluran und 2 L/min Sauerstoff fließen zu einer Einheit Kohle Behälter befestigt.</li>
	<li>Die Maus Gliedmaßen mit Lab Klebeband zurückhalten und seine Haut mit Chlorhexidin, Jod und 75 % Ethanol, mit Wattestäbchen zu sterilisieren.</li>
	<li>Machen Sie einen 5 mm Hautschnitt in der Mitte der vorderen Brustwand Verwendung steril Mikrodissektion Schere, Aufzug die rechten Seite neben der Schnitt der Haut und die Haut von der Brustwand mit der Schere zu trennen und dann invertieren die Haut um das Recht #2 verfügbar zu machen Mamma Fettlappen.</li>
	<li>20 μl Zellsuspension Krebs mit einer Spritze 1 mL Insulin mit einer 28,5 G-Nadel in Fettpolster unter direkter Sicht durch die Wunde sorgfältig zu injizieren. Hinweis: Die Nadel geht durch die Wunde, nicht die Haut. Halten Sie die Nadel in die Fettpolster für 5 s vor zu ziehen, die Zeit für die gallertartige Proteinmischung zu erstarren lässt.</li>
	<li>Schließen Sie die Hautschnitte durch Nähte, mit nicht resorbierbaren Fäden steril 5-0.</li>
	<li>Nach der Operation, die Tiere wieder einen sauberen Käfig und überwachen sie, bis sie sich erholt haben und sind frei bewegen (nach ~ 1 – 2 min.). Wenn ein Tier nicht angezeigt wird, um bei guter Gesundheit innerhalb von 24 Stunden nach der Operation sein, verwalten Sie Buprenorphin (0,2 mg/kg).</li>
	<li>Die Nähte in Narkose zu entfernen (siehe Punkt 3.1) 7 d nach der Operation.</li>
</ol>(4) Mastektomie
Hinweis: Das Timing der Mastektomie ist sehr wichtig. Wenn sie zu früh erfolgt, tritt Lungenkrebs Metastasen nicht. Wenn sie zu spät erfolgt, eingedrungen der Primärtumor großen Blutgefäße, die eine komplette onkologische Resektion schwierig machen. So wurden mehrere Zeitpunkte für Mastektomie zu bestimmen, welcher Zeitpunkt produziert das richtige Gleichgewicht in der Wartezeit für Metastasen vor Resektion zu schwierig wurde geprüft. Nach dabei in mehr als 50 Maus-Experimente, es zeigte sich, dass Mastektomie 8 Tage nach der Inokulation Krebs Zelle (oder wenn die Größe des Tumors, 5 mm erreicht) die ideale war Zeit Punkt zu erreichen, die13Bilanz.
<ol><li>Eine Maus mit 2-4 % inhaliert Isofluran zu betäuben und injizieren Buprenorphin (siehe Schritte 3.1 und 3.2).</li>
	<li>Die Maus zurückhalten und seine Haut zu sterilisieren (siehe Punkt 3.4).</li>
	<li>Machen Sie einen 5 mm Hautschnitt 2 mm auf der linken Seite aus die Operationsnarbe, die bei der ursprünglichen Krebs Zelle Inokulation mit der Schere Mikrodissektion erfolgte. Verlängern den Schnitt in Richtung der Wurzel der Vordergliedmaße, den Tumor zu entfernen, die Haut unter anderem die Operationsnarbe und die Läsion in Kontakt mit den Tumor sowie der axillären Lymphknoten-Becken, in dem meiste Zeit keine sichtbaren Lymphknoten existiert zum Zeitpunkt der mastect Konjunktur-13. Achten Sie darauf, nicht die axillaris Vene zu beschädigen.</li>
	<li>Schließen Sie die Hautdefekte durch Nähte, mit nicht resorbierbaren Fäden steril 5-0 in der Form eines "Y".</li>
	<li>Das gleiche wie in Schritt 3,8, zurück die Maus zu einem sauberen Käfig und Monitor, bis sie sich erholt haben.</li>
	<li>Die Nähte in Narkose zu entfernen (siehe Punkt 3.1) 7 Tage nach der Operation.</li>
</ol>5. Biolumineszenz Quantifizierung des Primärtumors (Orthotopic Impfung ohne Mastektomie) oder Lunge Metastasen (Mastektomie Modell)
Hinweis: Die Biolumineszenz ist für Primärtumor Belastung Quantifizierung gemessenen 2 x pro Woche ab dem Tag nach der Inokulation orthotopen. Für die Lunge Metastasen Quantifizierung ist die Biolumineszenz gemessenen 2 x pro Woche ab dem Tag nach der Mastektomie.
<ol><li>D-Luciferin in Dulbeccos Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (DPBS), eine Endkonzentration von 15 mg/mL in einer Gewebekultur Kapuze auflösen. Aliquoten Röhren in 1,5 mL Licht abgeschirmt Microcentrifuge. Speichern Sie die verdünnte Lösung bei-80 ° C. Hinweis: Für eine 20 g-Maus ist 200 µL verdünnter D-Luciferin erforderlich.</li>
