Name: Toluidin blauer Färbung Harz eingebettet Abschnitte für die Beurteilung der Morphologie der peripheren Nerven (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Lernen Sie die Toluidinblau-Färbung harzeingebetteter Schnitte zur Untersuchung peripherer Nervenmorphologie. Diese Methode ermöglicht hochauflösende Bildgebung von Axonen und Myelinisierung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren möchten Thankthe Jenkins-Mikroskopie-Anlage an der University of Wyoming für ihre Hilfe und die Mitglieder des Bushman Lab, Kelly Roballo, Hayden wahr, Wupu Osimanjiang und Subash Dhunghana, um Unterstützung bei der Pflege der Tiere. Diese Publikation wurde durch eine institutionelle Development Award (IDeA) aus dem National Institute of General Medical Sciences von den National Institutes of Health unter Grant # 2P20GM103432 ermöglicht.

Erwachsene Sprague-Dawley Ratten wurden in diesem Projekt verwendet und alle Verfahren wurden von der University of Wyoming institutionelle Tierpflege und Use Committee genehmigt.
1. Chirurgie und In Vivo -Nerv-Fixierung
Hinweis: Herstellerinformationen für alle Materialien und Geräte verwendet, die in diesem Protokoll finden Sie in der Tabelle der Materialien.
Hinweis: In Vivo Nerv Fixierung wird verwendet, um das Gewebe zu bewahren und reduzieren strukturelle Verschlechterung, die zwischen dem Zeitpunkt des Todes und Sammlung der Nerven auftreten können. In Vivo Gewebe Fixierung ist ein Standardverfahren für die Vorbereitung des Nervensystems Gewebe für Histologie, wo die Perfusion ist oft eine Vorstufe dazu. Die Anordnung und Größe der peripheren Nerven, die für in-situ Fixierung erlaubt. Wir empfehlen nicht Sammlung und Fixierung des Gewebes nach Euthanasie durch die Möglichkeit der Schädigung von Gewebe.
<ol><li>Die Ratte für die Vollnarkose vorbereiten, indem man sie in eine Kammer Induktion mit 2-3 % Isofluran, dann die narkotisierten Ratte in Bauchlage auf der Oberseite eine Dissektion Matte und auch bleiben bei 1-2 % der Isofluran über Narkose bugnase. Um ausreichende Tiefe der Narkose zu gewährleisten, testen Sie Tiere für Pedal Rückzug auf die Hinterfüße zu und überprüfen Sie das Fehlen von palpebrale Reflexe an den Augen durch Berühren der medialen Augenwinkel des Auges. Hinweis: Intraperitoneale Injektion von Ketamin ist eine häufig verwendete Alternative zu inhalierten Isofluran.</li>
	<li>Um den Ischiasnerv freizulegen, rasieren Sie die Haare von den Hind limb(s) und reinigen Sie die rasierten Bereiche mit 70 % Ethanol. Mit einem Skalpell oder einer Schere, machen einen 2-3 cm Einschnitt in die Haut entlang der hinteren Gliedmaßen vom Knie bis zu den Trochanter Major, wo Palpation des Oberschenkelknochens mit dem sterilen Skalpell um die richtige Position des Schnittes zu gewährleisten. Das Femur befindet sich nur auf das zugänglichste Segment des Nervus ischiadicus proximal. Obwohl dies eine Operation nicht überleben wird, pflegen Sie sterile Techniken.</li>
	<li>Nach dem vornehmen der hautinzision, suchen Sie das Flugzeug zwischen den Muskel Bizeps Femoris und den Musculus Muskel, und mit Mikrodissektion Schere trennen die zugrunde liegenden Faszie und setzen 2-3 cm des Nervus ischiadicus unterstreichen. Um eine klare Abschnitt des n. ischiadicus verfügbar zu machen, verwenden Sie einen Retraktor, um die Kluft zwischen den beiden Muskeln (Abbildung 1A) zu vergrößern. Trennen Sie mit feinen Zangen und Iris Schere vorsichtig den Nerv aus den umliegenden Bindegewebes, unter größter Sorgfalt nicht zu komprimieren oder Schnitten den Nerv.</li>
	<li>Fügen Sie ausreichend Trump Fixativ (4 % Formaldehyd, 1 % Glutaraldehyd mit 1 X PBS-Puffer (Phosphat gepufferte Kochsalzlösung) mit 1,16 g NaH2PO4· H2O pro 100 mL) in den Hohlraum mit exponierten Nervs Nervus abdecken und 10 Minuten ruhen lassen. Wenn nötig, Platz Gaze unter der Hind Bein, um den Winkel zu verbessern, so dass mehr Fixiermittel in den Hohlraum hinzugefügt werden kann. Entfernen Sie das Fixiermittel nach 10 Minuten und wiederholen Sie diesen Schritt zwei weitere Male.</li>
	<li>Mit einem sezierenden Mikroskop schnitten den Nerv von beiden Seiten mit feinen Dissektion Schere, sicherstellen, dass nicht zu dehnen oder zu kneifen der Ischiasnerv und sofort die Nerven-Abschnitte in 15 mL Röhrchen mit Trumps Fixiermittel bei 4 ° C für eine Woche, Ändern der Fixiermittel alle 48 h.</li>
	<li>Nicht unbeaufsichtigt lassen Tiere während eines Teils des chirurgischen Eingriffs. Nach der Entfernung des Nervs einschläfern Sie Tiere durch zervikale Dislokation unter Narkose.</li>
</ol>(2) Osmium ausgefällt Behandlung und Harz einbetten
<ol><li>Post-Fixierung, sorgfältig entfernen Sie alle verbleibenden Fett und Bindegewebe vom Nerv und mit einem scharfen Skalpell schnitten den Nerv in Segmente ca. 5 mm in der Länge (Nerv Segmente getrennt und in verschiedene Leitungen gekennzeichnet werden können). Bereiten Sie frische 2 % Osmium ausgefällt in Trumps Fixativ Lösung verdünnt und halten in einer Glasröhre. Tauchen Sie Nerven Segmente in 2 % Osmium ausgefällt für 2 h, die im Kunststoff-Rohre für diesen kurzen Zeitraum der Zeit sein kann. Hinweis: Einige Kunststoffrohre reagieren mit Osmium ausgefällt, verursacht eine Verdunkelung der Lösung, daher längerer Lagerung von Osmium ausgefällt in Kunststoffrohren nicht empfohlen.</li>
