Name: Ein pulmonaler Stamm Streifenbildung Modell der Drucküberlastung induzierte rechtsventrikuläre Hypertrophie und Versagen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Lernen Sie eine chirurgische Methode zur Induktion von rechtsventrikulärer Hypertrophie und Versagen bei Ratten. Diese Technik ermöglicht präzise und reproduzierbare Nachlaststeigerung zur Untersuchung von Herzinsuffizienzmechanismen.

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Diese Arbeit wurde von The Danish Council für unabhängige Forschung [11e108410], der dänischen Herzstiftung [12e04-R90-A3852 und 12e04-R90-A3907] und die Novo Nordisk Stiftung [NNF16OC0023244] unterstützt.

Alle Ratten wurden nach dänischen nationalen Richtlinien in das dänische Gesetz über Tierversuche und ministerielle Verordnung von Tierversuchen beschrieben behandelt. Alle Experimente wurden von der institutionellen Ethik Review Board genehmigt und im Einklang mit dem dänischen Gesetz für Tierforschung (RMA-Nummer 2012-15-2934-00384, dänischen Ministerium für Justiz).
1. Anpassung der Ligation Clip Klammer
Hinweis: Die Streifenbildung des pulmonalen Rumpfes erfolgt mit einer modifizierten offen selbstligierendes Clip Präger mit einem abgewinkelten Kiefer. Die Klammer wird modifiziert, mit einem verstellbaren Anschlag-Mechanismus, die Kompression zu beenden, wenn die Kiefer exakte Abstände voneinander zu erreichen. Wenn eine kleine Titan Ligation Clip mit der modifizierten Präger komprimiert wird, besteht ein Lumen zwischen die Beine des Clips mit einem bestimmten Durchmesser je nach Einstellung des Stopp-Mechanismus (Abbildung 1).
<ol><li>Wählen Sie den Durchmesser der gewünschten Banding, z.B., 0,6 mm.</li>
	<li>Stellen Sie die Ligation Clip Klammer der Abstand zwischen den Backen 1,0 mm bei vollständig komprimiert. Dies lässt ein Lumen von 0,6 mm, wie die zwei Clips Beine eine Dicke von 0,2 mm haben.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58050/58050fig1.jpg"> Abbildung 1: die PTB Verfahren. (A) die chirurgische Instrumente für die PTB-Verfahren einschließlich der Ligation Clip Klammer (blauer Pfeil). (B) die einstellbaren Anschlag Mechanismus der die Ligation clip Klammer. Drehen das Zahnrad (blauer Pfeil) passen die Position des Stiftes (gelber Pfeil), der das Schließen der Klammer hält, wenn der Kiefer einen bestimmten Abstand voneinander zu erreichen. Der Abstand entspricht zweimal die Dicke der Beine des Clips und der Innendurchmesser des Clips, wenn der Clip komprimiert ist und kann z.B. durch Verwendung einer Nadel mit einem bekannten Außendurchmesser kalibriert werden. (C) komprimiert die Klammer einen Titan-Clip zu einem genauen Innendurchmesser vorgegeben durch Anpassung der die Klammer. (D) der innere Durchmesser des komprimierten Clips kann eingestellt werden, um verschiedene Schweregrade von RV-Hypertrophie und Misserfolg zu induzieren. Für die vorgelegten Daten ein Innendurchmesser von 1,0 mm wurde verwendet, um milde RV-Hypertrophie zu induzieren, ein Innendurchmesser von 0,6 mm wurde verwendet, um moderate RV-Versagen zu induzieren und ein Innendurchmesser von 0,5 mm wurde verwendet, um schwere RV-Versagen zu induzieren. (E) den Clip nach dem Auftragen um den pulmonalen Stamm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58050/58050fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
