Blatt-Spray-Massenspektrometrie: Eine schnelle Ambient Ionisation Technik direkt Metaboliten von Pflanzengewebe bewerten

Leaf Spray MS ist eine schnelle Methode zur qualitativen und semiquantitativen Analyse von intaktem Pflanzengewebe, die eine Vielzahl von Anwendungen hat. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass pflanzliches Gewebe direkt analysiert werden kann, ohne dass eine Probenvorbereitung erforderlich ist. Diese Methode bietet zwar gute Einblicke in die Mesembrinalkaloide aus Sceletium, kann aber auch für die Analyse verschiedener anderer Pflanzenarten und exogener Chemikalien wie Pestizide verwendet werden.

Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, können eine Herausforderung darstellen, da es notwendig ist, das Protokoll für jede Pflanzenart, jeden Gewebetyp und jede Verbindung von Interesse zu optimieren. Verwenden Sie eine modifizierte Nano-Sprühquelle für Blattspray MS.As keine fluidischen Komponenten für Blattsprüh-MS erforderlich sind, modifizieren Sie die Quelle, indem Sie die Flüssigkeitschromatographiesonde von der Quelle entfernen. Der Blattsprüh-Massenspektrometrie-Draht, der eine Spannung an das Pflanzengewebe anlegt, hat an einem Ende einen Stift, der mit dem Draht verlötet wurde, und eine Klemme, die am anderen Ende gelötet wurde.

Wenn das System kürzlich in Betrieb war, lassen Sie es abkühlen, bevor Sie eine alternative Quelle im Sweep-Konus entfernen. Befestigen Sie dann das Nanospray Leaf Spray MS-Quelle. Erstellen Sie abschließend eine Tune-Datei und eine Methodendatei, wie im Textprotokoll beschrieben.

Tragen Sie immer Handschuhe und verwenden Sie kein Pflanzengewebe, das mit bloßen Händen angefasst wurde. Andernfalls dominieren Verunreinigungsionen wie Polyethylenglykol die Spektren. Bringen Sie das Pflanzengewebe für die Analyse in den gleichen Raum wie das Massenspektrometriesystem, um eine schnelle Probenahme zu ermöglichen.

Bei Pflanzengewebe, das keine von Natur aus spitze Spitze hat, verwende eine Rasierklinge auf einem Objektträger, um eine spitz zulaufende Spitze zu schneiden. Schneiden Sie die Blätter von Sceletium tortuosum 10 Wochen nach der Keimung in dünne Streifen mit jeweils einem spitz zulaufenden Ende, um eine Spitze zu bilden. Wählen Sie mit einer Pinzette vorsichtig das Pflanzengewebe am Ende aus, das eingespannt werden soll.

Halten Sie das Gewebe mit einer Pinzette fest und übertragen Sie es vorsichtig in die Klemme. Stellen Sie den flexiblen Arm und den Draht mit der Klemme ein, um das Gewebe in einer Linie mit dem MS-Einlass zu positionieren. Im Text finden Sie den optimalen Abstand vom Ioneneintritt für jedes spezifische Massenspektrometer.

Erzeugen die ersten Versuche eine geringe Signalintensität, kann das Pflanzengewebe näher an den Ioneneingang gerückt werden. Laden Sie die Methodendatei. Benennen Sie die Datendatei und legen Sie den Speicherort der Datei fest.

Schalten Sie dann das MS-System ein, indem Sie auf Play und dann auf Start klicken, um mit der Datenerfassung zu beginnen. Tragen Sie ein Lösungsmittel mit einer Pipette mit einer Gelladespitze auf, um den Abstand zwischen der Hochspannung und den Händen des Benutzers zum Schutz zu maximieren. Erfassen Sie Daten, solange das Signal anhält oder bis die entsprechenden Spektren erfasst wurden, in der Regel 30 bis 60 Sekunden.

Stoppen Sie die Datenerfassung und pausieren Sie das MS-System. Entfernen Sie nach der Aufnahme das Taschentuch und waschen Sie die Klemme mit 100%Methanol in einem fusselfreien Tuch. Öffnen Sie die Datendatei, und überprüfen Sie das Chronogramm der Basis-Spitzenmasse visuell.

Überprüfen Sie, ob die Signalintensität etwa 10 Millionen bis 500 Millionen beträgt. Erstellen Sie eine neue Methodendatei mit einer Einschlussliste von M über Z bis zu vier Dezimalstellen. Klicken Sie auf globale Listen und Inklusion.

Wählen Sie unter Eigenschaften von PRM die Fragmentierungsenergie und andere Tandem-MS-Parameter aus. Um die Tandem-MS-Daten für Mesembrinalkaloide zu erhalten, fragmentieren Sie die Ionen bei 276,1583 M über Z, 290,1742 M über Z und 292,1897 M über Z bei einer normierten Kollisionsenergie von 35. Laden Sie als Nächstes die Tandem-MS-Methodendatei und eine benannte Datendatei.

Schalten Sie das MS-System ein und beginnen Sie mit der Datenerfassung, indem Sie bei Bedarf ein Lösungsmittel hinzufügen. Wenn ausreichende Spektren gesammelt wurden, in der Regel nach 30 bis 60 Sekunden, stoppen Sie die Erfassung. Führen Sie die Datenanalyse durch, wie im Textprotokoll beschrieben.

Repräsentative Ergebnisse der metabolischen Profilierung von Sceletium tortuosum mittels Blattspray-MS und positiver Ionisation sind mit einem Ausschnitt von 260 bis 295 M über Z.In dieser Studie wurden insgesamt neun Mesembrinalkaloide durch Blattspray-MS nachgewiesen und puditive Identifizierungen vorgenommen. Das Massenchronogramm der Blattspray-MS stellt ein erfolgreiches Blattspray-MS-Experiment dar, bei dem ein stabiles Signal über die gesamte Dauer der Aufnahme aufrechterhalten wurde. Für jeden Peak ist die obere Zahl die Zeit in Minuten und die untere die M über Z. Tandem-Massenspektren wurden in positiver Ionisation aus einem Sceletium tortuosum geschnittenen Blatt mit Blattspray MS gesammelt. Die öffentliche Identifizierung der Alkaloide erfolgte durch genaue Massen- und Massenfragmentierung für Mesembrin M und Mesembrenon M Isomere, Mesembrin und Mesembrin M Dihydro.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie Blattspray MS zum Nachweis von Pflanzenmetaboliten verwenden können. Das Blattspray MS wird verwendet, um sowohl endogene Verbindungen als auch exogene Verbindungen wie Pestizide nachzuweisen.