	<li>Mit einer Epoxy Einbettung mittlere Kit, bereiten Sie die endgültige Einbettungs-Formel:<ol>
<li>Mischen Sie das Epoxidharz einbetten Medium mit DDSA-Lösung (Dodecenylsuccinic-Anhydrid; Mischung A) und mischen Sie das Epoxidharz einbetten Medium mit NMA-Lösung (Methylnadic-Anhydrid; Mischung B). Lassen Sie beide Mischungen, die A und B mindestens 20 min durch Rühren mit einem Magnetrührer mischen.</li>
		<li>Unmittelbar vor der Anwendung mischen Sie A und B-Mischung und fügen Sie das Gaspedal DPM-30 (2,4,6-tris(dimethylaminomethyl)phenol) im Verhältnis von 1,5 bis 2,0 % des Gesamtvolumens des Gemisches. Beachten Sie, dass die DPM-30 Lösung gemessen werden sollte, gerade um zu verhindern, dass den Block immer dunkel in der Farbe und spröde. Alle Harz-Chemikalien sind giftig; seien Sie besonders vorsichtig, Hautkontakt oder Inhalation zu verhindern.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mit 1,5 mL-Tuben, Nerv Segmenten mit PBS waschen und die Austrocknung zu starten, indem man die Nerv Segmenten in verschiedenen Aceton/destilliertes Wasser Passagen: 30 %, 60 %, 90 %, Konzentrationen für 10 min, dann in 100 % Aceton 3 Mal für 10 Minuten.  Beachten Sie, dass Ethanol anstelle Aceton verwendet werden kann.</li>
	<li>Platzieren Sie für Harz Infiltration den Nerv Segmenten in einer Mischung aus 1 Teil der abschließenden Einbettung Mischung und 1 Teil 100 % Aceton für 30 min, dann in einer Mischung aus 2 Teilen der abschließenden Einbettung Mischung und 1 Teil 100 % Aceton für 30 min , und schließlich der Nerv im Finale Segmenten Platz Einbettung Mischung für 30 Minuten.</li>
	<li>Silikon-Kautschuk Einbettung Formen die Nerv Segmenten umgesetzt (wir haben 106 mm Länge x 71 mm Breite x 7 mm Tiefe verwendet; Blocklänge Größe 11 mm x 6 mm Breite x 3 mm Tiefe). Fügen Sie sanft das Harz auf die Nerven, und achten Sie auf decken die gesamten Nerv Segmenten und verhindern, dass Luftblasen. Lassen Sie die Form mit Nerv Segmenten mit dem Harz über Nacht bei 60 ° C polymerisieren.</li>
</ol>3. Schnitt durch regungsloses
<ol><li>Bereiten Sie Glas Messer mit einer Glas-Messermacher (Abbildung 1 b) und machen Sie Glas Messer mit Booten (Abbildung 1), die verwendet werden, auf das destillierte Wasser schwimmenden Nerv zu sammeln.</li>
	<li>Ort Harz eingebettet Nervenblockaden in regungsloses Halter mit der trapezförmige Seite nach oben. Mit regungsloses Rahmen, kein überschüssiges Harz rund um das Nervengewebe zu trimmen, und den Block eine Trapezform Gesicht und möglichst nahe an der längs-Oberfläche des Nervs wie möglich mit einer einseitig geschliffenen Klinge wie eine Rasierklinge. Dringen Sie nicht längs Oberfläche des Segments Nerv, die erkennbar durch seine dunkle Färbung von Osmium ausgefällt. Hinweis: Trimmen des überschüssigen Harzes verringert sich das Gebiet des Harzes werden geschnitten und Leistung der Blade und schneiden in den nachfolgenden Schritten verbessern.</li>
	<li>Mit der regungsloses stellen Sie mehrere Querschnitte ausreichend, um eine gleichmäßige Querschnitt Oberfläche des Nervengewebes mit einem einfachen Glas-Messer verfügbar zu machen. Sobald dies geschehen ist, wechseln Sie zu einem Glas Messer, dessen Schiff mit destilliertem Wasser bei Raumtemperatur gefüllt ist, und passen Sie die regungsloses, 1-2 μm dünne Abschnitte geschnitten.</li>
	<li>Übertragen Sie schwimmende Dünnschliffe aus dem Glas-Messer-Boot zu einem Rückgang von entionisiertem Wasser auf Objektträger mit Metallöse (Abbildung 1). Trocknen Sie Folien mit Abschnitten, indem man mehrere Male über einer Flamme für ein paar Sekunden, und achten Sie nicht auf die Abschnitte zu überhitzen. Getrocknete Teile sofort mit Toluidin blauer Fleck oder für mehrere Tage vor der Färbung bei Raumtemperatur lagern. Hinweis: Abschnitte können auch mit einer Warmhalteplatte bei 60 ° C für 15 min getrocknet werden. Eine langsame Trocknung macht die Abschnitten glatt.</li>
</ol>4. Toluidin blauer Färbung
<ol><li>Bereiten Sie 1 % ige Lösung von Toluidin blau durch 2 g Natrium Borat in 100 mL entionisiertem Wasser auflösen dann fügen Sie 1 g Toluidin blau hinzu und rühren Sie, bis aufgelöst. Filtern Sie die Lösung mit Filterpapier (Porengröße: 11 µm) und halten Sie die Lösung in eine undurchsichtige Flasche bei Raumtemperatur bis zu zwei Wochen.</li>
	<li>Mit einem Kunststoff-Pipette oder Mikro-Pipette, einen Tropfen Toluidin blau Lösung oben auf der Nerv-Abschnitte und lassen für 20-30 s.</li>
	<li>Spülen Sie alle überschüssige Toluidin blau-Lösung durch die Folien in entionisiertem Wasser Glas sanft eintauchen und wiederholen Sie 3-4 Mal, bis Abschnitte klar sind. Trocknen Sie die Folien mindestens 15 min bei 60 ° C oder über Nacht bei Raumtemperatur und dann bedecken Sie die Abschnitte mit einem deckgläschen mit regelmäßigen Eindeckmedium. Untersuchen Sie die gerahmten Dias sofort oder bei Raumtemperatur lagern.</li>
	<li>Überprüfen Sie unter einem Lichtmikroskop. A 100 X Öl Immersion-Objektiv empfiehlt sich für detaillierte Bilder verwendet, um g-Werte zu berechnen.</li>
</ol>