2. Vorbereitung der Ratte
Hinweis: Andere Therapien von Analgetika können angewendet werden.
<ol><li>Verwenden Sie Wistar Ratten Jungtiere mit einem Gewicht von ca. 100 – 120 g. Um Körpertemperatur während der Operation zu erhalten, verwenden Sie eine überdachte Heizkissen.</li>
	<li>Verwenden Sie für die Chirurgie einen mechanischen Entlüfter auf eine Tidal volume von etwa 1,75 mL und Atemfrequenz von 75 / min eingestellt.</li>
	<li>Betäuben Sie die Ratte mit Sevofluran (7 %-Mix in 1,5 L O2) in einer Induktion Kammer für 5 Minuten. Intubation die Ratte mit einem 17 G IV Kanüle, wo die distalen 2 mm der Nadel sind abgeschnitten worden in Reihenfolge für die weiche Katheter um die Spitze zu decken. Entfernen Sie die Nadel und verbinden Sie die Kanüle mit den Ventilator.</li>
	<li>Legen Sie die Ratte auf seinem Rücken auf das Heizkissen. Stellen Sie sicher, dass die Intubation korrekt ist, durch die Beobachtung der Bewegungen des Brustkorbs. Diese sollte ohne Seite Unterschiede und im Tempo mit dem Ventilator. Hinweis: Fehlen von Bewegungen des Thorax, Bauch Kontraktionen und Inflation des Magens im linken Oberbauch sind Anzeichen für ein verlegtes Rohr. Entfernen der Kanüle, setzen Sie die Ratte wieder in die Induktion Kammer und erneute Intubation.</li>
	<li>Nach dem korrekten Intubation, reduzieren die Sevofluran Wartung Konzentration (3,5 % Mischung in O2, 1,5 L/min) und die Pfoten der Ratte, das Heizkissen zu beheben.</li>
	<li>Bestätigen Sie Prober Anesthetization durch Überprüfung Rückzug Reflexe der Extremitäten mit einer Pinzette, um die Pfoten der Ratte zu quetschen.</li>
	<li>Die Ratten mit Buprenorphin zu injizieren (0,1 mg/kg subkutan (s.c.)) und Carprofene (5 mg/kg s.c.), postoperative Schmerzen zu lindern.</li>
	<li>Die Brust zu rasieren und desinfizieren mit Chlorhexidin.</li>
</ol>3. Isolation der pulmonalen Kofferraum
<ol><li>Machen Sie mit einer Schere einen 2 cm Schnitt in die Haut entlang der mittlere Teil des Brustbeins. Identifizieren Sie dem großen Brustmuskel zu und schneiden Sie ihr sternale festhalten. 2Nd, 3rdund 4th Costa unten zu identifizieren.</li>
	<li>Optional greifen Sie 2Nd Costa mit einer Fixierung Pinzette, setzen eine Naht (4: 0, Multifilament, resorbierbaren) nahe der 2Nd Costa vom 1St Intercostalneuralgie Raum mit dem medialen Unterteil 2Nd Intercostalneuralgie Platz. Knoten Sie einen festen um die vorderen Brust-Arterie zu verbinden. Hinweis: Dies kann nützlich sein, wenn Blutungen aus der vorderen Brust-Arterie ein wiederkehrendes Thema ist.</li>
	<li>Schneiden Sie 4th, 3rdund 2Nd Costa in der Nähe des Brustbeins mit der Schere und sezieren Sie sorgfältig die Zwischenrippenmuskeln zu, bis eine komplette linke Thorakotomie durchgeführt wurde. Tritt eine Blutung aus der vorderen Brust-Arterie, mit einem europäischen komprimieren Sie und verbinden Sie die Arterie.</li>
	<li>Legen Sie einen Retraktor zwischen dem Brustbein und der besteht und zu öffnen Sie, um eine gute Operationsfeld zu bekommen. An der Spitze des Feldes ist die Thymusdrüse in der Aorta und der pulmonalen Stamm. Sorgfältig mit einem europäischen Thymus heben Sie und drehen Sie sie nach oben um die Aorta und die pulmonale Stamm unten offen zu legen.</li>
