Name: Eine 3-dimensionale (3D)-gedruckte Vorlage für hohen Durchsatz Zebrafish Embryos anordnen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: Erfahren Sie die Hochdurchsatz-Anordnung von Zebrafisch-Embryonen mit einer 3D-gedruckten Vorlage für 96-Well-Platten. Diese Methode beschleunigt die Probenvorbereitung erheblich und ermöglicht effizientes Screening in der Entwicklungsbiologie.

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Diese Arbeit wurde von Jugendprogramm "1000plan", die Startup-Fonds von der Tongji-Universität und NSFC Grant # 21607115 und 21777116 (Lin) unterstützt.

1. Design und Fertigung von einem Zebrafish Embryos anordnen Vorlage
<ol><li>
Entwerfen Sie die arraying Vorlage mit einem 12 x 8, 96-Well-Layout, das eine standard 96-Well-Platte passt. Verwendung der Dimensionen in Figur 1A für die oberen Embryo Einklemmung Kammer aufgeführt (siehe auch die ergänzenden Datei).
	<ol>
<li>Verwenden Sie die Maße, die in Abbildung 1 b und 1D für die Verlockende Falle gut gezeigt.</li>
		<li>Verwenden Sie die Maße für die Vakuumkammer unten in Abbildung 1 .</li>
		<li>Verwenden Sie die Maße für die Luft im in Abbildung 1 b / Outlet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwenden Sie einen 3D-Drucker (mit 0,1 mm Genauigkeit) die Vorlage drucken; siehe Tabelle der Materialien für empfohlene Harz für den Druck verwendet werden. Hinweis: 3D Drucker mit einer Genauigkeit von 0,1 mm werden für die Herstellung der arraying Vorlage empfohlen (siehe Tabelle der Materialien). Die empfohlene Farbe für die Fläche der Vorlage ist dunkelgrau oder schwarz.</li>
</ol>(2) Zebrafischembryo Laichen
<ol><li>Legen Sie zwei Paare von männlichen und weiblichen Fische pro Paarung Box einen Tag vor der Laichzeit. Getrennten Männchen und Weibchen durch einen durchsichtigen Kunststoff Teiler.</li>
	<li>Nehmen Sie den Teilern morgens, männliche und weibliche Fische zu mischen.</li>
	<li>Entfernen Sie die männlichen und weiblichen Fische und sammeln Sie Zebrafisch-Embryonen mit einem feinmaschigen Sieb zu. Waschen Sie die Embryonen mit Ei 250 mL Wasser (siehe Tabelle der Materialien).</li>
	<li>Übertragen Sie die gesammelten Embryonen auf Petrischalen (90 mm Durchmesser) mit Holtfreter Lösung (siehe Tabelle der Materialien) und Tote und unbefruchtete Embryonen mit einem Stereomikroskop zu entfernen.</li>