<ol><li>Zacchigna, S., Ruiz de Almodovar, C., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similarities+between+angiogenesis+and+neural+development%3A+What+small+animal+models+can+tell+us%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Similarities between angiogenesis and neural development: What small animal models can tell us.</a> Current Topics in Developmental Biology. 80, 1-55 (2008).</li>
<li>Grinsell, D., Keating, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+nerve+reconstruction+after+injury%3A+A+review+of+clinical+and+experimental+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Peripheral nerve reconstruction after injury: A review of clinical and experimental therapies.</a> BioMed Research International. 2014, 1-13 (2014).</li>
<li>Chen, M. B., Zhang, F., Lineaweaver, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luminal+fillers+in+nerve+conduits+for+peripheral+nerve+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Luminal fillers in nerve conduits for peripheral nerve repair.</a> Annals of Plastic Surgery. 57 (4), 462-471 (2006).</li>
<li>Scipio, F., Raimondo, S., Tos, P., Geuna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+protocol+for+paraffin-embedded+myelin+sheath+staining+with+osmium+tetroxide+for+light+microscope+observation%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Research+and+Technique%22%5BJournal%5D)">A simple protocol for paraffin-embedded myelin sheath staining with osmium tetroxide for light microscope observation.</a> Microscopy Research and Technique. 71, 497-502 (2008).</li>
<li>Raimondo, S., Fornaro, M., Di Scipio, F., Ronchi, G., Giacobini-Robecchi, M. G., Geuna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+5%3A+Methods+and+protocols+in+peripheral+nerve+regeneration+experimental+research%3A+part+II-morphological+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Neurobioly%22%5BJournal%5D)">Chapter 5: Methods and protocols in peripheral nerve regeneration experimental research: part II-morphological techniques.</a> International Review of Neurobioly. 87, 81-103 (2009).</li>
<li>Carriel, V., Garzon, I., Alaminos, M., Campos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+myelin+sheath+and+collagen+reorganization+pattern+in+a+model+of+peripheral+nerve+regeneration+using+an+integrated+histochemical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of myelin sheath and collagen reorganization pattern in a model of peripheral nerve regeneration using an integrated histochemical approach.</a> Histochemistry and Cell Biology. , 709-717 (2011).</li>
<li>Sridharan, G., Shankar, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toluidine+blue%3A+A+review+of+its+chemistry+and+clinical+utility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Pathology%22%5BJournal%5D)">Toluidine blue: A review of its chemistry and clinical utility.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 16, 251-255 (2012).</li>
<li>Epstein, J. B., Scully, C., Spinelli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toluidine+blue+and+Lugol%27s+iodine+application+in+the+assessment+of+oral+malignant+disease+and+lesions+at+risk+of+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Toluidine blue and Lugol's iodine application in the assessment of oral malignant disease and lesions at risk of malignancy.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. 21, 160-163 (1992).</li>
<li>Carriel, V., Garzon, I., Alaminos, M., Cornelissen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+assessment+in+peripheral+nerve+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Histological assessment in peripheral nerve tissue engineering.</a> Neural Regeneration Research. 9, 1657-1660 (2014).</li>
<li>Dykstra, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDykstra%2C+MJ+%22A+manual+of+applied+techniques+for+biological+electron+microscopy%22">A manual of applied techniques for biological electron microscopy</a>. , Plenum. New York. 257(1993).</li>
<li>Vleggeert-Lankamp, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+evaluation+methods+in+the+assessment+of+peripheral+nerve+regeneration+through+synthetic+conduits%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">The role of evaluation methods in the assessment of peripheral nerve regeneration through synthetic conduits: A systematic review.</a> Journal of Neurosurgery. 107 (6), 1168-1189 (2007).</li>
<li>Williams, P., Wendell-Smith, C. P., Finch, A., Stevens, G. <a target="_blank" href="http://jcs.biologists.org/content/joces/s3-105/69/99.full.pdf">Further uses and methods of processing of fresh frozen sections of peripheral nerve.</a> Journal of Cell Science. 3 (69), 99-105 (1964).</li>
<li>Castro, J., Negredo, P., Avendaño, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+composition+of+the+rat+sciatic+nerve+and+its+modification+during+regeneration+through+a+sieve+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Fiber composition of the rat sciatic nerve and its modification during regeneration through a sieve electrode.</a> Brain research. , 65-77 (2008).</li>
<li>Raimondo, S., Fornaro, M., Di Scipio, F., Ronchi, G., Giacobini-Robecchi, M. G., Geuna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+and+protocols+in+peripheral+nerve+regeneration+experimental+research%3A+Part+II-morphological+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22International+review+of+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Methods and protocols in peripheral nerve regeneration experimental research: Part II-morphological techniques.</a> International review of neurobiology. 87, 81-103 (2009).</li>
<li>Bozkurt, A., Lassner, F., O'Dey, D., Deumens, R., Böcker, A., Schwendt, T., Janzen, C., Suschek, C. V., Tolba, R., Kobayashi, E., Sellhaus, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microstructured+and+interconnected+pore+channels+in+a+collagen-based+nerve+guide+on+axonal+regeneration+in+peripheral+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The role of microstructured and interconnected pore channels in a collagen-based nerve guide on axonal regeneration in peripheral nerves.</a> Biomaterials. 33 (5), 1363-1375 (2012).</li>
<li>Weis, J., Brandner, S., Lammens, M., Sommer, C., Vallat, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processing+of+nerve+biopsies%3A+A+practical+guide+for+neuropathologists%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Neuropathology%22%5BJournal%5D)">Processing of nerve biopsies: A practical guide for neuropathologists.</a> Clinical Neuropathology. 31 (1), 7-23 (2012).</li>
<li>Battiston, B., Tos, P., Geuna, S., Giacobini-Robecchi, M. G., Guglielmone, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+repair+by+means+of+vein+filled+with+muscle+grafts.+II.+Morphological+analysis+of+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Nerve repair by means of vein filled with muscle grafts. II. Morphological analysis of regeneration.</a> Microsurgery. 20 (1), 37-41 (2000).</li>
<li>Bhattacharyya, T. K., Thomas, J. R. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1179/his.2004.27.3.161">Comparison of staining methods for resin-embedded peripheral nerve.</a> Journal of Histotechnology. 27, 161-164 (2004).</li>
<li>Zbaeren, J., Zbaeren-Colbourn, D., Haeberli, A. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1179/his.2007.30.1.27">High-resolution immunohistochemistry on improved glycol methacrylate-resin sections.</a> Journal of Histotechnology. 30 (1), 27-33 (2007).</li>
<li>Alturkistani, H. A., Tashkandi, F. M., Mohammedsaleh, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+stains%3A+A+literature+review+and+case+study%5BTitle%5D)+AND+%22Global+Journal+of+Health+Science%22%5BJournal%5D)">Histological stains: A literature review and case study.</a> Global Journal of Health Science. 8 (3), 72-79 (2016).</li>
<li>Ezra, M., Bushman, J., Shreiber, D., Schachner, M., Kohn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+and+nonporous+nerve+conduits%3A+the+effects+of+a+hydrogel+luminal+filler+with+and+without+a+neurite-promoting+moiety%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Porous and nonporous nerve conduits: the effects of a hydrogel luminal filler with and without a neurite-promoting moiety.</a> Tissue Engineering Part A. (9-10), 818-826 (2016).</li>
<li>Bhatnagar, D., Bushman, J. S., Murthy, N. S., Merolli, A., Kaplan, H. M., Kohn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+glue+as+a+stabilization+strategy+in+peripheral+nerve+repair+when+using+porous+nerve+guidance+conduits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Science%3A+Materials+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fibrin glue as a stabilization strategy in peripheral nerve repair when using porous nerve guidance conduits.</a> Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 28 (5), 79(2017).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte.