	<li>
Führen Sie die Spitze des einen kleinen chirurgischen Hooklet mit 85° Winkel durch den transversalen Herzbeutel Sinus befindet sich hinter der linken atrial Appendage. Ziehen Sie es auf halbem Weg zurück durch den Sinus und führen Sie die Spitze des Ohrbügels nach oben, bis es zwischen der Aorta ascendens und der pulmonalen Stamm erscheint.
	<ol>
<li>Entfernen Sie alle Bindegewebe über die Spitze mit einer Iris-Schere um den pulmonalen Stamm aus der Aorta ascendens zu trennen.</li>
		<li>Wiederholen Sie den Schritt mit einem größeren Haken (optional).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Führen Sie eine abgewinkelte Muskel Zange um den pulmonalen Stamm durch die Passage mit der Hook(s) gemacht. Schnappen Sie sich am Ende eine ca. 10 cm Ligatur (4-0, Multifilament) und ziehen Sie die Hälfte der Ligatur zurück durch die Passage. Jetzt die pulmonale Stamm ist getrennt von der Aorta ascendens und gesteuert werden, indem die Ligatur um ihn herum.</li>
</ol>4. Anwendung des Clips
<ol><li>Die bereinigte selbstligierendes Clip Klammer mit einem Clip zu laden. Führen Sie eines der Kiefer und einem Bein des Clips vorsichtig aber den Durchgang um den pulmonalen Stamm. Verwenden Sie die Ligatur um die pulmonale Stamm nach oben und in die Gabel des Clips ziehen.</li>
	<li>Wenn der pulmonale Stamm in der Gabel des Clips ist und die beiden Spitzen der Clip Beine frei von jeder Bindegewebe sind, komprimieren Sie den Clip mit der Klammer, die Streifenbildung anzuwenden.</li>
	<li>Beobachten Sie, wie die RV sofort als Reaktion auf die Streifenbildung weitet und entfernen Sie die Ligatur zu.</li>
</ol>5. Abschluss des Thorax
<ol><li>Entfernen Sie die europäischen aus dem Thymus und positionieren Sie Thymus an seiner natürlichen Position neu zu. Entfernen Sie die Aufrollvorrichtung.</li>
	<li>Schließen Sie den Brustkorb in drei Schichten: die Intercostalneuralgie Schicht, dem großen Brustmuskel und die Haut mit Naht (4-0, Multifilament, resorbierbaren). Spritzen Sie 2 mL Kochsalzlösung s.c., während der Operation verlorene Flüssigkeit zu ersetzen.</li>
	<li>Die Sevofluran ausschalten und und halten Sie die Ratte auf den Ventilator (1,5 L von O2) bis es beginnt spontan atmen. Dann Extubate der Ratte.</li>
	<li>Die Ratten mit Buprenorphin in das Trinkwasser für die folgenden drei Tage14 zu behandeln oder ein vergleichbares analgetische Protokoll anwenden. Nach drei Tagen die Ratten erholt haben und ohne Beschwerden.</li>
	<li>In den folgenden Wochen sollte das Wohlergehen der Ratten und mögliche Nebenwirkungen auf einer täglichen Basis bewertet werden. Die Heilung der Wunde von der Thorakotomie sollte besondere Aufmerksamkeit während der ersten Woche erhalten, um irgendwelche Anzeichen einer Infektion oder Insuffizienz der Narben zu erkennen. Wenn die Ratten einer Gedeihstörung einschließlich borstigen Fell, eingeschränkter Mobilität, Atmungsprobleme und Gewichtsverlust Anzeichen, sie sollten engmaschig überwacht und eingeschläfert, wenn sie mehr als 20 % ihres Körpergewichts verlieren oder entwickeln fulminante Atemwege Insuffizienz.</li>
</ol>6. Sham Chirurgie
<ol><li>Führen Sie eine Schein-OP folgen all die oben genannten Schritte, außer für die Anwendung des Clips (Schritt 4).</li>
</ol>