	<li>Öffnen Sie die imaging-Software, und klicken Sie auf zu initialisieren. Hinweis: Es dauert ca. 15 min. abkühlen – Coupled Ladegerät (CCD). Wenn der CCD die eingestellte Temperatur erreicht, wechselt die Farbe des Balkens Temperatur von rot auf grün.</li>
	<li>Die Mäuse mit 2-4 % Isofluran in einer dedizierten Induktion Kammer vor Bildgebung zu betäuben (siehe Punkt 3.1).</li>
	<li>Wiegen Sie die Mäuse.</li>
	<li>150 mg/kg D-Luciferin intraperitoneal zum Zeitpunkt der Mitte des Bauches, mit Hilfe einer Nadel 28,5 G zu injizieren.</li>
	<li>Passen Sie jede Maus mit einer Nase Kegel innerhalb der imaging-System in der Rückenlage (Platz maximal fünf Mäuse zur gleichen Zeit). Anästhesie bei 1 % - 3 % Isofluran (in 100 % Sauerstoff) durch die Nase Kegel während der Bildgebung zu erhalten.</li>
	<li>
Erfassen Sie ein Bild alle 5 min um die Gipfel Biolumineszenz für 50 min (oder bis die bestätigten Peak Biolumineszenz) zu erkennen.
	<ol>
<li>Wählen Sie Auto, Binning , als Mediumund Sichtfeld als D Lumineszenz .</li>
		<li>Klicken Sie auf erfassen um das Bild aufzunehmen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Zurückkehren Sie die Mäuse zu ihren Referenzdrehzahl und überwachen sie, bis sie sich erholt haben (siehe Punkt 3.8).</li>
</ol>(6) Lunge Metastasen Tumor Belastung Quantifizierung von Ex-Vivo Bildgebung
Hinweis: Lungenkrebs Metastasen Quantifizierung ist für orthotopen Inokulation mit und ohne Mastektomie Modelle anwendbar. Im Modell Mastektomie ist ex-Vivo Bildgebung oder Überleben Beobachtung gewählt, je nach Verwendungszweck. Im orthotopen Inokulation (ohne Mastektomie) Modell produzieren meist Primärtumor Euthanasie Größenkriterien (> 2 cm) ca. 21 Tage nach der Inokulation.
<ol><li>21 Tage nach der Krebs Zelle Inokulation von ex-Vivo Bildgebung Lunge metastatischen Läsionen zu quantifizieren.</li>
	<li>Die Mäuse mit 2-4 % Isofluran in einer dedizierten Induktion Kammer zu betäuben (siehe Punkt 3.1).</li>
	<li>Wiegen Sie die Mäuse.</li>
	<li>150 mg/kg D-Luciferin intraperitoneale Injektion (siehe Punkt 5.6).</li>
	<li>Die Mäuse durch zervikale Dislokation, 15 min nach der Injektion einschläfern.</li>
	<li>Öffnen Sie den Bauch durch Schneiden der Haut und Bauchfell in der Mitte des Bauches, mit Mayo Schere gebogen. Den Schnitt auf der rechten und der linken zu verlängern. Herausziehen der Leberzellkrebs mit der Pinzette, bis das Zwerchfell visualisiert wird; dann schneiden Sie die Membran.</li>
	<li>Mit der gebogenen Mayo Schere schneiden die bilateralen Rippen aus kaudale (12. Rippen), kopfwärts (1. Rippen), die Lunge aussetzen durch Umklappen der vorderen Thorax-Wand.</li>
	<li>Identifizieren der thorakalen Ösophagus, die aussieht wie eine Schnur verbindet die Lunge an der Wirbelsäule durch Anheben der Lunge mit Pinzette und dann schneiden mit der Schere Mikrodissektion Speiseröhre.</li>
	<li>Heben Sie die bilateralen Lunge und Herz mit Zange (Anwendung Traktion herunterziehen, in Richtung der kopfwärts zu kaudale) und dann schneiden Sie die Luftröhre und die großen Schiffe an die Spitze der Lunge bei der kopfwärts, Mikrodissektion Schere verwenden. Hinweis: Dies ermöglicht für die Isolierung von Lunge und Herz aus dem Körper.</li>
	<li>Entfernen Sie das Herz aus der Lunge mit Mikrodissektion Schere.</li>
	<li>Legen Sie die Lungen in einer 10 cm Petrischale.</li>
	<li>Erfassen Sie das Abbild der Biolumineszenz (siehe Schritte 5.7.1 und 5.7.2) 5 min nach Euthanasie (20 min nach der Injektion von Luciferin).</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Für das letzte Jahrzehnt etablieren wir mehrere murinen Krebs-Modelle, einschließlich Brust Krebs Modelle3,7,13,16,20,21. Bisher haben wir gezeigt, dass Brustkrebs Krebs Zelle orthotopen Inokulation in das Brustdrüsengewebe unter direkter Sicht einen größeren Tumor mit weniger Größe Variabilität im Vergleich zu injizierenden ...