Untersuchungen der morphologischen Strukturen der periphere Nervenverletzung und Regeneration sind häufige Themen der Studie13. In diesem Protokoll beschreiben wir die Schritte, um Bilder in hoher Qualität für histologische Daten Quantifizierungen mit Ratte Ischias-Nervengewebe eingebettet in Harz Blöcken und gefärbt mit Toluidin blau zu erhalten. Diese Technik bietet ein Bild der Nerv Morphologie der Nervenregeneration durch Messung der Zahl von Axonen, Grad der Myelinisierung, Vorhandensein von ...

Periphere Nerven erstrecken sich im ganzen Körper, innervieren Zielgeweben mit motorischen oder sensorischen Axonen1. Periphere Nerven Mängel verursacht durch Erkrankungen und Trauma eine große Gesundheitsproblem darstellen und haben große wirtschaftliche Auswirkungen2,3. Trotz der Fortschritte bei der Bewertung der Ergebnisse der peripheren Nervenverletzungen und Verständnis Nervenregeneration sind traditionelle Methoden wie Nerven Histologie und Färbetechniken wesentliche Instrumente, um qualitativ und quantitativ Nerven Gesundheit bewerten als terminal Ausgang Maß in Tiermodellen oder ausgeschnittenen menschliches Gewebe. Dies ist oft mit elektrophysiologische Messungen der peripheren Nervenfunktion, gepaart wo Morphometrie offenbaren kann, warum funktionelle Nervenregeneration habe oder nicht auftreten.
Toluidin blauer Färbung der Harz eingebettet Semi-dünne periphere Nerven Abschnitte ist eine spezielle Methode für imaging Markhaltige Nervenfasern, qualitativ hochwertige und klare detaillierte Bilder von Nerv Strukturen4,5,6 . Toluidin blau ist ein acidophilen metachromatic Fleck, von William Henry Perkin im Jahre 18567, entdeckt und wurde in mehreren medizinischen Anwendungen8verwendet. Toluidin blau gefärbten peripheren Nerven Abschnitte gewonnenen Harz eingebettet Nerv Segmenten ermöglicht eine übersichtliche Visualisierung von Nervenstrukturen. Visualisierung der Myelinscheide Struktur kann durch die Verwendung von Osmium ausgefällt Post-Fixierung4,9verbessert werden. Osmium ausgefällt ist eine toxische Oxidationsmittel und Lipid Fixativ Agent, die Interaktion mit den Doppelbindungen in Lipiden, was zu krass definierten lipidreichen Myelinscheiden10. Jedoch Osmium ausgefällt ist giftig, teuer, erfordert eine längere Inkubationszeit der Nerv Segmenten und wird nicht immer verwendet.
Zur Visualisierung der peripheren Nerven Morphologie wurden alternative Methoden der Verarbeitung und Färbung entwickelt; Paraffin, Kryo-Schnitt und Epoxy-Harz eingebettet Nerv Schnitt gefolgt von Färbungen mit Toluidin blau oder Phenylendiamin Lösung verwendet wurde, um morphologische Veränderungen der peripheren Nerven Regeneration 11,12 zu quantifizieren . Jede dieser Methoden haben ihre vor- und Ertragsdaten wesentlich von der Anzahl der Axone, Myelin Dicke, Axon Durchmesser und Axon Durchmesser Markhaltige Faser Durchmesser (g-Wert) 11,13,14,15 .
Der primäre Unterschied der Harz-Einbettung in diesem Protokoll ist, dass es 1-2 μm Dicke Querschnitte aufgrund der Härte des Harzes erleichtert unter Beibehaltung der histologischen Eigenschaften des Nervs zu erhalten. Diese dünne Abschnitte, im Gegensatz zu den 4-5 μm Dicke Abschnitte von Paraffin einbetten, erhalten bieten peripheren Nerven Abschnitte mit höherer Auflösung, so dass für eine genaue Quantifizierung der Axon Myelinisierung, wie der g-Wert, die nicht aus dickeren Abschnitte16gewonnen. Während Kryo-Schnitt verwendet werden kann um 1-2 µm Abschnitte zu erhalten, ist es unserer Erfahrung gewesen, ist es schwieriger, ohne zahlreiche große Risse zu bekommen. Solche Risse Abschnitte kann ungenau zählen die Anzahl der Axone und Aspekte der Myelinisierung.
Neben Toluidin Blau Färbung17eine silberne Färbung Methode18 und Masson trichrome Färbung4 auch einsetzbar, Nervenzellen Axone zu zeigen. Jedoch gebeizt mit Harz Einbettung der Ratte n. medianus Abschnitte mit Hämatoxylin und Eosin oder Masson trichrome zeigte schwache Myelinscheiden und unbekannte Strukturen, während Toluidin blauer Färbung klar Myelinscheide Bild zeigte und kann leicht quantifizierte4sein. Trotz einiger Einschränkungen Toluidin blauer Färbung Harz eingebettet peripheren Nerven ist eine wertvolle Technik, die verwendet werden kann, wenn Bilder mit hoher Auflösung der Nerv Morphologie erforderlich sind.
Der primäre Nachteil für die Einbettung von Harz ist, dass es zeitaufwendig ist und nicht für Immunostaining des gleichen Gewebes aufgrund der Schwierigkeiten der Antigen-Retrieval gegenüber Paraffin und eingebettete Gefrierschnitte Techniken zu ermöglichen. So kann es nicht im Allgemeinen das gleiche Gewebe für Immunostaining zu nutzen, die über Harz-Einbettung für Toluidin blauer Färbung verarbeitet wird. Obwohl nicht verwendet hier ggf. Immunohistochemistry im Harz eingebettete Abschnitte, die Verwendung von Glykol Methacrylat Einbettung Harze ermöglicht Immunohistochemistry Gewebeschnitte ausgeführt werden, aber es ist relativ teuer19. Dies kann etwas gemildert durch Einschneiden der peripheren Nervs, separate Segmente, einige für die Einbettung von Harz und andere für Immunostaining direkt nach der Fixierung.
Der Prozess der Toluidin blauer Färbung Harz eingebettet periphere Nerven, wie mit die meisten histopathologische Analyse in fünf Stufen, einschließlich Fixierung, Austrocknung, einbetten, schneiden und färben20unterteilt werden kann. Hier wollen wir ein Protokoll und einen praktischen Leitfaden für die Verwendung von Harz eingebettete Ratte Ischiasnerv Abschnitte gebeizt mit Toluidin blau erwerben Bilder in hoher Qualität bieten.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco's Phosphat Buffer Kochsalzlösung</td><td>Gibco</td><td>14200-075</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyd</td> Lösung <td>Sigma-Aldrich</td><td>G6257</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Natriumphosphat Monobasisches Monohydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638</td><td></td></tr><tr><td>Toluidinblau o</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3260</td><td></td></tr><tr><td>Natriumtetraborat-Decahydrat</td><td>Acros Organics</td><td>205950010</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal</td><td>NDC 66794-013-25</td><td></td></tr><tr><td>Epoxid-Einbettmedium Kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>45359</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydroxidlösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>72068</td><td>Zur Einstellung von Trumps Fixiermittel pH</td></tr><tr><td>Aceton Fisher</td><td>Chemical 170942</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Osmium-Tetroxid-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75632</td><td></td></tr><tr><td>VWR Micro Slides, Superfrost Plus</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop-Deckglas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12545102</td><td></td></tr><tr><td>Pelco Embedding Cast</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9671811</td><td></td></tr><tr><td>Glass Knife Maker</td><td>RMC Products</td><td>GKM-2</td><td></td></tr><tr><td>Ultramikrotom</td><td>RMC Products</td><td>MT-XL</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Konisches Röhrchen</td><td>Falcon</td><td>ISO 9001</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9661</td><td></td></tr><tr><td>4 mL Glasfläschchen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>854190</td><td></td></tr><tr><td>Rasierklingen</td><td>VWR</td><td>55411-050</td><td>Zum Trimmen von Harzblöcken</td></tr><tr><td>Perfect Loop</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>70944</td><td>Zum Aufnehmen dünner Harzschnitte</td></tr><tr><td>Ultra Glass Messerstreifen 6,4 mm x 25 mm x 400 mm</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>71012</td><td></td></tr><tr><td>100 Watt</td><td>Ofenmillipore</td><td></td><td></td>6350115</tr><tr><td>Whatman Filterpapier</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA10010155</td><td></td></tr><tr><td>3 mL Kunststoffpipette</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z331740</td><td></td></tr><tr><td>Mikrochirurgie-Kit</td><td>World precision instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Olympus Fluoreszenzmikroskop</td><td></td><td></td><td>Dual-CCD-Farb- und Monochromkamera, DP80</td></tr></tbody></table>

toluidin blauer färbung harz eingebettet abschnitte für die beurteilung der morphologie der peripheren nerven