<ol><li>Kaufman, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+profiling+of+left+and+right+ventricular+hypertrophy+in+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Failure%22%5BJournal%5D)">Genomic profiling of left and right ventricular hypertrophy in congenital heart disease.</a> Journal of Cardiac Failure. 14 (9), 760-767 (2008).</li>
<li>Zungu-Edmondson, M., Suzuki, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+stress+response+mechanisms+in+right+and+left+ventricles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Rare+Diseases+Research+%26+Treatment%22%5BJournal%5D)">Differential stress response mechanisms in right and left ventricles.</a> Journal of Rare Diseases Research & Treatment. 1 (2), 39-45 (2016).</li>
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<li>de Raaf, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SuHx+rat+model%3A+partly+reversible+pulmonary+hypertension+and+progressive+intima+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">SuHx rat model: partly reversible pulmonary hypertension and progressive intima obstruction.</a> The European Respiratory Journal. 44 (1), 160-168 (2014).</li>
<li>Gomez-Arroyo, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocrotaline+model+of+pulmonary+hypertension+in+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 302 (4), L363-L369 (2012).</li>
<li>Bogaard, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+pulmonary+artery+pressure+elevation+is+insufficient+to+explain+right+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Chronic pulmonary artery pressure elevation is insufficient to explain right heart failure.</a> Circulation. 120 (20), 1951-1960 (2009).</li>
<li>Borgdorff, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sildenafil+enhances+systolic+adaptation%2C+but+does+not+prevent+diastolic+dysfunction%2C+in+the+pressure-loaded+right+ventricle%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Sildenafil enhances systolic adaptation, but does not prevent diastolic dysfunction, in the pressure-loaded right ventricle.</a> European Journal of Heart Failure. 14 (9), 1067-1074 (2012).</li>
<li>Mendes-Ferreira, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+right+ventricle+remodeling+in+response+to+pressure+overload+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Distinct right ventricle remodeling in response to pressure overload in the rat.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 311 (1), H85-H95 (2016).</li>
<li>Piao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inhibition+of+pyruvate+dehydrogenase+kinase+improves+impaired+cardiac+function+and+electrical+remodeling+in+two+models+of+right+ventricular+hypertrophy%3A+resuscitating+the+hibernating+right+ventricle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The inhibition of pyruvate dehydrogenase kinase improves impaired cardiac function and electrical remodeling in two models of right ventricular hypertrophy: resuscitating the hibernating right ventricle.</a> Journal of Molecular Medicine. 88 (1), 47-60 (2010).</li>
<li>Hirata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Model+of+Pulmonary+Artery+Banding+Leading+to+Right+Heart+Failure+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Novel Model of Pulmonary Artery Banding Leading to Right Heart Failure in Rats.</a> BioMed Research International. 2015, 753210(2015).</li>
<li>Schou, U. K., Peters, C. D., Kim, S. W., Frøkiær, J., Nielsen, S. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0939860006000186">Characterization of a rat model of right-sided heart failure induced by pulmonary trunk banding.</a> Journal of Experimental Animal Science. 43 (4), 237(2007).</li>
<li>Andersen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+bisoprolol+and+losartan+treatment+in+the+hypertrophic+and+failing+right+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Failure%22%5BJournal%5D)">Effects of bisoprolol and losartan treatment in the hypertrophic and failing right heart.</a> Journal of Cardiac Failure. 20 (11), 864-873 (2014).</li>
<li>Holmboe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inotropic+Effects+of+Prostacyclins+on+the+Right+Ventricle+Are+Abolished+in+Isolated+Rat+Hearts+With+Right-Ventricular+Hypertrophy+and+Failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inotropic Effects of Prostacyclins on the Right Ventricle Are Abolished in Isolated Rat Hearts With Right-Ventricular Hypertrophy and Failure.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 69 (1), 1-12 (2017).</li>
<li>Jessen, L., Christensen, S., Bjerrum, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antinociceptive+efficacy+of+buprenorphine+administered+through+the+drinking+water+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The antinociceptive efficacy of buprenorphine administered through the drinking water of rats.</a> Lab Anim. 41 (2), 185-196 (2007).</li>
<li>Andersen, A., Povlsen, J. A., Botker, H. E., Nielsen-Kudsk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Right+ventricular+hypertrophy+and+failure+abolish+cardioprotection+by+ischaemic+pre-conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Right ventricular hypertrophy and failure abolish cardioprotection by ischaemic pre-conditioning.</a> European Journal of Heart Failure. 15 (11), 1208-1214 (2013).</li>
<li>Fujimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+Cardiac+Output+Leads+Hepatic+Fibrosis+in+Right+Heart+Failure+Model+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Low Cardiac Output Leads Hepatic Fibrosis in Right Heart Failure Model Rats.</a> PloS one. 11 (2), e0148666(2016).</li>
<li>Marques, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-fat+diet-induced+obesity+Rat+model%3A+a+comparison+between+Wistar+and+Sprague-Dawley+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Adipocyte%22%5BJournal%5D)">High-fat diet-induced obesity Rat model: a comparison between Wistar and Sprague-Dawley Rat.</a> Adipocyte. 5 (1), 11-21 (2016).</li>
<li>Osadchii, O., Norton, G., Deftereos, D., Woodiwiss, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+strain-related+differences+in+myocardial+adrenergic+tone+and+the+impact+on+cardiac+fibrosis%2C+adrenergic+responsiveness+and+myocardial+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Rat strain-related differences in myocardial adrenergic tone and the impact on cardiac fibrosis, adrenergic responsiveness and myocardial structure and function.</a> Pharmacological Research. 55 (4), 287-294 (2007).</li>
<li>Brower, M., Grace, M., Kotz, C. M., Koya, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+growth+characteristics+of+Sprague+Dawley+rats+obtained+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of growth characteristics of Sprague Dawley rats obtained from different sources.</a> Laboratory Animal Research. 31 (4), 166-173 (2015).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neonatal+rat+model+of+increased+right+ventricular+afterload+by+pulmonary+artery+banding%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A neonatal rat model of increased right ventricular afterload by pulmonary artery banding.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 154 (5), 1734-1739 (2017).</li>
<li>Borgdorff, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+loading+conditions+reveal+various+patterns+of+right+ventricular+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Distinct loading conditions reveal various patterns of right ventricular adaptation.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 305 (3), H354-H364 (2013).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben

Wir beschreiben eine zugänglich und hoch reproduzierbare Methode zur pulmonalen Stamm Streifenbildung mit einer modifizierten selbstligierendes Clip Klammer um einen Titan-Clip um den pulmonalen Stamm komprimieren. Durch die Anpassung der Klammer um den Clip zu unterschiedlichen Innendurchmesser zu komprimieren, können unterschiedliche Phänotypen von RV-Hypertrophie und Ausfall einschließlich schweren RV mit extra kardiale Manifestation der Dekompensation induziert werden.
Trotz ihrer Einfachh...

Der Rechte Ventrikel (RV) kann eine anhaltende Drucküberlastung anpassen. In der Zeit jedoch Anpassungsmechanismen nicht Herzzeitvolumen, stützen die RV weitet und schließlich die RV schlägt fehl. RV-Funktion ist der wichtigste prognostische Faktor für mehrere Herz-Lungen-Erkrankungen einschließlich pulmonaler arterieller Hypertonie (PAH), thromboembolische pulmonale Hypertonie (CTEPH) und verschiedene Formen von angeborenen Herzerkrankungen mit Druck (oder Volumen) Überlastung der RV. Trotz intensiver Behandlung bleibt RV Ausfall eine vorherrschende Ursache des Todes unter diesen Bedingungen.
Aufgrund der einzigartigen Eigenschaften1,2 und Embryonalentwicklung3 des RV werden nicht einfach Erkenntnisse aus Linksherzinsuffizienz, Rechtsherzinsuffizienz extrapoliert. Tiermodelle der Rechtsherzinsuffizienz sind daher notwendig, um die Mechanismen der RV Fehler und mögliche pharmakologische Behandlungsstrategien zu untersuchen.
Es gibt experimentelle Modelle der pulmonalen Hypertonie induziert durch SU5416 kombiniert mit Hypoxie (SuHx)4 oder Monocrotaline (MCT)5, die RV Scheitern sekundär zu Krankheit in der pulmonalen Gefäßsystem zu induzieren. Diese Modelle werden verwendet, um die therapeutischen Wirkungen von Drogen das Ziel der pulmonalen Gefäßsystems bewerten. Die SuHx und die MCT-Modell sind nicht feste Nachlast Modelle der RV-Versagen. Infolgedessen ist es nicht möglich festzustellen, ob eine Verbesserung in der RV-Funktion nach einer Intervention sekundär zu Nachlast-Senkung pulmonalen vaskulären Effekte ist oder ob es durch direkte Auswirkungen auf die RV verursacht wird Darüber hinaus hat das MCT-Modell mehrere extra kardialen Effekte.
In experimentelle pulmonale Stamm Streifenbildung Modelle ist die Nachlast des RV durch eine mechanische Verengung des pulmonalen Kofferraum fixiert. Dies ermöglicht die Untersuchung der direkte kardiale Auswirkungen einer Intervention auf der RV unabhängig von einer pulmonalen vaskulären Effekte6,7,8,9. In der Regel ist die Streifenbildung durchgeführt, indem man eine Nadel entlang der pulmonalen Stamm. Dann ist eine Ligatur um die Nadel und der pulmonalen Stamm gelegt und mit einem Knoten gebunden, und die Nadel wird entfernt, so dass die Naht um den pulmonalen Stamm. Abhängig von der Gradmesser für die Nadel verschiedene Grade von Verengungen können angewendet werden, aber trotz dieser Ansatz wird am meisten benutzt, es hat einige Nachteile. Erstens ist der Durchmesser des die Streifenbildung nicht genau dasselbe wie der Außendurchmesser der Nadel wie die Ligatur um die Nadel und der pulmonalen Stamm gebunden ist. Zweitens gibt es möglicherweise erhebliche Unterschiede, wie eng der Knoten gebunden ist, macht es schwierig, ein gewisses Maß an Streifenbildung zu reproduzieren. Dies führt zu einer Variation Streifenbildung Durchmesser und damit eine größere Streuung. Zu guter Letzt kann der Knoten im Laufe der Zeit lockern.
Eine Studie gilt einen halbgeschlossene Tantal Clip rund um die pulmonale Stamm10. Sie komprimiert den Clip um den pulmonalen Stamm zu einem inneren Bereich von 1,10 mm2 und verglich sie mit Ratten Streifenbildung mit einer Naht mit einer Nadel 18 G ausgesetzt. Alles in allem war die Streifenbildung mit dem Clip mit weniger Peri-operativen Komplikationen und Varianz der Daten in Verbindung gebracht.
Basierend auf den Prinzipien von Schou beschrieben Et Al.11, weiter entwickelt und charakterisiert die pulmonalen Stamm Streifenbildung (PTB) Modell RV-Hypertrophie und Versagen. Hier präsentieren wir Ihnen unsere Erfahrung mit diesem Modell basierend auf Ergebnissen aus früheren Studien12,13. Für dieses Modell ist ein Titan-Clip um den pulmonalen Stamm eine genaue voreingestellten Innendurchmesser komprimiert, was angepasst werden kann, um unterschiedliche Phänotypen der RV-Versagen zu induzieren.