Tiermodelle spielen eine Schlüsselrolle in der Krebsforschung. Wenn eine Hypothese in vitro nachgewiesen ist, sollte es in-vivo auszuwertende ihre klinische Relevanz geprüft werden. Tumorprogression und Metastasierung sind oft besser von Tiermodellen im Vergleich zu in-vitro-Modelle erfasst, und es ist wichtig, ein neues Medikament testen in einem Tiermodell als einer präklinischen Studie für Droge-Entwicklung1,2. Die technischen Details von Tierversuchen sind jedoch oft nicht gut beschrieben in veröffentlichten Artikeln, so dass es eine Herausforderung, das Modell erfolgreich zu reproduzieren. In der Tat ging die Autoren, die diese orthotopen Inokulation und Mastektomie Modelle hergestellt durch langen und strengen Prozesse von Versuch und Irrtum. Die Erfolgsquote bei der Tumorgenese nach Krebs Zelle Impfung ist einer der wichtigsten Faktoren für den Erfolg und die Effizienz eines Tieres studieren3. Die Zell-Linie und die Anzahl der Zellen zu impfen, die Impfung-Website und die Belastung der Mäuse sind alle wichtigen Faktoren. Es ist bekannt, dass es große Unterschiede in den Ergebnissen von Tierversuchen durch individuelle Unterschiede im Vergleich zu in-vitro-Techniken gibt. Daher ist es wichtig, stabile Ergebnisse zur Verbesserung der Effizienz von Tierversuchen und irreführende Ergebnisse zu vermeiden, mit einem etablierten Modell mit einem standard-Technik.
Dieses Dokument enthält etablierte Techniken4 um Brust Krebs orthotopen und Mastektomie Mausmodellen zu generieren. Die Ziele dieser Methoden sind 1) menschliche Muttermilch Tumorprogression und Behandlungszyklen zu imitieren, und (2) in vivo Experimente mit mehr Effizienz und höhere Erfolgsraten im Vergleich zu anderen Brust-Krebs-Impfung oder Mastektomie Techniken. Im orthotopen Krebs Zelle Inokulation um menschliche Muttermilch Tumorprogression, imitieren wählen wir #2 Mamma Fettpolster als Impfung Website, befindet sich in der Brust. In den meisten Studien, Brustkrebs-Zellen werden subkutan geimpft5. Diese Technik erfordert keine Operation, und so ist es einfach und unkompliziert. Die subkutane Mikroumgebung unterscheidet sich jedoch von der Brustdrüse Mikroumgebung, die Ergebnisse in verschiedenen Tumorprogression und auch molekularer Profile6,7. Einige Studien verwenden #4 Brustdrüse, die sich in der Bauchhöhle befindet, als eine Impfung Seite6. Da jedoch #4 Milchdrüsen in der Bauchhöhle befinden, ist die häufigste metastasierendem Muster peritonealen Carcinomatosis7, die mit weniger als 10 % von metastasierendem Brustkrebs Krebs8auftritt. Generiert durch die Technik in der Brustdrüse #2 das hier vorgestellte Brustkrebs metastasiert in die Lunge, die eines der häufigsten Brust Krebs metastasiertem Websites9ist.
Mit dieser Technik soll auch eine höhere Tumorgenese mit minimalen Tumor Größe Variabilität im Vergleich zu anderen Brust Krebs Impfung zu erzielen. Hierzu sind Krebszellen, die in eine gallertartige Proteinmischung ausgesetzt unter direkter Sicht durch einen medianen vorderen Brust Wand Schnitt geimpft. Diese Technik sorgt für eine hohe Tumorgenese Rate mit weniger Variabilität in der Größe des Tumors und Form im Vergleich zur subkutanen oder nicht-chirurgische Injektion, wie bereits berichtet3,7.
Wir führen auch eine Maus radikale Mastektomie Technik in der orthotopen Brusttumor mit dem umliegenden Gewebe und axillären Lymphknoten reseziert wird. In der klinischen Einstellung ist die Standardtherapie für Patientinnen mit Brustkrebs ohne Fernmetastasen Krankheit Mastektomie10,11. Bevor eine Mastektomie wird axillären Lymphknoten-Metastasen von Bildgebung und Sentinel-Lymphknoten-Biopsie befragt. Wenn es keinen Beweis der axillären Lymphknoten-Metastasen gibt, ist der Patient dann mit eine vollständige oder partielle Mastektomie, behandelt in der axillären Lymphknoten-Resektion weggelassen wird. Totale Mastektomie ist eine Technik, um Brustkrebs mit das ganze Brustgewebe en bloc zu resezieren, während partielle Mastektomie Brustkrebs mit einer Marge von umgebenden normalen Brustgewebe, resezieren somit Erhaltung der verbliebenen normalen Brustgewebe in der Patienten. Patienten, die Erhaltung normalen Brustgewebe nach einer partiellen Mastektomie verbleibende erfordern jedoch postoperative Strahlentherapie Lokalrezidiv10zu vermeiden. Patienen mit axillären Lymphknoten-Metastasen, die radikale Mastektomie verpflichten sich, wodurch das Brustkrebs mit allen normalen Brust-Gewebe und axillären Lymphknoten und marschierte in Geweben En Bloc10,11. Im Mausmodell ist die Überwachung für axillären Lymphknoten Metastasen und/oder postoperative Bestrahlung nicht sinnvoll oder machbar. So nutzen wir die radikale Mastektomie-Technik zur Vermeidung von lokalen oder axillären Lymphknoten-Metastasen.
Krebs Zelle Beimpfen über die Rute Vene ist die am weitesten verbreitete Lunge Metastasen Maus Modell12, die so genannte "experimentelle Metastase". Dieses Modell ist leicht zu generieren und erfordert keine Operation; jedoch ist es nicht menschliche Muttermilch Tumorprogression imitieren die verschiedenen Metastasen Verhalten führen können. Um die menschliche Brust Krebs Behandlung natürlich imitieren wo Metastasierung häufig nach Mastektomie tritt, ist nach der orthotopen Krebs Zelle Inokulation der Primärtumor entfernt. Diese Technik erzeugt weniger Lokalrezidiven im Vergleich zu einfachen Tumor-Resektion, wie bereits berichtet13, und eignet sich für neuer Therapeutika, präklinische Studien und für metastasierendem Brustkrebs Krebs Forschungsstudien. Die hier beschriebenen Techniken sind für die meisten Brust Krebs orthotopen Modellversuche. Es ist jedoch wichtig zu bedenken, dass die gallertartige Proteinmischung die Mikroumgebung beeinflussen und Operation Stress/Immune Antwort14 beeinflussen. Daher sollten Forscher studieren die Mikroumgebung und/oder Stress/Immunantwort Potenzial Störfaktoren berücksichtigen.