	<li>Legen Sie die Embryonen in einem Inkubator 28,5 ° C. Um 4 Uhr post Düngung (hpf), beobachten die Embryonen und entfernen Sie alle Toten und ungesunden Embryonen. Die Embryonen sind nun bereit für den nächsten Schritt.</li>
</ol>3. Vorbereitung der Vorlage anordnen
<ol><li>Waschen Sie die Vorlage 2 – 3 Mal mit 500 mL entionisiertem Wasser und steckte es in den Trockenofen (45 ° C) für 5 min.</li>
	<li>Kleben Sie die untere Kammer mit einem Stück des Versiegelns Film (Bild 2Schritt 1).</li>
	<li>Verbinden Sie eine Vakuum-Pumpe durch den Luftauslass an der Unterseite der Vorlage. Hinweis: Die empfohlene max. Vakuum für die Vakuumpumpe ist 0,1 Mpa. Beachten Sie die Stärke des Vakuums verwendet. Wenn der Unterdruck zu stark ist, schneiden Sie eine kreuzförmige Loch auf der Siegelfolie, den Druck zu senken.</li>
</ol>4. Anordnung Zebrafish Embryos in einer 96-Well-Platte
<ol><li>Mit einer Kunststoff transferpipette, legen Sie ca. 150 Embryonen in die Vorlage, wie in Abbildung 2, Schritt2 gezeigt.</li>
	<li>Verbinden Sie die Vakuumpumpe bis zum ausblas Unterdruck in der Kammer von der Siegelfolie in Schritt 3.3 versiegelt zu generieren.</li>
	<li>Schütteln Sie die gesamte Vorlage horizontal, bis jeder auch ein Embryo gefangen (Abbildung 2, Schritt 3 hat). Hinweis: Wenn die Holtfreter Lösung trocknet, bevor die Embryonen in jedem Bohrloch gefangen sind, fügen Sie zusätzliche Holtfreter Lösung in der Einklemmung Kammer hinzu und wiederholen Sie diesen Schritt.</li>
	<li>Entsorgen Sie zusätzliche Holtfreter Lösung und Embryonen, die nicht in den Brunnen (Abbildung 2, Schritt 4) eingeschlossen sind.</li>
	<li>Schalten Sie aus und trennen Sie die Vakuumpumpe.</li>
	<li>Legen Sie eine standard 96-Well-Platte umgedreht gegen die Vorlage (Abbildung 2, Schritt 5) und drehen Sie beide zur gleichen Zeit (Abbildung 2, Schritt 6).</li>
	<li>Tippen Sie auf der Unterseite der Vorlage oder die Luft verbinden Steckdose, um ein komprimiertes Gas Abstauben kann um alle eingeschlossenen Embryonen aus der Vorlage auf die 96-Well-Platte (Abbildung 2, Schritt 6) übertragen.</li>
	<li>Wiederholen Sie Schritt 4.1 bis 4,8, zusätzliche Multi-well-Platten vorzubereiten.</li>
	<li>Der Siegelfolie entfernen und Waschen der Vorlage 3 Mal von oben bis unten mit 500 mL entionisiertem Wasser für eine spätere Verwendung. Hinweis: Verwenden Sie organischen Lösungsmitteln wie Ethanol, nicht um die Vorlage zu reinigen.</li>
</ol>