<table><tbody><tr><td>17 G IV Venflonkanüle</td><td>Becton Dickinson, US</td><td>393228</td><td>Distal 2 mm der Nadel wurden abgeschnitten</td></tr><tr><td>1 mL Spritze + 26 G Nadel</td><td>Becton Dickinson, US</td><td>303172 & 303800</td><td></td></tr><tr><td>4-0 resorbierbares Multifilament Naht</td><td>Covidien, US</td><td>GL-46-MG</td><td>Polysorb, violett, 5x18"</td></tr><tr><td>4-0 Multifilament Ligatur</td><td>Covidien, US</td><td>LL-221</td><td>Polysorb, violett, 98"</td></tr> <tr><td>Buprenorphin</td><td>Indivior UK Limited</td><td></td><td>Lokale Beschaffung, Temgesic 0,3 mg/mL</td></tr><tr><td>Carprofene</td><td>ScanVet, DK</td><td>27693</td><td>Norodyl 50 mg/mL</td></tr><tr><td>Chlorhexidin</td><td>Faaborg Pharma, DK</td><td></td><td>Lokale Beschaffung</td></tr><tr><td>Auftragnehmer</td><td>Aesculap, Deutschland</td><td>BV010R</td><td>Blunt, selbsthaltend, 70 mm</td></tr><tr><td>Ohrhaken</td><td>Lawton, Deutschland</td><td>66-0261</td><td>Klein, 14 cm, Spitze auf einen Winkel von 85° modifiziert;</td></tr><tr><td>Augengel</td><td>Decra, UK</td><td></td><td>Lubrithal, Lokale Beschaffung</td></tr><tr><td>Pinzette, Zartes Gewebe</td><td>Lawton, Deutschland</td><td>09-0020</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette, Dissektion</td><td>Lawton, Deutschland</td><td>09-0013</td><td>1 regulär, 1 mit Spitze, die auf einen Winkel von 100 Grad modifiziert wurde;</td></tr><tr><td>Gasanästhesiesystem</td><td>Penlon Limited, UK</td><td>SD0217SL</td><td>Sigma Delta Vaporizer</td></tr><tr><td>Haarschneider</td><td>Oster</td><td>76998-320-051</td><td></td></tr><tr><td>Horizon Open Ligating Clip Applier</td><td>Teleflex, US</td><td>137085</td><td>Modifiziert mit einstellbarem Stoppmechanismus</td></tr><tr><td>Horizon Titanium Clips</td><td>Teleflex, US</td><td>001200</td><td>Kleine</td></tr><tr><td>Induktionskammer</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iris Schere</td><td>Lawton, Deutschland</td><td>05-1450</td><td></td></tr><tr><td>Iris Schere</td><td>Aesculap, Deutschland</td><td>BC060R</td><td></td></tr><tr><td>Beatmungsgerät</td><td>Ugo Basile, Italien</td><td>7025</td><td></td></tr><tr><td>Mikroschere</td><td>Lawton, Deutschland</td><td>63-1406</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Carl Zeiss, Deutschland</td><td>303294-9903</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Lawton, Deutschland</td><td>08-0011</td><td>TITEGRIP</td></tr><tr><td>Pean</td><td>Lawton, Deutschland</td><td>06-0100</td><td>Halsted-Mosquito, gerade</td></tr><tr><td>Pro-Optha</td><td>Lohmann & Rauscher, Deutschland</td><td>16515</td><td>Tampon</td></tr><tr><td>Kochsalzlösung 9 mg/mL</td><td>Fresenius Kabi, DK</td><td>209319</td><td></td></tr><tr><td>Sevofluran</td><td>AbbVie, US</td><td></td><td>Sevorane, Lokale Beschaffung</td></tr><tr><td>Chirurgischer Haken</td><td>Lawton, Deutschland</td><td>51-0665</td><td>Cushing, 19 cm, Spitze auf einen Winkel von 90° modifiziert;</td></tr><tr><td>OP-Klebeband</td><td>3M, US</td><td>1530-0</td><td>Mikroporen-Temperaturregler</td></tr><tr><td></td><td>CMA Mikrodialyse; Schweden</td><td>8003760</td><td>CMA 450</td></tr><tr><td>Waage</td><td>VWR, US</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wistar Rattenentwöhnung</td><td>Janvier Labs, Frankreich</td><td></td><td>RjHan:WI, 100-120 g</td></tr></tbody></table>

ein pulmonaler stamm streifenbildung modell der drucküberlastung induzierte rechtsventrikuläre hypertrophie und versagen

A Pulmonary Trunk Banding Model of Pressure Overload Induced Right Ventricular Hypertrophy and Failure