<table><tbody><tr><td>Mikrodissektionsschere</td><td>Roboz</td><td>RS-5983</td><td>Für die Inokulation von Krebszellen und die Masstektomie</td></tr><tr><td>Adson-Pinzette</td><td>Roboz</td><td>RS-5233</td><td>Für die Inokulation von Krebszellen und die Masstektomie</td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Roboz</td><td>RS-7830</td><td>Für die Inokulation von Krebszellen und die Masstektomie</td></tr><tr><td>Mayo</td><td>Roboz</td><td>RS-6873</td><td>Für ex vivo</td></tr><tr><td>5-0 Seidennähte</td><td>Look</td><td>774B</td><td>Für die Inokulation von Krebszellen und die Masstektomie</td></tr><tr><td>Trockensterilisationsmittel (Germinator 500)</td><td>Braintree Scientific</td><td>GER 5287-120V</td><td>Für die Inokulation von Krebszellen und die Masstektomie</td></tr><tr><td>Clipper</td><td>Wahl</td><td>9908-717</td><td>Für die Inokulation von Krebszellen und die Masstektomie</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>Für die Inokulation von Krebszellen</td></tr><tr><td>D-Luciferin, Kaliumsalz</td><td>GOLD-Bio</td><td>LUCK-1K</td><td>Für die Quantifizierung von Biolumineszenz</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Insitute 1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>Für Zellkulturen</td></tr><tr><td>Fötaler Rinderserub</td><td>Gibco</td><td>10437028</td><td>Für Zellkulturen</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Für Zellkulturen</td></tr></tbody></table>

