Autopsie-basierte Wildfisch Gesundheitsprüfung

Die auf Autopsie basierende Bewertung der Fischgesundheit wird verwendet, um die Gesundheit von Wildfischen für die routinemäßige Überwachung, spezifische Studien zum Vergleich von Standorten und als Grundlage für die Gewebeentnahme für eine tiefergehende Analyse zu beurteilen. Fische sind ständig einer Kombination von Stressfaktoren wie komplexen Mischungen aus Chemikalien, Krankheitserregern und Parasiten ausgesetzt. Diese Kombinationen von Stressoren können zu unerwünschten Auswirkungen wie verminderter Krankheitsresistenz, Krebs und Fortpflanzungsversagen führen.

Die demonstrierten Techniken ermöglichen eine standardisierte Bewertung sichtbarer Anomalien und die Entnahme von Blut und Geweben für die Histopathologie, Otolithen für das Alter und Gewebe für andere nachgelagerte Analysen. Zunächst werden wir die routinemäßige autopsiebasierte Beurteilung mit Blut-, Otolithen- und Gewebeentnahme für die Histopathologie an einem Fisch demonstrieren. Die Entnahme der vorderen Niere für Immunfunktionstests und von Leber oder anderem Gewebe für die Genexpression sind Ergänzungen zu dieser Methode, die wir ebenfalls demonstrieren werden.

Es ist wichtig, das Gewebe so schnell wie möglich zu entnehmen, um postmortale Veränderungen zu vermeiden. In der Regel haben wir also einen Fließbandprozess mit zwei bis drei Personen, die Gewebe sammeln, und jemandem, der die Daten aufzeichnet. Heather Walsh und Cheyenne Smith, Doktorandinnen der West Virginia University, und Ryan Braham, ein frischgebackener Doktorand, werden die verschiedenen Schritte des Prozesses demonstrieren.

Nach dem Sammeln und Einschläfern der Fische gemäß den institutionellen Richtlinien werden die Fische gewogen und gemessen und eine Blutprobe entnommen. Messen Sie dann die Gesamtlänge des Fisches von der Spitze der Schnauze bis zum Ende des Schwanzes. Führen Sie eine Spritze mit drei CC mit einer zuvor mit Heparin beschichteten 22- oder 23-Gauge-Nadel vor dem kaudalen Bereich unterhalb der Seitenlinie ein.

Winkeln Sie den Bedarf nach oben, bis er auf die Wirbelsäule trifft, und ziehen Sie ihn leicht zurück, um eine Blutprobe zu erhalten. Bevor Sie die Blutprobe in ein Entnahmeröhrchen überführen, entfernen Sie die Nadel und legen Sie sie in einen Behälter für scharfe Gegenstände. Bei Tagesausflügen kann das Blut bis zur Rückkehr ins Labor auf nassem Eis aufbewahrt werden.

Dann wird es zentrifugiert, um das Plasma zu entfernen, das bis zur Analyse bei minus 80 Grad Celsius gelagert wurde. Wenn Sie nicht jeden Tag ins Labor zurückkehren, ist eine Zentrifuge und eine Trockeneislagerung erforderlich. Dokumentieren Sie als Nächstes alle äußeren Anomalien oder Läsionen am Körper, an den Flossen, Augen und Kiemen des Fisches.

Untersuchen Sie den Fisch auf äußere Parasiten wie Blutegel, Engerlinge, Trematoden-Metazerkarienzysten und Kiemenparasiten. Öffnen Sie dann mit einer Schere die Bauchhöhle vom Analbereich bis zum Operculum. Entferne den Muskellappen, um die inneren Organe freizulegen.

Untersuchen Sie die inneren Organe und dokumentieren Sie allgemeine und fokale Verfärbungen, das Vorhandensein von erhabenen Bereichen, Zysten, Parasiten und Größenanomalien. Um die Leber zu entfernen, durchtrennen Sie anschließend die Leberarterie und das Bindegewebe des vorderen Endes. Heben Sie die Leber vorsichtig aus dem Schlachtkörper und schneiden Sie alle Verwachsungen und Verbindungen zu Darm und Fett ab, wobei Sie darauf achten, die Gallenblase nicht zu durchstechen.