Rechtsventrikuläre (RV) Scheitern induziert durch nachhaltige Drucküberlastung ist ein wesentlicher Faktor für die Morbidität und Mortalität in mehreren Herz-Lungen-Erkrankungen. Zuverlässige und reproduzierbare Tiermodellen der RV Fehler sind daher geboten, um Krankheitsmechanismen und Auswirkungen der möglichen therapeutischen Strategien zu untersuchen. Banding der pulmonalen Stamm ist eine gängige Methode um isolierte RV-Hypertrophie zu induzieren, aber in der Regel zuvor beschriebenen Modelle nicht gelungen ein stabiles Modell RV-Hypertrophie und Versagen.
Wir präsentieren einem Rattenmodell der Druck induzierten Überlastung RV Hypertrophie verursacht durch pulmonale Stamm Streifenbildung (PTB) ermöglicht, die verschiedenen Phänotypen von RV-Hypertrophie mit und ohne RV-Versagen. Wir verwenden eine modifizierte selbstligierendes Clip Klammer um einen Titan-Clip um den pulmonalen Stamm zu einer voreingestellten Innendurchmesser zu komprimieren. Wir verwenden verschiedene Clip Durchmessern um zu verschiedene Phasen des Fortschreitens der Krankheit von milden RV-Hypertrophie dekompensierten RV-Versagen zu induzieren.
RV-Hypertrophie entwickelt sich konsequent in Ratten ausgesetzt, um die PTB-Verfahren und je nach Durchmesser des angewandten Streifenbildung Clips, wir können genau reproduzieren, andere Krankheit Schweregrade von kompensierten Hypertrophie bis hin zu schweren dekompensierten RV Fehler mit extra kardiale Manifestationen.
Das vorgestellte Modell der PTB ist eine gültige und robuste Modell der Drucküberlastung induzierte RV Hypertrophie und Versagen, die mehrere Vorteile zu anderen banding-Modelle einschließlich hohe Reproduzierbarkeit und die Möglichkeit des Verursachens ernsthafter und dekompensierten RV Missachtung hat.

Verwenden das beschriebene Verfahren der PTB in früheren Studien von unserer Gruppe12,13, induziert wir durch Streifenbildung mit einem 1,0 mm-Clip, ein gewisses Maß an RV scheitern (PTB moderate) durch Streifenbildung mit einem 0,6 mm-Clip und einem schweren Grad RV Hypertrophie (PTB mild) RV Verstoß (PTB schwere) mit einem 0,5 mm Clip Streifenbildung. Die Ratten, die schweren Streifenbildung entwickelten extra kardialen Manifest...

Wir präsentieren eine chirurgische Methode, um rechtsventrikuläre Hypertrophie und Versagen bei Ratten zu induzieren.

Ein pulmonaler Stamm Streifenbildung Modell der Drucküberlastung induzierte rechtsventrikuläre Hypertrophie und Versagen