generieren eines murinen orthotopen metastasierendem brustkrebs krebs modells und durchführung von murinen radikale mastektomie

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

In-vivo Mausmodellen Brust Krebs Fortschreiten zu beurteilen sind unerlässlich für die Krebsforschung, einschließlich der präklinischen Medikament Entwicklungen. Der Großteil der praktischen und technischen Daten entfallen jedoch häufig in veröffentlichten Manuskripte, die daher, macht es schwierig, um die Modelle zu reproduzieren, besonders wenn es um chirurgische Techniken geht. Biolumineszenz Technologie ermöglicht die Auswertung von geringen Mengen von Krebszellen auch wenn ein Tumor nicht greifbar ist. Verwendung von Krebszellen Luciferase-zum Ausdruck zu bringen, schaffen wir eine Brust Krebs orthotopen Inokulation Technik mit einer hohen Tumorgenese. Lungenkrebs Metastasen ist ein ex-Vivo -Technik bewertet. Wir etablieren dann eine Mastektomie-Modell mit einer niedrigen lokale Rezidivrate der metastatischen Tumorlast zu beurteilen. Hierin beschrieben, detailliert, die Operationstechniken der orthotopen Implantation und Brustamputation für Brustkrebs mit einer hohen Tumorgenese und niedrigen lokalen Rezidivraten bzw. zur Verbesserung der Brust Krebs Modell Effizienz.