Toluidine Blue Staining of Resin-Embedded Sections for Evaluation of Peripheral Nerve Morphology

Periphere Nerven erstrecken sich im ganzen Körper, innervieren Zielgeweben mit motorischen oder sensorischen Axonen. Aufgrund der weiten Verbreitung sind periphere Nerven häufig wegen Verletzung oder Krankheit beschädigt. Methoden und Strategien entwickelt wurden, um periphere Nervenverletzung in Tiermodellen, Funktion und Regeneration, bewerten analysieren die Morphometrie der peripheren Nerven ein wesentliches Ergebnis der terminal-Messung geworden ist. Toluidin blauer Färbung des Nervs Kreuz Abschnitte gewonnenen Harz eingebettet Nerv Abschnitte ist eine reproduzierbare Methode für die qualitative und quantitative Beurteilung der peripheren Nerven, ermöglicht die Visualisierung der Morphologie Anzahl der Axone und Grad der Myelinisierung. Diese Technik kann wie bei vielen anderen histologischen Methoden schwierig sein zu erlernen und zu beherrschen, mit schriftlichen Standardprotokolle. Die Absicht dieser Veröffentlichung ist daher um schriftliche Protokolle für Toluidin blauer Färbung der peripheren Nerven mit Videografie von der Methode, bei der Ischias Nerven geerntet von Ratten zu betonen. In diesem Protokoll beschreiben wir in Vivo peripheren Nerven Fixierung und Sammlung der Gewebe und Post-Fixierung mit 2 % Osmium ausgefällt, Einbettung von Nerven in Epoxidharz und regungsloses Nerven 1-2μm Dicke schneiden. Nerv Abschnitte dann auf einen Objektträger übertragen und gefärbt mit Toluidin blau, woraufhin sie quantitativ und qualitativ bewertet werden. Beispiele für die häufigsten Probleme sind sowie Schritte zur Eindämmung dieser Probleme angezeigt.

Harz eingebettet peripheren Nerven Abschnitte mit Toluidin blau gebeizt für genaue histologische Daten Quantifizierungen ermöglichen. Ein Überblick über das Verfahren zeigt (Abbildung 2). Ischias-Nerven-Abschnitte in Harz Medium eingebettet und befleckt mit Toluidin blau zeigte klare Bilder mit einer optimalen Auflösung (Abb. 3). Nervenschäden kann viele Veränderungen in Nervenzellen morphologische Strukturen, z. B. Veränderungen der Nervenfa...

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um die feinen Strukturen des peripheren Nerven visualisieren und 1-2 µm Abschnitte mit Toluidin blauer Färbung

Toluidin blauer Färbung Harz eingebettet Abschnitte für die Beurteilung der Morphologie der peripheren Nerven

Peripheral nerves extend throughout the body, innervating target tissues with motor or sensory axons. Due to widespread distribution, peripheral nerves ...