<ol><li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>Leslie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+larvae+could+help+to+personalize+cancer+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Zebrafish larvae could help to personalize cancer treatments.</a> Science. 357 (6353), 745-745 (2017).</li>
<li>Lin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+Transformation%2C+Speciation%2C+and+Hazard+Potential+of+Copper+Particles+in+a+Model+Septic+Tank+System+Using+Zebrafish+to+Monitor+the+Effluent%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Understanding the Transformation, Speciation, and Hazard Potential of Copper Particles in a Model Septic Tank System Using Zebrafish to Monitor the Effluent.</a> ACS Nano. 9 (2), 2038-2048 (2015).</li>
<li>Lin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspect+ratio+plays+a+role+in+the+hazard+potential+of+ceo2+nanoparticles+in+mouse+lung+and+zebrafish+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Aspect ratio plays a role in the hazard potential of ceo2 nanoparticles in mouse lung and zebrafish gastrointestinal tract.</a> ACS Nano. 8 (5), 4450-4464 (2014).</li>
<li>Baraban, S. C., Dinday, M. T., Hortopan, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening+in+Scn1a+zebrafish+mutant+identifies+clemizole+as+a+potential+Dravet+syndrome+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Drug screening in Scn1a zebrafish mutant identifies clemizole as a potential Dravet syndrome treatment.</a> Nature Communications. 4, (2013).</li>
<li>Lin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+content+screening+in+zebrafish+speeds+up+hazard+ranking+of+transition+metal+oxide+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">High content screening in zebrafish speeds up hazard ranking of transition metal oxide nanoparticles.</a> ACS Nano. 5 (9), 7284-7295 (2011).</li>
<li>Kuipers, J., Kalicharan, R. D., Wolters, A. H. G., van Ham, T. J., Giepmans, B. N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+Scanning+Transmission+electron+microscopy+%28nanotomy%29+of+healthy+and+injured+zebrafish+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Large-scale Scanning Transmission electron microscopy (nanotomy) of healthy and injured zebrafish brain.</a> Journal of Visualized Experiments. (111), (2016).</li>
<li>Liu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+Phenotype+Recognition+for+Zebrafish+Embryo+Based+In+vivo+High+Throughput+Toxicity+Screening+of+Engineered+Nano-Materials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Automated Phenotype Recognition for Zebrafish Embryo Based In vivo High Throughput Toxicity Screening of Engineered Nano-Materials.</a> PLoS One. 7 (4), (2012).</li>
<li>Tu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+Categorization+and+Scoring+of+Solid%2C+Part-Solid+and+Non-Solid+Pulmonary+Nodules%5BTitle%5D)+AND+%22in+CT+Images+with+Convolutional+Neural+Network.+Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Automatic Categorization and Scoring of Solid, Part-Solid and Non-Solid Pulmonary Nodules.</a> in CT Images with Convolutional Neural Network. Scientific Reports. 7, 8533(2017).</li>
<li>Mandrell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+zebrafish+chorion+removal+and+single+embryo+placement%3A+optimizing+throughput+of+zebrafish+developmental+toxicity+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory+Automation%22%5BJournal%5D)">Automated zebrafish chorion removal and single embryo placement: optimizing throughput of zebrafish developmental toxicity screens.</a> Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 66-74 (2012).</li>
<li>Lin, S., Zhao, Y., Nel, A. E., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+An+in+vivo+model+for+nano+EHS+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: An in vivo model for nano EHS studies.</a> Small. 9 (9-10), 1608-1618 (2013).</li>
</ol>