Orthotopen Modell soll imitieren menschlichen Krebs Fortschreiten (d. h., das Wachstum des Primärtumors gefolgt von Lymphknoten-Metastasen und dann entfernte Lunge Metastasen)15. Nach Krebs Zelle Inokulation, die Biolumineszenz wird quantifiziert, regelmäßig (zwei-bis dreimal / Woche) (Abbildung 1A). Die Biolumineszenz in der Lunge ist tiefer und kleiner als die primäre Läsion. Die Biolumineszenz spiegelt vor allem die primäre...

Wir führen einen murinen orthotopen Brust Krebs Modell und radikale Mastektomie Modell mit Biolumineszenz-Technologie, die Tumorlast um menschliche Muttermilch Tumorprogression imitieren zu quantifizieren.

Generieren eines murinen orthotopen metastasierendem Brustkrebs Krebs Modells und Durchführung von murinen radikale Mastektomie

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich Brustkrebs zu beantworten, wie man die Progression und Behandlung von menschlichem Brustkrebs in einem Mausmodell nachahmt. Der Hauptvorteil dieses Maus-Brustkrebsmodells ist, dass es eine hohe Tumorigeneserate nach orthotopischer Implantation und eine niedrige lokale Rezidivrate nach Mastektomie hat. Beginnen Sie mit der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Zehenkneifen in einer anästhesierten weiblichen Maus und kleben Sie die Gliedmaßen des Tieres auf ein chirurgisches Brett.Mit sterilen Wattestäbchen sterilisieren Sie den operationsfreien Bereich mit Chlorhexidin, Jod und 75% Ethanol. Und machen Sie einen Fünf-Millimeter-Hautschnitt in der Mitte der vorderen Brustwand. Heben Sie als nächstes die rechte Seite der Haut neben dem Schnitt an und verwenden Sie eine sterile Mikrodissektionsschere, um die Haut von der Brustwand zu lösen.Invertieren Sie die Haut, um das richtige Brustfettpad Nummer zwei freizulegen, und verwenden Sie eine Ein-Milliliter-Insulinspritze, die mit einer 28,5-Spur-Nadel ausgestattet ist, um sorgfältig 20 Mikroliter Krebszellsuspension durch die Wunde in das Fettpolster zu injizieren. Halten Sie die Nadel fünf Sekunden lang im Fettpolster, damit sich die gelatinöse Krebszellproteinmischung vor dem Entfernen der Nadel verfestigen und den Schnitt mit sterilen 5-0 nicht resorbierbaren Nähten schließen kann. Dann legen Sie das Tier in einen sauberen Käfig mit Überwachung bis zur vollen Recumbency.Um die Mastektomie acht Tage nach der Krebsimpfung durchzuführen, bereiten Sie die Maus auf eine Operation vor, wie gerade gezeigt, und machen Sie einen Fünf-Millimeter-Hautschnitt zwei Millimeter links von der chirurgischen Narbe aus der Krebszellimpfung. Erweitern Sie den Schnitt in Richtung der Wurzel des Vorderbeins, um den Tumor zu entfernen, und die Haut, einschließlich der chirurgischen Narbe, und die Läsion in Kontakt mit dem Tumor, und das axilläre Lymphknotenbecken, in dem typischerweise keine sichtbaren Lymphknoten zum Zeitpunkt der Mastektomie vorhanden sind. Dann schließen Sie die Hautdefekte mit sterilen 5-0 nicht resorbierbaren Nähten in Form eines Y.Und bringen Sie das Tier in seinen Käfig mit Überwachung bis zur vollen Amtsinhaberschaft zurück.Für Lungenmetastasen Quantifizierung 21 Tage nach der Impfung injizieren 150 Milligramm pro Kilogramm D-Luciferin IP 15 Minuten vor der Euthanasie. Und verwenden Sie gekrümmte Mayo-Schere, um die Haut und Peritoneum in der Mitte des Bauches zu öffnen. Drücken Sie die Leber nach unten, bis das Zwerchfell visualisiert werden kann, und schneiden Sie das Zwerchfell und die bilateralen Rippen von Caudad zu Cephalad.Drehen Sie die vordere Thoraxwand, um die Lunge freizulegen, und heben Sie die Lunge an, um die Thorax-Ösophagus zu identifizieren, die wie eine Schnur aussieht, die die Lunge mit der Wirbelsäule verbindet. Schneiden Sie die Speiseröhre mit einer Mikrodissektionsschere und ziehen Sie die bilaterale Lunge und das Herz mit Zangen in Richtung Caudad. Dann schneiden Sie die Luftröhre und die Hauptgefäße an der Cephalade an die Lungenspitze und legen Sie die Lunge in eine 10-Zentimeter-Petrischale für biolumineszierende Bildgebung.Verwenden Sie die Schere, um das Herz aus dem Lungengewebe zu entfernen. Ab etwa acht Tagen nach der Impfung von Brustkrebszellen ist die Biolumineszenz in der Lunge tiefer und kleiner als in der primären Läsion, die die primäre Tumorbelastung bei lebenden Mäusen widerspiegelt. Die Messung der Tumorgröße mit Sätteln ermöglicht die Abschätzung des Tumorvolumens vor Ort.Dieses Mastektomie-Modell ermöglicht auch die serielle überwachung der metastasierenden Tumorbelastung, ohne die Tiere einschläfern zu müssen. Die Tumorbelastung der Lungenmetastasen kann auch durch Ex-vivo-Bildgebung quantifiziert werden, aber die Einschränkung ist, dass die Mäuse eingeschläfert werden müssen. Das Überleben der Maus nach der chirurgischen Behandlung kann auch als übersetzbarer klinischer Endpunkt überwacht werden.Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet des Brustkrebses, nicht nur die Entwicklung neuer Medikamente, sondern auch die Brustkrebsforschung im Allgemeinen zu erforschen.