Wiegen Sie die Leber. Ermitteln Sie dann den hepatosomatischen Index, wie er im Textprotokoll beschrieben ist. Als nächstes entfernst du die Gonaden und wiegst sie.

Schneiden Sie vorsichtig, ohne zu ziehen, kleine Gewebeproben aus. Geben Sie die Gewebeproben eines Fisches in denselben Behälter. Schneiden Sie anschließend mindestens fünf, drei bis vier Millimeter dicke Stücke aus verschiedenen Regionen der Leber ab und legen Sie sie in den Fixierbehälter.

Je nach Größe legst du eine ganze Gonade oder Stücke einer Gonade in den Fixierbehälter. Lege dann kleinere ganze Organe und Stücke anderer größerer Organe in den Fixierbehälter. Wenn abnormales Gewebe beobachtet wird, bewahren Sie ein zusätzliches benachbartes Stück normalen Gewebes auf.

Zahlreiche Strukturen wie Schuppen, Flossenstrahlen und Otolithen können zur Alterung von Fischen verwendet werden. Hier verwenden wir Otolithen, da sie am genauesten sind. Schneiden Sie zuerst den Kiemenisthmus durch und beugen Sie den Kopf nach hinten.

Um die prootische Bulla zu lokalisieren, entfernen Sie dann das Binde- und Muskelgewebe um die unteren Teile des Neurokraniums. Verwende einen Knochenschneider, um die prootische Bulla zu knacken und die Otolithen freizulegen. Die Otolithen sollten mit bloßem Auge sichtbar sein.

Legen Sie die Otolithen in ein beschriftetes, unverschlossenes Fläschchen und lagern Sie sie bei Raumtemperatur, bis eine Altersanalyse durchgeführt werden kann. Die Exposition gegenüber zahlreichen Chemikalien und anderen Umweltstressoren kann zu Immunsuppression führen. Aus diesem Gewebe können Lymphozyten, Makrophagen und Granulozyten isoliert werden und im Labor kann ihre Fähigkeit gemessen werden, Krankheitserreger abzutöten, Antikörper zu produzieren, auf Tumorzellen zu reagieren und andere Funktionen zu messen.

Mit steriler Schere, Skalpell und Pinzette wird das vordere Nierengewebe entfernt. Legen Sie die vordere Nierenprobe in das geeignete Medium, um die Zellen am Leben zu erhalten. Verwenden Sie einen sterilen Handwolf, um die Probe in Einzelzellsuspensionen zu homogenisieren.

Und halten Sie die Proben auf nassem Eis. Für die RNA-Konservierung legen Sie zwei bis drei kleine Leberstücke in das geeignete Konservierungsmittel in einem Verhältnis von 10 zu eins zwischen Konservierungsmittel und Gewebe. In dieser Studie wurden Weiße Saugnäpfe aus drei besorgniserregenden Gebieten der Großen Seen (AOCs) und dem Referenzstandort Kewanee River gesammelt.

Der Anteil der Fische mit externen Tumoren reichte von 15,5 % im St. Louis AOC bis 58 % im Milwaukee AOC. Es wurden verschiedene Arten von äußeren Läsionen beobachtet, darunter diskrete weiße Flecken, leicht erhabene mukoide Läsionen und große papillomatöse Läsionen. Viele der diskreten weißen Flecken und mukoiden Läsionen, die in dieser Studie beobachtet wurden, insbesondere an der Kewanee-Referenzstelle, waren hyperplastische Läsionen im Gegensatz zu Neoplasien.

Die histopathologische Analyse identifizierte auch Lebertumoren, die mit visueller Beobachtung nicht identifizierbar waren. Einmal gemeistert, kann diese Technik in 15 bis 20 Minuten pro Fisch durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Wenn Sie dieses Verfahren ausprobieren, ist es wichtig zu wissen, was für Ihre spezielle Spezies normal ist, und bei der Beschreibung von Anomalien so konsistent und genau wie möglich zu sein.

Fügen Sie Größe, Farbe, Textur und Standort hinzu. Eine Fotodokumentation ist sinnvoll. Diese Technik kann für jede Fischart verwendet werden und ist nützlich, um die Gesundheit der Fische sowohl räumlich als auch zeitlich zu dokumentieren, um die nachteiligen Auswirkungen von Umweltstressoren besser zu verstehen und invasive Krankheiten zu identifizieren.