Diese Methode könnte dazu beitragen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet der Schädigung und Regeneration des peripheren Nervs zu beantworten, z. B. wie ist die Morphometrie eines peripheren Nervs, wie viele Axone sind vorhanden, wie ist der Zustand der Myelinisierung und ist fibrotisches Gewebe vorhanden? Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine hochauflösende Visualisierung von Nervenmerkmalen ermöglicht. Beginnen Sie damit, eine betäubte Ratte in Bauchlage auf eine Seziermatte zu legen.Platzieren Sie einen Nasenkonus, um die Anästhesie mit 1-2% Isofluran aufrechtzuerhalten. Um eine ausreichende Narkosetiefe zu gewährleisten, werden die Tiere auf Pedalrückzug und Lidreflexe der Hinterfüße getestet. Sobald eine angemessene Narkosetiefe erreicht ist, rasieren Sie die Haare der Hintergliedmaßen und sterilisieren Sie die rasierten Bereiche mit 70% Ethanol.Palpieren Sie den Oberschenkelknochen, um die richtige Stelle für den Schnitt zu identifizieren. Der Femur befindet sich genau proximal des am besten zugänglichen Segments des Ischiasnervs. Nachdem Sie einen zwei bis drei Zentimeter langen Schnitt in der Haut entlang der hinteren Extremität vom Knie bis zum Trochanter major gemacht haben, lokalisieren Sie die Ebene zwischen dem Musculus biceps femoris und dem Musculus gluteus maximus.Trennen Sie dann mit einer Mikrodissektionsschere die darunterliegende Faszie und legen Sie zwei bis drei Zentimeter des darunter liegenden Ischiasnervs frei. Verwenden Sie einen Retraktor, um den Abstand zwischen den beiden Muskeln zu vergrößern. Trennen Sie mit einer feinen Pinzette und einer Irisschere den Nerv vorsichtig vom umgebenden Bindegewebe und achten Sie darauf, den Nerv nicht zu komprimieren oder zu durchtrennen.Bedecken Sie anschließend den freiliegenden Nerv mit Trumps Fixativ und lassen Sie ihn 10 Minuten einwirken. Legen Sie bei Bedarf Gaze unter das Hinterbein, um den Winkel zu verbessern, damit mehr Fixiermittel in die Kavität gegeben werden kann. Entfernen Sie das Fixiermittel nach 10 Minuten und wiederholen Sie diesen Schritt noch zwei weitere Male.Schneiden Sie unter dem Präpariermikroskop den Ischiasnerv von beiden Seiten mit einer feinen Präparierschere ab und achten Sie darauf, den Nerv nicht zu dehnen oder einzuklemmen. Legen Sie die Nervenabschnitte sofort in 15-ml-Röhrchen mit Trumps Fixiermittel und fixieren Sie es eine Woche lang bei vier Grad Celsius, wobei Sie das Fixiermittel alle 48 Stunden wechseln. Entfernen Sie nach der Fixation vorsichtig das restliche Fett und Bindegewebe vom Nerv und schneiden Sie den Nerv mit einem scharfen Skalpell in etwa fünf Millimeter lange Segmente.Nervensegmente können in verschiedene markierte Röhren unterteilt werden. Tauchen Sie Nervensegmente zwei Stunden lang in frisch zubereitetes 2%Osmiumtetroxid. Bereiten Sie mit einem Epoxid-Einbettungsset die endgültige Einbettmischung vor.Mischen Sie das Epoxid-Einbettmedium mit der DDSA-Lösung und mischen Sie das Epoxid-Einbettmedium mit der NMA-Lösung. Mischen Sie beide Lösungen mindestens 20 Minuten lang mit einem Magnetrührer. Kombinieren Sie unmittelbar vor der Verwendung den DPM-Beschleuniger mit Lösung B, und kombinieren Sie diesen dann mit Lösung A, sodass der endgültige Anteil des Beschleunigers zwischen einem Komma fünf und 2 % des Gesamtvolumens liegt.Übertragen Sie die Nervensegmente auf einen Punkt fünf Milliliter Röhrchen und beginnen Sie nach dem Waschen mit PBS den Dehydratisierungsprozess, indem Sie das PBS durch steigende Konzentrationen von Aceton und destilliertem Wasser für jeweils 10 Minuten ersetzen, dann dreimal für jeweils 10 Minuten in 100% Aceton. Ein kritischer Schritt ist die Dehydrierung des Gewebes. Wasser und Harz interagieren nicht, so dass das im Gewebe verbleibende Wasser nicht vom Harz infiltriert wird und Löcher im Schnitt ohne histologische Eigenschaften hinterlässt.Für die Harzinfiltration legen Sie zunächst die Nervensegmente 30 Minuten lang in eine Eins-zu-Eins-Mischung aus Einbettmischung und 100%igem Aceton. Übertragen Sie die Segmente nach 30 Minuten für 30 Minuten auf eine Zwei-zu-Eins-Mischung aus