Die Autoren haben ein Patent auf die beschriebenen 3D-gedruckten Vorlage gefüllt.

Es gibt zwei wichtige Schritte in diesem Protokoll, die Aufmerksamkeit für eine erfolgreiche Umsetzung der 3D-Druck Vorlage erfordern für Anordnung Zebrafisch-Embryonen.
Der wichtigste Faktor auf die Gestaltung der arraying Vorlage ist die Einklemmung. Macht sicher gibt es nur einen Embryo in jedes gut gefangen, man sollte achten Sie besonders auf den Durchmesser und die Tiefe des Brunnens Verlockende Falle, und der Durchmesser der Durchgangsöffnung. Der empfohlene Durchmesser ist innerhalb vo...

Als beliebter Modellorganismus ist in den Bereichen Medizin und Toxikologie1,2,3,4Zebrafisch verbreitet. Im Vergleich zu in-vitro- Plattformen, Zebrafisch bieten viel höherer biologischen Komplexität, dass ein oder zwei Zelltypen nicht bieten konnte. Abgesehen davon, dass ein Organismus, Modell, dem Zebrafisch-große Fruchtbarkeit, schnelle und gleichzeitige Embryonalentwicklung und hohen Orgel Transluzenz haben gegeben, dieses Modell einzigartige Vorteile für groß angelegte Toxizität oder Drogen/Verbund screening-5verwendet werden. Die Hunderte von Embryonen, die jede Woche von ein paar Erwachsene Zebrafisch produziert haben übertreffen alle anderen ganz Tiermodellen und es für Hochdurchsatz-Screening geeignet.
Eine typische Screening-Verfahren mit Zebrafisch beinhaltet eine erhebliche Menge an Handarbeit, wie Erwachsene Zebrafisch laichen, Embryo Auswahl und Anordnung von Embryonen in geeigneten Behältern, wo sie auf die Exposition durch Eintauchen in Wasser ausgesetzt sind. Die Entwicklung der Embryonen wird überwacht und beobachtbaren Endpunkte wie Sterblichkeit, Schlupfrate und Anomalie sind oft manuell ausgewertet und als vorläufige Identifikationen der Toxizität von Chemikalien oder Hinweise auf die Wirksamkeit der Drogen oder Verbindungen. Um die Screening-Verfahren zu beschleunigen, wurden zuvor Ansätze wie automatisierte Imaging- und computergestützte Bildanalyse untersucht. Beispielsweise wurden Mikroskope mit hohem Gehalt imaging-Funktionen führen Sie automatisierte Hellfeld oder Fluoreszenz-Bildgebung auf Zebrafish Embryos in verschiedenen Entwicklungsstadien von 96/384-well-Platten6angepasst. Mikrofluidische Geräte gepaart mit Mikroskopen dienten zebrafischlarven durch aktuellen Bearbeitung für die Bildgebung des Gehirns Neuronen7positionieren. Diese Ansätze könnten die Effizienz der Bild Akquisitionen im Vergleich zum traditionellen manuellen Betrieb erheblich verbessern. Darüber hinaus wurden mit großen Anzahl von Bildern erzeugt werden, Bild-Analyse-Tools auch entwickelt, um die Verarbeitung der Daten zu beschleunigen wie Liu Et Al. und Tu Et Al. zeigen 8 , 9.
Der Durchsatz der Bildverarbeitung und Bildanalyse erhöht, wurde es klar, dass die Bandbreitenbegrenzung Schritt für das Screening liegt in den Prozess der Exposition, die in der Regel bedeutet, wobei sie in 96 oder 384-Well-Platten Zebrafish Embryos vorbereiten. Um diesen Engpass Schritt zu lösen, Vision-geführte Robotik von Mandrell Et Al. entwickelt wurden 10 und uns11 zuvor, manuelle Handhabung aber die Instrumente zu ersetzen waren eher anspruchsvoll und es gibt eine Tiefe Lernkurve, solche Techniken umzusetzen. Daher bieten ein easy-to-Use-Ansatz ist ein wichtiger Faktor, der Durchsatz Zebrafisch-Screening weiter zu verbessern und das Hauptziel dieser Arbeit ist.
In dieser Arbeit wir konstruiert und gefertigt einen Embryo, die Vorlage von 3D-Druck anordnen. Eine arraying Vorlage wurde entwickelt, um Zebrafish Embryos in Vertiefungen, die mit einer standard 96-Well-Platte passen zu fangen. Anstelle von Embryonen auswählen und anordnen sie in einzelnen Brunnen eins nach dem anderen, könnte man Embryo Einschluss und Array alle 96 Embryonen in einem mehrlagigen Teller auf einmal durchführen. Mit dieser Vorlage und das folgende Protokoll, konnte man deutlich steigern die Effizienz der Embryonen in mehrlagigen Platten, die im Begriff Schub würde die Screening-Kapazität mindestens das Zehnfache, im Vergleich zu manuellen Betrieb anordnen. Die nachfolgend beschriebene Protokoll beinhaltet eine Gesamtkonzeption für die Anordnung der Vorlage, Zebrafisch laichen, Embryo-Sammlung und Anordnung. Abbildung 1 zeigt das gesamte Design der arraying Vorlage. Abbildung 2 zeigt eine Übersicht des Protokolls Schritt für Schritt über die Verwendung der Vorlage in den Teilen 3 und 4 beschrieben.