Right ventricular (RV) failure induced by sustained pressure overload is a major contributor to morbidity and mortality in several cardiopulmonary ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen über zugrunde liegende Mechanismen und die Behandlung von rechtsventrikulärem Versagen zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie eine präzise und reproduzierbare Nachlasterhöhung ermöglicht, die eine rechtsventrikuläre Hypertrophie und ein Versagen induziert. Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Therapie des rechtsventrikulären Versagens, da sie Effekte eliminiert, die sekundär zur lungenvasodilatation sind.Bevor Sie mit der Stammisolierung beginnen, wählen Sie einen geeigneten Durchmesser für die Bandierung aus und passen Sie den Liganderclip so lange an, bis der Abstand zwischen den Backen einen Millimeter beträgt, wenn der Clip vollständig komprimiert ist und ein Lumen von 6 Millimetern hinterlässt. Als nächstes bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion in Zehenkneifung in einem anästhesierten 100 bis 120-Gramm Wistar Ratte Entwöhnung und machen einen zwei Zentimeter großen Hautschnitt entlang der Mittellinie des Brustbeins. Unter einem Sezieren Mikroskop schneiden Sie den Hauptbrustmuskel an seiner Brustbefestigung und identifizieren die zweite, dritte und vierte Costae.Verwenden Sie eine Schere, um die vierte, dritte und zweite Costae in der Nähe des Brustbeins zu schneiden und die interkostalen Muskeln sorgfältig zu sezieren, bis eine vollständige linke Thorakotomie durchgeführt wurde. Bei der Durchführung der linken seitlichen Thorakotomie sollten Sie sehr vorsichtig sein, da die linke innere Brustarterie nur den Brustkorb bellt, also seien Sie sehr vorsichtig. Legen Sie einen Retraktor zwischen das Brustbein und die Costae ein und öffnen Sie die Backen, bis der Thymus oben im Sichtfeld sichtbar ist.Verwenden Sie die Peen Zange, um vorsichtig den Thymus zu kippen, um die Aorta und den Lungenstamm zu belichten und die Spitze eines kleinen chirurgischen Hooklets, gebogen in einen 85-Grad-Winkel, durch die umgekehrte parakardiale Sinus hinter dem linken Vorhof-Anhängsel zu führen. Ziehen Sie den Haken auf halbem Weg zurück durch die Sinus und führen Sie die Spitze des Ohrhakens nach oben, bis er zwischen der aufsteigenden Aorta und dem Lungenstamm erscheint. Achten Sie beim Platzieren des Ohrhakens darauf, dass Sie den richtigen Winkel haben.Sie sollten keine Kraft verwenden, es könnte anfangs etwas schwierig sein, aber Sie können es mit der Übung meistern. Verwenden Sie iris Schere, um jedes Bindegewebe zu entfernen, das die Spitze bedeckt, um den Lungenstamm von der aufsteigenden Aorta zu trennen. Verwenden Sie abgewinkelte Foreceps, um ein 10-Zentimeter-Stück von 4/0 multifilimant Ligatur um den Lungenstamm durch den Durchgang durch den Haken gemacht zu führen.Erobern Sie das Ende der Ligatur mit einer weiteren Zange. Der Lungenstamm sollte nun von der aufsteigenden Aorta getrennt werden und kann durch die Ligatur um ihn herum gesteuert werden. Wenn der Lungenstamm gesichert ist, verwenden Sie einen Clip, um den verstellbaren Klammerclip zu laden.Führen Sie vorsichtig einen Kiefer und ein Bein des Clips durch den Durchgang um den Lungenstamm mit der Ligatur, um den Lungenstamm sanft nach oben und in die Gabel des Clips zu ziehen. Wenn sich der Lungenstamm in der Gabel befindet und die beiden Spitzen des Clips frei von Bindegewebe sind, komprimieren Sie den Clip, um die Bandierung anzuwenden, die die Ligatur entfernt, sobald sich der rechte Ventrikel als Reaktion auf die Bandierung ausdimiert. Wenn der Stamm gebändert wurde, entfernen Sie die Peenzange aus dem Thymus und bringen Sie das Gewebe in seine natürliche Position zurück.Entfernen Sie den Retraktor, und verwenden Sie resorbierbare 4/0 Multifiliment Nähte, um den Thorax in drei Schichten zu schließen. Dann subkutan injizieren 2 Milliliter Saline, um jede Flüssigkeit während der Operation verloren zu ersetzen und überwachen das Tier bis zur vollen Reemumbency. Bei der Auswahl verschiedener Durchmesser des Clips ist es möglich, verschiedene Stadien der Krankheitsschwere zu induzieren, wie hier durch einen zunehmenden Grad der rechtsventrikulären Hypertrophie deutlich wird.Nur schwere Banding verursacht zusätzliche herzkarge Manifestationen einschließlich Leberversagen. Unterschiede in der mittelschweren und schweren pulminären Rumpfbandierung sind offensichtlich durch die Erhöhung des rechten ventrikulären Drucks und verursachen ein mittelschweres oder schweres rechtsventrikuläres Versagen, wie eine schrittweise Abnahme der Herzleistung und der ditrikuspidalen annularen Ebene bei zunehmender Schwere der Banding zeigt. Das pulmonale Stammbandverfahren induzierte rechte Ventrikeldilatation ist durch eine Zunahme sowohl des rechtsventrikulären Enddiastolisches Volumens als auch des systolischen Volumens bei den mittelförmigen pulmonalen Stammbandratten im Vergleich zu scheinbetriebenen Tieren und in den schweren Lungenstamm-Bandratten im Vergleich zu den mittelschweren und Scheintieren zu erkennen.Eine schrittweise Abnahme der rechtsventrikulären Auswurffraktion wird ebenfalls beobachtet. Die rechtsventrikuläre Hypertrophie wird ferner durch eine Zunahme des Kardiomyozytenquerschnittsbereichs bei pulmonalen Stammbandratten im Vergleich zu scheinbetriebenen Tieren sowie durch andere morphologische Veränderungen des rechten Ventrikeles im Zusammenhang mit einem rechten Ventrikelversagen, einschließlich der rechten Ventrikelfibrose, angezeigt. Einmal gemeistert kann diese Technik in 30 Minuten durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird.Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, konsistente Ergebnisse mit dem Modell zu erhalten, bevor experimentelle Forschung eingeleitet wird. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der rechten Herzinsuffizienz, um pharmakologische Interventionen und grundlegende Mechanismen zu erforschen. Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie Lungenstamm-Banding durchführen.

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Medizin

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Lernen Sie eine chirurgische Methode zur Induktion von rechtsventrikulärer Hypertrophie und Versagen bei Ratten. Diese Technik ermöglicht präzise und reproduzierbare Nachlaststeigerung zur Untersuchung von Herzinsuffizienzmechanismen.

Ein pulmonaler Stamm Streifenbildung Modell der Drucküberlastung induzierte rechtsventrikuläre Hypertrophie und Versagen

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