Einbettmischung und 100 % Aceton. Platzieren Sie die Nervensegemente in Silikonkautschuk-Einbettungsformen und geben Sie das Harz vorsichtig auf die Nerven, wobei Sie darauf achten, dass das gesamte Nervensegment bedeckt ist und Luftblasen vermieden werden.Lassen Sie das Harz über Nacht bei 60 Grad Celsius polymerisieren. Platzieren Sie einen Harzblock mit eingebettetem Nerv mit der trapezförmigen Seite nach oben in den Ultramikrotomhalter. Verwenden Sie beim Betrachten durch das Ultramikrotom-Zielfernrohr eine einschneidige Klinge, um überschüssiges Harz zu entfernen, das das Nervengewebe umgibt.Dringen Sie nicht in die Längsoberfläche des Nervensegments ein, die an der dunklen Verfärbung mit Osmiumtetroxid erkennbar ist. Machen Sie mit einem einfachen Glasmesser auf dem Ultramikrotom mehrere Querschnitte, um eine gleichmäßige Querschnittsoberfläche des Nervs freizulegen. Sobald dies erledigt ist, wechseln Sie zu einem Glasmesser, wobei das Boot mit destilliertem Wasser bei Raumtemperatur gefüllt ist, und stellen Sie das Ultramikrotom auf ein bis zwei Mikrometer ein, um dünne Schnitte zu schneiden.Verwenden Sie eine Metallschlaufe, um schwimmende Dünnteile vom Glasmesserboot auf einen Tropfen deionisiertes Wasser auf einem Glasobjektträger zu übertragen. Ein weiterer kritischer Schritt ist die Übertragung des Dünnschliffs vom Glasmesser auf den Objektträger. Diese dünnen Schnitte sind sehr zerbrechlich und können brechen oder sich falten.Trocknen Sie die Abschnitte auf den Objektträgern, indem Sie die Folie mehrmals über eine Flamme führen, wobei Sie darauf achten, dass die Abschnitte nicht überhitzen. Objektträger können mehrere Tage bei Raumtemperatur gelagert werden, wenn sie nicht sofort mit Toluidinblau gefärbt werden. Um die Nervenabschnitte zu färben, verwenden Sie eine Plastikpipette oder Mikropipette, um einen Tropfen Toluidinblau-Lösung auf die Oberseite der Nervenabschnitte zu geben.Spülen Sie nach 20 bis 30 Sekunden alle überschüssigen Toluidinblau-Lösungen ab, indem Sie die Objektträger vorsichtig in ein Glas mit entionisiertem Wasser tauchen und dies drei- bis viermal wiederholen, bis die Abschnitte klar sind. Trocknen Sie die Objektträger mindestens 15 Minuten bei 60 Grad Celsius oder über Nacht bei Raumtemperatur. Nach dem Trocknen normales Eindeckmedium hinzufügen und die Abschnitte mit einem Deckglas abdecken.Untersuchen Sie abschließend die montierten Sektionen unter einem Lichtmikroskop. Für detaillierte Bilder zur Berechnung der g-Verhältnisse wird eine 100-fache Ölimmersionslinse empfohlen. Ischiasnervenabschnitte, die in Harzmedium eingebettet und mit Toluidinblau gefärbt waren, zeigten klare Bilder mit optimaler Auflösung bei Erhöhung der Vergrößerung von 10X auf 20X, 40X und 60X.Diese Methode bewahrt die Nervenstruktur und ermöglicht eine hochauflösende Bildgebung mit hoher Vergrößerung, die die Messung mehrerer Parameter erleichtert, wie z. B. des g-Verhältnisses, das das Verhältnis des Axondurchmessers, angezeigt durch den Pfeil mit der Bezeichnung B, zum Gesamtfaserdurchmesser mit der Bezeichnung A. Eine Vielzahl von Faktoren kann zu nicht optimalen peripheren Nervenabschnitten führen, einschließlich des Vorhandenseins von Rissen in dem Abschnitt aufgrund unsachgemäßer Handhabung des Nervs. Auch durch unzureichende Dehydrierung können Löcher in der Sektion entstehen. Ein weiterer möglicher Fehler im Verfahren ist das Falten der Sektionen, was durch die Verwendung von Impfösen für die Übertragung der Profile auf den Objektträger behoben werden kann.Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie die Axonquantifizierung durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, z. B. wie hoch ist der Regenerationsgrad in einem regenerativen Nerv? Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie ein bis zwei Mikrometer lange periphere Nervenschnitte erhalten, um die Nervenmorphometrie zu beurteilen.

toluidine-blue-staining-resin-embedded-sections-for-evaluation

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Eine Kombination verschiedener Techniken, um die Datenerfassung von der Maus Gewebe zu maximieren wird vorgestellt.