<table><tbody><tr><td>Zebrafisch-Anlage</td><td>Shanghai Haisheng Biotech Co., Ltd.</td><td>Z-A-S5</td><td></td></tr><tr><td>Gegenbox</td><td>Shanghai Haisheng Biotech Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Waschflasche, 500 ml</td><td>Sangon Biotech</td><td>F505001-0001</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Vetec</td><td>V900058-500G</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Sinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd</td><td>10016318</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchlorid</td><td>Sinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd</td><td>20011160</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat&nbsp;</td><td>Vetec</td><td>v900182-500G</td><td></td></tr><tr><td>Methylenblauhydrat</td><td>TCI</td><td>M0501</td><td></td></tr><tr><td>Salzsäure</td><td>Sinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd</td><td>10011008</td><td></td></tr><tr><td>Meersalze</td><td>Instant Ocean</td><td>SS15-10</td><td></td></tr><tr><td>Pipettierer</td><td>Fisherbrand</td><td>13-675M</td><td></td></tr><tr><td>Kontrollierte Drop-Pasteur-Pipette</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-30</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>OLYMPUS</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Biochemischer Inkubator</td><td>Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.</td><td>LRH-250</td><td></td></tr><tr><td>3D-Drucker</td><td>UnionTech</td><td>Lite600</td><td></td></tr><tr><td>Lichtempfindliches Harz</td><td>UnionTech</td><td>UTR9000</td><td></td></tr><tr><td>Vakuumpumpe</td><td>Shanghai Yukang Scientific Instrument Co., Ltd.</td><td>SHB-IIIA</td><td></td></tr><tr><td>Adhäsive PCR-Plattendichtungen</td><td>Solarbio</td><td>YA0245</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Platte</td><td>Costar</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>Multi 8-Kanal-Pipette 30 - 300 &mu; l</td><td>Eppendorf</td><td>3122000.051</td><td></td></tr><tr><td>Druckluftstaubwedel</td><td>Shanghai Zhantu Chemical Co., Ltd.</td><td>ST1005</td><td></td></tr><tr><td>DI Wasser</td><td>Thermo</td><td>GenPure Pro UV / UF</td><td></td></tr><tr><td>Trockenschrank</td><td>Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.</td><td>BPG-9106A</td><td></td></tr><tr><td>Systemwasser</td><td></td><td></td><td>Wasser aus der Anlage s Wassersystem</td></tr><tr><td>Eiwasser</td><td></td><td></td><td>Verdünnt 60mg " Sofortiger Ozean" Meersalz und 0,25 mg/l Methylenblau in 1 l Wasser mit DI</td></tr><tr><td>Holtfreter" </td><td></td><td></td><td>7,0 g Natriumchlorid (NaCl), 0,4 g Natriumbicarbonat (NaHCO3), 0,1 g Kaliumchlorid (KCl), 0,235 g Calciumchlorid (CaCl2,2H2O) in 1,9 l DI-Wasser auflösen. Stellen Sie den pH-Wert mit HCl auf 7 und das Volumen mit Di-Wasser auf 2 l ein</td></tr></tbody></table>

eine 3-dimensionale (3d)-gedruckte vorlage für hohen durchsatz zebrafish embryos anordnen

A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

Der Zebrabärbling ist ein weltweit anerkannter Süßwasser Organismus häufig in Entwicklungsbiologie, Umwelttoxikologie und Krankheit beim Menschen verwandten Forschungsgebieten. Dank seiner einzigartigen Eigenschaften, einschließlich große Fruchtbarkeit, Embryo Transluzenz, schnelle und gleichzeitige Entwicklung, etc.Zebrafisch-Embryonen werden häufig verwendet für groß angelegte Toxizität Bewertung von Chemikalien und Drogen/Compound Screening. Eine typische Screening-Verfahren beinhaltet Erwachsenen Zebrafisch laichen, Embryonen Auswahl und Anordnung der Embryonen in Multi-well-Platten. Von dort aus Embryonen sind Belichtung und die Toxizität von Chemikalien ausgesetzt, oder die Wirksamkeit der Medikamente/Verbindungen kann relativ schnell anhand der phänotypischen Beobachtungen ausgewertet werden. Zwischen diesen Prozessen ist Embryonen anordnen eine zeitraubende und arbeitsintensive Schritte, die den Durchsatz begrenzt. In diesem Protokoll präsentieren wir ein innovatives Konzept, das macht die Verwendung einer 3D-gedruckten arraying Vorlage in Verbindung mit-Manipulation Vakuum um diesen mühsamen Schritt zu beschleunigen. Das Protokoll hierin beschreibt das Gesamtdesign der arraying Vorlage, eine detaillierte Versuchsaufbau und Schritt für Schritt Verfahren, gefolgt von repräsentative Ergebnisse. Bei der Implementierung sollte dieser Ansatz in einer Vielzahl von Anwendungen in der Forschung mit Zebrafisch-Embryonen als Tests Themen vorteilhaft.