generating-murine-orthotopic-metastatic-breast-cancer-model

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Das Video demonstriert die orthotope Inokulationstechnik für Brustkrebs in einem Mausmodell. Diese Technik führt zu einer hohen Tumorgeneserate mit geringerer Variabilität in Tumorgröße und -form im Vergleich zur subkutanen oder nicht-chirurgischen Injektion.

Orthotope Injektion: Implantation gewebespezifischer Krebszellen in eine erwachsene Maus

Dieses Video beschreibt eine Technik der radikalen Mastektomie, die zur chirurgischen Entfernung der gesamten Brustdrüse einer Maus verwendet wird, um das Fortschreiten von Krebs zu untersuchen.

Radikale Mastektomie: Chirurgische Entfernung der gesamten Brustdrüse einer Maus zur Untersuchung des Fortschreitens der Krebserkrankung

Krebs ist eine komplexe Erkrankung, die durch den den Tumor umgebenden Gewebes sowie lokale pro- und anti-inflammatorischen Mediatoren beeinflusst wird. Daher kann orthotrope Pritzer, anstatt subkutanen Modellen nützlich sein, um Krebsprogression in einer Weise, dass eine bessere ahmt menschlichen Pathologie studieren.

Orthotopische Injektion von Brustkrebszellen in das Brustfettpolster von Mäusen, das Tumorwachstum zu studieren.