Die Kombination lipophiler Farbstoff, In situ Hybridisierung, Immunhistochemie und Histologie

Immunzytochemische Identifizierung der peripheren sensorischen Nervenfasern Subtypen (und Detektion von Protein-Expression darin) sind der Schlüssel zum Verständnis der molekularen Mechanismen, die periphere Empfindung. Hier beschreiben wir Methoden für die Herstellung von peripheren / viszeralen Gewebeproben, wie Haut-und Gliederschmerzen Knochen, für spezifische Immunfärbung der peripheren sensorischen Nervenfasern.

Tissue Vorbereitung und Immunfärbung von Maus sensorischen Nervenfasern innervieren Haut und Limb Bones

Dieses Video demonstriert die Färbetechnik von in Harz eingebetteten, mit Osmiumtetroxid behandelten peripheren Nervenschnitten von Ratten mit Toluidinblau. Die gefärbten Nervenabschnitte helfen dabei, die feinen Strukturen der peripheren Nerven sichtbar zu machen.

Toluidinblau-Färbung von peripheren Nervenabschnitten: Eine Technik zur Färbung myelinisierter Nervenfasern für die Visualisierung der peripheren Nervenstruktur

Um die Änderungen des nozizeptiven intraepidermal Nervenfasern (IENFs) in schmerzhafte Neuropathie (PN) zu untersuchen, haben wir Protokolle, die direkt untersuchen könnte dreidimensionalen morphologischen Veränderungen in nozizeptiven IENFs beobachtet. Dreidimensionale Analyse IENFs hat das Potenzial, um die morphologischen Veränderungen in IENF PN bewerten.

Dreidimensionale Bildgebung Nozizeptive Intraepidermale Nervenfasern im menschlichen Hautproben

Techniken zur Visualisierung von retinalen Zytoarchitektur direkt an einzelnen Elektroden innerhalb eines Retina-Stimulator.

Techniken für die Verarbeitung Augen mit einem Netzhautprothese für lokalisierte Histopathologische Analyse Implantierte

Riech ensheathing Zellen (OECs) sind Neuralleistenzellen, die das Wachstum der primären Riechzellen zu ermöglichen. Diese spezielle Eigenschaft kann für die zelluläre Transplantation verwendet werden. Wir stellen hier ein Modell der zellulären Transplantation basierend auf der Verwendung von OECs in einer Kehlkopfnervenschädigung-Modell.

Transplantation von olfaktorischen Zellen ensheathing zu Funktionswiederherstellung nach peripheren Nervenschäden Bewerten

Das Protokoll für die dynamische Längs Bildgebung und Selective Laser Läsion des Nervenenden in Reporter-transgenen Mäusen wird vorgestellt.

In-vivo Zwei-Photonen-Mikroskopie einzelner Nervenenden in der Haut

Demyelinisierende Krankheiten können bei Tieren durch fokale Anwendung von Lysolecithin in das ZNS modelliert werden. Eine einzige Injektion von Lysolecithin in das Rückenmark der Maus führt zu einer Läsion, die sich im Laufe der Zeit spontan repariert. Ziel ist es, Faktoren zu untersuchen, die an der De- und Remyelinisierung beteiligt sind, und Wirkstoffe zur Verbesserung der Reparatur zu testen.

Experimentelle Demyelinisierung und Remyelinisierung von Murine Rückenmark von Focal Injektion von Lysolecithin

Hier beschreiben wir ein neuartiges Präparat zur Abbildung lebender lanzettlicher sensorischer Enden von Palisadenenden, die Mausohren, Haut, Haarfollikel während des Färbens und Entfärbens mit Styrylpyridiniumfarbstoffen innervieren.

Optische Überwachung der Lebensnervenendigung Beschriften in Haarfollikel Lanceolate Endigungen der<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Maus-Ohr-Haut

Die Kombination von Transmissions-Elektronenmikroskopie und in der Gebärmutter Transduktion ist ein leistungsfähiger Ansatz für das Studium der morphologischer Veränderungen in den feinen Ultrastruktur des Nervensystems während der Entwicklung. Diese kombinierte Methode ermöglicht tiefe Einblicke in Änderungen in Strukturdetails Neuroplastizität in Bezug auf ihre topographische Darstellung zugrunde liegen.

Bewertung der Ultrastrukturforschung Neuroplastizität Parameter nach In Utero Transduktion von Entwicklungsländern Mausgehirn und Rückenmark

Wir beschreiben Fluoreszenz-Photoaktivierungsmethoden zur Analyse des axonalen Transports von Neurofilamenten in einzelnen myelinierten Axonen peripherer Nerven von transgenen Mäusen, die ein photoaktivierbares Neurofilamentprotein exprimieren.

Bildgebung und Analyse des Neurofilamenttransports in verbraucheten Maus-Tibialnerv

Lernen Sie die Toluidinblau-Färbung harzeingebetteter Schnitte zur Untersuchung peripherer Nervenmorphologie. Diese Methode ermöglicht hochauflösende Bildgebung von Axonen und Myelinisierung.

Toluidin blauer Färbung Harz eingebettet Abschnitte für die Beurteilung der Morphologie der peripheren Nerven

Weitere Videos entdecken