Abbildung 3 zeigt eine typische 3D-gedruckten arraying Vorlage. Diese Vorlage verwendet lichtempfindliche Harz als Rohstoff und wurde von einem 3D-Drucker gemacht; eine Schicht aus schwarzem Lack wurde angewandt, um einen besseren Kontrast zur Farbe der Embryonen zur Verfügung zu stellen. Die Position von 96 Wells (12 x 8) wurde entwickelt, um mit einer standard 96-Well-Platte passen. Ebenso eine 384 (24 x 16) gut Vorlage könnte auch so konzipiert und hergest...

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zu entwerfen und fertigen eine zebrafischembryo Vorlage, gefolgt von ein detailliertes Verfahren für die Verwendung dieser Vorlage für hohen Durchsatz Zebrafish Embryos Anordnung in einer 96-Well-Platte anordnen.

Eine 3-dimensionale (3D)-gedruckte Vorlage für hohen Durchsatz Zebrafish Embryos anordnen

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related ...

Diese Methode kann das Verfahren zur Anordnung von Zebrafisch-Embryonen erheblich beschleunigen und den Zebrafisch wirklich für das Hochdurchsatz-Screening geeignet machen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die Verwendung einer 3D-gedruckten Schablone, um Zebrafischembryonen in eine 96- oder 384-Well-Matrix zu pre-arrayn, was einen hocheffizienten Plattenvorbereitungsprozess ermöglicht. Wir hatten die Idee für die Methode erst, als wir das Screening von Nanopartikeln durchführten, indem wir einzelne Embryonen manuell in jede Vertiefung einer modularen Platte entnahmen und selektierten, und wollten die Effizienz steigern.Neben Tianyu wird auch sein Doktorandenkollege Yue Jiang das Verfahren vorführen. Beginnen Sie dieses Verfahren mit dem Entwurf der Arraying-Schablone mit einem 96-Well-Layout von zwölf x acht Pixeln, das auf eine standardmäßige 96-Well-Platte passt. Wie im Textprotokoll beschrieben.Verwenden Sie einen 3D-Drucker mit einer Genauigkeit von 0,1 Millimetern, um die Vorlage zu drucken. Einige Schlüsselkomponenten der Schablone sind die Einschlusskammer, die Einschlusswanne, die Vakuumkammer und der Lufteinlass. Um das Laichen der Zebrafischembryonen durchzuführen, tre

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Imaging von zerebrovaskulären Entwicklung in Zebrafisch-Larven beschrieben. Techniken zur 3D-Bildgebung zu erleichtern und zu ändern zerebrovaskuläre Entwicklung mit chemischen Behandlungen sind ebenfalls vorhanden.

Imaging und 3D-Rekonstruktion der zerebrovaskuläre Strukturen in embryonalen Zebrafisch

Die Entwicklung von Zebrafisch kann über Tage mit Licht-Mikroskopie Blatt, wenn Embryonen werden in optisch klare Polymerrohren mit niedriger Konzentration Agarose eingebettet folgen.

Multilayer-Halterung für Langzeit-Licht-Mikroskopie Blatt der Zebrafisch

Hier beschrieben ist ein Protokoll zur halbautomatischen Bilderzeugungsgewebespezifischer Fluoreszenz in Zebrafischembryos.