Eine orthotope Brustkrebs primären Tumormodell und die operative Entfernung des Primärtumors Maus Lebensdauer zu verlängern spontane Metastasierung zu erzeugen, werden beschrieben. Das Tumorwachstum und Progression werden überwacht und durch Luciferase Fluoreszenzbildgebung quantifiziert.

Ein orthotopen Mausmodell des Spontan Metastasierung von Brustkrebs

Um den mehrstufiger Prozess der Peritonealdialyse Verbreitung von Ovarialkarzinomen klären, die aktuelle Studie stellt eine murine experimentellen Modell der ursprünglichen Tumorentstehung und Metastasierung Peritonealdialyse über orthotoper Impfung mit diesen Tumorzellen.

Murine experimentellen Modell der ursprünglichen Tumor-Entwicklung und Peritoneal Metastasierung<em&gt; über</em&gt; Orthotopische Inokulation mit Ovarialkarzinomzellen

Präklinische Modelle, die eine adjuvante Therapie mit Brustkrebs-Metastase auswerten, fehlen. Um dies zu lösen, entwickelten wir ein murines Modell der de novo pulmonalen Mamma-Adenokarzinom-Metastase, wobei Therapien, die in der adjuvanten Einstellung (postchirurgische Resektion von Primärtumoren) verabreicht werden, auf die Wirksamkeit bei der Auswirkung von zuvor gesäten pulmonalen Metastasen untersucht werden können.

Chirurgische Verfahren und Methodik für ein präklinisches Murine - Modell von De Novo Mamma Krebs Metastase

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasiv und einfach zu handhabende Möglichkeit, einzupflanzen und dieses orthotopen Brust Krebs Mausmodell mit einer richtigen Mamma Fettlappen Umgebung kann verwendet werden, um verschiedene Aspekte zu untersuchen Krebs.

Orthotopen Injektion von Brustkrebs-Zellen in den Mäusen Mamma Fettlappen

Diese Arbeit setzt ein fortschrittliches Protokoll vor, um die Tumorbelastung durch den Nachweis von grünen Fluoreszenzprotein- und Biolumineszenzsignalen sowie die Integration quantitativer molekularer Detektionstechniken genau zu bewerten.

Studieren von dreifach negativem Brustkrebs mit orthotopischem Brustkrebsmodell

Patientenbasierte Xenograft-Modelle (PDX) und transplantierbare gentechnisch veränderte Mausmodelle rekapitulieren menschliche Krankheiten originalgetreu und sind bevorzugte Modelle für die grundlegende und translationale Brustkrebsforschung. Hier wird eine Methode beschrieben, Brusttumorfragmente orthotopisch in das Brustfettpolster zu transplantieren, um die Tumorbiologie zu untersuchen und die Arzneimittelreaktion zu bewerten.

Orthotope Transplantation von Brusttumoren als präklinische Modelle für Brustkrebs

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Intratibia-Osteosarkom-Zellinjektion zur Generierung von Mausmodellen mit orthotopen Osteosarkom- und Lungenmetastasenläsionen.

Intratibiale Osteosarkom-Zellinjektion zur Erzeugung orthotoper Osteosarkom- und Lungenmetastasen-Mausmodelle

Das Manuskript beschreibt eine Methodik für die Etablierung sowie das longitudinale Wachstumsmonitoring von spontanen Lungenmetastasen von orthotopisch injizierten Brusttumoren, die in allen Stadien der Metastasierungskaskade interveniert werden kann.

Im lebenden Organismus Bildgebung zur Messung der spontanen Lungenmetastasierung von orthotopisch injizierten Brusttumorzellen

Erfahren Sie die Erstellung eines murinen orthotopen Brustkrebsmodells mit Biolumineszenz-Technologie zur Quantifizierung der Tumorlast. Dieses Modell ermöglicht die Untersuchung von Krebsprogression und Behandlungsansätzen.

Generieren eines murinen orthotopen metastasierendem Brustkrebs Krebs Modells und Durchführung von murinen radikale Mastektomie

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