Semi-Automated Imaging von Gewebespezifische Fluoreszenz-in Zebrafischembryonen

Der Zebrafisch ist eine hervorragende experimentelle Organismus auf wirbelEntwicklungsProzesse und das Modell menschlichen Krankheit zu studieren. Hier ein Protokoll auf, wie man eine manuelle chemische Bildschirm mit hohem Durchsatz in Zebrafischembryonen mit einer führen beschreiben wir ganze-mount in situ Hybridisierung (WISH) ausgelesen.

Ein Handbuch Kleine Molecule Bildschirm Nähern Hochdurch Mit Zebrafischembryonen

Mikroinjektion von Zebrafisch-Embryonen und Larven ist eine entscheidende, aber anspruchsvolle Technik in vielen Modellen der Zebrafisch. Hier präsentieren wir Ihnen eine Reihe von Microscale Tools zur Unterstützung bei der Stabilisierung und Ausrichtung der Zebrafisch für Mikroinjektion und Imaging.

Mikrostrukturierter Apparate für optimierte Mikroinjektion und Imaging von Zebrafischlarven

Hier beschreiben wir eine Methode, um die Größe von Zebrafisch-Embryonen zu reduzieren, ohne die normalen Entwicklungsprozesse zu stören. Diese Technik ermöglicht das Studium der Musterskalierung und der Entwicklungsrobuste gegen Größenwechsel.

Chirurgische Größenreduktion von Zebrafischen für die Erforschung der embryonalen Muster Skalierung

Dieser Artikel beschreibt eine Methode zur Montage zerbrechlicher Zebrafischembryonen für eine längere konfokale Zeitraffermikroskopie. Diese kostengünstige Methode ist einfach mit normalen Glasbodenmikroskopie-Geschirr für die Bildgebung auf jedem invertierten Mikroskop durchzuführen. Die Montage erfolgt in Agaroseschichten in unterschiedlichen Konzentrationen.

Eine geschichtete Montagemethode für die verlängerte Zeitraffer-Konfokalmikroskopie ganzer Zebrafisch-Embryonen

Dieses Protokoll beschreibt einen Ansatz zur In-toto-Markierung und mehrdimensionalen Bildgebung der frühen Augenentwicklung von Zebrafischen. Wir beschreiben die Markierung, Einbettung und vierdimensionale (4D) Bildgebung mit hilfe der konfokalen Laserscanning-Mikroskopie und Überlegungen zur Optimierung der Erfassung von Datensätzen zur Sezierung von Mechanismen der optischen Cup-Morphogenese.

4-dimensionale Bildgebung der Zebrafisch-Optikbecher-Morphogenese

Eine Probenvorbereitungsstrategie für die Abbildung früher Zebrafischembryonen in einem intakten Chorion mit einem Lichtblattmikroskop wird beschrieben. Es analysiert die verschiedenen Orientierungen, die Embryonen innerhalb des Chorions in den 70% Epibolie- und Knospenstadien annehmen, und beschreibt bildgebende Strategien, um mit Hilfe des Lichtblattsystems eine zelluläre Auflösung im gesamten Embryo zu erzielen.

Lichtblattmikroskopie: Bildgebung und Montagestrategien für frühe Zebrafischembryonen

Ein innovatives Verfahren zur Herstellung von mikrofluidischen Geräten mit Polyethylenterephthalat (PET)-Laminierung reduziert die Kosten und die Komplexität des Einfangens und der Bildgebung mehrerer lebender Zebrafischembryonen erheblich.

Kostengünstige Mikrofluidik-Designs für die Laminierung von Polyethylenterephthalat für die Multiplex-Bildgebung von Zebrafischen

Erfahren Sie die Hochdurchsatz-Anordnung von Zebrafisch-Embryonen mit einer 3D-gedruckten Vorlage für 96-Well-Platten. Diese Methode beschleunigt die Probenvorbereitung erheblich und ermöglicht effizientes Screening in der Entwicklungsbiologie.

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